临床标本细菌培养鉴定常见的15个疑问
细菌培养标本的_采集、运送与处理
痰标本的处理
培养基：血琼脂、麦康凯琼脂、嗜血杆菌巧克 力琼脂和沙保弱琼脂。
划线方法：分四区划线，每次划下一区前都要 烧灼接种环，待冷却后再划。下一区与上一区 要相交4-6次。
35℃5%-10%二氧化碳中培养24-48h。
咽拭子及口腔拭子
采集前患者应用冷开水反复漱口， 拭子的选择：要求无菌、不含抑制剂； 预先沾湿拭子（非常重要）； 由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉
霍乱弧菌培养：
记录收到标本时间和病人电话 碱性蛋白胨水35℃培养 6-8小时后转种4号平板（四区划线） 继续35 ℃培养
生殖道、尿道标本采集
男性患者:
尿道标本:
2h不排尿 清洗龟头后,用碘伏等消毒后,挤出分泌物或以专用细拭子
插入尿道口1-2cm旋转采取分泌物立即送检。
前列腺液标本: 应由医师按摩前列腺,以无菌操做自尿道
隔不少于60分钟。
采血方法
采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血 液注入血培养瓶前，应更换针头或过火消毒针 头。
血培养瓶口也要消毒，并待酒精挥发后（建议 用酒精灯烧灼瓶口）再注入血样, 。
采血量
每次采血量成人5～10ml，婴幼儿1～2ml， 培养基与血液之比以10：1为宜，以稀释血液 中的抗生素。
疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采 血为宜。
多次采血时, 应在不同部位进行。 不要从血管插管内采血。 切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取
血标本。
采血次数与间隔
急性感染患者： 从两臂分别采2份血样。 感染性心内膜炎患者: 24h内采血3次, 每次间
隔不少于30分钟。 发热原因不明患者: 24-48h后可再采血2次,间
细菌培养标本的 采集、运送与处理（需氧）
临床细菌培养鉴定流程及报告.介绍
3．分离培养 ⑴一般培养: 用定量接种环或无菌微量 加样器取尿液0.001ml或0.01ml(已使用 抗生素患者),接种于血平板和麦康凯/中 国兰平板,不能定量时需用倾碟法记数， 35～37℃培养18～24小时。 (2)特殊培养: 对临床要求真菌、淋病奈 瑟菌及结核菌等培养者，根据细菌所需 条件接种相应特殊培养基，放臵相应条 件下进行培养。
(三 ) 尿 尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖 而引起的尿路炎症。从肾脏排泌出来的 尿液正常情况下是无菌的，如果在尿液 中分离出细菌（排除污染因素）即为菌 尿，同时伴有感染症状者称为尿路感染。 根据感染部位可分为上尿路感染（肾盂 肾炎）及下尿路感染（膀胱炎），男性 还可出现前列腺炎。
1.尿中常见分离菌
⑵采血时间及采血量 采血培养应该尽量在使
用抗菌药之前进行，在24小时内采集2～3份血
培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视
为单份血培养）。对间歇性寒战或发热应在寒 战或体温高峰到来之前0.5～1小时，采集血液， 或于寒战或发热后1小时进行。成人采血量8～ 10ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比1：5 ～1：
(2)标本采集 a.清洁中段尿 最好是晨尿，是临床上 最常留取尿标本的方法 b.耻骨上膀胱穿刺法 是评估膀胱内细 菌感染的“金标准” c.直接导尿法 d.小儿收集包 e.留臵导尿
(3)标本运送 标本采集后应及时送检， 2小时内进行接种，否则应臵4～8℃冰箱 保存，冷藏保存标本时间不得超过8小时。
(2)报告方式 初步报告：在分离出细菌后，进行革兰 氏染色，作出初步报告。 最终报告：有意义的阳性结果报告，应 报告菌落计数、细菌种名及药敏结果。 无意义的阳性结果报告，报告菌落 数、革兰氏染色形态特征，并注明是纯 培养或是混合菌生长。 阴性结果报告:应报告无菌生长和菌落计 数＜1000cfu/ml或 ＜100cfu/ml尿。
微生物检验报告中常见疑义解析
微生物检验报告常见疑义解析徐州市第六人民医院检验科李继刚在临床上，常见的致病菌或条件致病菌有很多种类，根据对氧气的需求可以分为需氧菌、微需养菌、兼性需养菌、兼性厌氧菌、厌氧菌；根据对培养基的要求可以分为苛养菌和非苛养菌。
苛养菌对培养条件要求苛刻，例如流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌艰难梭菌等，非苛养菌对培养条件要求不高，一般实验室可以做到。
