两种方法检测胚胎小鼠内皮型一氧化氮合酶结果的相关性分析

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一氧化氮及内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与抑郁症及抗抑郁疗效相关分析

一氧化氮及内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与抑郁症及抗抑郁疗效相关分析张洪燕;张志珺;史家波;郝贵峰【期刊名称】《中华行为医学与脑科学杂志》【年(卷),期】2007(016)001【摘要】目的测定抑郁症患者血浆一氧化氮(NO)浓度并分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T功能多态性与NO浓度、抑郁症及抗抑郁剂疗效相关性.方法采用分光光度计法测定抑郁症患者疗前及正常对照组血浆NO浓度;运用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评估抑郁症患者治疗前后症状严重程度;根据eNOS基因G894T 多态性PCR-RFLP分析结果进行基因分型.结果患者组疗前血浆NO浓度(76.8±30.3)μmoL/L显著高于对照组(64.2±33.3)μmol/L,差异有显著性(P=0.009);患者组疗前血浆NO浓度(76.8±30.3)μmol/L与疗前HAMD分值[(23.9±4.6)]分呈显著正相关(r=0.262,P=0.008);患者组与对照组等位基因及基因型分布频率均差异无显著性(均P＞0.05);患者组与对照组携带不同等位基因或基因型者之间血浆NO浓度差异无显著性(均P＞0.05);携带不同等位基因或基因型患者疗前HAMD 评分和治疗后HAMD减分率差异均无显著性(均P＞0.05).结论血浆NO浓度增高可能是抑郁症发病的影响因素,并影响抑郁症患者急性期病情严重程度;eNOS基因G894T功能多态性可能不影响血浆NO浓度、抗抑郁剂治疗疗效,也不是抑郁症发病的主要基因因素.【总页数】3页(P18-20)【作者】张洪燕;张志珺;史家波;郝贵峰【作者单位】210029,南京,南京医科大学第二临床医学院;东南大学附属中大医院神经内科;南京医科大学附属脑科医院精神科;东南大学附属中大医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.内皮型一氧化氮合酶基因G894T的多态性与厄贝沙坦降压疗效的关系 [J], 孟祥雁2.东乡族内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与替米沙坦降压疗效及糖脂代谢相关性研究 [J], 张永正;王玉;闵海;马丽雅3.神经源型一氧化氮合酶C276T基因多态性与抗抑郁疗效相关分析 [J], 张洪燕;陆蓉;瞿秋霜4.内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与ACEI降压疗效相关性研究 [J], 陈改玲;党爱民;刘国仗5.新疆汉族和哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶基因T786C和G894T多态性与原发性高血压的相关分析 [J], 张强;邓峰美;何芳;王树人;卢贤贵;王刚;邹放君;钟华;唐斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

3种微核检测方法的比较

[ 3 ] Zhang Y, Sun LG, Shang H, et a l. Exp ression of aFGF in ovarian
ep ithelial cancer and its signal transduction pathway [ J ]. Chinese M ed ical Jou rnal, 2003, 83 ( 11) : 9762980. [ 4 ] 徐叔云 ,卞如濂 ,陈修. 药理实验方法学 [M ]. 北京 : 人民卫生出版社 , 2005: 123521238. [ 5 ] 陈雄 ,程学文 ,徐美荣. 山楂叶总黄酮对大鼠肾缺血 /再灌注损伤的保护作用 [J ]. 实用儿科临床杂志 , 2007, 22 (5) : 3592360. [ 6 ] 李宓 ,杜艺 ,陈家湄 ,等. hHGF基因肾脏电转染对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用 [ J ]. 第四军医大学学报 , 2007, 28 ( 1) : 9912994. [ 7 ] 赵浦 ,孙玲娣. 缺血再灌注大鼠肾脏诱导型一氧化氮合酶表达的意义 [ J ]. 实用儿科临床杂志 , 2006, 21 (17) : 113721138. [ 8 ] 王新良 ,李洪娟 ,谢菲 ,等. 离体灌流技术检测缺血再灌注对大鼠肾功能和肾血管反应性的影响 [ J ]. 新乡医学院学报 , 2005, 22 ( 5) : 4412443. [ 9 ] 徐勇 ,陈珊珊. 白细胞介素 24 / 210对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡的抑制作用 [ J ]. 实用儿科临床杂志 , 2007, 22 ( 5 ) : 375 2376. [ 10 ] Mariano RH, JesusM S,Manuel R, et a l. 1HNMR structural char2

