Study on Colloidal Gold Immunochromatography Assay
胶体金免疫层析技术及其在霉菌毒素检测中的应用
中国饲料2009年第23期氯金酸（HauCl 4）在还原剂的作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。
由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
Faulk 和Taylor （1971）首次将胶体金引入了免疫化学，建立以胶体金标记抗原（或抗体）检测相应抗体（或抗原）的免疫学新方法。
自此，胶体金标记技术成为继荧光标记、酶标记和放射性免疫标记之后的又一新型的免疫标记技术。
30年来，随着免疫胶体金标记技术的不断成熟，其已不仅广泛应用于电镜水平研究、光显微细胞化学、免疫沉淀及蛋白质染色技术上，并且被引进免疫诊断领域中，尤其是在医学检验的快速诊断方面显现出了巨大的前景。
目前已成熟应用于妊娠检测、病原体抗原或抗体检测、药物检测及疾病相关蛋白检测等（王东勇和张松乐，2003）。
霉菌毒素至今仍是全球畜禽饲料的威胁因素，每年大约有25%的农作物受到霉菌毒素的危害，其检测方法尤为重要。
近年来，胶体金免疫层析试纸条能对其进行快速灵敏的检测。
本文主要综述胶体金在霉菌毒素检测中的应用研究进展。
1胶体金免疫层析技术1.1胶体金标记原理由于胶体金颗粒具有高电子密度的特性，且颗粒聚集达到一定密度时（10个/mm ），出现肉眼可见的粉红色斑点，因而可以作为免疫层析试验的指示物。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金粒子对蛋白质具有很强的吸附能力，可以与葡萄球菌A 蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽络合物等非共价结合，因而成为基础研究和临床实验中的重要工具。
1.2胶体金免疫层析技术免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法（Glad 和Grubb ，1981）。
其原理是以条状纤维层析材料为固相，借助毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，同时，使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体（如抗体或抗原）发生高特异、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域（检测带），通过酶促显色反应或直接使用可目测着色标记物短时间（5～10min ）便可得到直观的试验结果。
免疫胶体金技术ppt课件
λmax
橙色
518nm
橙色
522nm
红色
525nm
紫红ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
535nm
TEM Images of Colloidal Au
Average particle size ~ 17nm
Good gold colloids and bad (unstable) gold colloids
. 劣质金外形不均一，且 非球形，有凝集景象， 颗粒间变异系数较大
➢Final conjugation (IgG)
Take 100ml of gold sol and adjust to Ph9 Adjust the dialyzed and centrifuged antibody solution
(0.1ug/ul) to pH9.2 Add the determined amount of antibody solution dropwise
胶体金与蛋白质的结合胜利与否，取决于pH值，普 通只需在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才干结 实地结合，因此，标志之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标志蛋白质的等电点略偏碱。
需求提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需求 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH能 够损害pH测定计的探头，因此，普通用精细的pH试纸测 定其pH即可.
2. Adjust the antibody (0.1ug/ul) to the proper pH with 100nM K2CO3 or 100mM HC1.
3. Add the antibody to each tube in a series from 0150ul (ie 0-15ug in steps of 0, 1, 2, 3 ....15ug).
胶体金免疫层析技术在动物源性食品中的应用
胶体金免疫层析技术在动物源性食品中的应用收稿日期：2009-05-19基金项目：国家“十一五”科技支撑计划（2006BAD06A11）作者简介：祁光宇（1978-），男，研究实习员，硕士研究生，研究方向为动物源性食品卫生研究与免疫学。
E-mail:qiguangyu0931@ *通讯作者：蒋韬，副研究员，博士生导师，研究方向为分子病毒学与免疫学。
E-mail:pcrjiang@祁光宇1,2，智晓莹1,2，任维维1,2，黄银军1，牟克斌1，刘学荣1，王宇1，蒋韬2*（1.中农威特生物科技股份有限公司，兰州730046；2.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州730046）摘要：胶体金标记免疫层析技术作为一种新型的免疫学快速诊断和检测技术，不仅具有敏感、特异、便捷、快速等特点，而且适合基层和现场使用。
目前，该技术已应用在动物源性食品安全与质量控制方面。
文章综述了该技术的基本原理，并且着重介绍了免疫胶体金技术在动物源性食品的应用现状和遇到的问题及发展前景。
关键词：胶体金免疫层析技术；动物源性食品；应用进展中图分类号：R392文献标志码：A文章编号：1005-9369（2010）04－0156－05Application progress of colloidal gold immunochromatographic assay(GICA)in animal-derived food/QI Guangyu 1,2,ZHI Xiaoying 1,2,REN Weiwei 1,2,HUANGYinjun 1,MU Kebin 1,LIU Xuerong 1,WANG Yu 1,JIANG Tao 2(1.China Agricultural Veterinary Biological Sciences and Technology Co.,Ltd,Lanzhou 730046,China;2.Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture/State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China)Abstract:Colloidal Gold Immunochromatographic Assay (GICA)is a new rapid diagnostic andtesting technology in immunology,which is not only sensitive,specific,convenient,fast,etc.,but also suitable for grass-roots and on-site use.At present,the technology has been used in animal-derived food safety and quality control.This article reviewed the basic principle of the technology,focusing on the application statu and the encountered problems and the prospects for development developing prospects of GICA on animal-derived food.Key words:colloidal gold immunochromatographic assay;animal-derived food;application progress 免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。
胶体金快速检测法测定水产品中兽药
分析检测胶体金快速检测法测定水产品中兽药残留丘韶麟1,2，龚晓莹1,2，司徒茵1,2，朱明智1,2，刘俊威1,2，陈 苑1,2（1.广东省食品工业研究所有限公司，广东广州 511442；2.广东省食品质量监督检验站，广东广州 511442）摘 要：以农贸市场销售的水产品为调查对象，针对高风险品种进行抽检，采用胶体金免疫层析法对水产品进行快速检测。
结果显示，8 178批次水产品中检出阳性样品227批次，阳性检出率为2.78%，其中问题比较突出的品种是贝类（花甲、白贝）、鱼类（泥猛鱼、黄骨鱼），主要问题项目为氯霉素、孔雀石绿。
本文通过对水产品中兽药残留进行快速检测分析，筛查出重点检测品种、项目，为提升水产品的质量安全提供参考。