目前大多数实验室只能针对需氧菌中的非苛养菌进行培养、鉴定及药敏试验，这就引发了一系列的问题，例如细菌涂片镜检报告与细菌培养报告结果矛盾，细菌培养报告与临床不符等。
因此，我科微生物室工作人员特就这些问题做出解答，并提出一些解决方案。
1.问：临床经常发现脑膜炎疑似患者，而脑脊液培养结果常为阴性，为什么？答：引起脑膜炎的常见细菌为脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌、结核杆菌等等，脑膜炎奈瑟菌的培养需要5%的二氧化碳和巧克力培养皿，流感嗜血杆菌需要特殊的营养因子，结核杆菌需要专用培养基，这些条件多数医院无法做到。
临床在采集脑脊液标本时，可以另外留取一部分做细菌、结核菌和真菌涂片检测，如果确实需要做培养，需要根据培养的种类另外交费，送外院检验，我们医院开展的是普通细菌培养。
2.问：临床常见的脓肿，抽出来的脓液常为恶臭味，但细菌培养结果为无细菌生长，为什么？答：脓肿的原因多种多样，有病毒、肿瘤、寄生虫等引起的无菌性坏死，也有真菌感染或自身免疫原因引起的坏死，但这些一般没有恶臭味，最常见的原因是细菌感染。
厌氧菌和苛养菌培养目前大多数实验室都没有条件开展，建议同时进行细菌涂片检验和细菌培养，如果细菌涂片阳性而细菌培养阴性，则为厌氧菌或其他苛养菌感染，如果细菌涂片阴性而细菌培养阳性，则为污染。
3.问：严重腹泻患者粪便培养大多数为阴性，为什么？答：正常粪便中的菌群多种多样，包括乳酸杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、枯草杆菌、葡萄球菌、链球菌、肠杆菌、酵母菌等，其中主要为革兰阳性杆菌，占80%左右，其次为肠球菌。
临床标本的细菌检验
痰标本临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌或仅有少量细菌侵入。
在呼吸道标本细菌学检验中，上呼吸道标本（咽拭子）由于有正常菌群的存在，不易判断出何为与疾病有关的细菌，进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。
下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，临床常取痰液标本进行细菌学检验，以明确感染病原及其药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。
痰标本须经上呼吸道排出，常受该处正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。
上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。
标本的验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
拒收标准：a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。
b.标本涂片白细胞数＜10/低倍镜和鳞状上皮细胞数＞25/低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。
c.容器错误标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。
分离培养1．痰标本培养前处理（均质化）2．分离培养（1）一般细菌培养应同时划区接种（痰半定量原则）痰半定量方法：用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本，进行培养。
痰半定量培养的临床意义三区划线法：首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分（或将接种坏通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许，尽量取有脓或血部分）然后将其涂布在平板第一区，并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。
1）血平板（5%CO2环境）适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。
2）巧克力平板（5%CO2环境）适用于分离嗜血杆菌。
3）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）适用于分离革兰阴性杆菌。
（2）分离培养血平板和巧克力平板置5%CO2环境，麦康凯平板/中国兰平板置普通孵箱，35℃孵育。