内皮型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾脏发育中的表达

维普资讯
第１７卷第２期２００８年４月
中国组织化学与细胞化学杂志
ＣＨＩＩＥＯＵＲＮＡＬＥＳＪＯＦ删ＨｍＭ１ＡＮＤＹ
Ｖ０．７Ｎｏ２１１．．Ａｐ．０８ｒ２０
胚胎小鼠肾脏早期发育中的意义。方法
新生组（ｏＰ）小鼠各１，共６组。分别用免疫组化及免疫印迹方法对小鼠肾脏内ｅＯ只ＮＯＳ达进行定性、定量分析。结果表（）免疫组化结果显示：Ｅ４１ｌ、Ｅｌ组ｅＯＳ在生肾区呈阳性表达；Ｅ６组生肾区表达减弱，肾近端小管呈强阳性表达，５Ｎｌ同时远端小管及肾脏小动脉内皮也有阳性表达；Ｅ８组、Ｐｌｏ组近端小管呈强阳性表达，远端小管呈阳性表达，髓质中的集合管ｅＯＳ表达弱阳性，而致密斑呈阴性表达。（）免疫印迹结果显示：Ｅｌ组肾脏ｅＯＳ含量较少，随后逐渐增多，ＰＮ２４ＮＤ０组ｅＳ含量最多。结论ＮＯ（）ｅ１ＮＯＳ在小鼠肾脏第１ｄ开始呈阳性表达，以后含量逐渐升高，出生时含量最高。（）４２ｅＳ表达部位从生肾区开始，以后其表达逐渐减弱甚至消失，而肾近端小管、远端小管的表达晚于生肾区，且呈逐渐增ＮＯ
ｍａｕｕｅａ６ｔｔｅｓｍｅｔｍｅ，ｔｅｅｗａａｎｘｒｓｉｎｉｈｉｔｌｔｂｌｎａｃｌｒａｌｔｂｌｔＥ１；ａｈａｉｈｒｓａｆｉｔｅｐｅｓｏｎｔｅｄｓａｕｕｅａｄｖｓｕａｎｔｅｉｌｅ１ＡｔＥ１ｈｌｌａｃ．８，ｅＯＳｗａｌａｌｘｒｓｅｎｐｏｉｌｎｉｔｌｔｂｌｓＡａｘｒｓｉｎｏＮｓｃｅｒｙｅｐｅｓｄｉｒｘｍａ，ａｄｄｓａｕｕｅ．ｗｅｋｅｐｅｓｏｆ

RFLP 检测内皮一氧化氮合酶基因多态性

RFLP检测内皮一氧化氮合酶基因多态性一、实验背景PCR-RFPLDNA分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基础。

RFLP（限制片段长度多态性）已被广泛基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。

RFLP是根据不同个体基因组的限制性内切酶的酶切位点发生改变，或酶切位点之间发生碱基的插入、缺失，导致酶切片段大小发生变化，这种变化也可以通过特定探针杂交进行检测，从而可以比较不同个体DNA水平的差异（即多态性）。

内皮一氧化氮合酶基因多态性与高血压一氧化氮合酶（NOS）是一种催化小分子信息化合物，一氧化氮生成的酶广泛参与免疫调节、神经传递、血压生理调控和血小板凝聚的抑制等多种生理功能。

与高血压、糖尿病、肾病等多种疾病的发生密切相关。

NOS可以分为三型：神经元型、诱导型、内皮型。

内皮型一氧化氮合酶（NOS3，又称eNOS）基因在人类染色体上定位于7q35~7q36区域，跨度约21kb，含有26个外显子和25个内含子，相应的信使核糖核酸（mRNA）约4.1kb，翻译成含1203个氨基酸的蛋白产物。

近年来已知的NOS3的3个基因多态性位点与原发性高血压的关系。

1、位于第4内含子上的27bp数目可变的串联重复序列（VNTR），根据重复次数不同有两种等位基因，重复4次为a等位基因，重复5次为b等位基因。

2、位于第8外显子上，由于894位碱基G突变成T（G894T，即rs57135373），导致相应蛋白产物第298位上的谷氨酸被替换成天冬氨酸（Glu298Asp），突变前后的等位基因分别成为G、T等位基因。

3、位于5端侧翼区上786位碱基T突变成C（T786C），突变前后的等位基因分别为T、C等位基因。

G894T多态性1.与血管痉挛的关系:最近的研究显示带有G894T的NOS3基因转染细胞后可以分裂成100Kda和35Kda的两个片段，影响NOS3的功能导致NOS3合成减少或功能下降，NO减少，冠状动脉紧张性升高诱发冠状动脉痉挛。

PubMed收录内皮型一氧化氮合酶相关文献的计量学分析

PubMed收录内皮型一氧化氮合酶相关文献的计量学分析对PubMed收录的内皮型一氧化氮合酶近5年相关文献的年份、国别、期刊来源、多产作者、主要主题词进行统计，并对有关数据进行分析，以明确内皮型一氧化氮合酶相关文献分布特点和研究现状。

