PCR技术在转基因水稻检测中的应用
基于实时荧光PCR技术检测水稻转基因成分
因水稻作为一种重要的转基因作物
2010
[15]
[14]
ꎬ 其安全性对
设计水稻转基因成分 pCaMV35S、 tNOS 和内源
内蒙古锡林浩特市德克隆超市ꎬ 将试验材料研磨粉碎
1 2 试验方法
基因 SPS 的引物及探针ꎬ 建立水稻中转基 因 成 分 的
1 2 1 DNA 的提取
捷、 准确地检出水稻中转基因成分ꎬ 为相关部门提供
1 2 3 反应体系和反应条件
量 PCR 扩增反应ꎬ 反应条件同 1 2 3ꎬ 进行检出限试
上下游引物各 1μLꎬ 探针 1μLꎬ 模板 DNA 2μLꎬ 补水
坐标做转基因成分 pCaMV35S 和 tNOS 的定量检测标
反应体系: TransStart Probe qPCR SuperMix 10μLꎬ
(1 锡林郭勒职业学院ꎬ 内蒙古 锡林浩特 026000ꎻ 2 锡林郭勒生物工程研究院ꎬ 内蒙古 锡林浩特 026000ꎻ
3 锡林郭勒食品检验检测和风险评估中心ꎬ 内蒙古 锡林浩特 026000)
摘 要: 水稻是我国主要的粮农作物ꎬ 是否含有转基因成分与粮食和食品安全息息相关ꎮ 本试验基于出入境检验
至 20μLꎮ
反应条件: 94℃ 30sꎻ 94℃ 5sꎬ 60℃ 31sꎬ 40 个
循环ꎻ 在每个循环退火时收集荧光信号ꎮ
验ꎮ 以拷贝数的自然对数值为横坐标ꎬ 以 Ct 值为纵
利用PCR方法检测转BT基因水稻
Ta s e i c rm ec u trat fn n GM rd csa dted tcinss m dfrc reai emak dg n sa dt n g nc T e rn g ncRi fo t o nep r o o - e h po u t n h e t t a orlt g t re e e a s e i. h e o ye n o n h n r
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pcr的原理特点及应用领域
PCR的原理特点及应用领域
1. PCR的原理特点
PCR(聚合酶链反应)是一种在体外复制DNA的技术,它能够迅速扩增特定DNA片段,其原理特点如下:
•热循环反应:PCR是通过不断的循环变温来实现DNA的复制。每个循环包括三个步骤:变性、退火和延伸。变性步骤用高温将DNA双链分离;
退火步骤利用低温将引物与目标DNA序列结合;延伸步骤利用酶(如Taq聚合酶)在合适的温度下合成新的DNA链。
•引物的设计:PCR需要两个引物,它们分别位于目标DNA序列的两端。引物的设计需要考虑到引物长度、碱基组成、GC含量和引物之间的互补性,以确保引物能够特异性地结合目标序列。
•热稳定酶的应用:PCR中最常用的DNA聚合酶是热稳定的Taq聚合酶。由于Taq聚合酶能在高温下稳定活性,因此PCR反应可以在高温下进行,提高了反应的效率和特异性。
•指数级扩增:PCR是一种指数级扩增技术,每个PCR循环通过扩增目标DNA序列的两倍。经过多轮循环后,可以获得大量的目标DNA。
2. PCR的应用领域
PCR技术的高效、敏感和特异性使其在许多领域得到广泛应用。以下是PCR
在不同领域的应用:
2.1 医学诊断
PCR在医学诊断中的应用主要体现在以下几个方面:
•遗传病的诊断:PCR可以用于检测基因突变,从而早期诊断遗传疾病。例如,基于PCR的突变检测技术已经成为婴儿先天性代谢病和遗传性肿瘤等疾病的常规检测方法。
•传染病的诊断:PCR可以通过检测病原体的核酸来诊断传染病。例如,PCR技术可以用于快速检测流感病毒、艾滋病病毒和结核分枝杆菌等病
PCR技术及其在食品检测中的应用
