畜禽肉中土霉素,四环素,金霉素的测定

畜禽肉中土霉素，四环素，金霉素的测定

食品安全检验手册101页

１.原理 样品中土霉素，四环素，金霉素经提取，用微孔滤膜过滤后进HPLC 色谱仪测定 ２.试剂和材料

⑴乙腈 色谱纯

⑵高氯酸 分析纯;

⑶高氯酸溶液 5%(V/V)

⑷土霉素标准品 纯度≥99%;

⑸土霉素标准贮备液 准确称取10.0mg 土霉素,用甲醇配制浓度为100μg/mL 的标准贮备液。

⑹土霉素标准中间液: 准确吸取5.0mL 土霉素标准贮备液,于50mL 容量品瓶中,加水稀释至刻度。摇匀,此液1mL 含10μg 氯霉素。

⑺土霉素标准系列溶液: 准确吸取土霉素标准中间液0.1,0.2,0.5,1.0，2.0mL 分别放于10mL 容量瓶中,然后,各加水至10.0mL. 摇匀,即得每mL 含 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 .2.0μg 的土霉素标准系列溶液。

３.仪器和设备

(1) 液相色谱仪，配有紫外吸收仪;

(2) 匀质器；

(3) 离心机：6000r/min 。

４.测定步骤

（1）提取 称取试样5g(精确至0.01g)，置于50mL 离心管中，加人25mL 高氯酸溶液：5%(V/V), 超声提取20min, 然后离心10min ( 4000r/min )。取上清液，经0.45µm 滤膜过滤后，滤液作HPLC 用。

（2）测定高效液相色谱参考条件

色谱柱:Grace Smart C 18 250mmX4.6mm, 5µm;

测定波长: 350nm

流速: 1.0mL/min;

色谱柱温度:室温。

（3）色谱测定:

① 标准曲线的制备 分别吸取土霉素标准溶液各20µL,在上述色谱条件下,进行HPLC 分析,以标准液浓度与峰面积进行回归分析。

② 样品测定 按上述色谱条件下,进样20µL, 进行HPLC 分析,根据保留时间和峰面积，与标准比较进行定性定量。外标法定量。

５．结果计算

m X ∨

×=ρ （1-71）

式中:

X—试样中土霉素残留量, μg/g

ρ—测定液中土霉素的含量, μg/mL

V--试样溶液的体积, mL

m-试样的质量,g 。

6．土霉素，四环素，金霉素色谱图1-78

1.土霉素；

2.四环素；

3.金霉素