2019年实验二溶血空斑meng.ppt
实验二溶血空斑meng
眼球取血 → 处死小鼠 → 取脾→用10ml洗 液冲脾→离心2000r/min 8min→弃上清，加 裂解液2ml，混匀，2min后离心（转数、时间 同上）→弃上清加洗液10ml，混匀，离心 （同上）
2.用100μl的微量进样器吸取被检细胞混 合悬液，于小室一端轻轻将液体注满两 个小室。记录实际注入的悬液微升数。
3. 将做好的标本水平放置37℃温箱中， 孵育30 分。
【结果分析】
结果观察及溶血空斑计数。
1.肉眼观察空斑 ，计数两个小室出现的溶血空 斑数。对模糊不清的空斑，可在低倍镜下检 查。真正的溶血空斑，必须中心有一个淋巴 细胞，周围为透明区。
加样
10ul 细胞悬液
玻片小室的制作
取洁净的载玻片按下图贴二条宽约5mm 和一条10mm 的双面胶，然后用小镊子取 二片盖玻片分别放在其上，做成两个小室， 用小镊子尾部将盖玻片压平贴牢。
细胞混悬液的配制及灌注
1.取小试管一支，用1ml吸管取0.2ml指示 细胞悬液；0.2ml 500倍稀释的脾细胞 悬液，混匀后即为被检的细胞混合悬液。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大 方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方 格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论 是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方 格数都是相同的，即16×25=400小方格。
示意图
细胞计数板的使用
1mm
A
2.计算出全脾脏中抗体产生细胞总数：
脾细胞悬液总毫升数（即为50ml）
抗体产生细胞总数＝
溶血性贫血的实验室检查分析PPT课件
1. 红细胞渗透脆性试验
【原理】是测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血 的抵抗能力。主要取决于红细胞表面积与体积之 比。 表面积大而体积小，对低渗盐水抵抗力大（即脆 性较小）。反之，抵抗力较小（即脆性较大）。
【参考值 】 开始溶血：0.42%～0.46%（4.2～4.6g/L）NaCL 完全溶血：0.28%～0.34%（2.8～3.4g/L）NaCL 【临床意义】 （1）脆性增高 遗传性球形红细胞增多症（开始
【结果判定】阴性 【临床意义】溶血时阳性
6.血浆高铁血红素白蛋白试验 （methemalbumin test）
血浆中游离血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，接着分 解为高铁血红素，后者与白蛋白结合形成高铁血 红素白蛋白
【结果判定】阴性
【临床意义】见于各种原因所致的严重血管 内溶血
7. 外周血红细胞形态改变
溶血性贫血 常用的实验室检查
溶血性贫血定义
• 各种原因导致红细胞生存时间缩短、破坏 增多或加速，骨髓代偿造血功能不足时所 发生的一类贫血叫溶血性贫血。
• 指骨髓代偿能力足以补偿红细胞的损耗而 不出现贫血时称溶血性疾患。
溶血性贫血的分类
按发病机制分类
1. RBC内在因素（遗传性/获得性）
RBC膜缺陷：遗传球、PNH RBC酶缺陷：G-6PD缺乏症 珠蛋白异常（肽链不平衡）：海洋性贫血、异常血红蛋
裂细胞schistocyte （红细胞异形症poikilocytosis） 系指红细胞发生各种明显的形
态学异常改变而言。红细胞 可呈梨形、泪滴性、新月形、 长圆形、哑铃型、逗点性、 三角形、盔形，以及球形、 靶形等。 见于红细胞因机械或物理因素 所致的破坏，如微血管病性 溶血性贫血如弥散性血管内 凝血、血栓性血小板减少性 紫癜、溶血尿毒症综合征等。 也可见于严重烧伤病人。
《溶血性贫血》课件
腹痛和背痛
由于肝脾肿大引起的 腹部不适。
肝脾肿大
肝脾增大可触及于腹 部。