临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
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痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
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痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
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尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
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尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
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粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
临床医学检验：临床细菌学学习资料
临床医学检验：临床细菌学学习资料1、单选用于霍乱弧菌培养的选择性培养基是()A．SS琼脂B．麦康凯培养基C．LB琼脂D．蛋白胨水E．庆大霉素琼脂正确答案：E2、单选?患者王某某，男，36岁，有肺结（江南博哥）核病史，现持续性膀胱炎，经一般抗菌药物治疗后症状不缓解，怀疑为肾结核。
结核分枝杆菌培养最常用的固体培养基是()A．SS培养B．中国蓝培养基C．MAC培养基D．改良罗氏培养基E．巧克力琼脂正确答案：D3、单选与大肠埃希菌比较，伤寒沙门菌在糖发酵方面的主要差别是伤寒沙门菌不分解()A．葡萄糖B．乳糖C．蔗糖D．麦芽糖E．山梨醇正确答案：B4、问答题简述白喉毒素的致病与免疫机制。
正确答案：白喉棒状杆菌是白喉的病原菌，因患者咽喉部粘膜具有灰白色假膜而名。
传染源为患者和带菌者，以飞沫和玩具等为媒介传染，引起急性呼吸道传染。
本菌不侵人血液，在粘膜局部定植并产生白喉毒素，引起局部炎症和侵入血液形成毒血症，致全身中毒症状。
白喉毒素具有强烈细胞毒作用，可使局部粘膜上皮细胞产生炎症、渗出和坏死反应，渗出的纤维素和局部细菌、炎症细胞、坏死粘膜紧密结合在一起形成假膜，不易拭去。
若假膜延伸并脱落于气管，可致患者于疾病早期窒息死亡。
白喉毒素是一种酶原，经酶蛋白降解后，分成A、B两个多肽片段，B肽链无酶活性，有1个受体结合区和1个转位区，与易感细胞表面受体结合，显示其选择性亲和力；A肽链有酶活性，但不能单独侵入细胞；通常A肽链由B肽链携带，附着于细胞膜受体并转运入胞质内。
A肽链使细胞内延伸因子Ⅱ(EF-2)失活，易感细胞蛋白质合成障碍。
常见的易感细胞有心肌、外周神经、肝、肾、肾上腺等组织，可引起相应的临床症状。
免疫机理：人类对白喉毒素有一定耐受性，足量白喉毒素可激发机体产生充分的免疫应答，故病后可获得以体液免疫为主的牢固免疫力。
5、判断题葡萄糖氧化-发酵试验不能用于鉴别需氧菌和厌氧菌。
()正确答案：对6、单选结核分枝杆菌具有以下特征()A．细胞壁含有大量脂质B．生长缓慢C．专性需氧菌D．传染性免疫E．以上都是正确答案：E7、单选?如图所示为细菌的触酶试验结果，下列对于该图的描述正确的是()A．1和2均为触酶阳性B．1和2均为为触酶阴性C．1为触酶阴性，2为触酶阳性D．1为触酶阳性，2为触酶阴性E．要据细菌的菌落形态综合判断正确答案：D8、单选关于铜绿假单胞菌的培养特性，错误的是()A．需氧生长，生长温度范围广B．营养要求较高C．最适生长温度为35℃D．在血琼脂平板上产生透明溶血环E．能产生水溶性色素正确答案：B9、填空题副溶血性弧菌在含______NaCl的培养基上生长良好。
从临床标本分离、鉴定细菌的基本要领
从临床标本分离、鉴定细菌的基本要领
1．重视标本送检申请单
标本送检申请单上通常均注明标本的来源及患者的主要临床情况，检验者应予以重视。
这样，可有目的的去检出病原菌，避免走弯道。
2．注意选择适宜的培养基
各种标本初分离应选用的培养基类别参见下表。
各种标本初分离细菌应选用的培养基
3．认真识别污染菌
在从标本中分离出细菌时，应特别注意区分是否是人体正常菌群成员。
并且要识别是否是污染菌，其识别法通常有以下几点：
（1）观察菌落是否在划线上。
（2）结合拟培养细菌的生长特点去对照判断（如菌落的形状、大小、边缘、透明度、湿润度、溶血现象等）。
（3）注意观察培养时间。
非致病菌与致病菌的生长速度不同。
例如布鲁菌与结核分枝杆菌生长缓慢。
