灭活剂、保护剂和免疫佐剂
灭活剂
灭活剂：用于灭活微生物的化学试剂或药品称为灭活剂。如甲醛和β-丙内酯(BPL)。β-丙内酯(β-PL)：广泛用于病毒及灭活疫苗的研制和生产。做灭活剂使用。如用β-丙内酯应使用95%以上浓度的新试剂，β-丙内酯保存时间过长引起自身聚合，影响灭活效果。我国制备狂犬病疫苗时采用甲醛溶液灭活，甲醛为致癌物，残留的游离甲醛随疫苗注入人体后产生制激性反应。β-丙内酯由于能在疫苗液体中完全水解，不必考虑在成品疫苗中的残留，因此可考虑在纯化前低剂量预灭活一次，提高生产工序时的安全性，在纯化后再灭活一次以确保完全灭活.
BPL在国外已广泛用于各种疫苗的灭活。它是一种杂环类化合物(C3H4O2)，沸点15 5℃，常温下是无色粘稠状液体，对病毒具有很强的灭活作用，其机理为改变病毒RNA结构达到灭活目的。β-丙内酯杀灭病毒的作用很强，1 g/L β-丙内酯，在37℃作用2小时后即可杀灭血浆中的西方马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、淋巴脉络丛脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、狂犬病病毒等。到目前为止，以流感病毒、猪瘟病毒、腺病毒、乙肝病毒、痘病毒、黄热病毒、微小RNA 病毒、疱疹病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉脑炎病毒、狂犬病病毒、鼠脑炎病毒等作试验，β-丙内酯气体均能有效地将其杀灭，一般认为，β-丙内脂气体杀灭病毒的有效浓度为5～30mg/L。低浓度的β-丙内酯(2～4 mg/L)可以破坏病毒核酸，但不改变病毒蛋白质，因此也是灭活疫苗制造中很常用的病毒灭活剂。实践中应根据病毒材料的种类和状态，应用正确浓度、使用方法、作用时间、温度等等。
04第四章 灭活剂、保护剂和免疫佐剂(兽医生物制品学)
3．保护剂配置方法 配置方法不同会影响保护剂的效果。例如含糖保护剂灭菌温度不宜
过高，以114C 30min灭菌或间歇灭菌为宜；血清保护剂就不能用热灭菌 法，必须以滤过法除菌。
4．保护剂pH 保护剂的pH应与微生物生存时的pH相同或相近，过高或过低都能导
致微生物的死亡。例如明胶蔗糖保护剂的pH以6.8~7.0为最佳，否则会造 成微生物大量死亡。又如含葡萄糖、乳糖保护剂经高压灭菌后能改变保护 剂的pH值，从而影响保护效果，为此最好采取滤过除菌。
总之，每种新的冻干制品在批量生产前应进行系统的最佳保护剂选择 试验，包括保护剂冻干前后的活菌数、病毒滴度和效价测定的比较试验； 不同保存条件和不同保存期的比较试验。
三、常用的冻干保护剂
各类微生物适用的保护剂很多，各国的配制方法各异。即使同一种制 品所使用的保护剂组成也不一样。
例如鸡新城疫弱毒疫苗，我国选用5%蔗糖脱脂乳为冻干保护剂，而日 本则用5%乳糖、0.15%聚乙烯吡咯烷酮、1%马血清；或0.4%蔗糖脱脂乳、 0.2%聚乙烯吡咯烷酮作保护剂。猪丹毒弱毒菌苗，我国以5%蔗糖、1.5% 明胶作冻干保护剂；而日本用5%脱脂乳、2.5%酵母浸膏为保护剂。
或氨基结合保护其二级和三级结构。
2. 对活细胞（细菌） 降低细胞内外的渗透压，防止细胞膜破损水； 防止因细胞内水分结晶而对细胞膜或其他生物成份产生的应力，以
