临床标本细菌培养鉴定常见的15个疑问
临床标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验，从各种标本中查找病原菌及其对抗生素的敏感性，在明确诊断、指
导用药、预防和流行病学调查等方面具有重要意义。对各种标本，应根据实际要求和标本特
点选择适当的检验步骤及方法，准确、快速地检测病原菌，分析检验结果并报告，同时应注
意低耗和安全防护。分离细菌的目的是查找与疾病相关的病原体及其对抗生素的敏感性，对
临床诊断、治疗、预后和流行病学调查很有价值。
1临床标本的采集与送检
临床标本的质量对于细菌学检验的结果至关重要，严格按操作规程的要求进行标本采集、运送、保存和处理，才能保证检验结果准确、可靠。
1.1临床标本的采集
1.1.1细菌学检验申请单的检查与登记：应仔细检查检验申请单上的内容，如标本类型、来源、送检目的、患者姓名、性别、年龄、临床诊断(如未明确，应注明主要症状)及是否已用
抗生素等，并及时登记。
1.1.2标本盛放容器：采集的标本，尤其是采自无正常菌群寄居部位的标本如血液、脑脊液、穿刺液等，必须盛放于无菌容器内[1]。容器灭菌应采用干热、湿热等物理方法灭菌。容器上
应贴上标签，注明待检患者姓名、床号等信息。
1.1.3无菌操作：在采集血液、脑脊液、穿刺液、骨髓时，应严格进行无菌操作，避免杂菌
污染标本。采集粪便、痰液、咽拭子、肛拭子等标本，虽无需严格无菌操作，但也应尽量避
免杂菌污染。
1.1.4采集时间和部位：选择合适的采集时间是很重要的，一般情况下，标本应尽量在疾病
早期或在症状、体征明显时，在抗生素治疗之前采集，一些特殊检验的标本应按规定的时间
采集。根据感染的具体情况，选择适当的部位采集标本。
微生物检验报告中常见疑义解析
微生物检验报告常见疑义解析
徐州市第六人民医院检验科李继刚
在临床上，常见的致病菌或条件致病菌有很多种类，根据对氧气的需求可以分为需氧菌、微需养菌、兼性需养菌、兼性厌氧菌、厌氧菌；根据对培养基的要求可以分为苛养菌和非苛养菌。苛养菌对培养条件要求苛刻，例如流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌艰难梭菌等，非苛养菌对培养条件要求不高，一般实验室可以做到。目前大多数实验室只能针对需氧菌中的非苛养菌进行培养、鉴定及药敏试验，这就引发了一系列的问题，例如细菌涂片镜检报告与细菌培养报告结果矛盾，细菌培养报告与临床不符等。因此，我科微生物室工作人员特就这些问题做出解答，并提出一些解决方案。
1.问：临床经常发现脑膜炎疑似患者，而脑脊液培养结果常为阴性，为什么？
答：引起脑膜炎的常见细菌为脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌、结核杆菌等等，脑膜炎奈瑟菌的培养需要5%的二氧化碳和巧克力培养皿，流感嗜血杆菌需要特殊的营养因子，结核杆菌需要专用培养基，这些条件多数医院无法做到。临床在采集脑脊液标本时，可以另外留取一部分做细菌、结核菌和真菌涂片检测，如果确实需要做培养，需要根据培养的种类另外交费，送外院检验，我们医院开展的是普通细菌培养。
2.问：临床常见的脓肿，抽出来的脓液常为恶臭味，但细菌培养结果为无细菌生长，为什么？答：脓肿的原因多种多样，有病毒、肿瘤、寄生虫等引起的无菌性坏死，也有真菌感染或自身免疫原因引起的坏死，但这些一般没有恶臭味，最常见的原因是细菌感染。厌氧菌和苛养菌培养目前大多数实验室都没有条件开展，建议同时进行细菌涂片检验和细菌培养，如果细菌涂片阳性而细菌培养阴性，则为厌氧菌或其他苛养菌感染，如果细菌涂片阴性而细菌培养阳性，则为污染。
第十八章临床标本的细菌学检验
痰标本镜下分类 分级 A B C 白细胞（个） >25 >25 <10 上皮细胞（个） <10 <25 >25
注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本
（1）一般细菌涂片
2.特殊细菌培养 （1）淋病奈瑟菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）结核分枝杆菌培养 3.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2天无细菌生长”。 查见细菌，报告菌名及其菌落计数（菌落数/ml） 和药敏结果。
第五节 粪便标本
• 正常情况下肠道中有多种细菌。 • 引起感染性腹泻的病原微生物有：