溶血性贫血的诊断
血液学检查
包括血红蛋白、红细胞计数、血小板计数等。
免疫学检查
检测特定抗体或免疫球蛋白。
细胞学检查
检查红细胞形态、大小、结构。
分子生物学检查
分析相关基因的突变。
溶血性贫血的治疗和预防
1
药物治疗
使用对症治疗的药物，如免疫抑制剂、
手术治疗
2
抗病毒药物。
对于特定类型的溶血性贫血，可以考虑
手术治疗，如脾切除。
3
免疫治疗
通过免疫调节剂或干预免疫系统的治疗
预防措施
4
方法。
注意避免暴露于环境因素，并遵医象 • 感染 • 血栓栓塞
小结
溶血性贫血的定义和分类
溶血性贫血是血液细胞破坏大于生成导致贫血 的疾病，可分为遗传性和后天性。
《溶血性贫血》PPT课件
溶血性贫血是一种血液疾病，血液细胞的破坏快于生成，导致贫血。本课件 将介绍溶血性贫血的定义、病因、症状、诊断、治疗及预防等相关知识。
什么是溶血性贫血？
定义
溶血性贫血指血液细胞的破坏速度大于生成速 度，导致贫血状态。
分类
根据溶血性贫血的病因和机制，可分为遗传性 溶血性贫血和后天性溶血性贫血。
病因和症状及体征
遗传、药物、免疫和环境因素导致的症状包括 贫血、黄疸、腹背痛等。
诊断和治疗
通过血液学和分子生物学检查进行诊断，药物、 手术和免疫治疗进行治疗。
并发症及预防措施
脾功能亢进、贫血危象、感染、血栓栓塞是并 发症，注意预防环境因素。
溶血性贫血的病因
1 遗传因素
溶血性贫血实验室检测PPT课件
弱阳性或阴性，对此，可延长孵育时间再观察各管有无溶血。 6. 血清最好用正常同型血清或AB型血清。
【实验结果】 如阴性对照管不溶血而测定管溶血为阳性反
应，如测定管不溶血则为阴性反应。
注意事项
1. 一切用具要干燥，针头要粗，以免溶血。 2. 红细胞要洗净，HCL加量要准确，血清要新鲜，以免补体失活。 3. 加酸时勿加在管壁上，并将酸与血清混匀后，再加红细胞悬液，而
且红细胞悬液要直接滴入，不要沿管壁流下，以免溶血。 4. 血清酸化后用塞盖好，以免二氧化碳逸出而降低了血清的酸度，以
3. 各管置于室温静置2h，红细胞自然沉淀或溶解，从高浓 度管开始观察上层液体的颜色及管底沉淀。
4. 记录红细胞开始溶血（上层液体开始有淡红色出现，管 底尚有多量未溶的红细胞）和完全溶血（上层液体呈红
。 色，管底无红细胞）时NaCl浓度
注意事项
1. NaCl必须干燥，准确称量，用前新配。
2. 加入血液前需将蒸馏水和NaCl溶液混匀. 3. 试剂加量要准确，血液应直接滴入液体中，不能沿
管壁流入。 4. 空针及针头必须干燥，以免溶血。红细胞在低渗液中
很化血清溶血试验
【实验原理】 PNH患者体内存在对补体敏感
的红细胞，在酸化的正常血清中（PH值6.66.8），经孵育，补体被激活，红细胞被破坏， 产生溶血。而正常红细胞不被溶解，无溶血 现象出现。
实验方法
1. 取试管两支，按下表操作：
正常人血清（ml） 0.2 mol/L HCL (ml) 50%被检者红细胞悬液（ml） 生理盐水（ml）
测定管 0.5 0.05 0.025 /
对照管 0.5 / 0.025 0.05
溶血空斑试验
溶血空斑试验溶血空斑试验一、原理溶血空斑试验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法，即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37℃作用图3131琼脂平板溶血空斑溶血空斑试验溶血空斑试验试验原理示意图下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。
每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
由于溶血空斑试验具有特异性高，筛检力强，并可直接观察等优点，故可用作判定免疫功能的指标，观察免疫应答的动力学变化，并可进行抗体种类及亚类的研究。
溶血空斑试验溶血空斑试验目前有关溶血空斑试验的具体方法很多，现仅将琼脂平板溶血空斑试验的操作方法简介如图3131。