标签：PubMed；内皮型一氧化氮合酶；文献计量学本文运用文献计量学方法对美国国立医学图书馆提供的PubMed数据库收录的内皮型一氧化氮合酶近5年相关文献进行分析，旨在明确内皮型一氧化氮合酶文献分布特点和研究现状，为科研人员指明方向。

1材料与方法以PubMed数据库为数据源，统计近5年PubMed收录的内皮型一氧化氮合酶相关文献，检索式：”Nitric Oxide Synthase Type III”[Mesh] AND （”2009/06/13”[PDat] ：“2014/06/13”[PDat]）。

检索时间为2014年6月14日。

将获得的3428篇文献按发表时间、国别、来源期刊、多产作者及主要主题词进行统计分析。

2结果与分析2.1年代分布（表1）从表1可以看出，近5年内皮型一氧化氮合酶文献量约在672～805篇/年之间，这是因为1991年由For-stermann和Pollock在内皮细胞中首次发现内皮型一氧化氮合酶[1]，广大的医药工作者纷纷投入到对该酶的研究中。

2.2国别分布（表2）3428篇文献分散在40个国家中，表2为发表25篇以上内皮型一氧化氮合酶相关文献的国家。

表2所列的10个国家共发表内皮型一氧化氮合酶相关文献3186篇，占总文献量的92.94%，说明该领域的研究主要集中在少数国家，其中美国发表的内皮型一氧化氮合酶文献（约50.00%）远多于其他国家，表明美国在该领域的研究比其他国家先进。

值得注意的是中国发表75篇文献。

2.3来源期刊分布（表3）内皮型一氧化氮合酶相关文献共发表在854种期刊上，刊载36篇及以上内皮型一氧化氮合酶文献的杂志共10种，见表3，他们可以作为内皮型一氧化氮合酶研究的核心期刊，特别是American journal of physiology. Heart and circulatory physiology作为生理学领域的专业期刊，刊载的内皮型一氧化氮合酶相关文献最多（124，3.62%），远远超过排在第二位的PloS one （104，3.03%），可以作为内皮型一氧化氮合酶研究参考的最重要文献来源。

几种微血管形态学观测方法间的比较分析

・技术方法・几种微血管形态学观测方法间的比较分析张卫光1,　冯凤芝2,　夏家骝1,　田　珑1,　严宗毅1(1.北京大学医学部解剖学与组织胚胎学系,北京100083;　2.中国医学科学院北京协和医科大学北京协和医院,北京100730) 【摘要】目的:通过对6种微血管形态学观测方法的比较,使研究者能够选择出最适宜的实验方法。

方法:针对每一种方法,进行实验方法的简介和分析。

结果:6种方法间各有所长。

结论:研究者应根据实验的要求和条件,选择出一种方法或几种方法相结合,以达到研究的目的。

【关键词】微血管;　形态学;　方法学【中图分类号】R322　【文献标识码】A　【文章编号】1001-165X(2003)04-0408-03The comparison and analysis among a few methods on microvascular observation and measureZHA N G Wei2guang3,FEN G Feng2z hi,XIA Jia2liu,et al.3Depart ment of A natomy and histoembrology,Peking U niversity Health Science Center,Beijing100083,China【Abstract】Objective:To select a optimal method on microvascular observation and measure via comparisonand analysis among6kinds of morphological methods.Methods:Each of methods was briefly introduced and an2alyzed.R esults:Each of methods has its own advantages and disadvantages.Conclusion:According to differentexperimental need and condition,researchers should select a suitable method or integrate several methods.【K ey w ords】microvessel;　morphology;　methodology 微血管通常是指管径小于300μm的血管,主要包括微动脉、微静脉和毛细血管等,是研究组织和器官微循环的基础。

小鼠一氧化氮合成酶(NOS)说明书

小鼠小鼠一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶(NOS)(NOS)(NOS)酶联免疫酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围检测范围：： 96T1µmol/L - 32µmol/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(NOS)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)水平。

用纯化的小鼠一氧化氮合成酶(NOS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS)，再与HRP 标记的一氧化氮合成酶(NOS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)浓度。

试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（64µmol/L ） 0.5ml ×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

内皮型一氧化氮合酶来源的

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%LSP % 来源的一氧化氮 $ $#>*#/ (E#/,% & LS % 广泛表达于肿瘤组织 & 调节着肿瘤血管
的生长 & 但研究结果并不一致 ( 本研究中探讨 LS 对肿瘤血管形成的作用及其机制 ( 方法 ! 将 .C7TU V 9 小鼠随机分为 5 组 # LS 组小鼠右胁下接种 %LSP 基因转染的 U%W#& 肺癌细胞 ’ %LSP 拮抗组小鼠接种 U%W#& 肺癌细胞后腹腔注射 %LSP 拮抗剂 UGLX@F ’ 对照组接种 U%W#& 肺癌细胞后注射同等体积的生理盐水 ( 处理 5 周

