病毒培养技术PPT课件
合集下载
病毒的细胞培养课件ppt
化；或者是细胞形态很差等情况时，需要 （4）细胞生长状况的观察
传代：细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。
给细胞换液。 细胞培养用液及培养基（液）:
用PBS液充分冲洗组织碎块2-3次，加入3-5倍量的胰蛋白酶消化液，置37℃消化10分钟，每隔2-3分钟轻轻摇动一次。 从37℃水浴中取出冻存管或安瓶，离心1000r×1min,用酒精消毒后开启，用滴管吸出上清液，注入培养液1ml充分混匀，转入刻度离心 管制成细胞悬液后低速离心，除去上清液，必要时再重复用培养液洗一次。 （1）选取对数生长期的细胞，用常规传代的方法将细胞制成悬液并计数，800-1000r/min离心5min，弃上清。 成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析，易发生支原体污染 原理
• 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生 长需要。
• 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想 使细胞生Biblioteka Baidu和繁殖，还需补充一定量的天 然培养基（如血清）。
• 血清中含有：
• ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） • ②多种金属离子 • ③激素 • ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原
• 潜伏期 接毒后发生病变的鸡胚成纤维细胞
5ml处理好的禽流感病毒液注入细胞瓶内，使病毒液充分铺满瓶底 优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。 五 培养细胞的生长方式及类型
传代：细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。
给细胞换液。 细胞培养用液及培养基（液）:
用PBS液充分冲洗组织碎块2-3次，加入3-5倍量的胰蛋白酶消化液，置37℃消化10分钟，每隔2-3分钟轻轻摇动一次。 从37℃水浴中取出冻存管或安瓶，离心1000r×1min,用酒精消毒后开启，用滴管吸出上清液，注入培养液1ml充分混匀，转入刻度离心 管制成细胞悬液后低速离心，除去上清液，必要时再重复用培养液洗一次。 （1）选取对数生长期的细胞，用常规传代的方法将细胞制成悬液并计数，800-1000r/min离心5min，弃上清。 成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析，易发生支原体污染 原理
• 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生 长需要。
• 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想 使细胞生Biblioteka Baidu和繁殖，还需补充一定量的天 然培养基（如血清）。
• 血清中含有：
• ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） • ②多种金属离子 • ③激素 • ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原
• 潜伏期 接毒后发生病变的鸡胚成纤维细胞
5ml处理好的禽流感病毒液注入细胞瓶内，使病毒液充分铺满瓶底 优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。 五 培养细胞的生长方式及类型
第二章 病毒的培养ppt课件
三、受精卵的质量和孵化
１、受精卵最好来自SPF鸡群
２、受精卵应该是新鲜的
３、受精卵的壳最好是白色的
４、孵化温度37.5-38.5℃，湿度50-60%，
通风。 SPF(无特定病原微生物污染的)
四、接种途径 1、绒毛尿囊膜接种
2、尿囊腔接种
3、卵黄囊接种
Байду номын сангаас
4、静脉接种 6、脑内接种
7、眼球接种
蓝舌病毒 狂犬病毒