✓ Garcia-Canas 等应用多重 PCR 法同时成功检测 5 种转基因玉米; ✓ 陶震等运用多重 PCR 方法对 5 个大豆和 6 个豆粕样品进行检测; ✓ 刘光明等利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒和番茄等11 份实物样品进行了检测,结果有
实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点。
➢ 医学:肿瘤基因检测(表达异常和突变);病毒检测;优生优育诊断(唐氏综合征是
由染色体异常所导致)
➢ 食源性致病菌检测:致病菌(沙门氏菌) ➢ 转基因食品检测:用于转基因成分的定性、品系鉴定和含量检测 ➢ 环境监测:地表水和饮用水中致病菌
4
《食品生物技术进展》
PCR技术及其在食品检测中的应用
CONTENTS
PCR定义 1 4
PCR原理 2 5
PCR特点 3
PCR分类 PCR应用
1
PCR定义
1
PCR定义
1
PCR定义wk.baidu.com
2
PCR原理
2
PCR原理
2
PCR原理
2
PCR原理
2
PCR原理
3
PCR特点
3
PCR特点
✓ PCR 是一种扩增特定 DNA 片段的生 物学技术, 它可以将微小的 DNA 片 段进行大幅扩增。
荧光定量PCR技术在植物基因表达研究中的应用
荧光定量PCR技术在植物基因表达研究中的
应用
荧光定量PCR技术(qPCR)是一种常用的分子生物学技术,可用于定量分析
特定DNA序列的扩增产物。它以相对定量或绝对定量的方式检测PCR扩增物的数量,特别适用于基因表达分析、检测微生物数量、检测点突变以及检测转基因作物等方面。本文将着重探讨荧光定量PCR技术在植物基因表达研究中的应用。
1. 荧光定量PCR技术的基本原理
荧光定量PCR技术是一种通过荧光信号来定量检测PCR扩增产物的方法。与
传统的PCR技术相比,qPCR技术可以在早期检测到PCR扩增产物,而且对单个
扩增产物进行测量,因此具有更高的灵敏度和精度。
qPCR通常使用荧光探针来检测PCR扩增产物。其中最常用的是TaqMan探针,其基本结构包括引物和探针两部分。引物是夹在要扩增的DNA序列两端的短寡核
苷酸,用于引导PCR引物在靶DNA的两侧进行扩增。探针则是一种荧光标记的探针,它包括一个与靶序列互补的短寡核苷酸片段和一个荧光染料与荧光猝灭剂。Taqpolymerase在扩增PCR过程中在探针结合位点上结合并开始DNA合成,导致
荧光比例发生改变,由此可以测量扩增产物的数量。
2. 2.1 基因表达分析
荧光定量PCR技术在植物基因表达研究中广泛应用。基因不是一直处于高表
达状态,而是受到内部和外部环境的影响而受到调控,因此qPCR技术可以用于检
测基因在特定条件下的表达情况。在植物研究中,检测RNA表达水平的主要方法
是qPCR技术。通过比较样品基因的相对且绝对表达,在控制实验组和实验组之间
建立基因表达的差异性也是一种常见的研究分析方法。
说明使用表型观察,pcr法鉴定转基因水稻的条件(一)
说明使用表型观察,pcr法鉴定转基因水稻的条件(一)
说明使用表型观察、PCR法鉴定转基因水稻的条件
1. 引言
转基因技术的广泛应用使得转基因作物的鉴定成为农业领域中的重要任务之一。其中,转基因水稻鉴定对于保障粮食安全、推动农业可持续发展具有重要意义。本文将针对使用表型观察和PCR法鉴定转基因水稻进行详细介绍。
2. 表型观察鉴定转基因水稻的条件
转基因水稻的表型观察鉴定通常需要以下条件:
•生长环境:转基因水稻和非转基因水稻应在相同的生长环境下进行观察,包括温度、湿度、光照等因素。确保生长环境的一致性有助于排除其他环境因素对水稻表型的影响。
•对照品种:选择与待鉴定水稻表型相似的非转基因水稻对照品种,用于对照比较观察结果。这有助于辨别转基因水稻的特异表型特征。