溶血空斑试验溶血空斑试验二、材料和方法(一) 材料平皿(直径55×15cm)，温箱(37℃)，水浴箱(45℃)，离心机，显微镜及白细胞计数器，18～25g昆明系小鼠等。
溶血空斑试验溶血空斑试验(二) 试剂1．SRBC悬液取无菌脱纤绵羊血(或阿氏液保存的血液)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗3次，每次 2 000r/min离心5min，最后取压积红细胞，悬于灭菌pH值7 2 P BS(含Ca2+、Mg2+)中，使成为20%浓度，经细胞计数后，调整细胞浓度为2×10 9/ml。
溶血空斑试验溶血空斑试验2．01mol/L pH值7 2 PBS(含Ca2+、Mg2+)。
3．底层和顶层琼脂取抗补体作用小的琼脂(日本琼脂粉或旅大水产制品厂的产品)用PBS配成14%和07%两种浓度。
将07%的琼脂分装小试管，每管15ml备用。
4．DEAE右旋糖酐分子量5万，用蒸馏水配成1%浓度备用。
5．补体采集3只以上豚鼠血清，应用时用PBS稀释成1:30浓度(如不加DEAE右旋糖酐，可采用原补体或作1:5稀释)。
溶血空斑实验..
（四）加补体 • 从温箱中取出平皿，每皿加入1:5稀 释的新鲜豚鼠血清1ml，继续放37℃ 温箱中温育30min后取出，观察溶血 空斑。也可在室温下放置1h，4℃冰 箱过夜，次日观察结果。
结果判定
观察时，将平皿对着光亮处， 用肉眼或放大镜观察每个溶血空斑 的溶血状况，并记录整个平皿中的 空斑数，同时求出每百万个脾细胞 内含空斑形成细胞的平均数。
●一个空斑代表一个抗体形成细胞（即B
细胞 ），空斑的数量反映机体的体液 免疫功能。 ●空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的 多少。由于溶血空斑试验具有特异性高， 筛选力强，可直接观察等优点，故可用 做判定免疫功能的指标，观察免疫应答 的动力学变化，并可进行抗体种类及亚 类的研究。
实验材料与试剂
• 器材：平皿、37℃水浴箱、离心机、显微 镜 • 试剂： ①SRBC悬液：取无菌脱纤维羊血，用NS或PBS 离心洗涤3次，每次以2000rpm，5min，用 PH7.2的PBS（含Ca2+、Mg2+）悬成细胞浓度 为2.00×109个/mL
②Hanks液（含Ca2+、Mg2+ ） ③底层基（1.4%）和表层基（0.7% ）： 将琼脂糖用Hanks液配成1.4%和0.7%两种 浓度。将表层基分装于小试管中，每管 2ml ④补体：新鲜豚鼠血清 ⑤小牛血清：56℃灭活 30min
实验步骤
㈠免疫脾细胞悬液的制备 ①小鼠免疫：每只小鼠经尾静脉注入上述SRBC悬 液2.00×104个/0.2ml或者腹腔注射4.00×108 个 /1ml。 ②单个脾细胞悬液的制备：将免疫后第四天的小 鼠拉颈处死，解剖取出脾脏，放入PH7.2的PBS 中漂洗，去掉结缔组织，加入适量的PBS，用镊 子挤压脾脏，稍静置，吸上清液至离心管中， 2500r/min离心5min，弃上清后，定量加入PBS 液1ml，混匀，再用PBS液稀释10倍（浓度约为 5×106个/ml）
溶血空斑试验
溶血空斑试验溶血空斑试验一、原理溶血空斑试验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法，即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37℃作用图3131琼脂平板溶血空斑溶血空斑试验溶血空斑试验试验原理示意图下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。
每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
由于溶血空斑试验具有特异性高，筛检力强，并可直接观察等优点，故可用作判定免疫功能的指标，观察免疫应答的动力学变化，并可进行抗体种类及亚类的研究。