（4）涂片染色检查，观察是否与目的菌一样。
值得提出的是机体的某些部位通常是无菌的，若检出细菌，应视为致病菌（如血液、骨髓、脑脊液等）。
临床标本的细菌学检查汇总
二 生殖道标本
正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器 （包括男性尿道口和女性阴道）有多种细 菌寄生。 查见病原菌提示有细菌感染。 常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、 链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形 杆菌等。
（一）标本采集 1.女性生殖道标本 2.男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本
第五节 泌尿、生殖道标本
一 尿液标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要 价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病 原菌。 有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105/ml， 提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核 等）。 常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球 菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。
（2）男性
（一）标本采集
1. 中段尿标本采集法 （1）女性：
（3）儿童、婴儿
（4）两侧肾盂尿
（5）膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃 去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml， 则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数 >105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
法尿 和液 操标 作本t 操作步骤
Uricult 菌落比密图
Uricult 细菌种类标准模式 图
4.特殊菌落培养 （1）淋病奈瑟菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）结核分枝杆菌培养 5.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2 天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及 其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。
常见临床标本的细菌学检验
+
+ （+）
+/+/-
+
+ +
耶尔森氏菌属
肥杆菌属 致病性杆菌属 克沃尔氏菌属 拉思氏菌属
K/d
K K A A
A
A A A A
d/+ （+）
（+）/+
-
+ +/（+） -
西地西菌属
塔特母氏菌属
K/d
-
A
A
-
-
-
注：A 产酸； K 产碱； + 90-100%菌株阳性；（+）76-89%菌 株阳性 ；d 26-75%菌株阳性； - 0-10%菌株菌阳性
AD
15
1N
16
SO
1
-
4
-
2
-
1
+
4
-
2
-
1
-
4
-
1
0
0
细菌编码052100 摩根氏变形杆菌
查编码鉴定手册得
操作步骤：取3-4个同细菌菌落用 4mlNS制成悬液，每孔加0.2ml，加 盖。35℃ 4h 观察结果（某些项目要 加入相应试剂）。
H2S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO
序号 1
实验名称 H2S
英文缩写 H 2S
阴性 无色
阳性 棕色、黑色
2
3
硝酸盐还原
苯丙胺酸
N
P
淡黄/白色
白色
粉红
绿色
4
吲哚
I
白色
粉红
序号 实验名称 英文缩写 5 赖胺酸 LD 6 乌胺酸 OD 7 丙二酸盐 M 8 尿素 U 9 V—P VP 10 七叶苷 E 11 ONPG ONPG 12 蔗糖 S 13 阿拉伯糖 A 14 侧金盏花醇 AD 15 肌醇 1N 16 山梨醇 SO
临床上鉴定病原菌的流程
临床上鉴定病原菌的流程
临床上鉴定病原菌的流程一般包括以下步骤：
1. 临床表现与病史：医生首先对患者的临床表现和病史进行详细的了解和分析，包括症状、体征和患病时间等。