•观察时间点:需要在适当的生长阶段进行观察,以确保转基因水稻的表型特征能够明显表现出来。通常,在水稻植株出苗、分蘖、开花等关键生长阶段进行观察效果较好。
•观察指标:通过观察转基因水稻在相关生长阶段的形态特征、生理指标等来判断其是否为转基因品种。例如,观察水
稻株高、叶片形态、穗长等指标的变化情况。
3. PCR法鉴定转基因水稻的条件
PCR法是一种常用的转基因鉴定方法,也可用于转基因水稻的鉴定。下面是鉴定转基因水稻所需的条件:
•提取基因组DNA:利用合适的DNA提取方法,从待鉴定水稻样品中提取基因组DNA。确保提取的DNA质量和浓度适宜,以保证PCR反应的准确性和可靠性。
•选择适当的引物:根据需要鉴定的转基因特征,选择适当的引物。这些引物应与目标转基因序列具有特异性,以确保
pcr的原理和应用领域
PCR的原理和应用领域
1. PCR的原理
PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)是一种在体外扩增DNA
片段的技术。它是由美国生物学家凯瑟琳·梅利斯(Kary B. Mullis)在1983年发明的,因其在分子生物学领域的重要应用而获得了1993年的诺贝尔化学奖。
PCR的原理主要包括三个步骤:变性、退火和延伸。
1.1 变性(Denaturation)
将待扩增的DNA样品加热至94-98℃,使双链DNA解开成两条单链DNA。这
一步是为了使DNA分子的双链结构完全解链,以便后续的退火步骤。
1.2 退火(Annealing)
将待扩增的DNA样品降温至50-65℃,加入引物(寻找特定靶序列的DNA寡
核苷酸链),使引物与单链DNA序列互补配对结合。这一步是为了使引物与待扩
增的DNA序列特异性地结合,以启动PCR反应。
1.3 延伸(Extension)
将待扩增的DNA样品在72℃下加入DNA聚合酶(如Taq聚合酶),使DNA
引物双链结构被DNA聚合酶复制成两条新的DNA双链。这一步是为了合成新的DNA链,使扩增物数量呈指数倍增。
经过多个循环的变性、退火和延伸步骤,可以在短时间内扩增出大量特定目标
序列的DNA片段。
2. PCR的应用领域
PCR技术具有高效、灵敏、特异性强等优点,因此在许多领域得到了广泛应用。
2.1 分子生物学研究
PCR技术在分子生物学研究中扮演着重要角色,广泛应用于:
•基因克隆和表达研究:PCR可以扩增特定基因片段,用于克隆和构建重组DNA。可以通过PCR检测基因在不同组织和细胞类型中的表达水平,研究基因的功能和调控机制。
PCR技术的原理及其应用
逆转录PCR广泛应用于基因表达分析、病毒检测、RNA编辑等领域。通过比较不同样本或不同处理条件下的基因 表达差异,可以揭示生物学过程中的调控机制。
其他PCR变种技术
要点一
原理
除了上述常规PCR技术外,还有许多其他PCR变种技术, 如多重PCR、不对称PCR、热启动PCR等。这些技术通过 改进PCR反应条件或引入新的策略,提高了PCR的特异性 、灵敏度和通用性。
不同目标基因之间的扩增效率可能存在差异,导致结果不准确。可以通 过调整引物浓度、优化反应条件等方法来改善扩增效率的均一性。
03
产物区分难题
多重PCR产物需要在后续分析中准确区分,可以采用不同长度的引物、
添加标签序列等手段来实现产物的有效区分。
数字PCR技术原理及应用前景
技术原理
数字PCR是一种将PCR反应分散到大量独立 反应单元中进行的技术,通过泊松分布原理 对目标基因进行绝对定量。每个反应单元中 只包含一个或零个拷贝的目标基因,从而实 现了高灵敏度和高精确度。
扩增反应条件优化
反应体系组成
PCR扩增反应体系包括DNA模板、引物、dNTPs、DNA聚合酶以及缓冲液等组 成部分。
反应条件优化
为了获得最佳的扩增效果,需要对PCR反应条件进行优化,如调整退火温度、延 伸时间、循环次数等参数。同时,还需要注意避免污染和假阳性结果的出现。