（1）细菌性：产毒素型腹泻、侵袭型腹泻、食物中毒、 慢性腹泻。 （2）真菌性 （3）病毒性
• 如病人已实施治疗，应在增菌培养液中加入百度文库应拮抗剂：
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素→2u青霉素酶/ml 氨基糖苷类、多粘菌素类→聚回香脑磺酸钠 其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
血标本采集的注意事项
• 应从静脉采血，不建议采集动脉血。 • 血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血。 • 血培养瓶常温保存，不应冷藏；采集血标本后请立即送
膀胱穿刺法二尿液标本中常见的病原菌细菌中80为革兰阴性杆菌20为革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阳性菌其他病原菌大肠埃希菌肠球菌真菌变形杆菌属金黄色葡萄球菌支原体铜绿假单胞菌腐生葡萄球菌衣原体克雷伯菌属表皮葡萄球菌螺旋体肠杆菌属链球菌结核分枝杆菌沙门菌属淋病奈瑟菌三检验方法和操作流程涂片检查涂片检查取离心沉淀物涂片1一般细菌革兰染色镜检报告2淋病奈瑟菌菌可报告检出革兰阴性双球菌位于细胞内或外形似淋病奈瑟菌3念珠菌革兰染色镜检如发现芽生孢子和假菌丝且革兰染色阳性时可报告检出念珠菌
痰液标本细菌学检验的注意事项
痰液标本细菌学检验的注意事项
痰液标本细菌学检验是一种常用的临床检查方法，主要用于分离和鉴定痰液中的细菌，
以帮助诊断和治疗呼吸系统感染和其他相关疾病。随着医学技术的不断发展和进步，痰液标
本细菌学检验的应用范围和检测方法也在不断更新和完善。然而，由于痰液标本细菌学检验
存在一些技术难点和操作问题，容易出现误判和漏诊等情况，给临床诊疗带来一定的挑战和
困难。
采集痰液标本前的准备工作是痰液标本细菌学检验中非常重要的一个环节。如果准备工
作不充分，将会影响痰液标本的质量和可靠性，甚至导致检测结果的误判和漏诊。因此，在
采集痰液标本前，应做好以下准备工作：①确认患者是否适宜进行痰液标本检测。痰液标本
检测主要适用于呼吸系统感染和其他相关疾病的诊断和治疗。在进行痰液标本检测前，应仔
细询问患者的病史，了解其病情和病程，以确认是否适宜进行该项检测。②患者的呼吸系统
状态要充分准备。采集痰液标本时，需要患者能够充分清除呼吸道内的分泌物，以便采集到
干净的痰液。因此，患者应在采集痰液标本前充分排空呼吸道，建议在晨起后进行采集，因
为此时痰液较为浓稠，容易采集到足够的样本。③患者是否接受抗生素治疗。抗生素治疗可
能会影响痰液中细菌的生长和检测结果。因此，需要了解患者是否接受抗生素治疗，并在采
集痰液标本前停止使用抗生素一段时间，以避免影响检测结果。④采集器材的准备。在采集
痰液标本时，需要准备相应的器材，如痰杯、痰杯盖、手套、口罩等。要求器材干净、无菌、无异味，以避免交叉感染。⑤给患者充分解释并获得其同意。在采集痰液标本前，需要给患
临床标本的细菌检验
痰标本
临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌或仅有少量细菌侵入。在呼吸道标本细菌学检验中，上呼吸道标本（咽拭子）由于有正常菌群的存在，不易判断出何为与疾病有关的细菌，进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，临床常取痰液标本进行细菌学检验，以明确感染病原及其药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。痰标本须经上呼吸道排出，常受该处正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。
标本的验收
遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
拒收标准：
a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。
b.标本涂片白细胞数＜10/低倍镜和鳞状上皮细胞数＞25/低倍镜，表示该标
本已污染正常菌群，建议重送标本。
c.容器错误标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。
分离培养
1．痰标本培养前处理（均质化）
2．分离培养
（1）一般细菌培养应同时划区接种（痰半定量原则）
