细胞培养完整手册
细胞培养手册
细胞培养手册1.培养基配制（如200 mL）：①胎牛血清10%（20 mL）②双抗1%（青霉素-链霉素，2 mL）③加入DMEM 至200 mL。
2.细胞复苏：①将冻存于-80℃或液氮中的细胞取出，放在37℃的温水中来回摇晃，使处于冰状的细胞解冻。
②将培养基、PBS提前预热至37℃，可增大细胞复苏成功率。
③将解冻的细胞（含培养基）移至15 mL的离心管中，1000 rpm离心10 min。
④倒掉上清液，向离心管中加入1-3 mL的完全培养基，用移液枪将细胞轻轻吹打，使得细胞均匀地悬浮在培养基中。
⑤将吹散的细胞加到装有培养基的培养皿（或培养瓶）中，再将培养皿（或培养瓶）轻轻摇晃，使细胞均匀地分布在培养基中。
⑥将接种有细胞的培养皿（或培养瓶）放入37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
2.细胞传代①将培养瓶（皿）中的培养液倒出至废液盒中。
②向培养瓶（皿）中加入2 mL胰蛋白酶，消化细胞，让贴壁的细胞分散开来。
③加入胰蛋白酶消化2 min后，向培养瓶（皿）中加入4 mL培养基，同时轻轻吹打培养瓶（皿）壁，将贴壁生长的细胞吹散开。
④将胰蛋白酶消化过的细胞移至15 mL离心管中，1000 rpm离心10 min。
⑤将离心后的上清液倒掉，向离心管中加入4-6 mL的培养基，轻轻地将细胞吹打开，使细胞均匀地悬浮在培养基中。
再将分散好的细胞加入到培养瓶（皿），每个培养皿中加入2 mL细胞悬浮液。
⑥将接种有细胞的培养皿置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
3.细胞冻存将经胰蛋白酶消化后的细胞1000 rpm离心10 min，去掉上清液，再向离心管中加入1-1.5 mL冻存液（冻存液配制：70%DMEM-1050μL、20%FBS-300μL、10%DMSO-150μL），先放在4℃存放1 h，再放在-20℃存放1 h，然后再放在-80℃下过夜，最后放在液氮中长期储存。
4.细胞计算。
细胞培养完整手册
细胞培养完整手册常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品柜（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum 和培养用液）。
无菌操作基本技术无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 ％过氧乙酸擦拭。
2.CO2 孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰ 新洁尔灭擦拭，然后用75 ％酒精擦拭或者0.5 ％过氧乙酸，再用紫外灯照射。
3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30 分钟。
4.实验后灭菌：用75 ％酒精（3‰ 新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
5.定期检测下列项目：钢瓶之CO2 压力；CO2培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)；无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75 ％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75 ％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
细胞培养操作指南
细胞培养操作指南1.实验室准备：在开始细胞培养之前，准备好所有所需的实验室设备和试剂：培养皿、细胞培养基、胎牛血清、无菌移液器、无菌离心管、显微镜等。
2.个人准备：进入实验室前，务必穿戴好个人防护装备，包括实验室服、手套和口罩。
确保双手清洁，并使用含酒精的消毒液消毒工作台。
3.细胞培养基准备：根据实验需求，配制适当的细胞培养基。
将细胞培养基加热至37摄氏度，使其变得温暖。
4.细胞扩增与传代：a.从冷冻保存的细胞存储管中取出细胞，并将其转移到一只预先加热的离心管中。
b.离心管轻轻离心，使细胞沉淀在管底。
c.弃去上清液，加入预先加热的新鲜培养基，轻轻悬浮细胞沉淀。
d.将细胞悬液转移到一个新的培养皿中，确保细胞均匀分布。
e.将培养皿放入恒温培养箱，并根据细胞类型和实验要求设置合适的温度和湿度。
f.观察细胞生长情况，并根据需要传代细胞。
传代细胞时，将细胞悬液转移到新的培养皿中，注意细胞定植的密度不要太高。
5.细胞分裂与凝聚度检测：使用显微镜观察细胞培养的生长情况，检查细胞的形态和凝聚度。
正常细胞应该呈现光滑、扁平、并且凝聚在一起的形态。
6.细胞的移植和收获：当细胞生长到适当的数量时，可以进行细胞的移植或收获。
使用无菌移液器将细胞转移至其他试管或培养皿中，确保操作环境和使用器皿都是无菌的。
7.细胞冻存：根据实验的需要，将细胞制备成冻存物。
将细胞悬液转移到冻存保存培养基中，并加入适量的冷冻保护剂（如DMSO），在-80摄氏度的冰箱中快速冷冻。