利用荧光定量PCR技术快速检测转基因产品的研究
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受 试 样 品 的 荧 光 定 量 456 检 测
扩增采用
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模板 8<=1<> 探 针 0!"!123 4 #5 各 $!#, 8<= 酶 %,;!# , 其余用超纯水补充至 !"!# 。荧光 ( !%%?"%%>.) $ !# , 定 量 9@A 检 测 采 用 ’B2 C+<6 公 司 的 BDED3*+ 系 统 ,
来估测 !, 的含量, 其 纤维( E>%&8 F$"%&(9 G$H"(+ EIJ ) 原 理 是 @K@L ( @##>)$&%$>’ >G KGG$)$&8 @’&89%$)&8 和 @@LL ( @?"($)&’ @##>)$&%$>’ >G L"("&8 L*"?$#%# ) 葡萄糖淀粉酶法的 测 定 原 理 , 测定方法参 L*"?$#%(9 ) 见文献 -.1/ 。;"((9 法, 主要通过测定可溶性淀粉后所 得到的不溶性淀粉量, 来计算 !, 百分含量。;"((9 法 虽然直接简单, 但是误差较大, 因为淀粉溶解度有快 速溶解、 慢速溶解和不溶解之分, 在具体操作时, 溶 解程度难以控制,导致结果真实性降低。由于
实时荧光PCR技术定量检测转Bt基因水稻的研究
继批准 了转基 因作物进 入商业 化生产 , 种植 面积急 剧 扩大。与此同时 , 转基 因产 品 的生物安 全性 以及 可 能
种较为精确的转基 因水稻定量检测方法 。
1 材 料 与 方 法 1 1 材 料 .
对人类健康 和生态环 境的影 响引起 了各 国政 府和 民众
的普遍关 注 , 出现 了一些 涉及到转 基 因生物及其 产 品 的案件 和纠纷。在各 国政府 的重 视下 , 基 因产 品 的 转 检测方法迅 速发展 起来 , 种作物 的转基 因产 品的定 各 性检测技术 已经 比较 普及 并进 入 了标准化 … , 多 国 许 家 和地 区都 加强 了对转基 因商 品的管理 , 台了对转 出 基 因生物产 品实施 强制性标 签 的制度 , 定 了食 品 中 规
第 2 第 6期 5卷 20 08年 l 2月
生 物 学 杂 志
J OURNAL OF BI OG OL Y
Vo . 5 No 6 12 . De 2 08 c, 0
实 时荧 光 P R技 术 定 量 测 转 B 基 因水 稻 的研 究 C 检 t
张 亮 , 杨剑波 宋丰顺 陈 圣 , , , 郭
一
1 13 主要 仪 器 M eerhO t o .. JR sac pi n2荧 光定 量 c
P R仪 ,hr ai G n un I C P a e eeQ at I型核 酸 蛋 白定 量仪 , m a Bo a e D e i rdG l o 凝胶成像 系统 ,p edf 80 — E pn o 5 1 R型 台式
转基因食品PCR定性检测
根据检测结果,对产品进行标识,明确标注 是否含有转基因成分,为消费者提供准确的 信息。
在市场监管中的应用
市场准入
对进口或国产的食品进行转基因检测,符合 要求的食品方能进入市场销售。
定期抽检
对市场上的食品进行定期抽检,确保市场上 销售的食品不含有转基因成分或符合相关规 定。
执法依据
为执法部门提供检测报告作为执法依据,对 违规销售转基因食品的企业进行处罚。
转基因食品
转基因食品是指利用转基因生物技术获得的转基因生物品系,并以该转基因生物为直接食品或为原料加工生产 的食品称为转基因食品。但凡是通过法律认可的转基因产品,都是经过系统的、规范的食品安全检验的验证, 对于人体的健康是安全的。