痰半定量方法：用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本，进行培养。
痰半定量培养的临床意义
三区划线法：首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分（或将接种坏通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许，尽量取有脓或血部分）然后将其涂布在平板第一区，并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。
1 832例临床标本细菌培养结果与药敏分析
近 年 来 ， 院 内感 染 已 引 起 人 们 的 高 度 重 视 ， 菌 药 物 的 医 抗
不 合 理 使 用 及 医 院 内感 染 管理 控 制 不 当 ， 得 细 菌 及 真 菌 的耐 使 药 性 呈 现 上 升 趋 势 。为 准 确 、 时 掌 握 临 床 分 离 病 原 菌 的流 行 及
选 择 抗 菌 药 物 ， 导 临床 合 理 用 药 。 指
【 键 词 】 交 叉 感 染 ； 临床 标 本 ； 细 茵 培 养 ； 抗 茵 药 ； 微 生物 敏 感性 试验 关
中 图分 类 号 ： ４ ６ ５ Ｒ ６ ． Ｒ ４ ．； ９９４ 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６ ２９ ５ （ ０ ９ ０ — ３ １０ １ ７ — ４ ５ ２ ０ ） ５０ ６ － ２ 森 菌属 ２ （ ． １ ） 其 他 １ 株 Ｏ ３ ， ２株 （ ． ６ ） １ ８ 。
检 验 医学 与 临 床 ２ ０ ０ ９年 ３月 第 ６卷 第 ５期
Ｌ ｂＭｅ ｌ Ｍａｃ ０ ９ Ｖｏ． ， ． ａ ｄＣｉ ｎ， ｒｈ２ ０ ， １６ Ｎｏ ５
１８ 临床 标 本 细 菌 培 养 结 果 与药 敏 分 析 ３ ２例
劳炳焕 林 岗 朱 庆 明 （ ． ， ， １ 广西壮 族 自治 区合 浦县 红十 字会 医院检 验科 ５ ６ ０ ； ３ １ ０
并 对 部 分 抗 菌 药 的药 敏 试 验 结 果 进 行 分 析 ， 报 道 如 下 。 现
临床标本的细菌学检查汇总
（2）男性
（一）标本采集
1. 中段尿标本采集法 （1）女性：
（3）儿童、婴儿
（4）两侧肾盂尿
（5）膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃 去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml， 则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数 >105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
第五节 泌尿、生殖道标本
一 尿液标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要 价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病 原菌。 有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105/ml， 提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核 等）。 常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球 菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。
（二）检验方法和操作流程
1.涂片检查 （1）革兰染色镜检 （2）梅毒螺旋体涂片检查 2.分离培养 （1）普通细菌培养 （2）淋病奈瑟菌培养 （3）阴道加特纳菌培养 （4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特 纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。
验生 方殖 法道 和标 操本 作细 流菌 程学 检
人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。
临床常见微生物标本采集法及影响临床微生物检验的因素
和指导.