致改变膜或分子的立体结构； 若保护剂是细胞（细菌）的营养物质，可以在细胞复苏时迅速修复
05生物制品的佐剂保护剂灭活剂
溴化铵、十八烷基酪氨酸盐酸盐等； ③非离子性表面沽性剂，如Span-80、Span-85、Tween-80等。
根据佐剂在体内存留时间分类
(1) 贮存型佐剂（depot type adjuvant）
免疫佐剂、保护 剂和灭活剂
————三类重要的生物制品原料
免疫佐剂
佐剂的概念 基本要求
一、佐剂概述 佐剂的分类
作用机理
二、不溶性盐类胶体佐剂
三、油乳佐剂
佐 剂概述
佐剂的概念
单独使用时一般没有免疫原性，与抗原物质合并使用时， 能增强抗原物质的免度原性，增强机体的免疫应答，或者改 变机体免疫应答类型的物质，称为佐剂（adjuvant），也 称免疫佐剂（immune adjuvant）或抗原佐剂（antigen adjuvant）。
球菌的细胞壁肽聚精、短小榨状杆菌的细胞壁骨架成分、耻垢分枝杆菌 等提取的水溶性佐剂、分枝杆菌提取的高分子多肽糖酯(即腊质I)、革兰 氏阴性菌的脂多糖、肺炎杆菌的糖蛋白、酵母菌提取的酵母多糖及香菇 的香菇多糖等。
(2) 非微生物物质
A. 高分子物质 例如DNA、RNA、聚丙烯酸、聚乙烯吡啶烷酮。 B. 低分子物质 例如硫酸铝、氢氧化铝、磷酸钙、钾明矾等。 C. 油类 包括矿物油(如白油)、植物油(如花生油)等。 D. 药物类 例如吡喃、丙胺肌苷、左旋嘧啶等。 E. 中草药类 如冬虫夏草、天麻、黄芪、苦参等也有佐剂作用。 F. 表面活性剂 能降低液体表面张力的物质，包括：
兽医生物制品学教学大纲
兽医生物制品学教学大纲
第一章绪论
内容提要：本章主要讲述兽医生物制品学的概念及在预防疾病上的应用，兽医生物制品的分类、命名原则；兽医生物制品发展的历史、成就及前景。
教学目标：掌握兽用生物制品的概念、分类、应用，了解兽用生物制品的命名原则、兽医生物制品发展的方向。
计划课时：4学时
1.1兽医生物制品学的概念与应用
兽医生物制品的概念；兽医生物制品学的概念
免疫预防；诊断；治疗
1.2兽医生物制品的分类与命名原则
1.3我国兽医生物制品的发展历史及前景
第二章生物制品的免疫学理论
内容提要：主要讲述抗原与抗体、免疫系统与免疫应答、免疫血清学技术
教学目标：掌握抗原抗体的概念。主要的微生物抗体，免疫球蛋白；理解免疫应答的机制；掌握体液免疫应答细胞免疫应答；熟悉免疫学诊断与检测的常用技术。计划课时：16学时
2.1抗原与抗体
抗原的概念、构成免疫原的条件、抗原决定簇、抗原的交叉性、主要抗原微生物免疫球蛋白与抗体、Ig的分子结构、Ig的主要特性与免疫学功能
2.2免疫系统与免疫应答
免疫器官、免疫细胞、细胞因子
免疫应答的基本过程、体液免疫应答、细胞免疫应答、免疫耐受、免疫应答的机制
2.3免疫血清学技术
第三章灭活剂、保护剂与免疫佐剂
内容提要：介绍灭活剂、保护剂、免疫佐剂、新型免疫佐剂
教学目标：掌握灭活剂、佐剂、保护剂的概念、影响灭活剂作用的因素，理解灭活剂、佐剂、保护剂在兽用生物制品生产中的作用。
计划学时:6学时
3.1灭活剂
灭火与灭活剂的概念、灭火的类型、
甲醛、烷化剂、苯酚、结晶紫、β-丙酰内酯
3.2保护剂
做成、作用机理
兽用疫苗保护剂与佐剂(57页)