关键词：胶体金免疫层析法；兽药残留；水产品Determination of Veterinary Drug Residues in Aquatic Products by Colloidal Gold Rapid DetectionQIU Shaolin1,2, GONG Xiaoying1,2, SI Tuyin1,2, ZHU Mingzhi1,2, LIU Junwei1,2, CHEN Yuan1,2(1.Guangdong Food Industry Institute, Guangzhou 511442, China; 2.Guangdong Food Quality Supervision andInspection Station, Guangzhou 511442, China)Abstract: The aquatic products sold in the farmers’ market were investigated as objects, and the high-risk varieties were randomLy examined. Colloidal gold immunochromatography was used to detect the aquatic products quickly, and the veterinary drug residues in aquatic products were analyzed. The results showed that 8 178 batches of aquatic products were sampled and 227 batches of positive samples were detected, with a positive detection rate of 2.78% , among them the more prominent problem species are shellfish (armored shell, white shell) , fish (mud predatory fish, yellow bone fish), the main problem items are chloramphenicol and malachite green. Through the rapid detection and analysis of veterinary drug residues in aquatic products, key test varieties and items were screened, in order to improve the quality and safety of aquatic products and ensure the safety of people’s dinner tables.Keywords: colloidal gold immunochromatography; veterinary drug residue; aquatic products水产品的兽药残留问题一直都是人们关注的焦点，随着水产养殖业的持续发展，其呈现出规模化及高密度养殖态势，极大程度地满足了消费者对水产品的日常需求。
瓜类细菌性果斑病研究新进展
中国瓜菜2017，30（11）：1-5收稿日期：2017-09-07；修回日期：2017-10-19基金项目：北京市自然科学基金(6162023)；国家西甜瓜产业技术体系（CARS-25）；农业部财政项目；中国农业科学院创新工程作者简介：蔡馥宇，女，在读本科生，研究方向为分子植物病理学。
E-mail ：caifuyu96@ 并列第一作者：关巍，男，助理研究员，主要从事植物细菌性病害研究。
E-mail ：wyngwan@通信作者：赵廷昌，男，研究员，主要从事瓜菜细菌病害防控研究。
E-mail ：zhaotgcg@瓜类细菌性果斑病是危害西瓜、甜瓜等多种葫芦科作物的一种重要的种传细菌性病害。
其病原菌是西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli ），是一种活体营养型细菌，属于革兰氏染色阴性菌。
该病害广泛分布于世界各地，近年来传入中国。
由于其具有较高的破坏性，对西瓜、甜瓜产业造成了严重威胁，影响瓜农经济收益，是危害我国西瓜、甜瓜生产的重要病害。
2007年，西瓜噬酸菌被列入《中华人民共和国进境植物有害性生物名录》中。
由于西瓜噬酸菌种内的多样性及与寄主之间关系复杂，使得对该病害的防控十分困难，目前仍没有找到有效的防治手段。
当前的研究多集中于病害检测和防治、传播方式以及致病机制等方面。
笔者从西瓜噬酸菌检测鉴定、致病机制、防治管理等方面，对其国内外研究进展及防治方法予以概述，以期为对其进行有效的检测及防治提供理论参考。
1传播发生瓜类细菌性果斑病为种传病害，其病原菌可以附着在种子表面，种子发芽后可感染子叶和真叶。
带菌种子是该病主要初侵染来源，感病果实分泌的菌脓可造成二次侵染。
Chalupowicz 等[1]通过使用扫描电镜、荧光标记等技术证实，在西瓜育苗棚中子叶为主要的二级侵染源。
近年来的研究发现了一些新的传播方式，Choi 等[2]通过研究发现，二斑叶螨（two-spotted spider mite ，TSSM ）可以作为西瓜噬酸菌的传播媒介，通过转座子构建绿色荧光标记的西瓜噬酸菌突变体菌株，发现TSSM 可以将西瓜噬酸菌从感病西瓜植株传播至健康植株上；B.Dutta 等[3]研究表明，西瓜噬酸菌从植株柱头侵入可以比从果皮侵入更快地在西瓜胚珠定殖，在这个过程中，花粉管起到了重要作用。
免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)-2
免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)-2（3）配制胶体金溶液的pH以中性（pH7.2）较好。
（4）氯金酸的质量要求上乘，杂质少。
最好是进口的。
（5）氯金酸配成1％水溶液在4℃可保持数月稳定，由于氯金酸易潮解，因此在配制时，最好将整个小包装一次性溶解。
（三）胶体金标记蛋白的制备胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。
如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。
除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。
1．待标记蛋白溶液的制备将待标记蛋白预先对0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后100 000g4℃离心1 h，去除聚合物。
2．待标胶体金溶液的准备以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl调胶体金液的pH值。
标记IgG时，调至9.0；标记McAb时,调至8.2；标记亲和层析抗体时，调至7.6；标记SPA时，调至 5.9～6.2；标记ConA时，调至8.0；标记亲和素时，调至9～10。
由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板，因此，在调节pH时，采用精密pH试纸测定为宜。
3．胶体金与标记蛋白用量之比的确定（1）根据待标记蛋白的要求，将胶体金调好pH之后，分装10管，每管1ml。
（2）将标记蛋白（以IgG为例）以0.005Mol/L pH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml～50µg/m l，分别取1ml，加入上列金胶溶液中，混匀。
对照管只加1ml稀释液。
（3）5min后，在上述各管中加入0.1ml 10％NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。
（4）结果观察，对照管（未加蛋白质）和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象；而加入蛋白量达到或超过最低稳定量的各管仍保持红色不变。
胶体金试纸条技术
The principle of the colloidal gold strip diagnosis technology
Using the nitrocellulose membrane as the carrier and making use of the capillary effect of microporous membrane, we add liquid on one side of the membrane, then the liquid move to the other end slowly. After the combination of antigenantibody, we can take advantage of the colloidal gold color reaction to detect antigen or antibody. It is the most commonly method to detect antigen by using double clamp method
If there are a test specific antigen in the specimen, it can be combined with immune antibodies in the gold complexes. when the antigen-antibody complex flows to the test area, it can be captured by solid phase antibody and show reaction red line on the membrane.