典型案例
我们在临床检验工作当中遇到过这样的事情，脑
积水患儿准备进行手术，术前三次脑脊液培养均 分离出表皮葡萄球菌，脑脊液常规检查正常，污 染菌？病原菌？临床请求会诊。
标本采集运送中的影响因素
• 抗微生物药物对标本的影响 抗菌药物抑制细菌生长，影响检出率，应当
在应用抗微生物药物之前采集标本，或者
回报结果快速及时
做好咨询与解释工作
细菌 螺旋体 真菌
病原体
衣原体
支原体
病 毒
常见病原体种类
流wenku.baidu.com程
感染性标本 微生物学检查
感染性疾病
个体治疗
诊断及鉴别诊断
在细菌检验中，许多因素可以影响检测结果的准
确性，我们在工作时应当加以注意，主要包括以 下几个方面： 标本的采集与运送 细菌的鉴定及药敏试验 结果的审核与报告
＞ 25
＜10
合格，用于细菌培养
B
＞25
10~25
尚合格，可用于细菌培 养
不合格，建议重送标本
C
＜10
＞ 25
标本运输
标本采集后应立即送检, 以防某些细菌在外环 境中死亡。作结核分枝杆菌或真菌培养的痰 液如不能及时送检，应置于4℃冰箱保存。
痰标本在平板上的菌落量化指标
分级 1区 ﹤10 ﹥10 ﹥10 ﹥10 ﹤5 ﹥5 ﹥5 ﹤5 ﹥5 划线区菌落数目 2区 3区
细菌培养标本采集及注意事项
培养。
新生儿可疑菌血症，应同时做尿液、脑脊液培养。
3 、采血时机：尽量在使用抗菌素之
前采血、尽量在寒战和发热初起时采血、
如患者已经使用抗菌药物进行治疗，应在
下次用药之前采血。
4、血液标本的采集方法： a、75%酒精清洁局部皮肤30s以上。 b、待皮肤干后，再用1%-2.%碘酊作用30s或 10%碘伏作用90s以上，从穿刺点中心部位向外画 圈消毒，范围不应小于 5 ㎝（直径），且不能用 手指触摸消毒后的皮肤。
e.每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提
高阳性率和区分感染菌与污染菌。
f.采血，周围静脉为宜。
g. 严格执行三步消毒后采血。注入血液时不能 将注射器内的空气加入血瓶内。绝对不能超出10 ml。
二、呼吸道标本培养
人体的上呼吸道有常居菌群，下呼吸 道是无菌，但下呼吸道分泌物经上呼吸 道排出时通常受到正常菌群的污染，故 要正确采集标本，并结合临床表现是否 有该细菌引起的感染。
2、痰：自然咳痰法:
清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔 内大量杂菌，用力咳出呼吸道深部的脓痰，直接 吐入干净、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口 带盖的容器中，标本量要≥ 1ml 。标本要尽快送 检。 咳嗽无力或昏迷，可用吸痰管经鼻腔或口腔经
气管腔内吸痰及支气管灌洗液送检。
4 、痰量极少者可用 45 ℃ 3%-10% 的氯化钠溶 液约 25ml 雾化。对于咯痰量少的幼儿 , 可轻轻压
胡方芳-临床微生物标本常见细菌培养和鉴定
三 细菌鉴定的基本依据
• 基本结构：形态与染色 • 生长特性：培养特性 • 细菌代谢产物：生化反应： • 细菌免疫学特征：血清学试验： • 遗传特征：分子生物学实验 • 其他：质谱分析技术、色谱分析技术等
四 细菌鉴定基本步骤
• （一） 挑选可疑菌落 • （二） 涂片染色 • （三） 生化反应试验 • （四） 血清学试验 • （五） 其他相关试验
（四） 无菌体液标本
• 对于无菌部位所采集的标本，只要培养出细菌（排除污染） 一律都视为致病菌。
• 无菌部位采集的标本：CSF、胸水、腹水、关节液各器官 穿刺液等。
接种平板：血平板/血平板+巧克力（CSF） 孵育条件：普通温箱 35℃/ 5%-10%CO2孵箱，35℃（CSF）
（五） 伤口分泌物
• 当每克组织中细菌数量＞(105～106)时，可造 成伤口感染。葡萄球菌，链球菌是引起毛囊炎、 疖痈、扁桃体炎、化脓性骨髓炎的常见细菌。
（3）杆菌肽敏感试验（BC）：A群链球菌敏感（S）
（4）其他：嗜麦芽窄食单胞菌（IPM R）
+ 靛基质
+ 大肠杆菌 枸橼酸杆菌 产酸克雷伯
产气、阴沟 普罗菲登 枸橼酸杆菌
其他肠杆菌 其他克雷伯
流感嗜血杆菌 多形性 血平板 -
嗜血巧克力 + 普通 –
卫星现象 +
G- b
186、临床标本细菌培养相关问题讨论
临床标本细菌培养 相关问题讨论<br><br>
主要内容<br> 痰标本 血培养 无菌体液<br><br>
一、痰标本<br><br>
痰标本存在的问题<br>标本不符检验要求： 痰标本中有食物残渣、菜叶 唾液 标本量少 标本干枯 非无菌容器留取标本 标本留置时间长（苛氧菌）<br><br>
痰涂片 是用来评价标本质量 细菌类别、真菌 寄生虫 ？？？<br><br>