PCR定性检测的意义
1
确保食品安全
PCR定性检测是确保转基因食品安全的 重要手段之一。通过检测转基因食品中 的特定基因片段,可以判断食品是否含 有转基因成分,从而避免潜在的安全风 险。
开发更快速的检测方法
01
目前转基因食品PCR定性检测通常需要数小时至数天的时间, 因此开发更快速的检测方法具有重要的实际意义。
02
可以研究开发新型的检测技术,如实时荧光定量PCR、荧光共
振能量转移技术等,以缩短检测时间。
同时,优化现有检测方法的样品处理和核酸提取步骤,采用自
03
动化和集成化的技术手段,也可以提高检测效率。
实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用_敖金霞
实时荧光定量PCR 技术在转基因检测中的应用
收稿日期:2008-03-05
基金项目:东北农业大学创新团队项目(CXT004-3-2)
作者简介:敖金霞(1977-),女,黑龙江人,博士研究生,助研,主要从事转基因作物基因检测技术方面研究。
*通讯作者:教授,博士生导师,E-mail:gaoxj5390@
敖金霞1,高学军1*,仇有文1,郭士成2
(1.东北农业大学生命科学与生物技术研究中心,农业部转基因生物产品成分监督检测测试中心,哈尔滨
150030;
2.东北农业大学生命科学学院,哈尔滨
150030)
摘要:实时荧光定量PCR 技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商业化,转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR 反应后不需电泳检测等优点,使RQ-PCR 逐步成为转基因检测的重要工具。
关键词:实时荧光定量PCR ;Taq Man 探针法;SYBR Green I 染料法;转基因检测中图分类号:TS207.3
文献标识码:A
随着有关转基因成分标签法的建立和对于转基因食品的重视程度及量化要求的提高,定性PCR 因其在转基因检测中的高敏感性差易造成假阳性现象,以及操作误差和一些反应抑制因素带来的假阴性现象,使其已经不能再满足人们的需要。在这种基础之上实时荧光定量PCR
(Real-time quantitative polymerase chain reaction ,RQ-PCR )发展起来,RQ-PCR 技术不仅实现了对DNA 模板的定量,而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。目前实时荧光定量PCR 已广泛应用于分子生物学、农业、医学等学科的应用和基础研究领域,并已经在转基因检测中发挥了不可替代的作用[1-2]。
PCR方法在抗虫转基因水稻外源基因漂移风险研究中的应用
PCR方法在抗虫转基因水稻外源基因漂移风险研究中的应用张富丽;牛蓓;常丽娟;宋君;王东;尹全;刘文娟
【摘要】本试验以抗虫转基因水稻华恢1号为研究对象,将几种非转基因常规栽培水稻种植在其周围,采用PCR检测方法对不同距离收集的F1代水稻种子进行转基因杂种鉴定,统计并分析外源基因漂移的频率,评估无标记基因抗虫水稻基因漂移风险.结果显示,外源bt基因向P13381和春江063水稻平均漂移频率皆为零.而抗虫转基因水稻华恢1号与非转基因水稻合系22-2、天香、明恢63、P1157几个品种不同程度地发生了转基因漂移,平均漂移频率最高为0.88%,并且漂移频率随着距离加大而逐渐降低,在7m以外的所有采样点平均转基因漂移频率为零.采用合理田间布局、物理隔离、保持合适距离,以及科学安排农时、错开花期等方式,可有效减小转基因水稻外源基因漂移风险.本试验表明,采用PCR法可以准确地进行转基因杂种的鉴定,但缺点是工作量很大,耗时较长,需进一步寻求更简便高效的方法用于检测无标记基因的转基因漂移频率.