measure
When measuring, we make the bottom of test paper strip immerse in the liquid samples, then the bottom absorbs liquid and move towards the upper end. when the liquid flow through the C , the immune gold complex dissolve on the strip.
株产单宁酶戊糖片球菌的筛选及功能评价
第46卷第6期2023年11月河北农业大学学报JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL UNIVERSITY Vol.46 No.6Nov.2023A 型塞内卡病毒胶体金免疫层析抗原检测试纸的研制安满鑫1，魏子宇1，陈玉潇1，吕 兰1，吴文璇1，袁万哲1,2，马 明3，李丽敏1,2（1.河北农业大学 动物医学院，河北 保定 071000；2. 河北省兽医生物技术创新中心，河北 保定 071000；3. 瑞普生物药业有限公司，河北 保定 071000）摘要：为建立一种快速检测A 型塞内卡病毒的免疫层析方法，本研究制备了SVA VP 2蛋白的单克隆抗体，将单克隆抗体1D 6作为金标记抗体，以单克隆抗体2C 2和羊抗鼠IgG 分别作为检测抗体和质控抗体，用双抗体夹心原理制备了试纸条。
结果表明，本研究所制备的2株单克隆抗体均具有良好的免疫活性，1D 6和2C 2 识别不同抗原表位且具有较高的亲和力。
基于单克隆抗体1D 6和2C 2制备的免疫层析试纸条能特异性的检测A 型塞内卡病毒且与PRRSV 、FMDV 和SFV 无交叉反应；病毒的最低检测限为4.8×102 TCID 50/mL 且具有良好的重复性；该方法与RT-PCR 方法检测临床样品的一致率为100%。
综上所述，本研究制备的SVA 胶体金免疫层析试纸具有良好的检测性能，为临床上SVA 的防控提供了快速、简便的方法。
关 键 词：A 型塞内卡病毒；单克隆抗体；免疫层析；快速检测中图分类号：S 855.3 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：文献标志码：ADevelopment of colloidal gold immunochromatographicantigen test strip for Senecavirus AAN Manxin 1, WEI Ziyu 1, CHEN Yuxiao 1, LV Lan 1, WU Wenxuan 2, YUAN Wanzhe 1,2, MA Ming 3, LI Limin 1,2（1. College of Veterinary Medicine, Hebei Agricultural University, Baoding 071000, China; 2. Hebei VeterinaryBiotechnology Innovation Center, Baoding 071000, China; 3. Ruipu Biogical Pharmaceutical Co. LTD.,Baoding 071000, China ）Abstract: To establish an immunochromatographic detection method for rapid detection of Senecavirus A, the monoclonal antibodies against SV A VP2 protein was prepared and a test strip was developed according to the double antibody sandwich principle with gold-labeled monoclonal antibodies against 1D6, monoclonal antibodies 2C2 as the test antibody and sheep anti mouse IgG as the quality control antibody. The results showed that the two monoclonal antibodies prepared in this study have good immune activity. 1D6 and 2C2 recognized different epitopes with high affinity. The immunochromatographic strip prepared with the monoclonal antibodies 1D6 and 2C2 could specifically recognize Senecavirus A without cross reaction with PRRSV 、FMDV and SFV . The lowest detection limit for SV A was 4.8×102 TCID 50/mL with good repeatability. The coincidence rate was 100% between this method and RT-PCR for detecting clinical samples. In conclusion, the SV A colloidal gold immunochromatographic test strip prepared in this study displayed good detection performance, which provides a rapid and simple method for controlling of SVA in收稿日期：2023-08-13基金项目： 河北省重点研发计划项目（22326606D）；河北省青年拔尖人才项目（2018）.第一作者：安满鑫（1997—），男，河北唐山人，硕士研究生，从事兽医免疫学相关研究.E-mail:******************通信作者：李丽敏（1982—），女，河北石家庄人，博士，副教授，从事预防兽医学研究.E-mail:*****************本刊网址：文章编号：1000-1573(2023)06-0083-06DOI ：10.13320/ki.jauh.2023.009684第46卷河北农业大学学报MONTANIDE ISA 201 VG 佐剂为SEPPIC 公司产品；HRP-羊抗鼠IgG 购于北京博奥龙生物科技有限公司；羊抗鼠IgG 、TMB 显色液购于北京索莱宝科技有限公司；DAB 显色液、FITC-羊抗鼠IgG 购于中杉金桥生物技术有限公司；RMPI 1640培养基购于Gibco 公司、DMEM 培养基购于韦森特生物技术有限公司、胎牛血清购于Dogesce 公司；HAT 选择培养基、HT 培养基、氯金酸为Sigma 公司产品；柠檬酸三钠、无水碳酸钾购于天津福晨化学试剂厂。
被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值
应用研究被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值王居鹏1，2，朱黎娜2，马明坤2，陈慧3，郭素香3，任丽1△摘要：目的分析被动凝集法（PA）、间接免疫荧光法（IFA）和胶体金法（GICT）联合检测对儿童肺炎支原体（MP）感染的诊断价值。
方法选取进行MP抗体检测的患儿617例，以临床诊断为判断标准，分为MP感染组（345例）和非MP感染组（272例）。
所有患儿均经PA检测MP总抗体，经IFA和GICT检测MP-IgM抗体。
分析PA、IFA和GICT 这3种方法单独检测及两两联合检测与临床诊断的一致性，受试者工作特征（ROC）曲线评价其对MP感染的诊断价值，分析PA联合IFA检测2组患儿抗体情况。