溶血空斑试验溶血空斑试验目前有关溶血空斑试验的具体方法很多，现仅将琼脂平板溶血空斑试验的操作方法简介如图3131。
溶血空斑试验溶血空斑试验二、材料和方法(一) 材料平皿(直径55×15cm)，温箱(37℃)，水浴箱(45℃)，离心机，显微镜及白细胞计数器，18～25g昆明系小鼠等。
溶血空斑试验溶血空斑试验(二) 试剂1．SRBC悬液取无菌脱纤绵羊血(或阿氏液保存的血液)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗3次，每次 2 000r/min离心5min，最后取压积红细胞，悬于灭菌pH值7 2 P BS(含Ca2+、Mg2+)中，使成为20%浓度，经细胞计数后，调整细胞浓度为2×10 9/ml。
溶血空斑试验溶血空斑试验2．01mol/L pH值7 2 PBS(含Ca2+、Mg2+)。
3．底层和顶层琼脂取抗补体作用小的琼脂(日本琼脂粉或旅大水产制品厂的产品)用PBS配成14%和07%两种浓度。
将07%的琼脂分装小试管，每管15ml备用。
4．DEAE右旋糖酐分子量5万，用蒸馏水配成1%浓度备用。
5．补体采集3只以上豚鼠血清，应用时用PBS稀释成1:30浓度(如不加DEAE右旋糖酐，可采用原补体或作1:5稀释)。
实验二溶血空斑
实验二溶血空斑实验目的：了解血液抗原与抗体的作用，掌握血凝反应的基本原理和实验方法，了解溶血空斑试验的原理，探讨影响溶血空斑的因素。
实验原理：人和动物的血液表面都有各种化学物质，其中最明显的有抗原和抗体。
血型抗原通常是在红细胞的表面，而血型抗体则在血清中。
在正常情况下，抗原与抗体之间不会产生相互作用，但是在体外与不同类型的血液混合时就会出现反应。
在血凝反应过程中，当同种抗体与同种抗原相遇时，它们会结合起来形成一个可见的团块。
抗体对于外来抗原有着高度的选择性，即其能够选择性的结合到特定的抗原，而不涉及其他抗原类型。
通常存在四种血型：A、B、AB、O。
每一种血型都有特定的抗体和抗原。
溶血是指红细胞破裂释放出细胞内物质的过程。
红细胞的膜结构具有半渗透性，并且固定量的抗体或淀粉样物质能与它们结合。
当不兼容的血液混合时，体内的抗体结合到血型抗原表面，从而导致血细胞的破裂和血液中出现游离的血红蛋白，也称为溶血现象。
溶血空斑试验是一种检测抗体特异性和浓度的试验。
在试验中，试管中的血浆加入已知抗原类型的红细胞悬液，然后让其稀释，最终加入悬液的红细胞浓度足以产生溶血空斑。
抗体与相应抗原结合时会在红细胞表面形成网状结构，称为空斑。
空斑在显微镜下呈现为圆形透明的结构，其大小和数量取决于抗体浓度和特异性。
抗体浓度越高，抗体与红细胞结合的位置越小，空斑越大。
实验步骤：设计课题：本实验选择 ABO 血型系统，探究不同抗体浓度对溶血空斑的影响。
器材：平滴管5ml，离心机，显微镜，石蜡片，波茨玻璃吸管，无菌吸球，超声波清洗器。
试剂：离心管，血型鉴定血清（A、B、O）、丙酮、0.9％生理盐水、0.3％凝血酶液、4％牛血清蛋白、洗涤缓冲液。
操作流程：1.实验器材的清洗：取下一个 50 毫升的玻璃容器，加入浓度为 10% 的氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌，再洗净，然后反复用蒸馏水洗净。
之后，使用超声波清洗器清洁吸球。
将使用密闭器前的所有仪器和试剂清洗，使其无残留物和干净。
溶血的检验 ppt课件
2
膝关节周围滑膜囊的分布 蔗糖溶血试验
一、原理：根据PNH患者的红细胞，在低离 子强度的蔗糖溶液中对补体敏感性增强， 经孵育后可使补体与红细胞膜结合加强， 蔗糖溶液进入补体敏感的红细胞内，导致 渗透性溶血。 二、参考值：定性试验：正常为阴性；定 量试验：正常溶血率<5%. 三、临床意义： PNH患者为阳性或溶血率增加，可作为PNH
7
膝关节周围滑膜囊的分布 血浆高铁血红素白蛋白检测