一优点一优点11组织分化程度低病毒易于增殖组织分化程度低病毒易于增殖22可选择不同的日龄和接种途径可选择不同的日龄和接种途径33感染病毒的组织和液体中含大量病毒感染病毒的组织和液体中含大量病毒44容易采集和处理容易采集和处理55来源充足来源充足66设备和操作简便易行设备和操作简便易行第二节第二节二缺点二缺点11胚内可能污染细菌和病毒胚内可能污染细菌和病毒沙门氏菌禽白血病病毒新城疫禽脑脊沙门氏菌禽白血病病毒新城疫禽脑脊髓炎病毒髓炎病毒22母源抗体母源抗体33许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针染指针三受精卵的质量和孵化三受精卵的质量和孵化1受精卵最好来自1受精卵最好来自spfspf鸡群2受精卵应该是新鲜的2受精卵应该是新鲜的3受精卵的壳最好是白色的3受精卵的壳最好是白色的4孵化温度4孵化温度375375385385湿度湿度50506060通风
病毒的细胞培养.ppt
• 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生 长需要。
• 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想 使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天 然培养基（如血清）。
• 血清中含有：
• ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） • ②多种金属离子 • ③激素 • ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原
• 游离期 • 贴壁期 • 潜伏期 • 对数生长期 • 停止期（平台期）
细胞培养常用的培养瓶、 培养皿、6孔板、96孔板
贴附生长型细胞
悬浮生长型细胞
六 细胞培养的实验步骤
1原代细胞的培养 以鸡胚成纤维细胞为例 （1）取胚 （2）组织处理 （3）消化 （4）分装、培养
（1）取胚
• 选取9-11日龄SPF鸡胚，大头朝上直立于蛋 架上，用碘酒、酒精消毒气室外壳。用镊 子从气室端打开蛋壳，撕开壳膜，用无菌 镊子轻轻取出鸡胚，放入灭菌平皿中。
二 主要优点
• ㈠ 研究的对象是活的细胞。 • ㈡ 研究的条件可以人为的控制。 • ㈢ 研究的样本，可以达到比较均一性。 • ㈣ 研究的内容便于观察、检测和记录。 • ㈤ 研究的范围比较广泛。 • ㈥ 研究的费用相对较经济。
三 分类
• 原代细胞培养 • 传代细胞培养
原代细胞培养
• 概念：从供体获取组织细胞后在体外进行 的首次培养。
衰老或细胞发生变异。
细胞冻存方法
病毒培养技术课件
•组成:中空纤维生物反应器、培养基容器、供氧器和蠕动泵
•中空纤维由乙酸纤维、聚氯乙烯－丙烯复合物或多聚碳酸硅等 材料制成，外径50~100µm，壁厚25~75µm，壁呈海绵状，上面 有很多微孔。
•中空纤维的内腔表面是一层半透性的超滤膜，允许营养物质和 代谢废物出入，而对细胞和大分子物质（如单克隆抗体）有滞 留作用。
学习交流PPT
14
悬浮培养
通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内 的培养方法，主要用于一些在振荡或搅拌下能生长繁殖的细 胞，如生产单克隆抗体的杂交瘤细胞。
微载体培养
微载体直径应为60～105nm，无毒性，透明，颗粒密度与培 养液密度相近似，略重于液体，低速搅拌即能悬浮，不吸收 培养液和化学反应，表面光滑、硬度小、有弹性，易于细胞 吸附在表面，如DEAE—SephadexA-50、Cytodexl、Cytodex2、 Cytodex3等。
• 尿囊腔接种法 • 卵黄囊接种法 • 羊膜腔接种法 • 静脉接种法 • 脑内接种法
学习交流PPT
5
鸡胚绒毛尿囊膜接种法
学习交流PPT
6
尿囊腔接种法
学习交流PPT
7
尿囊液收获方法
学习交流PPT
8
鸡胚卵黄囊接种法
学习交流PPT
9
（三）影响禽胚增殖病毒的因素
1．种蛋质量
动物病毒学课件：病毒的培养【8次】
（一）步骤
• 6、乳兔接种与乳兔组织苗的制备：取出 现典型稽留热成兔脾、淋种毒，离心去 处沉淀，肌肉接种乳兔，1毫升/只，其 间饲喂牛乳，每天三次。弃去24小时死 亡乳兔，收取24－40小时之间死亡及未 死乳兔于冰柜内冻死。
• 7、乳兔组织含毒鉴定：取乳兔组织离心 上清，接种于成年家兔，同前法测温。
2、细胞接种 （1）单层接种：弃取细胞培养液，用Hank’s冲洗3次，按0.5％－10％
（瓶体积）比例接入上述处理的病料，如果病毒液过少可以加入少 许细胞维持液。37 ℃吸附30－60分钟，弃取病毒液，也可不弃 （细胞培养的病毒液）。然后加入细胞维持液，每天观察细胞病变。
（2）同步接种：细胞消化后，分装细胞培养瓶，同时按上述比例接入病毒 液，次日需要换细胞维持液，逐日观察CPE。
四、病毒的鸡胚培养
1、优点：操作方便，来源容易，多数禽 源病毒均可以在鸡胚中增殖，培养病毒 量大，可以用于疫苗特别是禽类疫苗生 产。 2、缺点：哺乳动物病毒对鸡胚敏感性较 低，有时鸡胚可能携带来自种鸡病原。 最好使用SPF鸡胚，但价格较高。