结果MP感染组PA检测MP总抗体、IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性率较非MP感染组高（P＜0.01）。
PA检测MP总抗体的阳性检出率高于IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性检出率（P＜0.01）。
PA联合IFA与临床诊断为中度一致（Kappa值=0.41，P＜0.05）。
3种方法单独检测和两两组合检测中PA联合IFA的曲线下面积、敏感度、总符合率、阴性预测值最高，阴性似然比最低。
GICT单独检测特异度最高。
IFA单独检测阳性预测值和阳性似然比最高。
当MP-IgM抗体阳性时，MP感染组23.44%的患儿总抗体滴度＜1︰160，非MP感染组47.22%的患儿总抗体滴度≥1︰160。
当MP-IgM抗体阴性时，MP感染组91.91%的患儿MP总抗体滴度≥1︰160，非MP感染组有73.50%的患儿总抗体滴度＜1︰160。
结论PA和IFA联合检测可为临床诊断儿童MP 感染提供更客观、准确的检测结果。
关键词：肺炎支原体；儿童；胶体金；免疫球蛋白M；荧光抗体技术，间接；被动凝集法；间接免疫荧光法中图分类号：R446文献标志码：A DOI：10.11958/20212561Diagnostic value of particle agglutination,indirect immunofluorescence assay and immunecolloidal gold technique combined detection for Mycoplasma pneumoniae antibody inchildren with Mycoplasma pneumoniae infectionWANG Jupeng1,2,ZHU Lina2,MA Mingkun2,CHEN Hui3,GUO Suxiang3,REN Li1△1Department of Clinical Laboratory,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical ResearchCenter for Cancer;Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin;Tianjin's Clinical Research Center for Cancer, Tianjin300060,China;2Department of Clinical Laboratory,3Department of Pediatrics,Second TeachingHospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine△Corresponding Author E-mail:*************.cnAbstract:Objective To analyze the diagnostic value of particle agglutination(PA),indirect immunofluorescence assay(IFA)and immune colloidal gold technique(GICT)combined detection for Mycoplasma pneumoniae(MP)infection in children.Methods A total of617children were selected for MP antibody detection,and children were divided into the MP infection group(345cases)and the non-MP infection group(272cases)based on clinical diagnosis.All the children were detected MP total antibody by PA,and MP-IgM antibody by IFA and GICT.The consistency of PA,IFA and GICT detection alone or in combination with clinical diagnosis was analyzed.The diagnostic value of receiver operating characteristic(ROC) curve in the diagnosis of MP infection was evaluated,and the antibody detection of PA combined with IFA was analyzed.Results The positive rate of total MP antibody detected by PA and MP-IgM antibody detected by IFA and GICT was higher in the MP infected group than those in the non-MP infected group(P＜0.01).The positive rate of total MP antibody detected by PA was significantly higher than MP-IgM antibody detected by IFA and GICT(P＜0.01).PA combined with IFA was moderately consistent with clinical diagnosis(Kappa=0.41,P＜0.05).The area under the curve of the diagnostic value,基金项目：国家自然科学基金资助项目（81904250）；天津市教委科研计划项目（2019KJ045）作者单位：1天津医科大学肿瘤医院检验科（邮编300060），国家肿瘤临床医学研究中心；天津市“肿瘤防治”重点实验室；天津市恶性肿瘤临床医学研究中心；2天津中医药大学第二附属医院检验科，3儿科作者简介：王居鹏（1990），男，主管技师，主要从事临床免疫学相关研究。
科玛嘉金黄色葡萄球菌培养基使用说明
科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基使用说明书金黄色葡萄球菌是临床及食品工业中经常遇到的一种致病菌。
由金葡菌引起的院内感染正变得日益严重，因此，正确快速地检测金葡菌尤其是耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）就显得尤为重要。
科码嘉金葡菌显色培养基中添加了针对金葡菌的选择性色素，因而具有较高的特异性和灵敏度。
而且同常规培养基相比，能较好地消除假阳性提高金葡菌的检出率。
为筛选甲氧西林抗性菌株，可以在科码嘉金葡菌显色培养基中添加例如妥布霉素或甲氧西林等抗生素。
一、组分琼脂15.0g/L 蛋白胨及盐分65g/L 色素 2.5g/LpH6.9±0.2二、操作1．取瓶内干粉，溶于1000ml蒸馏水或纯水中，可以根据需要按照82.5 g/L 比例扩大、缩小。
2．将上述干粉缓慢倒入蒸馏水中，充分搅拌溶解。
3．加热至100℃，并按常规不断搅拌。
如果使用高压锅，无需加压，加热不能超过100℃。
混合物也可以在微波炉中加热，用此法加热，煮沸后混合物立即移出微波炉并轻轻搅拌，而后移入微波炉再加热，直至琼脂完全溶解（大量气泡代替泡沫产生，大约需要2分钟）。
4．使用倾注程序：将培养基水浴冷却至48℃，准备直径为90mm的已灭菌的带盖培养皿，每个培养皿接种1ml样品，然后倾注15±1ml上述溶解的培养基，混匀使其凝固，倒置，37℃培养24小时。