胚胎小鼠肾脏发育中神经型一氧化氮合酶的定量分析

中的意义。
１材料和方法
品孔，ＯＶ电压下电泳，ｌＯ待指示剂达到分离胶时，电压增至将
２Ｏ直到指示剂达到胶的底部。将胶板取下，转移缓冲液ＯＶ，在
１１实验动物．
中洗涤１ｍｉ，０ｎ将胶与０４／．５ｍ硝酸纤维素膜置于滤纸与海绵ｚ之间，赶尽气泡，常温下，半干转印。至转印好的硝酸纤维素膜，ＳＴｒ盐缓冲液）ＴＢ（ｉｓ冲洗２，脱脂奶粉溶液室温封闭遍５４ ℃过夜，分别与一抗（兔抗鼠ｎＳ多克隆抗体）稀释度为ＮＯ（１４０，℃孵育过夜，ＢＴ（Ｂ－．Ｔｗｅ－０溶液）：０）４ＴＳＴＳＯ５ｅｎ２洗脱３次，与二抗一再ＨＲＰ标迹的羊抗兔ＩＧ抗体（释度为１ｇ稀：２０室温孵育１，ＴＢＴ溶液洗脱３次后与ＤＢ试剂显０）ｈ以ＳＡ色，扫描电泳条带，Ｂｎｅｄｒ用ａｄＬａｅ软件分析电泳条带光密度。１５统计学分析．应用ＳＳ１．统计软件包进行统计分析，有数据均以ＰＳ１５所均数 ±标准差（ ±ｓ形式表示，ｚ）采用双因素方差分析和ｇ检
冷冻待用的左肾组织，加入３倍体积的细胞裂解液， ℃下剪Ｏ碎、匀浆，将组织匀浆液静止３ｍｉ，０ｎ冷冻离心机（Ｏ０ｒｍｉ）１００／ｎ离心１ｍｉ，１上清液，Ｂａｆｒ０ｎ取５１用ｒｄｏｄ法测定蛋白含量后，分装成每离心管中含ｌｐＯｔ白，ｏＣｇ蛋一２￣保存备用。配置８ＤＳＳ聚丙烯酰胺分离胶和５的浓缩胶，ｌｐ取Ｏｔｇ肾组织蛋白细胞裂解上清液，入１＞Ｄ加０１ＳＳ样品缓冲液，

kit小鼠内皮型一氧化氮合成酶eNOS,ELISA试剂盒kit

kit小鼠内皮型一氧化氮合成酶eNOS,ELISA试剂盒kit间接法简单操作步骤：（1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原；（2）加稀释的受检血清，保温反应。

血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗-体复合物；（3）加酶标抗抗体；（4）加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。

操作常见问题：1．边缘效应使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应"，即外周孔显色较中心孔深。

经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。

聚***乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。

因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度(如37℃)，就可以很容易地排除“边缘效应"，并且可提高测定的重复性。

2．加样在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。

注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。

加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。

加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。

溅出会对邻近孔产生污染。

出现气泡则反应液界面有差异。

所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。

kit小鼠内皮型一氧化氮合成酶eNOS,ELISA试剂盒kit注意事项：1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。

测量时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。

标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。

内皮型一氧化氮合酶在正常心肌和心力衰竭心脏中作用机制

参考文献：
[1]Sam F，Kerstetter DL，Pimental DR，et al. Increased reactive oxygen species production and functional alterations in antioxidant enzymes in human failing myocardium. Journal of Cardiac Failure，2005，11（6）：473-480
结论
NO信号在心脏功能和生长的调节中起着关键的作用。除了其正常的生理调节，eNOS功能的变化是心力衰竭的一个主要因素。对eNOS亚型的表达、位置、活性进行改变，结果导致下游蛋白质功能紊乱，造成了心肌收缩功能障碍和不利的重构。通过恢复NO的产生或针对下游机制来解决eNOS信号机能失调的各种治疗策略已被提出；然而，在人类心衰模型中仅能获得有限的有益成果。也许可能存在一个可同时直接恢复NO和O2-水平的有前途的治疗方法，仍需要进一步研究调查。
内皮型一氧化氮合酶在正常心脏中信号转导分子机制
在心肌细胞中，内皮型一氧化氮合酶（eNOS）结合Caveolin-3基因存在于心肌细胞的caveolae中。除了能够增加[Ca2+]i，eNOS也可以通过蛋白激酶B（PKB）激活磷酸化位点1179丝氨酸的磷酸化，这对终末期心力衰竭的心肌起到保护作用。虽然一氧化氮是高度扩散的气体，但一氧化氮合酶信号是时间和空间的局部位点（即分割信号）。由于eNOS和nNOS存在于心肌细胞的不同部位（eNOS主要存在于心肌细胞caveolae中、nNOS主要存在于肌质网中），它们的信号转导通路、终末靶蛋白以及对心肌功能的影响各不相同。与nNOS不同的是，eNOS信号不能调控心肌基底细胞的收缩，但能调控β-AR刺激对其引起的收缩。在心肌细胞caveolae中，eNOS密切定位于L-型钙通道（LTCC）和β-AR位点处。与nNOS?/?心肌细胞相比，给予eNOS?/?心肌细胞β-AR刺激，其收缩力增加，而给予小鼠心肌细胞过表达eNOS基因相同的刺激，其收缩力减弱。