2. 采集临床样本：医生根据患者的症状选择合适的临床样本进行采集，常见的样本包括血液、尿液、呼吸道分泌物、组织活检等。
3. 样本处理和预处理：采集到的样本需要进行处理和预处理，以去除干扰物质，并提高病原菌的浓度和纯度。
常见的预处理方法包括离心、滤液、稀释等。
4. 细菌培养：将处理后的样本接种到含有合适营养物的培养基上进行培养，以创造繁殖菌的适宜环境。
不同病原菌有不同的培养条件和时间，常见的培养方法包括血平板法、McConkey平板法等。
5. 菌落鉴定：根据菌落的外形、颜色、形态等特征进行初步鉴定，通常利用肉眼观察菌落的特征。
6. 生化试验：对初步鉴定的结果进行进一步确认，采用生化试剂进行特异性生化反应，通过观察反应结果来确定菌株的身份。
7. 抗生素敏感性试验：对鉴定出的病原菌株进行抗生素敏感性试验，确定其对不同抗生素的敏感性，以指导临床用药。
8. 分子生物学检测：对部分病原菌，尤其是难以培养或培养时间较长的病原菌，可以采用分子生物学方法进行检测，如PCR、DNA测序等。
9. 结果报告与解读：将实验结果整理并进行报告与解读，为临床医生提供指导性的诊疗意见。
需要注意的是，临床鉴定病原菌的流程会根据临床病情、样本类型、病原菌特性等因素有所差异，上述流程仅为一般步骤的参考。
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
临床微生物工作困惑分享
• 我们在判断时需要考虑病原体来源、分离 方法、涂片结果、同部位分离出的其他病
原体，更重要的是考虑临床症状和感染类
型来综合判断。也就是说需要根据细菌
（来源、分离方法、涂片结果及细菌特
点）、患者（临床症状和体征）、感染部
位（不同部位标本培养出的细菌意义不
一）、其他实验室检查（血常规、尿常规、 CRP、PCT、病理切片等）及高危因素等 进行综合判断。
• 2、患者为年轻人，不应该是免疫缺陷病人，骨科 一般患者为外伤性骨折，外伤后皮肤组织感染， 革兰氏阳杆？奴卡？
• 3、询问临床医生，了解情况！看看是不是鉴定方 向出了问题！
• 处理1、再次观察菌落形态，进行革兰氏染 色和抗酸染色，排除奴卡可能性！
新问题？
• 排除奴卡！发现满视野细针状抗酸阳性杆 菌？
• 总之，判断细菌感染与定植需要综合考虑 临床、微生物结果及患者情况，需要临床 医生、院感专职人员与微生物室多沟通配 合，当培养结果证据与临床症状不符时， 疗效才是唯一的金标准。
• 对于临床发现的多重耐药菌不管是定植还 是感染，都要落实好接触隔离措施。
• 区分感染与定植需要我们在工作中善于发 现，善于积累，善于总结，没有现有的公 式可套用。
48h形态
• 反馈结果：患者最终被确诊为布氏杆菌感 染，转院治疗。
• 感到欣慰！ • 沟通和坚持不懈的认真态度
必不可缺
• 布氏杆菌是一类革兰氏阴性的短小杆菌， 牛、羊、猪等动物最易感染，引起牲畜传 染性流产。人类接触带菌动物或食用病畜 及其乳制品，均可被感染
• 布氏杆菌是革兰氏阴性需氧杆菌。 无芽胞，无荚膜，无鞭毛，呈球杆状。
临床微生物检验存在问题及对策
临床微生物检验的主要任务
1.对微生物标本做出快速、准确的检验报告，及 时满足临床的需要；
浅谈临床微生物检验中存在的问题及改进措施
浅谈临床微生物检验中存在的问题及改进措施临床微生物检验是诊断感染性疾病最为直接且有效的方式，但从微生物检验的实践结果来看，因受诸多的影响，导致微生物检验的质量不高，不能够为临床诊疗提供可靠的参考依据。
因此，为了提升微生物检验的质量，本文从分析问题，提出改进措施入手，进行如下分析。
一、微生物检验存在的问题1.人员素质、专业技能问题在基层医院，存在从事微生物检验的人员配备不足，专业技能欠佳的问题，一些医院甚至都没有专职的微生物检验人员。
加上该职业具有一定的暴露风险，使得很多检验人员不愿意从事这项事业，导致自身缺乏责任性。
这在一定程度上影响了微生物检验的专业性，影响了微生物检验流程的规范性，也影响了微生物检验的质量控制。
虽然，现在很多微生物检验依靠自动化仪器，但是每一个步骤仍需要检验人员以扎实的理论知识，专业的操作技能和经验丰富的判断能力，才能确保检验结果的准确，为临床诊断提供科学、客观的依据。
因此，检验人员的专业素养及责任心问题是微生物检验中非常重要的部分2.标本质量问题标本质量的高低是影响检验结果的直接因素，不合格的标本不仅不能准确的检验出患者的实际情况，还会增加误诊率，诱导医生错误诊治，从而增加医疗纠纷。
常见的导致标本质量不合格的原因包括：（1）检验前患者使用了抗生素，（2）采集标本时没有规范化操作，例如：没有做到正确的采集方式、没有严格遵守标本采集的时间、没有用规定的容器保存、没有合理使用防腐剂和抗凝剂、没有按照正确的标本采集量采集、没有在规定的时间内送检、标本运送或采集过程中受到污染等。