5．如果用表面接种程序：将培养基倾注于已灭菌的培养皿中，使其凝固，在室温可保存一天或在冰箱里贮存数天（避光，4℃）。
划线接种，37℃培养24小时。
三、贮存1.干粉需保存在15-30℃干燥环境中。
2.倾注好的培养剂在室温可保存一天，4℃冰箱中避光可以贮存两星期。
四、结果菌落色彩初筛微生物金黄色葡萄球菌其他紫红色、红色、粉红色蓝色、无色或奶油色注：最后的鉴定必须做补充实验。
★使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃四、药敏实验为研究氧氟沙星和妥布霉素对金葡菌的抗菌性，培养基中加入抗生素，使其最终浓度为氧氟沙星2mg/l、妥布霉素8mg/l，孵育48小时。
胶体金Colloidal gold
COLLOIDAL GOLD95 Horse Block Road, Yaphank NY 11980-9710Tel: (877) 447-6266 (Toll-Free in US) or (631) 205-9490 Fax: (631) 205-9493Tech Support: (631) 205-9492 tech@PRODUCT INFORMATIONCOLLOIDAL GOLD-ANTIBODY AND PROTEIN CONJUGATESProduct Name:COLLOIDAL GOLD CONJUGATESCatalog Number:CG0300...CG3054Appearance:Brown (3 nm gold conjugates), red (5, 10, 15 nm gold conjugates) or purple (30 nm gold conjugates) solutionsRevision: 1.3 (March 2000)CONTENTSProduct InformationGeneral Considerations for Immunostaining with Colloidal Gold ReagentsElectron Microscopy Immunolabeling with Colloidal Gold1. Cells in Suspension2. Thin SectionsSilver Enhancement of Colloidal Gold for EMImmunolabeling and Silver Enhancement with Colloidal Gold for Light MicroscopyImmunoblottingReferencesWarning: For research use only. Not recommended or intended for diagnosis of disease in humans or animals. Do not use internally or externally in humans or animals. Non radioactive and non carcinogenic.PRODUCT INFORMATIONThe Nanoprobes line of colloidal gold conjugates1,2 consists of affinity purified IgG antibodies or streptavidin adsorbed to colloidal gold particles with 3, 5, 10, 15, and 30 nm diameters. These conjugates are purified by size exclusion chromatography for minimal aggregates.The optical density at 520 nm = 3.0 for 3,5, and 10 nm conjugates; 4.0 for 15 nm conjugates; and 5.0 for 30 nm conjugates. Except for the 30 nm conjugate, these conjugates come as solutions in 20mM Tris buffered saline, pH 8.2, with 1% bovine serum albumin and 0.05% sodium azide as stabilizers. The 30 nm conjugates are packaged with 0.1 % bovine serum albumin and 0.05% Carbowax as stabilizers.Colloidal gold particle concentration and number of adsorbed antibodiesFrom spectroscopic measurements on freshly prepared colloidal gold sols of different sizes, we have calculated the concentrations of gold particles in our commercial preparations of colloidal gold. These values assume that all the tetrachloroaurate used for the preparation is converted to colloidal gold, and that the gold particles are composed of metallic gold of density 19.31 grams per mL:。
胶体金试纸条检测技术实用PPT资料
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG） 的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。 外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
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作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于 的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。 胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。 双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。 胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。 结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉
免疫学实验胶体金免疫层析技术课件
胶体金免疫层析试纸条的构成
样品垫
金标垫
膜
吸收垫
衬板
胶体金免疫层析试纸条类型：
GICA有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法。 夹心法反应原理
B 阳性
C 阴性
间接法反应原理
B 阳性
C 阴性
竞争抑制法反应原理
阴性
弱阳性
阳性
检测线颜色强度与SD浓度负相关
目的：掌握间接试纸卡的检测原理，操
作方法及结果判定方法
实验材料：
1、禽流感H9亚型抗原检测试纸卡
2、禽流感抗体检测试纸卡 3、磺胺嘧啶残留检测试纸卡 4、禽流感H9亚型病毒阳性对照 5、禽流感H9亚型病毒阴性对照
6、禽流感抗体阳性对照
7、磺胺嘧啶残留阳性对照 8、磺胺嘧啶残留阴性对照
实验步骤：