胚胎小鼠肾脏发育中神经型一氧化氮合酶的定量分析

胚胎小鼠肾脏发育中神经型一氧化氮合酶的定量分析【摘要】目的：探讨神经型一氧化氮合酶在胚胎小鼠妊娠不同时期肾脏发育中的意义。

方法：选用成年健康昆明小白鼠，按雌雄比例3：1同窝饲养，采用检查阴道栓脱落的方法确定雌鼠受孕时间。

选取胚龄12天(ED12)、14天(ED14)、16天(ED16)、18天(ED18)的胎鼠及出生时(PD0)仔鼠，分5组，每组各6只母鼠，每只母鼠取2只胎鼠或仔鼠，剖腹取肾脏，用免疫印迹技术（Western blot ）及光密度分析系统分别对各组胎鼠或仔鼠肾脏内nNOS进行定量检测。

结果： Western blot及光密度分析显示， ED14组肾脏nNOS含量最少，随后逐渐增多，PD0组肾脏nNOS含量最多。

结论：胚胎小鼠肾脏nNOS在胚胎第14天开始呈阳性表达，以后含量逐渐升高，出生时含量最高，表明nNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要作用。

【关键词】神经型一氧化氮合酶；胚胎小鼠；肾脏一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase， NOS）是一氧化氮（NO）合成的限速酶，是调节NO的重要环节。

NO通过NOS产生，是一种可作为信使分子的自由基气体［1］，可激活可溶性鸟苷酸环化酶，通过生成cGMP而发挥作用。

NOS可分为内皮型（endothelial NOS，eNOS）、神经型（neuronal NOS， nNOS）和诱导型（inducible NOS，iNOS）3类。

NO在肾脏血流动力学和肾脏多种生理功能中的作用决定NOS的活性改变，NO可通过调节肾小球毛细血管压和管球反馈来调节肾血流量，是有效调节肾脏的血液动力学的舒张因子，能对抗缩血管物质，参与调节血管张力。

尽管国内外学者对成年肾脏NOS的表达进行大量的研究，但nNOS在胚胎肾发育过程中动态表达尚未见报道。

本实验通过观察妊娠不同时期胚胎小鼠肾脏nNOS的表达，旨在探讨nNOS在胚胎小鼠肾脏早期发育中的意义。

1 材料和方法1.1 实验动物昆明小白鼠，由辽宁医学院实验动物中心提供。

内皮型一氧化氮合酶..