3.检验方案设计问题检验方案的设计对于微生物检验十分重要，其直接影响检出率的高低，例如：结核杆菌形态学检查中使用的染色法，有研究指出，荧光染色法和萋尼氏抗酸染色法的检出率有明显的差异性。
还有研究指出，在进行痰液标本采集后，选取直接涂片法、培养检查、集菌检查法和PCR检测，阳性检出率不同，其中以PCR的阳性检出率最高，但受实验室条件限制，大多数基层医院仍选取抗酸染色法和直接涂片法作为结核杆菌的常规检查法。
临床标本的细菌学鉴定实验报告
临床标本的细菌学鉴定实验报告临床标本的细菌学鉴定实验报告一、引言在临床医学中，细菌学鉴定是一项至关重要的实验。
通过对临床标本进行细菌学鉴定, 可以帮助医生准确诊断和治疗感染性疾病。
本实验报告将对临床标本的细菌学鉴定进行评估和讨论，旨在加深我们对该实验方法的理解，并提供有关细菌学鉴定的综合性知识。
二、细菌学鉴定的目的和意义细菌学鉴定作为一种直接、快速、可靠的诊断方法，对临床诊断和治疗起到重要作用。
细菌学鉴定的主要目的是准确确定临床标本中存在的细菌种类，以便为医生提供科学依据。
通过细菌学鉴定，我们能够了解细菌的形态、结构、生物学特性以及对药物的敏感性，从而指导医生选择合适的抗生素进行治疗。
三、细菌学鉴定的方法1. 标本采集：选择适当的临床标本，按照规范采集方法采集标本。
常见的标本包括血液、尿液、呼吸道分泌物等。
2. 标本处理：对采集的标本进行适当的处理，如培养、染色等。
培养可以通过将标本划取于培养基上进行，以便细菌在适宜环境下生长繁殖，从而进行进一步的鉴定。
3. 微生物学特性观察：观察培养基上出现的微生物种类及其生长情况。
根据细菌的形态、结构、染色特性等，可以初步鉴定细菌的属种。
4. 生理生化特性测试：通过一系列生化试剂和培养基，检测微生物的生理特性，如产气、产酸、氧需求等。
根据生化反应的结果，可以进一步缩小细菌的鉴定范围。
5. 抗生素敏感性测试：选取不同类型的抗生素，用其调配成不同浓度的药品，将细菌接种在含有不同药物的培养基上进行培养。
观察细菌的生长情况，以判断其对抗生素的敏感性。
四、个人观点和理解在细菌学鉴定实验中，我认为标本采集的规范性非常重要。
只有正确采集到具有代表性的标本，才能更准确地进行鉴定并提供有效的治疗建议。
由于抗生素耐药性的增加，抗生素敏感性测试也变得越来越重要。
通过该测试，我们可以为医生提供更精确的抗生素选择，避免不必要的药物使用和抗药性的进一步扩散。
总结回顾：本实验报告全面评估了临床标本的细菌学鉴定方法，并深入探讨了如何通过观察微生物学特性、生理生化特性和抗生素敏感性来鉴定细菌种类。
临床标本送检问题回答
临床标本送检常见问题回答多重耐药菌的监测是感控专职人员的主要日常工作之一，除了对多耐患者进行常规的消毒隔离外按照药敏结果使用抗生素也是我们关注的问题，能否按药敏结果合理使用抗生素对于患者的预后也是非常重要。
但我们在多耐的监测中在涉及要求按药敏使用抗生素时有时候会受到主管医生的抗拒，里面牵扯很多大家心知肚明的问题。
但当主管医生说出自已的理由时，我们（大多感控专职人员非临床医生）有时候也不知道如何回答。
我举些例子，相信大家在监测中都会碰到这种情况：医生：为什么我用的A抗生素你们出的药敏结果里面没有做？下次让细菌室把A 药也给我做上。
专职人员：呃~~~~医生：你看我上次那个病人按药敏单里用了B药，但是就是没有效果，所以药敏结果不是太准，我还是经验用药吧。
专职人员：呃~~~~医生：我明明是取的脓液做培养，结果报无细菌生长，细菌室搞错了吧。
专职人员：呃~~~~本人在从事多耐监测的时候上述问题碰到过，有时候真无法解答，细菌室有自已的道理，临床有自已的道理，于是我就成了最无理取闹的人了。
机缘巧合，当我为这些问题非常困惑的时候有幸参加了一次培训，其中一位非常有名的微生物学教授的课让我豁然开朗。
现在我将这些整理下，分享给大家，希望也能让你豁然开朗，特别是刚从事多耐监测的兄弟姐妹。
问题一：临床想用的药物在药敏试验中没有做，是否能将所用的药都做药敏试验？答：试验的药物代表一类药，而不是一种药。
通过耐药机制和标志性药物可以预测同类抗菌药物的敏感性。
如碳氢酶希类抗生素亚胺培南、美罗培南、比阿培南等。
问题二：培养阳性的细菌都需要抗菌药物治疗吗？答：培养阳性≠感染，可能为污染（血培养），可能为定植（痰培养）；采集来源为无菌部位的标本更有临床意义。
感染部位的清创、引流、换药比使用抗菌药物更加重。
问题三：选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？答：体外药敏试验结果只能预测体内治疗效果，并不等同，一般来说，耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效；药敏结果中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合使用。