五、鸡新城疫病毒的鸡胚培养
（一）步 骤
1、种蛋选择、消毒与孵化：种蛋为健康未免 疫特定一种或几种疫苗、受精率为90﹪以上 的新鮮种蛋。15g高锰酸钾、30mL甲醛/m3熏 蒸消毒30分钟，气室向上38.5-39℃孵化，相 对湿度60-70%。每2小时翻番一次。
病毒培养技术PPT课件
（1）原代细胞(primary cell) 指由新鲜组织经剪碎和胰酶消化制备的细胞，如CEF细胞。 （2）细胞株(cell strain) 又称二倍体细胞 指自继代培养的细胞中选育出具有特殊生物学性质和标记的 细胞。这类细胞且能保持原来的二倍染色体数目，能连续传很 多 代 (50 ～ 100 代 ) ， 但 为 有 限 生 命 ； 没 有 肿 瘤 原 。 如 PKl5 、 BHK21和Vero （3）传代细胞（continued cell line）\ 细胞系(cell line) 能在体外无限传代，应用方便，其染色体数目及增殖特性 均类似于恶性肿瘤细胞，且多来源于癌细胞，如HeLa细胞系
2．细胞培养方法
• 静置培养
• 转瓶培养 •悬浮培养(suspension cell culture ) •微载体培养(microcarrier cell culture) • 中空纤维细胞培养(hollow fibre cell culture) • 微囊化细胞培养
悬浮培养
通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内 的培养方法，主要用于一些在振荡或搅拌下能生长繁殖的细 胞，如生产单克隆抗体的杂交瘤细胞。 微载体培养 微载体直径应为60～105nm，无毒性，透明，颗粒密度与培 养液密度相近似，略重于液体，低速搅拌即能悬浮，不吸收 培养液和化学反应，表面光滑、硬度小、有弹性，易于细胞 吸 附 在 表 面 ， 如 DEAE—SephadexA-50 、 Cytodexl 、 Cytodex2、Cytodex3等。
《病毒的细胞培养》课件
《病毒的细胞培养》PPT 课件
在这份PPT课件中，我们将深入介绍病毒的细胞培养。通过精心设计的布局和 丰富的内容，帮助大家更好地理解细胞培养的背景、步骤、应用和挑战。
细胞培养概述
什么是细胞培养
细胞培养的意义
细胞培养是指将细胞从体内环 境转移到体外培养基内，为研 究和应用提供可控的实验条件。
细胞培养为科学研究和应用提 供了重要的工具，帮助我们更 好地理解细胞的生理、病理以 及基因调控等方面。
研究领域中的应用
细胞培养为科学研究提供了重要手段，帮助科学家探索细胞的生长、分化、信号传导等关键 生物过程。
细胞培养的挑战
1 细胞的易受污染
细胞培养实验容易受到各种污染，因此需要严格的操作规范和无菌技术来保证实验的准 确性。
2 细胞的稳定性
细胞在长期培养中可能会发生突变、漂变等现象，导致实验结果的不稳定性，需要进行 细胞株的验证和维护。
3
细胞培养的操作步骤
细胞培养的操作步骤包括细胞的种植、分离、传代、培养液的更换和细胞的检测等。
细胞培养的应用
生物医学领域中的应用
细胞培养在生物医学领域中广泛应用于药物筛选、疾病模型的构建和组织工程等重要研究方 向。
农业领域中的应用
细胞培养技术在农业领域中可以用于作物改良、Leabharlann Baidu毒检测、种子培育等方面，提高农作物的 品质和产量。
在这份PPT课件中，我们将深入介绍病毒的细胞培养。通过精心设计的布局和 丰富的内容，帮助大家更好地理解细胞培养的背景、步骤、应用和挑战。
细胞培养概述
什么是细胞培养
细胞培养的意义
细胞培养是指将细胞从体内环 境转移到体外培养基内，为研 究和应用提供可控的实验条件。
细胞培养为科学研究和应用提 供了重要的工具，帮助我们更 好地理解细胞的生理、病理以 及基因调控等方面。
研究领域中的应用
细胞培养为科学研究提供了重要手段，帮助科学家探索细胞的生长、分化、信号传导等关键 生物过程。
细胞培养的挑战
1 细胞的易受污染
细胞培养实验容易受到各种污染，因此需要严格的操作规范和无菌技术来保证实验的准 确性。
2 细胞的稳定性
细胞在长期培养中可能会发生突变、漂变等现象，导致实验结果的不稳定性，需要进行 细胞株的验证和维护。
3
细胞培养的操作步骤
细胞培养的操作步骤包括细胞的种植、分离、传代、培养液的更换和细胞的检测等。
细胞培养的应用
生物医学领域中的应用
细胞培养在生物医学领域中广泛应用于药物筛选、疾病模型的构建和组织工程等重要研究方 向。
农业领域中的应用
细胞培养技术在农业领域中可以用于作物改良、Leabharlann Baidu毒检测、种子培育等方面，提高农作物的 品质和产量。
病毒的细胞培养.ppt
合成培养基