表２ＣＡＳ组与对照组Ｇ８９４Ｔ多态性的基因型和等位基冈频率分布比较［例数（％）］
表４冠心病危险因素ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析
２．４ＣＡＳ组硬化斑块与Ｇ８９４Ｔ基因多态性由于ＴＴ个体数量较少，以下与ＧＴ合并进行分析。在ＣＡＳ组中，不同斑块类型的分布、斑块总面积、Ｃｒｏｕｓｅ积分在基因型ＧＧ和ＧＴ＋ＴＴ问差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５，表５）。
ＣＡＳ斑块的Ｃｒｏｕｓｅ积分和总面积是反映ＣＡＳ程度的度量。与ＧＧ纯合子比较，Ｔ等位基因携带者具有较高的Ｃｒｏｕｓｅ积分和斑块面积，说明其ＣＡＳ进艘更为严蓖。这与Ｂｈｕｉｙａｎ等口１］得出等位基因Ｔ是发生ＩＭＴ增厚的保护因素的结论不同，可能与他们的研究群体年龄较轻以及种族不同有关。但和斑块类型分布一样，２个指标的组问差异还未达到显著差异。一个可能的解释足，Ｔ等位基因在ＣＡＳ发生的早期起ｒ比较重要的作用。但在后期其作用为其他风险冈素的作用所混杂。因此，它与ＣＡＳ发展的严蓖程度关联性较弱。这一假设有待大规模的前瞻性研究来证实。
我们的分析结果表明，ＣＡＳ组基因型ＧＴ、ＧＴ＋ＴＴ及Ｔ等位基因频率明显高于对照组，但对ＴＴ基因型差异无统计学意义。由于ＴＴ型的频率较低，因此需要增加样本量做进一步判定。与ＧＧ纯合子比较，携带等位基因Ｔ者发生ＣＡＳ的风险增大１倍；在对年龄和性别调整后，风险增大８９％，且差异仍有统计学意义。因此，可以认为有Ｔ等位基因的基因型ＧＧ＋ＧＴ与ＣＡＳ的发生之间有较强
进一步对其他常见危险冈素进行调整后，Ｔ等位基囚携带者的风险仍增大４３％，但差异无统计学意义，因此不能肯定Ｔ等位基因是ＣＡＳ的独立危险因素。使用逐步ｌｏｇｉｓｔｉｃ分析进行危险因素筛选，发现年龄增加、男性、高ＴＣ、高ＴＧ、吸烟及糖尿病等足ＣＡＳ的独立危险因素。与王根发等ｕ刮所报道的结果不同，本研究中患高血压未能作为独立危险囚素进入同归方程，应当是与构成对照组的人群高血压患病率较高有关。

内皮细胞型一氧化氮合酶在正常妊娠和胎儿生长受限中表达的研究进展

根据ＮＳ特性及基因定位将ＮＳ丝苏氨酸激酶（Ｒ和细胞外信号调节体滋养细胞分布致密而血管内皮较少，ＯＯＥＫ）而
ＡＴ蛋Ａｒｏ等ｏＮＳ分布在绒毛间质细胞和单核巨噬细分为两大类，即结构型ＮＳｃｎｉｔｅ激酶（Ｋ）白的调节．ｒｙ在以羊ｉＯＯ（ｏｓｔｉｔｕｖＮＳｃＯ）和诱导型ＮＳ（ｄｃｌＯ，ＮＳＯｉｕｉｅ为研究对象，通过高温暴露导致胎儿生胞。Ｍｒｎ等 …】免疫组织化学染色、ｎｂａｔｉ用ＮＳｉＯ）ＮＳ又分为神经元型ＮＳ长受限为模型中研究中发现．胎盘母面ＷｅｔｒＯ，Ｓ。ｃＯＮＯｓｎ印迹杂交和原位杂交的方法证实ｅ（ＮＳ和内皮细胞型ＮＳｅＯ）它们ｅＯｎＯ）Ｏ（ＮＳ，ＮＳ表达减少与ｐＫＡＴ蛋白浓度降低有细胞滋养细胞也表达ｅＯ。Ｅｓ１１观ＮＳｉ等［－］２３主要存在于神经元和内皮细胞中。已知所关．中期妊娠时脐带血中ＮＯ浓度增加察体外培养的滋养细胞向合体滋养细胞有ｃＯＮＳ均受ｃ。和钙调素（ａｄｌ）与ｐＲａｅｌｕｉｍｏｎＥＫ蛋白浓度增加有关。（）５雌激分化的不同阶段，ｅＯ用ＮＳ抗体进行免疫调节．任何因素引起含有ｃＯＮＳ细胞的素ｏ、【８受体参与雌激素相关的ｅＯＮＳ基组织化学的染色，发现细胞滋养细胞阴Ｃ２内流增加均可迅速激活ｃＯａＮＳ并增加因表达的调节［。 ” 性，合体滋养细胞阳性，明Ｎ而表Ｏ可与ＮＯ的合成．所以ｃＯＮＳ是钙离子依赖性３ｅＯＳ在正常妊娠的表达Ｎ滋养细胞分化有关。ＮＳ在妊娠子宫中Ｏ的。由免疫或炎症等刺激而诱导产生的妊娠大鼠、豚鼠和人的子宫平滑肌不同时期表达量不同，大鼠妊娠子宫ＮＳ称ｉＯ，ＯＮＳ主要存在于巨噬细胞中．故匀浆均存在依赖和不依赖于钙离子的ｅＯ．ＯＮＳｉＳ在整个妊娠时都有表达，Ｎ第有时又称ｍＮＳｉＯＯ，Ｓ的活性不受Ｃ的ＮＳ活性，以转化Ｌ精氨酸为Ｌ瓜氨１ＮＯ可一一３天显著增加，之后减少直至分娩。而且调节．以ｉＯ是钙离子非依赖性的。目所ＮＳ酸．提示：娠子宫存在细胞结构型和诱ｉＯ妊ＮＳ表达的改变与接受氨基胍治疗的