【期刊名称】《西南农业学报》
【年(卷),期】2016(029)010
【总页数】6页(P2269-2274)
【关键词】转基因水稻;抗虫性;基因漂移;环境安全;PCR方法
【作者】张富丽;牛蓓;常丽娟;宋君;王东;尹全;刘文娟
【作者单位】四川省农业科学院分析测试中心,四川成都610066;成都大学医学院,四川成都610106;四川省农业科学院分析测试中心,四川成都610066;四川省农业科学院分析测试中心,四川成都610066;四川省农业科学院分析测试中心,四川成都
PCR技术在基因检测中的应用
PCR技术在基因检测中的应用随着生物技术的飞速发展,PCR技术在基因检测中的应用越来越广泛。PCR即聚合酶链式反应,是一种用于扩增DNA分子的技术,可将极微小的DNA样本扩增至足够数量,以进行基因检测、分析等研究。
PCR的基本原理是将一段DNA序列扩增成数百万份,从而在一定条件下,使目标序列的数量增加。根据扩增产品和PCR条件的不同,PCR分为多样性PCR、荧光PCR、实时荧光PCR等。
PCR技术在基因检测中的应用非常广泛,可以应用于DNA测序、疾病基因检测、病原体检测、食品安全检测等领域。
1. DNA测序
PCR技术在DNA测序中得到了广泛应用,特别是在极低样本量下,PCR技术可以从很少的DNA样本中扩展出大量的DNA。
由于PCR扩增是高度可控和特异的,因此PCR可以用于测序选型和基因组重组检测。在基因检测过程中,PCR可以扩增目标序列,然后测序,从而获得DNA序列。
2. 疾病基因检测
PCR技术已被广泛应用于疾病基因检测。PCR技术因其高灵敏度、高特异性和高可靠性而被广泛应用于疾病基因检测。PCR技术可用于诊断多种疾病,例如:
(1)遗传性疾病:使用PCR技术鉴定基因突变可以诊断遗传性疾病,例如先天性免疫不足病(CID)。
(2)肝炎:使用PCR技术可以检测患者体内的乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)。
(3)人类免疫缺陷病毒:使用PCR技术可以检测人类免疫缺陷病毒(HIV)。
3. 病原体检测
PCR技术在病原体检测中的应用也非常广泛。PCR技术可用于检测病原体DNA或RNA。PCR技术在抗生素疗效评价的研究中也扮演着重要的角色。
pcr技术原理及应用
pcr技术原理及应用
PCR技术原理及应用。
PCR(Polymerase Chain Reaction)技术是一种用于扩增DNA片段的重要方法,它在分子生物学领域具有广泛的应用。PCR技术的原理非常简单,但其在科学研究、医学诊断、法医学和生物工程等领域的应用却十分广泛。本文将介绍PCR技
术的原理及其在不同领域的应用。
PCR技术的原理。
PCR技术主要涉及三个步骤,变性、退火和延伸。首先,DNA双链在高温下
变性,使其分离成两条单链。然后,引物(primers)与目标DNA序列特异性结合,通过退火使引物与DNA序列结合。最后,DNA聚合酶在适当的温度下延伸引物,合成新的DNA链。这样,一轮PCR反应就完成了,产生了两个与原始DNA片段
相同的DNA分子。连续进行多轮PCR反应,可以迅速扩增目标DNA片段。
PCR技术的应用。
在科学研究领域,PCR技术被广泛用于克隆基因、检测基因突变、建立DNA
指纹图谱等。通过PCR技术,科学家们可以快速、准确地获取感兴趣的DNA片段,为基因功能研究和分子生物学研究提供了重要工具。
在医学诊断领域,PCR技术被用于检测病原体、诊断遗传疾病和肿瘤等。例如,PCR技术可以快速检测出病毒、细菌和真菌等病原体,对传染病的快速诊断起到
了重要作用。此外,PCR技术还可以用于分子诊断,通过检测特定基因的突变来
诊断遗传性疾病和肿瘤。
在法医学领域,PCR技术被广泛用于DNA鉴定。通过PCR技术,可以从犯罪
现场的血迹、唾液等样本中提取DNA,并进行扩增和分析。这种DNA鉴定技术
已成为破案的重要手段,对司法实践产生了深远的影响。
PCR技术在食品检测中的应用和发展
PCR技术在食品检测中的应用和发展
一、PCR技术在食品检测中的应用
1.检测食品中的致病菌:PCR技术可以用于检测食品中的致病菌,如沙门氏菌、大肠杆菌等。PCR技术在该领域的应用主要包括两个方面:一是快速检测方法的开发,能够在短时间内得到检测结果,提高检测效率;二是多重PCR技术的应用,能够同时检测多种致病菌,提高检测的准确性和可靠性。