• 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数 量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多 种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
• 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化 合物、无机盐和其它一些辅助物质。
• 优点：标准化生产，组分和含量相对固定。成本 低
七 病毒的细胞培养
• 以禽流感感染鸡胚成纤维细胞为例。 • （1）病料的处理 • （2）病毒分离、繁殖 • （3）细胞病变的观察 • （4）效价测定 • （5）中和实验
（1）病料的处理
采集疑是感染禽流感禽的心、脑、肺、 淋巴结在含有双抗的PBS液中研磨，4℃过 夜，3000r/min离心10min，上清通过 0.22μm抽滤
等。 • ⑤各种生长因子 • ⑥转移蛋白 • ⑦不明成分
• 一般说来．含5％小牛血清的培养基对大多数细胞 可以维持细胞不死．但支持细胞生长一般需加10 ％血清．
• 对于血清支持细胞生长的生物学效应已得到证明， 但对血清中的复杂成分至今尚未完全清楚．
• 血清质量好坏是实验成败的关键。
• 常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血情、 兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。
（2）组织处理
• 用PBS液冲洗胚体2-3次，再将鸡胚的头、 爪、内脏去除，剩下的胚体在用PBS液冲 洗胚体2-3次，然后再放入平皿中，用剪刀 将鸡胚剪成碎块。
病毒的细胞培养PPT课件
通过细胞培养可以观察病毒对 细胞的感染过程、病毒的复制 周期以及病毒对细胞的破坏作 用等。
细胞培养还用于病毒的分离、 鉴定和疫苗制备等方面的工作。
02
病毒的细胞培养技术
细胞培养的基本条件
01
02
03
04
温度
细胞培养需要在恒定的温度下 进行，通常是37°C。
湿度
细胞培养箱内的湿度应维持在 95%左右，以保证细胞的正
成熟与释放
复制完成的病毒粒子从细 胞中释放出来，继续感染 其他细胞。
病毒的细胞培养方法
原代细胞培养
从动物组织中分离出的 细胞进行培养，可用于
某些病毒的培养。
传代细胞培养
将细胞系传代培养，可 用于多种病毒的培养。
组织块培养
将组织块切成小块进行 培养，可用于某些病毒
的培养。
悬浮细胞培养
将细胞悬浮在培养液中 进行培养，可用于某些
常生长。
气体环境
细胞培养需要一定比例的氧气 和二氧化碳，以维持细胞代谢
和生长所需的气体环境。
营养物质
细胞需要充足的营养物质，如 氨基酸、维生素、葡萄糖等，
以支持其生长和分裂。
病毒在细胞培养中的生长特性
01
02
03
吸附
病毒通过与细胞表面的受 体结合，进而进入细胞内 部进行复制。
复制
病毒在细胞内复制过程中， 会利用细胞的合成系统合 成病毒的核酸和蛋白质。
病毒的细胞培养.ppt
二 主要优点
• ㈠ 研究的对象是活的细胞。 • ㈡ 研究的条件可以人为的控制。 • ㈢ 研究的样本，可以达到比较均一性。 • ㈣ 研究的内容便于观察、检测和记录。 • ㈤ 研究的范围比较广泛。 • ㈥ 研究的费用相对较经济。
三 分类
• 原代细胞培养 • 传代细胞培养
原代细胞培养
• 概念：从供体获取组织细胞后在体外进行 的首次培养。
(4) 培养基
• 培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的 溶液，分天然培养基和合成培养基。
• 天然培养基： • 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡
胚和牛胚浸液）。 • 优点：营养成分丰富，培养效果好 • 缺点：来源受限。成分复杂，影响对某些实验产
物的提取和实验结果的分析，易发生支原体污染
七 病毒的细胞培养
• 以禽流感感染鸡胚成纤维细胞为例。 • （1）病料的处理 • （2）病毒分离、繁殖 • （3）细胞病变的观察 • （4）效价测定 • （5）中和实验
（1）病料的处理
采集疑是感染禽流感禽的心、脑、肺、 淋巴结在含有双抗的PBS液中研磨，4℃过 夜，3000r/min离心10min，上清通过 0.22μm抽滤
合成培养基
• 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数 量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多 种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
相关主题