1、加被检样品：100 ul/孔，阳性、阴性对照。 2、5min后观察结果。
胶体金免疫层析技术
（colloidal gold immunochromatography assay, GICA）
胶体金免疫层析技术
20 世纪 80-90 年代在酶联免疫吸附试验、 乳胶凝集试验、单克隆抗体技术、胶体金免疫 技术和新材料技术基础上发展了新型体外诊断 技术——胶体金免疫层析技术（colloidal gold immunochromatography assay, GICA）。
基础金核
双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中
zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附 功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白 质等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等 非共价结合，形成胶体金标记物。
胶体金-显微镜-单个核细胞
胶体金（colloidal gold），又称金溶胶（gold solution），是指分散相粒子直径在l—150nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系，颜色呈桔红色到紫红色。
胶体金可以作为标记物用于免疫组织化学，近10多年来胶体金标记已经发展为一项重要的免疫标记技术。
胶体金免疫分析在药物检测、生物医学等许多领域的研究已经得到发展，并越来越受到相关研究领域的重视。
胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（gold solution），是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。
胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。
胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核，较小的胶体金颗粒基本是圆球形的，较大的胶体金颗粒（一般指大于30nm以上的）多呈椭圆形。
在电子显微镜下可观察胶体金的颗粒形态。
胶体金因而具有胶体的多种特性，特别是对电解质的敏感性。
电解质能破坏胶体金颗粒的外周永水化层，从而打破胶体的稳定状态，使分散的单一金颗粒凝聚成大颗粒，而从液体中沉淀下来。
某些蛋白质等大分子物质有保护胶胶体金、加强其稳定性的作用。
呈色性微小颗粒胶体呈红色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。
最小的胶体金（2～5nm）是橙色的，中等大小的胶体金（10～20nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（30～80nm）则是紫红色的。
根据这一特点，用肉眼观察胶体金的颜色可粗略估计金颗粒的大小。
光吸收性胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰，这个光吸收峰的波长（λmax）在510～550nm范围内，随胶体金颗粒大小而变化，大颗粒胶体金的λmax偏向长波长，反之，小颗粒胶体金的λmax则偏于短波长。
胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金却也并非易事。
因此对每次制好的胶体金应加以检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程度及有无凝集颗粒等。
副溶血弧菌TDH 快速免疫胶体金检测板的研制
doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2020.21.015㊃免疫学技术与方法㊃副溶血弧菌TDH 快速免疫胶体金检测板的研制①杨靖亚 方 艳 陆晓帆 张 建 赵 勇(上海海洋大学食品学院,农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室,上海201306) 中图分类号 R392.12 文献标志码 A 文章编号 1000⁃484X (2020)21⁃2635⁃05①本文为上海市科委工程中心能力提升项目(No.16DZ2280300)㊂作者简介:杨靖亚,女,博士,副教授,主要从事海洋毒素的免疫学检测及海洋生物资源综合利用方面的研究,E⁃mail:jyyang@㊂[摘 要] 目的:开发特异性检测副溶血弧菌耐热直接溶血毒素(TDH)的快速免疫胶体金检测板㊂方法:利用本实验室前期制备的两株TDH 单克隆抗体T6D4和T9H4,以双抗体夹心法研制胶体金检测板㊂结果:研制出的快速免疫胶体金检测板能够特异性地检测TDH,检测限为500ng /ml㊂结论:成功研制出能够特异性检测副溶血弧菌TDH 的快速免疫胶体金检测板,为TDH 的快速检测提供了新的测试工具㊂[关键词] 副溶血弧菌;耐热直接溶血毒素;快速免疫胶体金检测板Development of colloidal gold immunochromatography plate for rapid detection of TDH produced by Vibrio parahaemolyticusYANG Jing⁃Ya ,FANG Yan ,LU Xiao⁃Fan ,ZHANG Jian ,ZHAO Yong .College of Food ,Shanghai Ocean University ,Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Aquatic Product on Storage and Preservation ,Ministry of Agriculture ,Shanghai 201306,China[Abstract ] Objective :To develop colloidal gold immunochromatographic test plate for specific detection of Vibrioparahaemolyticus heat⁃resistant direct hemolytic toxin (TDH).Methods :Using two TDH monoclonal antibodies T6D4and T9H4prepared in our laboratory,colloidal gold immunochromatographic test plate was developed based on principle of double antibody sandwich method.Results :Developed colloidal gold immunochromatographic test plate can specifically detect TDH with a minimumdetection limit of 500ng /ml.Conclusion :Colloidal gold immunochromatographic test plates were successfully prepared to detect TDH of Vibrio parahaemolyticus specifically,which providing a new testing tool for rapid detection of TDH.