①抗原递呈： 指抗原分子递呈给I细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有 助于抗 原性物质在胞内被加工，被^11化分子特异性的结合、保护、运输并递 呈给效应细
胞。
②抗原寻的（antigen targeting〉
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引 巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞 受体的结合等有重要作用。
肽、脂肽和免疫调节多肽。
2. 表面活性分子类佐剂：海藻糖合成衍生物（TDM） 3. 核酸及其衍生物类佐剂：合成核苷酸聚合体、CpG 4. 含硫复合物类佐剂：左旋咪唑 5. 碳水化合物高分子类佐剂：香菇多糖、DEAE-葡聚糖 6. 细胞因子类佐剂（cytokine） : IL-2、IL-4和y-IFN等。 7. 脂质分子类佐剂：脂多糖、VitA和VitE等脂溶性维生素 8. 其他：霍乱毒素（CT）、百DP亥毒素（PT）和破伤风类
质量标准： •无色无味
• 50＜：运动粘度71112 / 3左右 *紫外吸收八25()-35()＜(). 1 %，紫外消光系数＜12X108； •单环芳烃 与双环芳烃含量低干0.5%，无多环芳烃； •小鼠腹腔注射0+51111或家免皮下注射2.01111^油，观察60山 表现正
常。
乳剂配方与乳化方法
免疫实验动物用的佐剂配制：
(1) 弗氏佐剂：矿物汕75%〜85%，乳化剂15%〜25%，混合后经 除蘭过滤而 成为FIA^如向其中加入().511^ / 1^1死结核杆菌即 为FCA。使用吋，将含抗原
兽医生物制品名词解释重点
兽大夫物成品：依据免疫学道理,运用微生物.寄生虫及其代谢产品或免疫应答物制备的一类物资.作为诊断.治疗.预防特定传染病或其它疾病的制剂.
通俗成品：运用一般临盆办法制备的,未经浓缩.纯化处理所制成的.精成品：将原材料用物理或化学办法去除无效成分,并进行恰当浓缩所制成的.
单价制剂：只运用一种微生物的单一血清型
多价制剂：运用一种微生物的若干血清型
多联苗：一次打针可以预防多种疾病的疫苗.
疫苗：由病原微生物.寄生虫及其组分或代谢产品制成,接种动物后能产生主动免疫,从而预防疾病的一类生物制剂.
传统疫苗：运用微生物或寄生虫或代谢产品等完全个别制成的疫苗.逝世疫苗又称灭活苗：是将病原体司理化办法灭活后,损掉沾染性保持其免疫原性制成的疫苗.
弱毒苗：将微生物的天然强毒株经由过程化学.物理或生物学办法,使其对原宿主动物致病力损掉或只引起亚临床沾染 ,但仍保管优越抗原性 ;以此人工整弱的毒株制备的疫苗.
类毒素：是用细菌产生的外毒素经甲醛处理,去除毒性感化,保存抗原性后精制而成.
亚单位疫苗：是指提取微生物有用抗原部分,运用一种或几种亚单位结构成分制成的疫苗.
基因工程亚单位疫苗：是指它只含有病原体的一种或几种抗原基因,经由过程基因重组技巧转入恰当的细菌.酵母菌或哺乳动物细胞,以
获得的表达产品作为免疫原制成的疫苗.
基因工程活疫苗：病原微生物经由过程基因工程技巧删除其致病基因或部分片断从而获得毒力损掉或下降的毒株而制成的疫苗.
基因缺掉疫苗：运用基因工程技巧,使致病的病原体基因组中某个或某些与致病性相干的基因或非须要糖蛋白缺掉构建而成.