缺氧诱导因子_1_及内皮型一氧化氮合酶的研究进展

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内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性和急性冠脉综合征的关系的开题报告

内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性和急性冠脉综合征
的关系的开题报告
一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, NOS）是合成一氧化氮（NO）的重要酶类。

内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）被认为与血管功能调节密切相关。

G894T基因多态性是eNOS基因上一种常见的多态性，已经被多个研究发现与冠状动脉病变相关。

而急性冠脉综合征（ACS）是临床上急性冠脉事件的一种，其发生与病变形成及吸附血小板等多种因素相关。

因此，探究G894T基因多态性与ACS的关系，对于揭示ACS的发病机制有着一定的参考价值。

本研究旨在：探究G894T基因多态性与ACS的关系，分析G894T基因型在ACS患者中的分布情况，为临床预防和诊疗提供新的理论依据。

研究方法：收集100例ACS患者和100例对照组患者的DNA样本，进行G894T基因型的PCR扩增和限制性酶切，同时收集临床资料。

统计并分析两组患者G894T基因型分布的差异，比较两组患者基因型与临床资料的关系，并进行多因素回归分析。

预期结果：预计G894T基因的T等位基因频率在ACS患者组中高于对照组。

同时，希望通过统计和分析，探究G894T基因型与ACS的相关性，并初步探讨其在ACS的发病机制中的作用。

如果实验结果符合预期，则说明G894T基因多态性与ACS的发生存在相关性，为临床预防和诊治提供新的理论依据。

研究意义：ACS是一种常见疾病，其诊治一直是心脏科的难点。

通过研究G894T基因多态性与ACS的关系，可以为临床预防和诊治提供新的方向和思路，有望在防治ACS 的基因分子水平上取得新的突破。

内皮型一氧化氮合酶来源的NO调节

《癌症》Chinese Journal of Cancer，2010，29（1）：32－37·基础研究·1．四川省肿瘤医院肿瘤内科，四川成都6100412．四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室麻醉与危重病医学研究室，四川成都6100411．Department of Medical Oncology，Sichuan Cancer Hospital，Chengdu，610041，Sichuan，P．R．China2．Department of Anesthesiaand Critical Care Medicine ofState Key Laboratory of Biotherapy，West China Hospital，West China Medical School，Sichuan University，Chengdu，610041，Sichuan，P．R．China通讯作者：梅开Correspondence to：Kai Mei Tel．：86．28．85420660Fax：86．28．85420116E-mail：meikai1973＠yahoo．com．cn基金项目：四川省卫生厅课题（No．070028）Grant：Foundation of Health Department of Sichuan Province （No．070028）收稿日期：2009-05-06接受日期：2009-09-23［Abstract］Background and Objective：Studies have shown that nitric oxide （NO）derived from endothelial nitric oxide synthase（eNOS）is expressed widely in tumor tissues and regulates tumor angiogenesis．However，the results are controversial．This study was to investigate the effect of NO on tumor angiogenesis and its mechanism．Methods：C57BL／6mice inoculated with Lewis lung cancer cells were randomly divided into three groups．Mice in the NO group were inoculated with lung cancer cells transfected with eNOS gene，mice in the L-NAME group with L-NAME，an eNOS antagonist，and mice in the control group with normal saline．Plasma concentration of NO and the number of endothelial progenitor cells（EPCs）in peripheral blood were detected．Tumor vessel density，CD133＋cells，and the expression of VEGF-VEGFR in tumor tissues were also measured．Results：Four weeks after inoculation of Lewis cells，tumor volume was significantly larger in control group［（3022±401）mm3］than in the L-NAME group［（1204±97）mm3］and in the eNOS group［（1824±239）mm3］（P＜0．01）．eNOS protein and NO production increased significantly in Lewis lung cancer cells transfected with eNOS gene．But the number of CD133-positive cells and vessel density in tumors were significantly lower in the eNOS group than in the control group ［（48±19）／HPF vs．（103±27）／HPF，（19±7）／HPF vs．（31±9）／HPF，P＜0．05］．The number of EPCs in peripheral blood was not statistically different between each group．The levels of NO in blood and tumor tissue significantly decreased after the treatment of L-NAME，while the tumor vessel density reduced to12±5／HPF（P＜0．01，vs．the control group；P＜0．05，vs．the eNOS transfected group）．The number of EPCs in blood and that of CD133-positive cells in tumor tissue were significantly smaller in the L-NAME group than in the control group（P＜0．05）．Conclusion：NO derived from eNOS inhibits angiogenesis and tumor growth，which may be due to its suppression on either the mobilization or homing of EPCs via VEGF binding to VEGFR．Key words：endothelial nitric oxide synthase，nitric oxide，endothelial progenitor cells，tumor angiogenesis，vascular endothelial growth factor【摘要】背景与目的：内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）来源的一氧化氮（nitric oxicle，NO）广泛表达于肿瘤组织，调节着肿瘤血管的生长，但研究结果并不一致。