8.废弃物处置：在培养过程中产生的废弃物（例如培养皿、试管等），必须按照实验室的规定进行处理。
通常情况下，将废弃物放入带有生物危险标识的废物箱中。
9.清洗和消毒：在培养工作完成后，清洗并消毒实验室工作台和使用的器皿。
使用含酒精的消毒液对工作台表面进行擦拭，并将使用过的器皿彻底清洗，并经过高温高压灭菌。
10.实验记录：进行细胞培养时，要详细记录每个操作步骤，包括使用的细胞类型、培养方法、检测结果等。
细胞培养实验课程SOP
实验一传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养一、实验目的了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病毒接种方法及收毒方法。
二、常用细胞的种类BHK-21：仓鼠肾传代细胞、PK-15：猪肾传代细胞、IBRS-2：猪肾传代细胞、Hela：人的子宫瘤细胞、Vero：非洲绿猴肾细胞、Marc-145：来源于Vero细胞、Sf9：昆虫细胞。
三、材料1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞3、0.25%胰酶4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM四、传代细胞培养的条件要求1）细胞密度：2-3×105个/ml2）pH范围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.83）培养温度哺乳动物细胞一般为37℃昆虫细胞28-30℃五、常用细胞分散剂与作用原理1、胰酶使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解，导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。
2、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：与二价钙、镁离子结合，从而使细胞分散。
3、灰色链丝菌酶：由灰色链丝菌提取的一种酶制剂，是蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶的混合物。
六、营养液1、人工综合营养液氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嘌呤、嘧啶、辅助生长因子。
2、血清1）血清的种类胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。
2）血清的处理无菌采集，过滤除菌。
用前56℃灭活30min。
七、传代细胞系培养1、优点：1) 可以无限的传代。
2) 不少细胞系对病毒很敏感。
3) 某些传代细胞系能在悬浮培养条件下培养，适合病毒抗原的大量生产。
4) 生长旺盛，繁殖快速，对营养条件不苛刻。
细胞培养完整手册
细胞培养完整手册引言细胞培养是现代生物学和医学研究领域必不可少的一环。
本文将介绍细胞培养的基本原理、操作步骤、培养常见问题及解决方法。
细胞培养基本原理细胞培养是指利用人工制备的培养基以及适当的生长因子、激素和营养物质等对细胞进行体外培养和扩增，从而使细胞可以在体外连续增殖并保持原有的生物学特性。
细胞培养是现代细胞生物学、免疫学、病毒学、分子生物学以及药学研究的基础。
细胞培养的操作步骤实验前准备实验前要准备工具、试剂和消毒物品等，以确保实验的顺利进行和细胞的纯度与无菌。
细胞解冻1.从低温冻存罐中取出样品，将其放在37℃恒温水浴中解冻，不要使用冷却液或热盘等快速解冻方式。
2.用培养基缓慢悬浮细胞，宜加入10% FBS卡死细胞，避免冷冻完再活化产生过多氧化物等致细胞杀伤性的物质。
3.对细胞悬浮液进行离心，弃掉上清液，用适量的完整培养基重悬细胞沉淀，充分混匀后接续培养。
细胞传代1.用 PBS 泡洗清除细胞上附着的蛋白质和细胞碎片等杂质。
2.加入胰酶 0.05% 消化 3~5 分钟，让细胞分离迅速、均匀，切勿长时间消化。
3.将消化细胞在上清液中轻轻悬浮，检查细胞的分离和体积大小。
4.将细胞上清液转移至新的培养瓶中，鉴定细胞标记和污染情况。
5.加适量的完整培养基，并放入 CO2 培养箱中进行培养，定期观察细胞的生长情况，每两到三天定期更换培养基。
技巧提示1.培养瓶应洗涤干净，并喷壁消毒剂。
2.常用的培养基配方包括 DMEM 培养基、RPMI 1640 培养基、F12 培养基等，根据不同的实验需要进行选择。
3.培养箱应定期清洗和消毒，保证无菌环境。
4.细胞的传代次数不应过多，避免引起细胞特性的变化和突变。
细胞培养常见问题及解决方法细胞失活或死亡1.培养基中缺失营养物质如血清、氨基酸等，应加入完整培养基进行补充。
2.细胞感染，需要添加抗生素，如青霉素、链霉素等。
3.培养条件不适宜，如 CO2 浓度、温度等，应适当调节。
细胞培养标准操作程序(SOP).docx
细胞培养标准操作程序（SoP1.目的：为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。