免疫佐剂的概念
免疫佐剂的概念
免疫佐剂（Immunoadjuvant）是指能够增强免疫反应的物质或药物。它们被添加到疫苗或其他免疫制剂中，以提高其免疫原性和效力。
免疫佐剂的主要作用包括以下几个方面：
1. 增强免疫应答：免疫佐剂可以刺激免疫系统，增强对疫苗或抗原的免疫应答，从而提高疫苗的保护效果。
2. 诱导细胞免疫：一些免疫佐剂可以诱导更强的细胞免疫应答，包括 T 细胞的活化和增殖，从而增强对病原体的清除能力。
3. 延长免疫记忆：免疫佐剂可以促进免疫记忆细胞的形成和维持，从而提供长期的免疫保护。
4. 提高疫苗的稳定性和效力：免疫佐剂可以改善疫苗的稳定性和抗原递呈，使其更有效地诱导免疫应答。
免疫佐剂的种类很多，包括无机化合物（如铝盐）、微生物成分（如卡介苗）、脂质体、细胞因子、 toll 样受体激动剂等。不同类型的免疫佐剂具有不同的作用机制和特点。
需要注意的是，免疫佐剂的使用需要谨慎，因为它们可能引起不良反应，如局部炎症、过敏反应等。因此，在疫苗的研发和应用中，需要对免疫佐剂进行安全性评估和优化选择。
总之，免疫佐剂是一种重要的免疫调节物质，它们在疫苗和其他免疫治疗中发挥着关键作用，有助于提高免疫效果和保护机体免受病原体的侵害。
项目四 灭活剂、保护剂与免疫佐剂
当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相时，制
成的乳剂为油包水型乳剂（水／油或W／O），是生物 制品采用的主要剂型。
白油佐剂
一种好的乳剂苗，应该是W／O或O／W型，粘度较低， 颗粒大小均匀，稳定性良好，呈乳白色。
（四） 蜂胶佐剂 （五）微生物佐剂
三、新型免疫佐剂
1、细胞因子类 2、免疫刺激复合物
④干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖。
二、冻干保护剂的组成
⒈低分子物质（营养液）：
营养液：脱脂乳、蛋白胨、氨基酸、和糖类 等 ⒉赋形剂(高分子物质）骨架
赋形剂：蔗糖、山梨醇、乳糖、PVP、葡聚 糖等 ⒊抗氧化剂 抗氧化剂：Vit.C、Vit.E和硫代硫酸钠等
三、常用的冻干保护剂（稳定剂）
⒈保护剂种类：根据微生物种类或者用途来添加
不同种类保护剂。 ⒉保护剂组分浓度：严格按照配方执行。
⒊保护剂配制方法：如糖类均采用114°C
30min灭菌 ⒋保护剂酸碱度（PHBaidu Nhomakorabea：应于微生物生存时的PH 相同或相近。
任务3 免疫佐剂
一、免疫佐剂（佐剂）概念： 单独使用没有免疫原性，与抗原物质合并使用 能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特 异性免疫应答，发挥其辅佐作用的物质。
任务2 冻干保护剂
一、冻干保护剂概念：
保护剂：又称稳定剂，是指在冻干过程中及冻干后使生 物制品的生物活性物质免受破坏的一类物质。
动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用
动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用
摘要介绍了动物疫苗中的灭活剂和佐剂的种类及其作用,以期为灭活剂和佐剂的推广应用提供参考。
关键词动物疫苗;灭活剂;佐剂;种类;作用
动物疫苗种类包括弱毒苗和灭活疫苗,在灭活疫苗生产过程中,必然涉及灭活剂和佐剂,二者的安全性和效力也决定了疫苗的质量和推广应用效果。
1疫苗灭活剂
灭活是指破坏病原体的生物学特性,但尽可能避免影响其免疫原性或破坏血清中补体活性的过程。常用的灭活剂有甲醛、β-丙内酯(BPL)或其他有效灭活剂。
1.1甲醛
甲醛是一种有强烈刺激性的致癌物质,其既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基(如A,G,U),又可作用于病毒壳蛋白。作用于病毒壳蛋白时,易使蛋白质发生交联或病毒颗粒聚集,不能再作用于壳蛋白内的核酸。这样,病原体蛋白的抗原性会遭到严重破坏,并可能有病原体存活。用甲醛灭活时间长,一般需要在37～39℃处理24h以上或更长时间,使用浓度一般为0.1%。其灭活的效果易受温度、pH值、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响,残留的游离甲醛若随疫苗注入机体后,会产生制激性反应。
1.2β-丙内酯