细菌鉴定中应注意的问题
细菌鉴定中应注意的问题细菌是自然界中数量最大、分布最广、种类最多的病原体，其不仅代谢活力强，繁殖也非常快，并且易于变异，这些特性使得临床进行细菌鉴定时面临着较大的困难。
虽然临床在微生物检验方面不断更新技术、采取各种质量控制措施，但细菌鉴定过程中依然存在许多问题，检验人员若是不加以注意，将很难获得正确的鉴定结果，自然也谈不上对患者病情的准确诊断和有效治疗。
本文试分析阐述细菌鉴定各个环节中应该注意的一些问题。
一、标本采集环节我国有超过8成的医院在细菌标本的采集上存在问题。
以痰液标本为例，大部分痰液标本不合格的原因都是标本中存在除了痰液之外的其他呼吸道分泌物，这些分泌物污染了痰液标本，使其达不到痰液标本要求的质量标准，检验人员不得不将不合格的标本打回，由采集人员再次采集标本，这不仅浪费时间，还会给患者带来不适。
再以尿液标本为例，临床检验要求尿液标本应为患者晨起后的新鲜中段尿，若是刚刚排出的尿液，容易受到膀胱、尿道下段等泌尿器官中其他菌群的污染。
此外，对于术后感染分泌物或外伤分泌物，应采集深部的分泌物，医院要求细菌常规培养不得检出厌氧菌，否则会影响对厌氧菌的诊断准确性，若是采集浅表位置的分泌物，标本将会与空气接触，进而被污染。
此外，细菌标本应确保采集足量，以免需要二次采集。
二、标本送检环节细菌鉴定结果不仅与标本采集质量有关，与送检环节是否合乎规范也有密切联系，送检的过程中若是保存的容器开放，与外界空气和微生物接触，将会导致标本被污染。
此外，尿液标本应在采集后尽快送交实验室进行检验，以免因为尿液营养丰富而在较长的时间内有细菌大量繁殖，导致鉴定结果出现偏差。
血液标本也要尽快送检，若是保存时间过长、保存环境温度过高，血液标本将有可能发生凝血、溶血、变质等问题，也会影响鉴定结果的准确性。
三、分离鉴定环节（一）分离培养环节在进行细菌的分离培养时，应该基于标本的来源、病原菌可能的类型来选择适合的孵育环境和培养基，若有特殊需要，还需要选择特殊的培养基。
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问题1：如何正确应用药物敏感结果？
正确运用药敏试验结果应考虑以下3个方面：
首先要确定病原菌，如未找到真正的致病菌，药敏实验不但不能指导用药甚至可能误导临床；
重视耐药监测，这是经验用药的一个重要的参考；
考虑到药敏试验的局限性：体外报告敏感的药物体内治疗不一定有效，而体外报告耐药的药物体内治疗不一定无效。
问题2：是否MIC越低的药物越好？
不一定。
因为不同药物对同种细菌，同一药物对不同细菌的折点均可不同，并且若细菌产生某些特殊耐药机制时，即使体外敏感也应报耐药，另外尚需考虑药动学和耐受性。
因此，不能单纯比较MIC值而认为MIC越低的药物就一定越好。
MIC只表示一种药物对某一株细菌抗菌作用的强弱，MIC越低（离中介值越远）说明该药物对相应的病原菌的作用越强。
只能比较同一种药对同一株菌，若MIC值升高，可认为其耐药性提高。
问题3：是否所有报告的细菌均为病原菌？
不一定。
原因如下：
所报告细菌为污染菌或定植菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关。
如为血液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌。
某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。
可能为应用抗菌药后的菌群交替或菌群失调。
特别是原为复数菌感染时，针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，或广谱抗菌药治疗后可
能出现真菌感染。
有２种以上病原菌时因生长速度不同、营养要求不同，培养结果不能真实反映病原菌的种类、数量。
问题4：为什么有时痰涂片结果与痰培养结果不一致？
由于痰标本进行培养和涂片时选取的部位不一致；
某些快生长菌所占比例并不多，但由于生长速度快、营养要求低，能在培养过程中迅速变为优势菌而掩盖其他菌的生长；
标本从采集到接种的时间过长，造成部分苛养菌死亡，在涂片中看到的只是菌的残骸而非活菌。
问题5：我们想用的药物在药敏试验中没有做？
1.天然耐药
2.可能是药物的敏感性被其他药物所预报
问题6：为什么有的菌报告很多种药物，有的仅报告几种药物？
报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少。
问题7：是否能将所用的药都做药敏试验?