[Key words ] Vibrio parahaemolyticus ;Thermostable direct hemolysin;Gold immunochromatographic assay 副溶血弧菌是革兰氏阴性嗜盐菌,存在于沿海栖息地和河口,是导致日本海产品相关胃肠炎的主要原因[1,2]㊂副溶血弧菌是人类病原体,可引起胃肠炎㊁伤口感染和败血症[3]㊂毒性副溶血弧菌菌株通常产生热稳定的直接溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)和/或TDH 相关溶血素(TRH),被认为是物种致病性分子标记[4⁃7]㊂TDH 可引起Wagatsuma 琼脂培养基中称为神奈川现象(Kanagawa phenomenon,KP)的β型溶血,大部分临床分离株均为KP 阳性[8,9]㊂现已开发了副溶血弧菌的多重PCR 检测方法,同时使用物种特异性基因和毒素基因用于毒性特异性检测和非毒性副溶血菌株检测,但灵敏度和特异性不高,经常出现假阳性和假阴性结果[10⁃14]㊂因此相继开发了针对TDH 的新型检测方法,如质谱⁃脉冲电泳⁃PCR 连用技术㊁斑点ELISA 方法㊁CPA⁃核酸试纸条法,但具有耗时㊁成本昂贵等缺陷[15⁃17]㊂目前急需一种便捷㊁经济㊁快速的检测方法以满足市场需求㊂向辉等[18]研发了新型纳米标记免疫层析技术,但待测样本的前处理较为繁琐㊂胶体金试纸条检测法是一项发展迅速的新型检测手段,使用便捷㊁检测速度㊁灵敏度高㊁特异性强,但目前国内对于将胶体金技术用于副溶血弧菌TDH 的快速检测鲜有报道[19]㊂本研究旨在研制针对副溶血弧菌TDH 快速检测的快速免疫胶体金检测板,以满足大批量样品快速高效检测的需要㊂1 材料与方法1.1 材料 副溶血弧菌(ATCC33846)㊁沙门氏菌㊁大肠杆菌㊁单核细胞增多性李斯特菌(上海海洋大学食品安全实验室惠赠),抗TDH单克隆抗体T6D4㊁T9H4和毒素TDH(本实验室纯化制备),氯金酸(HAuCl4,Sigma公司),牛血清蛋白㊁Tween20 (上海正极生物有限公司),Tris㊁sucrose(上海生工生物有限公司),Whatman AE99㊁Pall Vivid170㊁Sartorius CN140㊁Millipore135硝酸纤维素膜(上海杰一生物科技有限公司)㊂1.2 方法1.2.1 制备胶体金溶液 参考文献[20],将待用玻璃器皿洗净㊁浸泡于5%二氯二甲基硅烷的氯仿溶液中,超纯水冲净干燥㊂100ml0.01%HAuCl4置于恒温磁力搅拌器煮沸,迅速加入1.2ml新鲜配制的1%柠檬酸三钠持续加热,不断搅拌至液体颜色转变为酒红色并继续煮沸10min㊂待胶体金溶液冷却至室温后补充超纯水至100ml,收集于棕色玻璃瓶并置于4℃冰箱中备用㊂1.2.2 胶体金⁃抗体复合溶液制备 磁力搅拌器室温匀速搅拌60min,使胶体金溶液中的金颗粒与待标记TDH单克隆抗体T6D4充分吸附平衡,加入10%BSA 0.01mol/L PBS(pH7.4),封闭处理金颗粒上未结合单克隆抗体的结合位点,使复合物溶液中BSA终浓度为1%,室温匀速继续搅拌60min,13000r/min离心60min,去上清,加入2ml0.01mol/L PBS(pH7.4)保存液重悬沉淀,4℃保存备用㊂1.2.3 胶体金颗粒与待标记抗体的标记试验 选择单克隆抗体T6D4作为捕获抗体与胶体金颗粒标记,制备胶体金⁃抗体的复合物溶液㊂加入0.1mol/L K2CO3调整胶体金溶液pH值,设置pH 为6.0㊁6.5㊁7.0㊁7.5㊁8.0㊁8.5㊁9.0,每试管胶体金溶液中分别加入0㊁0.5㊁1.0㊁1.5㊁2.0㊁2.5㊁3.0㊁3.5㊁4.0㊁4.5㊁5.0㊁5.5㊁6.0μl1mg/ml的待标记单克隆抗体T6D4,充分混匀后室温静置30min,每管添加100μl10%NaCl溶液观察溶液颜色,进行pH和抗体标记量优化㊂1.2.4 金标溶液最佳释放条件的优化 设置不同蔗糖浓度的金标溶液稀释液和不同浓度Tween20样品垫预处理液㊂分别为1%㊁3%㊁5%蔗糖的1% BSA0.01mol/L PBS(pH7.4);含0.5%㊁1%㊁2% Tween20的0.01mol/L PBS(pH7.4)㊂1.2.5 假阳性消减试验 选用2mg/ml浓度羊抗小鼠的抗体包被试纸条上的C线作为质控线;选用2mg/ml的T9H4单抗包被试纸条上的T线,作为检测线;选用含5%sucrose的1%BSA0.01mol/L PBS(pH7.4)溶液以1∶1含稀释金标抗体溶液包被金标垫㊂为防止假阳性结果,在洗涤液中加入一定量盐离子,分别设置含0.1%㊁0.2%㊁0.3%㊁0.4% NaCl的1%Tween200.01mol/L PBS(pH7.4)洗涤液,检测空白样本,得到最佳盐离子浓度,进一步优化检测体系㊂1.2.6 NC膜上检测抗体T9H4的稀释缓冲液及检测浓度的优化 稀释溶液的pH值会对检测结果的显色造成影响,分别选用pH7.0㊁7.4㊁8.0的3种0.01mol/L PBS溶解检测抗体T9H4,点于NC膜上㊂选定最佳检测抗体溶解液后,分别设置0.5㊁1.0㊁1.5mg/ml浓度的检测抗体T9H4,点于T线,以期寻找出最佳检测浓度㊂1.2.7 不同型号NC膜的比较 选择Whatman AE99㊁Pall Vivid170㊁Sartorius CN140㊁Millipore135硝酸纤维素膜4种硝酸纤维素膜进行组装,检测结果㊂1.2.8 快速免疫胶体金检测板的组装及使用 试纸条PVC底板用切条机裁剪为8.0cm×0.5cm,依次将NC膜㊁吸水垫㊁金标结合垫㊁样品垫黏附于PVC胶板;其中金标结合垫为单克隆抗体T6H4标记的胶体金溶液,NC膜的检测线为单克隆抗体T9H4㊁质控线C线上采用羊抗小鼠抗体,37℃恒温条件下干燥60min后组装㊂1.2.9 快速免疫胶体金检测板的灵敏度检测 在最佳检测体系下分别检测不同稀释度的TDH,分析所制备的快速免疫胶体金检测板的最低检测限㊂1.2.10 快速免疫胶体金检测板的特异性检测 37℃㊁180r/min下,对副溶血弧菌(含TDH)㊁沙门氏菌㊁大肠杆菌㊁单核细胞增多性李斯特菌和非致病性副溶血弧菌F188菌株进行液体增菌摇床培养24h, 8000r/min离心10min,取上清作为阴性检测样本和TDH阳性样本(2μg/ml)检测结果比对,确定所制备的快速免疫胶体金检测板对TDH检测的特异性㊂2 结果2.1 胶体金溶液质量分析 柠檬酸三钠还原法制备溶液,紫外可见分光光度法测定400~700nm处胶体金溶液吸光度,在527nm处出现最大吸收峰,对应金颗粒大小约为40nm,吸收曲线平滑㊁峰值单一㊁峰谷较窄,由此推断所制备的40nm金颗粒大小的胶体金溶液不含杂质,颗粒大小均匀,见图1㊂2.2 抗体与金颗粒的标记结果 pH =8.0时,抗体T6D4可与40nm 大小的金颗粒稳定结合,即在加入10%NaCl 后,溶液平衡不受外界离子破坏,溶液仍保持酒红色,2μg /ml 的金溶液呈抗体最佳结合量,见图2㊂2.3 金标溶液最佳释放条件 8号试纸条的金标垫完全呈白色,表明金标垫上的金标抗体溶液具有高复溶性及强释放率,因此选定样品垫采用含2%Tween 20的0.01mol /L PBS (pH7.4)处理,金标图1 纳米胶体金颗粒的全波长扫描Fig.1 Full wavelength scaning fornanogold图2 最佳抗体标记量分析Fig.2 Analysis of optimal antibody labelingquantity图3 金标溶液的最佳释放条件Fig.3 Best condition on release of gold⁃labled solutionNote:1.1%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labledpad)and 0.5%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);2.3%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad )and 0.5%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);3.5%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad)and 