β-丙内酯(Beta-Propiolactone,BPL)在国外已广泛用于各种疫苗的灭活,是一种杂环类化合物,沸点155℃,常温下是无色粘稠状液体,对病毒具有很强的灭活作用。能作用于病原体DNA或RNA,改变病毒核酸结构达到灭活目的,而不直接作用于蛋白,不破坏病原体的免疫原性。大剂量β-丙内酯(BPL)虽是一种致癌物,但极易水解,在37℃水浴水解2h后消失,其水解为无毒性的人体脂肪代谢产物β-羟基丙酸。另外,由于其能在疫苗液体中完全水解,不必考虑在成品疫苗中的残留,接种反应也轻微。同时,β-丙内酯灭活病原时间短,从而显著地缩短了疫苗生产周期,提高了经济效益。但与甲醛相比,价格明显昂贵,不适用于发展中国家或经济落后国家。
疫苗学期末复习知识点
疫苗学期末复习知识点
名词解释：
疫苗：它是采用微生物或其毒素、酶、动物的血清、细胞等制备的供预防和治疗用的试剂，是为了预防、控制传染病的发生或流行，用于人或动物体的预防接种的预防性生物制品。（或是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂）。
免疫原性：指疫苗接种进入机体后引起抗体产生免疫应答的强度和持续时间。影响免疫原性强弱的因素包括机体的因素和疫苗的因素。
免疫应答：指机体免疫系统受到抗原刺激后，免疫细胞对抗原的识别，并产生一系列复杂的免疫反应过程，可分为特异性免疫和非特异性免疫。
半数致死量（median lethal dose，LD50）：是指能使接种实验动物在感染后一定时限内死亡一半所需要的微生物量或毒素量。
半数感染量（median infection dose，ID50）:是指能使感染实验动物、鸡胚或细胞后，在感染后一定时限内感染发病一半所需要的微生物量。
内毒素外毒素
来源革兰阴性菌裂解产生革兰阳性菌及少数革兰阴性菌
产生方式细菌崩解后释放合成分泌到菌体外的化学成分脂多糖（LPS）蛋白质
稳定性较稳定，耐热不稳定，易被热、酸和消化酶灭活
毒性作用弱，对组织无选择性，各种内
毒素毒性作用相似
强，对组织细胞有高度选择
性，并能引起特殊的病变和
症状医学
抗原性较弱，免疫应答不足以中和毒
性
强，可刺激机体产生抗毒素，
能否产生类毒素不能经0.3%～0.4%甲醛液作用成类毒素
致热性常使宿主发热对宿主不致热
灭活疫苗：是用免疫原性强的病原微生物或其代谢产物，接种于动物、鸡胚、组织或细胞培养物中生长繁殖后、经灭活处理使其失去致病力，但仍保留完整的生物结构和免疫原性。疫苗中含有的菌体或病毒颗粒是“死”的，因此又称作死疫苗。
免疫佐剂专题知识专家讲座
免疫佐剂专题知识专家讲座
第21页
4. 细胞因子和其它免疫调整剂
IL-12：
• 一些小鼠病毒感染(鼠肝炎、伪狂犬病、淋巴细胞脉 络丛脑膜炎、水泡性口炎) ——无效
• 临床试验: – 重组人IL-12+甲型肝炎/乙型肝炎疫苗
• IL-12是安全，且有很好耐受性。 • 仅在加强免疫后：才诱导抗体滴度轻微增加。
第2页
佐剂研究必要性
1. 氢氧化铝： –优势：
• 无毒性作用 • 能诱导产生高水平抗体应答
–不足：
• 不能诱导产生较强T细胞免疫。
免疫佐剂专题知识专家讲座
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佐剂研究必要性
2. 基因重组疫苗、多肽疫苗和核酸疫苗 等
– 优势：
• 在理论上，比传统减毒疫苗和灭活疫苗 安全
– 不足：
• 其免疫原性不强，需要佐剂辅助其刺激 机体产生强免疫应答
免疫佐剂专题知识专家讲座
第4页
一、免疫佐剂定义和类别
• 佐剂(adjuvant)
–搀入疫苗制剂后，能促进、延长或 增强对疫苗抗原特异性免疫应答物 质。
免疫佐剂专题知识专家讲座
第5页
应用免疫佐剂潜在优点：
①能优化免疫应答; ②使疫苗能黏膜接种; ③能促进细胞介导免疫应答;
免疫佐剂专题知识专家讲座
第6页
第04章疫苗的制备与检定技术1。
第02节 疫苗制造基本程序
第03节 生物制品菌毒种的筛选与管理
生物制品菌(毒、虫)种：
1.直接用于生物制品研究、生产和检定的细菌菌种、病 毒毒种以及分类地位在原虫以下的生物种；
2.制备预防用生物制品、诊断制剂、治疗制剂的菌(毒、 虫)种。
菌(毒、虫)种的分类方式：
一、按毒力分类 1.强毒菌(毒、虫)种：具有强致病力、免疫原性良好，常
用于制造灭活疫苗和免疫血清，并用于疫苗的效力检验； 2.弱毒菌(毒、虫)种：对动物无致病性、但具有一定免疫
原性，用于制备弱毒疫苗。 二、按作用分类
如果是弱毒，可不经任何处理，经检定合格后，制备成弱 毒疫苗。主要在动物领域中使用。
如果是强毒，则需经病毒灭活处理，加入一定量的适当免 疫佐剂，混匀。经检定合格后，制备成灭活疫苗。主要在动物 领域中使用。
如果将病毒灭活后再进行提取纯化处理，获得高纯度的病 毒抗原，则可制备成精制疫苗。主要用于人。
细胞培养技术的成功是疫苗发展的助推器！
其他灭活条件：37℃，24～48hrs。有时灭活时间会更 长，如破伤风类毒素用0.4%的甲醛，37℃需灭活21～ 23天。