原理：血浆中游离的血红蛋白可被氧化为 高铁血红蛋白，再分解为珠蛋白和高铁血 红素，后者先与血红蛋白结合，血红蛋白 消耗完后，再与白蛋白结合形成高铁血红 素白蛋白，与硫化铵形成一个易识别的铵 血色原，用光谱仪观察结果，于绿光区 558nm处有一最佳吸收区带。
原理：血红蛋白可催化过氧化氢释放新生 态氧，使邻苯氧化为蓝紫色。根据显色深 浅，与同时测定标准血红蛋白液对照，可 测出血浆游离血红蛋白的量。
参考范围：0-40mg/L
应用评价： 1.明显增高是判断血管内溶血的指征。蚕豆
6
膝关节周围滑膜囊的分布 血清结合珠蛋白检测
原理：血清结合珠蛋白检测（Hp）是在待 测血清中加入一定量的血红蛋白液，使之 与待测血清中的结合珠蛋白形成Hp-Hb复合 物。通过电泳法将结合的Hp-Hb复合物与未 结合的Hb分开，测定Hp-Hb复合物的量， 可测得血清中结合珠蛋白的含量。 参考范围：0.5-1.5gHb/L 应用评价：1.减低：常见于各种溶血，尤其 是血管内溶血。严重肝病、先天性无珠蛋 白血症、传染性单核细胞增多症等Hp也明
参考范围：阴性
8
膝关节周围滑膜囊的分布 尿含铁血黄素试验
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5.用注射器将脾细胞悬液吸出移入试管中，再 用少量Hank′s 液冲洗脾脏及平皿内残留的 细胞，移入试管内。离心1000 转/分5～ 10 分, 弃上清，加5ml 冷红细胞裂解液（NH4Cl 3.735g/450ml 双蒸水+Tris 1.3g/50ml 双蒸 水pH7.65），将细胞离心管插入碎冰中，每2 分钟摇动1 次，裂解10 分。离心（1000转/ 分）5～10 分。弃上清，用Hank′s 液洗2 次，离心（1000 转/分）5～10分钟。弃上清。 用Hanks悬浮细胞，调细胞浓度到2×l06/m1。 6.将沉积的红细胞用乳头吸管吹吸悬起混匀。 吸取此悬液0.1ml 放小试管中，再加 0.9mlHank′s 液，即为500小鼠 → 取脾→用10ml洗 液冲脾→离心2000r/min 8min→弃上清，加 裂解液2ml，混匀，2min后离心（转数、时间 同上）→弃上清加洗液10ml，混匀，离心 （同上） 弃上清加4.9ml洗液混匀 取0.1ml脾细胞悬液+0.9ml洗液（A液），混 匀 取0.1ml（A液）+ 0.1ml指示系统，混匀
【操作方法】
眼球采血将血液保存于1.5mlEp管中， 4 ℃静置24H 10000rpm/10min，收集血清； -20℃保存待抗体水平检测。同时采集正常小 鼠血清作为对照。
小鼠B细胞溶血空斑形成试验
溶血空斑形成试验是基于抗原抗体反应可活 化补体，溶解细胞的原理来检测抗体形成细 胞的一种体外试验方法，经典的试验是用于 检查动物的抗体产生功能。 将绵羊红细胞（SRBC）免疫过的小鼠脾细胞 制成细胞悬液，与一定量的绵羊红细胞混合， 在补体参与下，使抗体产生细胞周围的SRBC 溶解，形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要 用于测定B细胞抗体产生能力。
【试剂与器材】
1. 健康小鼠（约18～20 克重）。 2. 绵羊红细胞悬液（2.5%）。 3. 指示细胞悬液： 含10% 绵羊红细胞悬液 0.5ml，补体（即新鲜豚鼠血清）0.3ml， Hank′s 液2.0ml。 4. Hank′s 液（pH7.2）。 5. 动物解剖器械、注射器（5ml）、平皿、中 试管、小试管、乳头吸管、载物玻片、 6. 盖玻片、双面胶、微量进样器和离心机等。
细胞混悬液的配制及灌注
1.取小试管一支，用1ml吸管取0.2ml指示 细胞悬液；0.2ml 500倍稀释的脾细胞 悬液，混匀后即为被检的细胞混合悬液。 2.用100μl的微量进样器吸取被检细胞混 合悬液，于小室一端轻轻将液体注满两 个小室。记录实际注入的悬液微升数。 3. 将做好的标本水平放置37℃温箱中， 孵育30 分。
溶血空斑试验现象
【操作方法】