2.检测食品中的转基因成分:PCR技术可以用于检测食品中的转基因成分,如转基因玉米、转基因大豆等。通过PCR技术可以确定食品中是否含有转基因成分,并对其进行定量分析。这对于食品质量的监管和食品安全的保障具有重要意义。
3.检测食品中的致敏成分:PCR技术可以用于检测食品中的过敏原分子,如鸡蛋、牛奶等。通过PCR技术可以对食品中的致敏成分进行敏感、快速的检测,提高食品安全性。
4.食品品种的鉴别:PCR技术可以用于鉴别食品中的品种,如鉴别食用油中的橄榄油、花生油等。通过PCR技术可以确定食品中包含的成分,避免食品欺诈行为。
二、PCR技术在食品检测中的发展
1.快速检测技术的进一步改进:PCR技术在食品检测中的应用之一是快速检测方法的开发。现有的PCR技术需要对样品进行DNA提取和准备,这些步骤都需要一定的时间和专业知识。未来的发展方向是发展更为简化的快速检测方法,如发展直接检测方法,免去复杂的样品处理步骤。
2.高通量检测技术的应用:PCR技术在食品检测中可以应用于检测多种目标物。目前已经有一些商业化的PCR芯片或PCR多孔板,可以同时对多个目标进行检测。这些高通量检测技术的应用可以提高检测的效率,并降低检测的成本。
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PCR技术在转基因水稻检测中的应用
仲恺农业工程学院生命科学学院
摘要:采用PCR技术检测启动子、终止子、Bt基因,判断水稻样品中是否含转基因成分,建立了稳定快速的转基因水稻定性PCR检测体系。结果表明:PCR技术检测外源基因是灵敏和准确的,可以广泛地应用到转基因作物及其加工产品的转基因成分检测中。此外,进一步讨论了转基因成分检测中存在的问题、转基因产品标识的必要性和目前转基因检测技术在检测中的问题。针对转基因检测的方法有很多种,其中PCR以其快速、准确、重复性好等特点已成为转基因检测中的主流方法。在PCR检测过程中,DNA模板的制备是保证PCR检测结果准确与否的重要因素之一。
关键词:水稻转基因 PCR检测内源检测
水稻是世界上最主要的粮食作物之一,在我国种植面积居第1位。随着转基因技术的发展,转基因水稻改良已成全球的目标。从1996-2000年,转基因作物种植面积累计达到近10亿hm2。2010年国家农业部批准第一个转基因水稻可以商品化生产,表明我国的水稻转基因研究及产业化进程正在提速。水稻转基因检测作为转基因研究体系中的重要环节,其重要性日益凸显。
目前,针对转基因检测的方法有很多种,其中PCR以其快速、准确、重复性好等特点已成为转基因检测中的主流方法。在PCR检测过程中,DNA模板的制备是保证PCR检测结果准确与否的重要因素之一。
1.材料与方法
1.1 材料
1种转基因水稻、中花作为非转基因对照样本。
试剂:DNA抽提液;10×TBE;Loading Buffer;Hpt 引物。
1.2实验方法
1.2.1DNA的提取及检测
①取0.1g的种子在液氮中低温下迅速研磨成粉末,置于2mL离心管中加入1.8mL抽提液,65℃水浴30min-1h,水浴过程中温和翻转混均几次,12000rpm离心10分钟。
②将上清移至2mL离心管中,加入2/3体积的氯仿,去除苯酚,混均后离心,
12000rpm 10分钟。
③将上清移至2mL离心管中,混匀后加入2倍体积冷乙醇,轻轻混均并静止一段时间后12000rpm离心 10分钟。
④用0.5ml 70%乙醇洗2次,风燥。
⑤加入20 ul ddH
O溶解备用。
2
⑥0.8%琼脂糖凝胶电泳检测。
1.2.2.PCR反应体系
反应体系总体积为25μL,其中,正反向引物各1μl,Taq mixture 12.5ul,DNA 模版1ul,去离子水补充至25μL。
PCR反应条件:94℃预变性5min;94℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸45s,35个循环;72℃再延伸10min。
1.2.3. PCR产物检测
每份扩增产物取10ul进行浓度为1.3%的琼脂糖凝胶电泳,使用凝胶成像系统进行.
2 结果与分析
2.1实验结果
图1 水稻基因提取电泳结果图2 PCR产物电泳结果图
2.2分析
3、讨论与结论