（二）烷化剂 (alkylating agent)
兽用疫苗保护剂和佐剂
兽用疫苗保护剂和佐剂
随着人类对动物健康和养殖业的关注日益增加，兽用疫苗成为提高动
物免疫力和预防疾病传播的重要手段。兽用疫苗并非一种简单的药物，它
由疫苗保护剂和佐剂两部分组成。疫苗保护剂含有致病菌或致病菌的一些
组分，用于引起动物的免疫反应；而佐剂则是辅助疫苗保护剂，增强疫苗
的稳定性、免疫效果以及延长免疫时间，使疫苗在动物体内发挥最大的保
护作用。
兽用疫苗保护剂是兽用疫苗的关键组成部分，它由病原体或病原体的
一些成分组成，通过自然免疫或人工免疫的方式引起动物的免疫反应。疫
苗保护剂的选择要根据不同的疫病特点和动物免疫途径来确定。对于细菌
性疫病，如猪鼻支原体、禽霍乱和鸡伤寒，常规的疫苗保护剂一般由灭活
疫苗、减毒疫苗或次单位疫苗制成。对于病毒性疫病，如禽流感和猪瘟，
常用的疫苗保护剂则有灭活疫苗、减毒疫苗、重组蛋白疫苗以及DNA疫苗等。
随着疫苗的广泛使用，人们发现疫苗的免疫效果与疫苗保护剂的稳定
性和免疫性能密切相关。佐剂作为疫苗保护剂的辅助剂，能够增强疫苗的
免疫原性、稳定性和免疫效果，提高动物的免疫力和抗体产生。佐剂的选
择要根据疫苗保护剂的特点和动物免疫途径来确定。常见的佐剂有油佐剂、水佐剂、微球佐剂、多糖佐剂以及胆固醇佐剂等。
油佐剂是最常用的佐剂之一，由白针剂、水针剂和油水乳剂等组成。
油佐剂具有较好的免疫增强效果，能延长疫苗在机体内的留存时间，增加
抗体的产生量，提高动物的免疫效果。油佐剂的缺点是使用时需要摇晃均匀，否则易引起注射部位的红肿和坏死。由于油佐剂的黏稠度较高，注射
时需要技术要求较高。
水佐剂是由氧化铝悬浮液和胶体硅悬浮液等组成，可以增强疫苗的免
免疫佐剂的作用和发展
免疫佐剂的作用和发展
佐剂（Adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。佐剂可选择性地改变免疫应答的类型，产生体液和\或细胞免疫。改变体液抗体的种类IgG亚类和抗体的亲和性。佐剂可改变抗原的构型，使疫苗诱导T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞(CHL)反应。佐剂可改变免疫反应为MHCⅠ型或MHC Ⅱ型。佐剂还能改变T辅助细胞(Th1和Th2)的免疫反应。随着生物技术的发展，新一代疫苗，如合成肽疫苗、基因工程疫苗等的研究已取得了初步成果，但现代疫苗研究过程所遇到的一个关键问题是其免疫原性较弱，往往需要佐剂来克服。对适合于推广应用的新疫苗的研制，佐剂的研究显得至关重要。因此，近年来免疫佐剂的研究进展更为迅速。本文就各种免疫佐剂的研究现状和应用前景进行简要的讨论。
1 矿物质
矿物质佐剂是传统佐剂中的一类，包括AL(OH)3和磷酸铝等。1926年Glenny首先应用铝盐吸附白喉类毒素，至今已有70多年了，但它还是唯一被FDA批准用于人用疫苗的佐剂。常用佐剂中效果较好的是AL(OH)3和磷酸铝佐剂，其次磷酸钙较常用。铝佐剂主要诱导体液免疫应答,抗体以IgG1类为主,刺激产生Th2型反应，还可刺激机体迅速产生持久的高抗体水平,也比较安全,对于胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原是良好的疫苗佐剂。它虽是人医和兽医均获批准的佐剂，广泛应用于兽医疫苗，特别是各种细菌苗，但其仍存在缺点：如有轻度局部反应，可以形成肉芽肿，极个别发生局部无菌性脓肿；铝胶疫苗怕冻；可能对神经系统有影响；不能明显地诱导细胞介导的免疫应答。疫苗中加入磷酸三钙[Ca3(PO4)2]作佐剂，与铝胶一样具有吸附沉淀作用，但使用更加简便。其缺点是：含盐量高；贮存日久有结晶沉淀。皮下注射时偶有肿胀或结块,抗原免疫原性弱时,不足以提高其免疫原性,特别是保护性免疫机制要求活性介导的免疫参加时,应使用其他佐剂。
灭活剂、保护剂和免疫佐剂
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系?
•
有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
免疫佐剂作用机理
作用方式
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，
胞对抗原或表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答 的本质或强度。T细胞有Th1和Th2两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用 能够引起不同的免疫反应。因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确