1.没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性
2.没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准）
问题8：选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？
①体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；一般来说，耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效；
②可能不是真正的致病菌（污染或定植菌）；
③细菌本身因素（如诱导耐药，生物被膜）；
④感染部位与药代动力学因素；
⑤细菌的MIC，给药剂量和用药方式；
⑥敏试验药物中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合用药；
⑦药物剂型及生物利用度（纯品、商品）。
问题9：涂片镜检结果与培养结果不吻合？
①涂片镜检是报告所有检见的细菌，而培养的目的是检出致病菌,因此会产生涂片和培养结果不一致的情况；
②一些苛氧菌需在特殊的环境或培养基上才能生长，因此可能在培养后才能得到。
问题10：取的明显就是脓液标本，为何鉴定报告为无菌生长？
①我们做的是有氧培养，脓液可能为厌氧菌感染。
②可能细菌被大量的中性粒细胞吞噬。
问题11：鉴定结果明明写着四联球菌、革兰氏阳性杆菌，为何没有药敏结果？
①四联球菌为微球菌，一般不引起人体致病，为非致病菌，故考虑污染可能；
②药敏结果参照CLSI标准，目前革兰氏阳性杆菌没有参照标准，故暂不能做药敏试验，若需治疗可参照阳性球菌用药。
问题12：一般培养不是三天出结果吗，今天第四天了怎么还没出来？
一般培养经48小时后，即第三天出报告，若需分离致病菌的则第四天出报
告。
细菌生长慢，生长需要适宜的条件。
细菌一般以二分裂法进行无性繁殖，在适宜条件下，多数细菌分裂一次需
要20-30分钟，结核分枝杆菌需18-20小时才分裂一次。
对数期（鉴定、药敏
常用该期的培养物）一般在培养后8-18小时。
普通细菌培养一般需48小时（培养需12-24小时，鉴定药敏需要12-24小
时）；酵母样真菌阳性报告需要2-3天，阴性报告需5天；丝状真菌（霉菌）
阴性报告需2-4周；血培养阳性报告需3天以上，阴性报告需5-7天。
问题13：今天的培养结果怎么与前天的不一样？
①取材是否规范。
②痰标本，有时选优势菌做，就可能导致两次不一样。
③抗生素的使用
问题14：明显稀便，培养结果为何正常？
①大便普通培养，通常只能鉴定志贺菌、沙门菌感染，致病性大肠杆菌
②怀疑霍乱时，需开霍乱弧菌培养；
③可能病毒感染(轮状病毒)。
问题15：为什么阳性率太低，临床符合率差?
不合格的标本直接导致病原菌分离率降低。
操作程序不规范，未进行直接涂片，未严格执行拒收制度等也是重要原因。
微生物和人体关系复杂。
致病和条件致病，定植和感染等，导致细菌室判
断病原菌困难，要证明培养结果与感染相关性是临床微生物检验所面临的难题。
已使用抗菌药，病原菌受到伤害，不能正常生长。
实验室条件有限，苛养菌漏检，常规培养不能检测厌氧菌、结核杆菌、衣原体、支原体、病毒等.。