免疫动物 取2.5% 绵羊红细胞悬液2ml，无菌操作注射 于小鼠腹腔内。（4 天后追加一次免疫效果 更佳）。 见试验一，已做
制备脾细胞悬液
1. 将免疫后 7 天的小鼠颈椎脱位处死， 75% 乙醇浸泡 3 分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上； 2.在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁， 可见红色长条状脾脏； 3. 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用 镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织， 取出脾脏。放入盛有5ml Hanks 液的培养皿中； 4. 左手持一把小镊子夹住脾脏，右手用 5ml 的注射器 抽取平皿内液体(4～５ml)缓缓注入脾脏内，将脾细 胞冲洗出来。如此反复冲洗，到脾脏变白为止。
取50ul加入玻片小室（约用30ul）
细胞计数板（Hemacytometer）
血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上 由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短 横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方 格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大 方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中 进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大 方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方 格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论 是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方 格数都是相同的，即16×25=400小方格。
示意图
细胞计数板的使用
1mm
A
B
1mm
1ml=1cm3=1000mm3
细胞数= C D A+B+C+D 4
104 稀释倍数
Concentration/ml = (Dilution Factor)(Count in 4 squares/4) X 104
细胞数= A+B+C+D 4 104 稀释倍数
实验二
血清分离（眼球取血） 脾细胞制备(吹气球法) 溶血空斑试验
血清分离
眼球采血：左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在 实验台上，取侧卧位，左手食指尽量将小鼠 眼周皮肤往颈后压，使眼球突出。用眼科弯 镊迅速夹去眼球，将鼠倒立，用器皿接住流 出的血液。采血完毕立即用纱布压迫止血。 每次采血量0.6-0.1mL。
【结果分析】
结果观察及溶血空斑计数。 1.肉眼观察空斑 ，计数两个小室出现的溶血空 斑数。对模糊不清的空斑，可在低倍镜下检 查。真正的溶血空斑，必须中心有一个淋巴 细胞，周围为透明区。 2.计算出全脾脏中抗体产生细胞总数：
脾细胞悬液总毫升数（即为50ml） 抗体产生细胞总数＝ 注入小室内的脾细胞毫升数 ×标本出现的空斑数
红细胞计数
Concentration/ml = (Dilution Factor)(Count in 5 squares X5)X 104
加样
10ul 细胞悬液
玻片小室的制作
取洁净的载玻片按下图贴二条宽约5mm 和一条10mm 的双面胶，然后用小镊子取 二片盖玻片分别放在其上，做成两个小室， 用小镊子尾部将盖玻片压平贴牢。