的免疫应答的目的。
佐剂的分类
1. 按佐剂物理性质 • 颗粒型佐剂 • 非颗粒型佐剂 2. 按佐剂的生物学性质（即Ballanti分类法） • 微生物及其组分 • 非微生物物质 3. 按佐剂在体内存留的时间 • 贮存型佐剂（depot type adjuvant） • 非贮存型（non-depot type adjuvant）
激性如：甲醛、β-丙酰内酯
甲醛溶液：
•《规程》（2000）中的26种灭活疫苗
• 灭活机理：
甲醛 醛基
氨基 羧基 羟基 巯基
甲基胺 亚甲基二醇单酯 羟基甲酚 亚甲基二醇
• 灭活浓度：多数为0.1％～0.3％
疫苗学知识要点
（2）重复感染：某种疾病在发病中，被同一种病原体再度侵袭而受染。血吸病、丝虫病、疟疾最为常见。
（3）复发：发病过程已转入恢复期或接近痊愈，而该病原体再度出现并繁殖，而原症状再度出现。伤寒最为常见。
（4）再燃：临床症状已经缓解，但体温尚未正常而又复上升、症状略见加重。多见于伤寒。
保护剂或稳定剂：
为保证作为抗原的病毒或其他微生物存活并保持免疫原性，疫苗中常加入适宜的稳定剂或保护剂，如冻干疫苗中常用的乳糖、明胶、山梨醇等。
灭活剂：
灭活病毒或细菌抗原的方法除了可用物理方法如加热、紫外线照射等之外，也常采用化学方法灭活。常用的化学灭活试剂有丙酮、酚、甲醛等，这些物质对人体有一定毒害作用，因此在灭活抗原后必须及时从疫苗中除去，并经严格检测，以保证疫苗的安全性。
潜伏感染：经感染后，病毒基因存在于组织细胞中，可反复激活，急性发作病毒只有在急性发作时才被检出如HSV、VZV
慢发病毒感染：潜伏期长，发病后为亚急性进行性直至死亡
2、病毒的致病机理
•杀细胞性感染：多见于无包膜病毒
•稳定状态感染：多见于有包膜病毒
•整合感染：多见于肿瘤病毒
•细胞凋亡
•细胞的增生和转化
•免疫系统紊乱
丙类传染病是指：流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹、急性出血性结膜炎、麻风病、流行性和地方性斑疹伤寒、黑热病、包虫病、丝虫病，除霍乱、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病。
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二、常用灭活剂的灭活机理与应用
(一) 灭活剂种类 1、甲醛溶液：
①蛋白质 ②核酸烷基化（不加中断剂）
2、烷化剂
乙酰基乙烯亚胺（AEI） 二乙烯亚胺(BEI) 缩水甘油醛 （使微生物核酸烷基化,灭活后加2%硫代 硫酸钠中断灭活） 3、苯酚（石炭酸）：用于防腐， 很少用于疫苗研制 4、结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂） 用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原 5、β-丙酰内酯 病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用. 注意：灭活剂对人有害， 有时对皮肤粘膜有强烈刺
1、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛 最常用。 2、微生物种类和特性 3、灭活剂浓度（一定要适合） 4、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和 温度不一致） 5、灭活时间 6、灭活PH值 7、有机物存在
第二节 保护剂（稳定剂）
保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞）
① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO)
DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚
砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
保护剂（protector）的分类
分类： •（根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白质等 •（根据其分子量大小） ——高分子物质、低分子物质。 •（按其化学性质） ——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
疫苗冻干保护剂组成