前处理 9 洗痰：灭菌生理盐水<br>冰冻 过滤 9 液化：痰标本液化 （胰酶、二硫苏糖醇） 生理盐水清洗痰液 9 直接涂片、直接接种<br>消化液<br>专利号：201320554637.6<br><br>
镜检：是用来评价痰标本质量 ？<br>9 用 三分类标准（观察白细胞和上皮细胞数量 1975）。 A 低倍镜下白细胞＞25，上皮细胞＜10<br>B 低倍镜下白细胞＞25，上皮细胞＜25<br>C 低倍镜下白细胞＜10，上皮细胞＞25<br><br>
A类标本，箭头所指的都是白细胞，可见白细胞大 约在40～50，上皮细胞1～3。<br><br>
B类标本，左箭头所指的是白细胞，右箭头所指是上 皮细胞，白细胞大约在40～50，上皮细胞26～30。<br><br>
常见临床标本的细菌学检验
3、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌 不能使用消毒剂）加入适当保存液 。
4、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必 须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌 氧运送。防止污染及扩散。
5、检样不宜过少，否则易干燥死亡。
+ + —— —
—— + + +
-/+
I MAN SUC C U PA
_
_
__
I项“+”非沙门氏菌
I项“+”非志贺氏菌 +
变+普
-/- → I
葡
C
不动杆菌
绿脓杆菌
+/- → 一般不会出现，可考虑接种不当，空
气污染
根据生化反应结果，结合相应血清学实验 报告结果
五、空气细菌计数
将直径9 .0cm/普通琼脂平板/血琼脂平板 按五点法/三点法打开盖暴露20’，盖好 →37℃ 24h计数菌落数，称出平均每个板 菌落数N
（五）痰：
1、先让病人用清水嗉口数次， 以除去口腔内大量杂菌。
2、取清晨第一口咳出的痰， （晨痰）
3、作结核杆菌培养可收集24h 痰。（冰箱保存）
（六）胆汁：Fra Baidu bibliotek
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
浅谈临床微生物检验中存在的问题及改进措施
浅谈临床微生物检验中存在的问题及改
进措施
临床微生物检验是诊断感染性疾病最为直接且有效的方式，但从微生物检验
的实践结果来看，因受诸多的影响，导致微生物检验的质量不高，不能够为临床
诊疗提供可靠的参考依据。因此，为了提升微生物检验的质量，本文从分析问题，提出改进措施入手，进行如下分析。
一、微生物检验存在的问题
1.人员素质、专业技能问题
在基层医院，存在从事微生物检验的人员配备不足，专业技能欠佳的问题，
一些医院甚至都没有专职的微生物检验人员。加上该职业具有一定的暴露风险，
使得很多检验人员不愿意从事这项事业，导致自身缺乏责任性。这在一定程度上
影响了微生物检验的专业性，影响了微生物检验流程的规范性，也影响了微生物
检验的质量控制。虽然，现在很多微生物检验依靠自动化仪器，但是每一个步骤
仍需要检验人员以扎实的理论知识，专业的操作技能和经验丰富的判断能力，才
能确保检验结果的准确，为临床诊断提供科学、客观的依据。因此，检验人员的
专业素养及责任心问题是微生物检验中非常重要的部分
2.标本质量问题
标本质量的高低是影响检验结果的直接因素，不合格的标本不仅不能准确的
检验出患者的实际情况，还会增加误诊率，诱导医生错误诊治，从而增加医疗纠纷。常见的导致标本质量不合格的原因包括：（1）检验前患者使用了抗生素，（2）采集标本时没有规范化操作，例如：没有做到正确的采集方式、没有严格
遵守标本采集的时间、没有用规定的容器保存、没有合理使用防腐剂和抗凝剂、
没有按照正确的标本采集量采集、没有在规定的时间内送检、标本运送或采集过
程中受到污染等。
临床标本的细菌学检验.ppt
下呼吸道感染
1.咳嗽 咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状 ，咳嗽的性质与痰的性状如脓或铁锈样痰具有 鉴别诊断意义。
39
脑膜炎类型
观察物
细菌性的 结核性的 真菌性的 病毒性的
பைடு நூலகம்优势白细 胞类型
糖
分裂的多形核 嗜中性粒细胞
单核细胞
很低
低
5-20mg/100ml 20-40mg/100ml
单核细胞
低 20-40mg/ml
蛋白
增高
增高
增高
涂片染色 革兰染色
抗酸染色
印度墨汁
单核细胞
正常 65-70mg/ml
感染早期 轻度增高
16
17
18
19
Step4. 初次培养基上的分离物，可能存在
多种细菌： 区分正常菌群与致病菌 确定优势菌群
20
化脓性链球菌菌落特征（β溶血）
铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）
21
• 快速
涂片检查
• 是“指南针”
• 对确诊报告提供参考意义
• 不要过分依赖、过分夸大它的作用
22
血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和 液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。
病原学检查的主要任务
1．研究感染性疾病的病原体特征
传统感染性疾病的病原体研究 条件致病菌和耐药菌的研究 临床感染优势菌的组成和变迁规律 新出现病原体的研究
临床标本的细菌学鉴定实验报告
临床标本的细菌学鉴定实验报告
临床标本的细菌学鉴定实验报告
一、引言
在临床医学中，细菌学鉴定是一项至关重要的实验。通过对临床标本进行细菌学鉴定, 可以帮助医生准确诊断和治疗感染性疾病。本实验报告将对临床标本的细菌学鉴定进行评估和讨论，旨在加深我们对该实验方法的理解，并提供有关细菌学鉴定的综合性知识。
二、细菌学鉴定的目的和意义
细菌学鉴定作为一种直接、快速、可靠的诊断方法，对临床诊断和治疗起到重要作用。细菌学鉴定的主要目的是准确确定临床标本中存在的细菌种类，以便为医生提供科学依据。通过细菌学鉴定，我们能够了解细菌的形态、结构、生物学特性以及对药物的敏感性，从而指导医生选择合适的抗生素进行治疗。
三、细菌学鉴定的方法
1. 标本采集：选择适当的临床标本，按照规范采集方法采集标本。常见的标本包括血液、尿液、呼吸道分泌物等。
2. 标本处理：对采集的标本进行适当的处理，如培养、染色等。培养
可以通过将标本划取于培养基上进行，以便细菌在适宜环境下生长繁殖，从而进行进一步的鉴定。
3. 微生物学特性观察：观察培养基上出现的微生物种类及其生长情况。根据细菌的形态、结构、染色特性等，可以初步鉴定细菌的属种。
4. 生理生化特性测试：通过一系列生化试剂和培养基，检测微生物的
生理特性，如产气、产酸、氧需求等。根据生化反应的结果，可以进
一步缩小细菌的鉴定范围。
5. 抗生素敏感性测试：选取不同类型的抗生素，用其调配成不同浓度
的药品，将细菌接种在含有不同药物的培养基上进行培养。观察细菌
的生长情况，以判断其对抗生素的敏感性。
四、个人观点和理解
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问题1：如何正确应用药物敏感结果？
正确运用药敏试验结果应考虑以下3个方面：
首先要确定病原菌，如未找到真正的致病菌，药敏实验不但不能指导用药甚至可能误导临床；
重视耐药监测，这是经验用药的一个重要的参考；
考虑到药敏试验的局限性：体外报告敏感的药物体内治疗不一定有效，而体外报告耐药的药物体内治疗不一定无效。
问题2：是否MIC越低的药物越好？
不一定。因为不同药物对同种细菌，同一药物对不同细菌的折点均可不同，并且若细菌产生某些特殊耐药机制时，即使体外敏感也应报耐药，另外尚需考虑药动学和耐受性。因此，不能单纯比较MIC值而认为MIC越低的药物就一定越好。 MIC只表示一种药物对某一株细菌抗菌作用的强弱，MIC越低（离中介值越远）说明该药物对相应的病原菌的作用越强。只能比较同一种药对同一株菌，若MIC值升高，可认为其耐药性提高。
问题3：是否所有报告的细菌均为病原菌？
不一定。原因如下：
所报告细菌为污染菌或定植菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关。如为血液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。
可能为应用抗菌药后的菌群交替或菌群失调。特别是原为复数菌感染时，针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，或广谱抗菌药治疗后可
能出现真菌感染。
有２种以上病原菌时因生长速度不同、营养要求不同，培养结果不能真实反映病原菌的种类、数量。
问题4：为什么有时痰涂片结果与痰培养结果不一致？
由于痰标本进行培养和涂片时选取的部位不一致；
某些快生长菌所占比例并不多，但由于生长速度快、营养要求低，能在培养过程中迅速变为优势菌而掩盖其他菌的生长；
标本从采集到接种的时间过长，造成部分苛养菌死亡，在涂片中看到的只是菌的残骸而非活菌。
问题5：我们想用的药物在药敏试验中没有做？
1.天然耐药
2.可能是药物的敏感性被其他药物所预报
问题6：为什么有的菌报告很多种药物，有的仅报告几种药物？
报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少。
问题7：是否能将所用的药都做药敏试验?