0.5%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);4.1%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad)and 1%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);5.3%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad)and 1%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);6.5%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad)and 1%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);7.1%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad)and 2%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);8.3%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad)and 2%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad);9.5%sucrose 1%BSA 0.01mol /L pH7.4PBS (gold⁃labled pad)and 2%Tween 200.01mol /L pH7.4PBS (sample pad).垫用含3%sucrose 1%BSA 0.01mol /L PBS(pH7.4)处理,作为初始溶液体系用于后续研究,见图3㊂2.4 假阳性消减试验分析 NaCl 含量为0.1%~0.4%时假阳性结果的消减呈现剂量依赖性㊂2.5 NC 膜上检测抗体T9H4的稀释缓冲液及最适检测浓度的确定 以1μg /ml 的TDH 阳性样本进行检测,当选用pH7.4时的0.01mol /L PBS 作为T9H4的包被溶液时,显色性较好㊂在选定最佳检测抗体包被液后,以1μg /ml 的TDH 阳性样本进行检测,当包被浓度达到1mg /ml 后,结果显色性基本保持不变,均呈现良好的阳性结果,因此最终选定最佳T 线抗体包被浓度为1mg /ml,见图4㊂2.6 NC 膜型号的选择 对于同样检测500ng /ml 的TDH 阳性样本,4款膜的阳性结果显色效果中,Sartorius CN140表现最佳且检测结果重复性好,虽然Sartorius CN140的跑水速度较慢,但金标抗体溶液在膜上的跑动效果最好㊂因此,选定SartoriusCN140硝酸纤维素膜作为本次实验的胶体金检测板,见图5㊂图4 快速免疫胶体金检测板最低检测限分析Fig.4 Analysis of minimum detection limit of immuno⁃chromatographic teststrips图5 快速免疫胶体金检测板的特异性分析Fig.5 Specificity analysis of immunochromatographic test stripNote:A.E .coli ;B.Salmonella ;C.Listeria monocytogenes ;D.F 188;E.ATCC 33846(TDH).3摇讨论研究表明TDH具有呈剂量和时间依赖性的肝毒性和非常迅速的致死效应[21,22]㊂快速便捷地进行TDH检测对于预防和监控TDH相关疾病具有重要意义㊂传统TDH检测技术包括常规分离培养㊁电化学法等,但检测时间较长㊁特异性较差㊂PCR检测需要昂贵的检测仪器以及专业的操作人员㊂随着检测方法的不断深入,近年来更多的学者倾向于利用免疫效应开发新型检测手段[23,24]㊂本实验利用2株TDH单克隆抗体成功地制备了能够特异性检测副溶血弧菌TDH的快速免疫胶体金检测板,样品垫采用2%Tween200.01mol/L pH7.4PBS处理㊁金标垫采用3%sucrose1%BSA 0.01mol/L pH7.4PBS处理,所得金标抗体溶液复溶性高,释放率强㊂选用pH7.4时的0.01mol/L PBS作为T9H4的包被溶液时,显色性较好,确定最佳T线抗体包被浓度为1mg/ml㊂人工组装的快速免疫胶体金检测板检测限为500ng/ml,且具有较强特异性㊂目前国内对于将胶体金技术用于副溶血弧菌TDH的快速检测鲜有报道,本实验所得的快速免疫胶体金检测板显著降低了样品的前处理要求,可在5min内完成检测,显著缩短了检测时间,本研究为副溶血弧菌TDH的现场㊁快速㊁简单㊁无需设备的检测提供了新的手段㊂参考文献:[1] Raszl SM,Froelich BA,Vieira CR,et al.A Review vibrio parahae⁃molyticus and Vibrio vulnificus in South America:Water,seafood, and human infections[J].J Appl Microbiol,2016,121(5): 1201⁃1222.[2] Sakazaki R,Iwanami S,Fukumi H.Studies on the enterop⁃athogenic,facultatively halophilic bacteria,Vibrio parahaemol⁃yticus.I.morphological,cultural and biochemical properties and its taxonomical position[J].Jpn J Med Sci Biol,1963,16(1):161.[3] Broberg CA,Calder TJ,Orth K.Vibrio parahaemolyticus cellbiology and pathogenicity determinants[J].Microbes Infect,2011, 13(12):992⁃1001.[4] Saito S,Iwade Y,Tokuoka E,et al.Epidemiological evidence oflesser role of thermostable direct hemolysin(TDH)⁃related he⁃molysin(TRH)than TDH on Vibrio parahaemolyticus pathog⁃enicity[J].Foodborne Pathog 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抗阿尔茨海默病天然产物及其药理学研究进展_李琳
银杏叶提取物对一氧化氮（ nitric oxide，NO） 和神经元 型一氧化氮合酶（ neuronal nitric oxide synthase，nNOS） 的表 达也有一定的影响。nNOS 神经元数目的减少伴有学习记忆 能力的下降，提示一氧化氮合酶（ nitric oxide synthase，NOS）
EGb 具有增加脑血流、清除自由基和抗脂质过氧化作 用。EGb 可明显改善痴呆大鼠学习记忆功能，增加大鼠脑组 织中 SOD、GSH-Px 的活力，降低 MDA 含量，减轻海马 CAl 区 病理组织学改变，提示银杏叶提取物有较强抗自由基作用， 有一定的脑保护作用［14］。另有研究表明［15］，EGb 的抗氧化 作用有可能（ 或者部分） 是通过促进谷氨酸半胱氨酸合成酶 催化亚单位（ glutamate cysteine ligase catalytic subunit，GCLC） 的生成实现的。
◇讲座与综述◇
抗阿尔茨海默病天然产物及其药理学研究进展