1. 营养液： • 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； • 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度 2. 赋形剂： • 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 • 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： • 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存 期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
激性如：甲醛、β-丙酰内酯
1、乙酰基乙烯亚胺（N-acetyl ethylenimine，AEI） •淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。 •0～4℃可保存1年，在-20℃可保存2年 •AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。 •口蹄疫病毒液: 终浓度0.05％，30℃8h, 加2％硫代硫酸钠阻断
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲 1%~2%（g/m1）。先 将12%~18%明胶液、30%蔗糖液和6%~12%硫脲液加热溶解，116℃高压 灭菌30~40min；
3．SPGA保护剂
蔗糖 76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血 清白蛋白10g、加去离子水至1000ml，混合溶解，过滤除菌。
２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。 ４、保护剂酸碱度（PH值）：主要对M的影响。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂
（一）细菌的保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸Baidu Nhomakorabea的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。
第三章 灭活剂、保护剂和免疫佐剂
第一节 灭活剂 一、灭活与灭活剂 1、灭活概念
是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性， 但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主要用于生 产灭活疫苗；或指破坏 诊断血清或待检血清中的补体活性， 以避免补体对诊断试验的干扰作用。
微生物毒力的灭活或毒素毒性灭活或补体活性灭活 2、灭活方法
2、二乙烯亚胺（binary ethylenimine，BEI） •市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月; •终浓度0.02%, 加入2％硫代硫酸钠中断灭活。
3、缩水甘油醛（glycidaldchyde，GDA） •大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 •本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。 •0～4℃ 3个月含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。
（二）病毒的保护剂 ① 5%蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖）5g，加脱脂乳至100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤；
② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力；
③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身。
二、影响保护剂效能的因素
1、保护剂种类: 根据微生物种类或者用途来添加不同种 类保护剂。
4、-丙酰内酯（－propiolactone）又名羟基丙酸--内酯 •无色有刺激气味的液体，水溶液应密封于玻璃瓶中5℃保存 •水中溶解度37％，能与丙酮、醚和氯仿任意混合 •对皮肤、粘膜及眼有强刺激性，对动物有致癌性。 •病毒灭活后，能保持良好的免疫原性 •主要用于狂犬病灭活疫苗的制备。
三、影响灭活作用的因素