1.没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性
2.没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准）
问题8：选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？
①体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；一般来说，耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效；
②可能不是真正的致病菌（污染或定植菌）；
③细菌本身因素（如诱导耐药，生物被膜）；
④感染部位与药代动力学因素；
⑤细菌的MIC，给药剂量和用药方式；
⑥敏试验药物中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合用药；
⑦药物剂型及生物利用度（纯品、商品）。
问题9：涂片镜检结果与培养结果不吻合？
①涂片镜检是报告所有检见的细菌，而培养的目的是检出致病菌,因此会产生涂片和培养结果不一致的情况；
②一些苛氧菌需在特殊的环境或培养基上才能生长，因此可能在培养后才能得到。
问题10：取的明显就是脓液标本，为何鉴定报告为无菌生长？
①我们做的是有氧培养，脓液可能为厌氧菌感染。
②可能细菌被大量的中性粒细胞吞噬。
问题11：鉴定结果明明写着四联球菌、革兰氏阳性杆菌，为何没有药敏结果？
①四联球菌为微球菌，一般不引起人体致病，为非致病菌，故考虑污染可能；
②药敏结果参照CLSI标准，目前革兰氏阳性杆菌没有参照标准，故暂不能做药敏试验，若需治疗可参照阳性球菌用药。
问题12：一般培养不是三天出结果吗，今天第四天了怎么还没出来？
一般培养经48小时后，即第三天出报告，若需分离致病菌的则第四天出报
告。
细菌生长慢，生长需要适宜的条件。
细菌一般以二分裂法进行无性繁殖，在适宜条件下，多数细菌分裂一次需
要20-30分钟，结核分枝杆菌需18-20小时才分裂一次。对数期（鉴定、药敏
常用该期的培养物）一般在培养后8-18小时。
普通细菌培养一般需48小时（培养需12-24小时，鉴定药敏需要12-24小
时）；酵母样真菌阳性报告需要2-3天，阴性报告需5天；丝状真菌（霉菌）
阴性报告需2-4周；血培养阳性报告需3天以上，阴性报告需5-7天。
问题13：今天的培养结果怎么与前天的不一样？
①取材是否规范。
②痰标本，有时选优势菌做，就可能导致两次不一样。
③抗生素的使用
问题14：明显稀便，培养结果为何正常？
①大便普通培养，通常只能鉴定志贺菌、沙门菌感染，致病性大肠杆菌
②怀疑霍乱时，需开霍乱弧菌培养；
③可能病毒感染(轮状病毒)。
问题15：为什么阳性率太低，临床符合率差?
不合格的标本直接导致病原菌分离率降低。
操作程序不规范，未进行直接涂片，未严格执行拒收制度等也是重要原因。
微生物和人体关系复杂。致病和条件致病，定植和感染等，导致细菌室判
断病原菌困难，要证明培养结果与感染相关性是临床微生物检验所面临的难题。
已使用抗菌药，病原菌受到伤害，不能正常生长。
实验室条件有限，苛养菌漏检，常规培养不能检测厌氧菌、结核杆菌、衣原体、支原体、病毒等.