内皮型一氧化氮合酶mRNA在人类胎盘中的表达

内皮型一氧化氮合酶mRNA在人类胎盘中的表达中华妇产科杂志 1999年第3期第0卷论著作者：沈文洁杨梦庚鲁永鲜李东红单位：100037 北京，解放军第三○四医院妇产科(沈文洁，鲁永鲜)；第四军医大学唐都医院妇产科(杨梦庚，李东红)关键词：一氧化氮合酶；妊娠；胎盘；RNA；信使【摘要】目的探讨内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA 在胎盘、脐带中的表达，及eNOS在胎盘中的定位。

方法采用原位聚合酶链反应与原位杂交的方法，对10例正常足月妊娠的胎盘及脐带中的eNOS mRNA的表达进行定位研究。

结果脐动、静脉内皮细胞及胎盘合体滋养细胞均呈eNOS阳性染色，干绒毛血管内皮细胞也呈eNOS阳性染色，但弱于合体滋养细胞，终末绒毛血管内皮细胞未见eNOS染色。

结论eNOS主要定位于胎盘合体滋养细胞及干绒毛血管内皮细胞。

Expression of Endothelial Nitric Oxide Synthase mRNA in Human Placenta SHEN Wenjie, YANG Menggeng, LU Yongxian,et al. 304th Hospital of pLA, Beijing 100037【Abstract】Objective To determine the localization and type of nitric oxide synthase in human placenta.Methods By polymerase chain reaction and in situ hybridization. The eNOS mRNA expression was observed in 10 cases of human normal term placenta and cord.Results In human normal term placenta, positive staining of eNOS was evident in the syncytiotrophoblast and the endothelium of umbilical artery and vein, positive staining also presented in the endothelium of stem villous vessels, but it was absent in the endothelium of terminal villous capillary.Conclusion eNOS is present in syncytiotrophoblast and endothelium of stem villi vessels, and it can synthesize nitric oxide which results in the increase of nitric oxide in pregnancy.【Key words】Nitric-oxide synthase Pregnancy Placenta RNA, messenger妊娠妇女体内一氧化氮(NO)合成增加，是妊娠期母体适应性改变的环节之一。

内皮型一氧化氮合酶基因导入对高血压大鼠细胞凋亡的影响

内皮型一氧化氮合酶基因导入对高血压大鼠细胞凋亡的影响付军张婧黄慧琳冷吉燕（吉林大学白求恩第一医院，吉林长春130021）〔摘要〕目的研究内皮型一氧化氮合酶（eNOS ）基因导入对高血压大鼠心脏、肾脏细胞凋亡的影响。

方法将实验大鼠分为自发性高血压大鼠（SHR ）组、AAV-LacZ 组和AAV-eNOS 组，每组8只，另设8只正常血压（WKY ）大鼠为WKY 组。

AAV-eNOS 组经尾静脉注射AAV-eNOS 200μl （含eNOS 基因拷贝1ˑ1012），AAV-LacZ 组注射AAV-LacZ 200μl ，WKY 及SHR 组大鼠分别经尾静脉给予等量0.1mol /L PBS 。

应用原位末端标记（TUNEL ）法检测各组大鼠心、肾组织中的细胞凋亡，免疫组织化学方法检测eNOS 的表达。

结果①SHR 组大鼠心肌组织及肾脏组织染色阳性信号明显增多，与WKY 组比较具有显著性差异（P ＜0.05），AAV-eNOS 组凋亡阳性信号明显低于SHR 组，差异显著（P ＜0.05）。

②SHR 组及AAV-LacZ 组大鼠心肌组织eNOS 表达低于WKY 组，差异具有显著性（P ＜0.05）；与SHR 组大鼠比较，AAV-eNOS 组eNOS 表达明显增加，差异具有显著性（P ＜0.05）。

各组大鼠肾脏eNOS 蛋白表达未见明显差异。

结论eNOS 基因导入可明显抑制心肌及肾脏组织细胞的凋亡，保护靶器官。

〔关键词〕内皮型一氧化氮合酶；高血压；细胞凋亡〔中图分类号〕R544.1〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）12-2537-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.043基金项目：吉林省科学技术厅资助项目（No.200505199）通讯作者：冷吉燕（1965-），女，博士，教授，硕士生导师，主要从事老年病学研究。

第一作者：付军（1959-），男，博士，教授，硕士生导师，主要从事老年病学研究。