2 .适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。
3 •操作规程：3.1培养液、PBS、胰蛋白酶的配制3.1.1 100Oml培养液的配制1、准备用品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH仪、2〜3天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCo3粉、1000ml无菌玻璃瓶（100ml× 10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2〜3个过滤器、注射器。
紫外线照台30min。
2、将培养粉用900ml新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。
3、充分搅拌,按说明添加成分（如InVitrogen公司的RPMl-1640配制1000ml需加NaHCO3粉2.0g , InVitrogen公司的DMEM需加NaHCo3粉3.7g等），再充分搅拌。
无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。
4、用1M （1mol∕L ）HCl调PH至7.0左右（细胞适宜在PH7.2〜7.4生长，配制好后PH值会升高0.2〜0.3 ,故配时调PH至7.0左右）。
5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml。
6、配青霉素80万/瓶+ 4ml蒸馏水溶解配链霉素100万/瓶+ 4ml蒸馏水溶解取0.5ml青霉素和0.4ml链霉素加入到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml ,充分搅拌混匀。
7、在无菌操作台里用0.22Um的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20 C保存备用。
注意：（1 ）配制培养液及调节培养液PH值所使用的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。
一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。
（2）准备的100ml× 10个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。
医学实验中细胞培养的基本操作教程
医学实验中细胞培养的基本操作教程细胞培养是医学实验中常用的技术手段，可以通过培养细胞体外研究细胞结构、功能、代谢以及疾病的发病机制。
本文将介绍医学实验中细胞培养的基本操作教程，包括无菌操作、细胞传代和细胞培养基的制备。
一、无菌操作1. 器具准备：将工作区域和培养器具用70%乙醇喷雾消毒，将所需器具放入无菌工作台，待干燥后再进行后续操作。
2. 细胞培养基准备：将所需的细胞培养基放入无菌环境中，根据实验需求添加适量的血清、抗生素等。
3. 细胞取样：取出培养物中所需的细胞，使用吸管或移液器将细胞转移到无菌的培养基中。
4. 细胞传播：将细胞和培养基混合均匀后，转移到培养皿或培养瓶中，注意避免皿壁的污染。
5. 无菌操作结束：将使用过的培养器具进行无菌处理，清理工作区域并进行必要的消毒。
二、细胞传代1. 始代细胞收获：当细胞在培养器中达到一定密度后，使用细胞解离液将细胞从底物上解离下来。
2. 离心：将解离的细胞转移到离心管中，以适当的转速离心沉淀细胞。
3. 上清液去除：倒掉离心管中上清液，注意尽量不要干扰到细胞沉淀。
4. 细胞悬浮液制备：使用无菌PBS洗涤离心沉淀的细胞，再添加适量的细胞培养基将其悬浮均匀。
5. 细胞传代操作：将悬浮细胞转移到新的培养器具中，注意避免气泡的产生，并将培养基置于CO2孵化箱中培养。
三、细胞培养基的制备1. 培养基组成：根据实验需求，制备含有特定成分的培养基，如DMEM、RPMI 1640等。
2. 液体消毒：将容器进行高温高压灭菌，确保培养基的无菌。
3. 配方调整：按照实验需求向培养基中添加适量的血清、抗生素、谷氨酸等。
4. 混合均匀：使用无菌器具将添加好成分的培养基搅拌均匀，确保各成分充分溶解。
5. 培养基保存：将制备好的培养基用无菌器具装入培养瓶中，标明日期和成分，存放于4℃的冰箱中，避免阳光直射。
以上就是医学实验中细胞培养的基本操作教程，从无菌操作、细胞传代到培养基的制备，这些基本技术对于医学实验中的细胞研究至关重要。
细胞培养protocol(实操版完美)
Cell Culture Protocol一、准备1.配制培养所用的解剖液(PBS替代)、H(+)、H(-)2.细胞培养多孔板：提前一天准备好，每孔加入一片玻璃片（实验需要时），24孔板每孔加入200uL的多聚赖氨酸，CO2培养箱，37℃包被2h，或过夜，3-5天存放都可以，多聚赖氨酸可回收。
使用前，用无菌milliQ洗去多聚赖氨酸，加入细胞培养液Hik-BME，每孔930uL（24孔，每孔1mL的总体积，70uL细胞悬浮液），CO2培养箱，37℃，平衡2-3h或过夜。
二、取材1.把配好的解剖液、H(+)、H(-)经酒精消毒表面后放入生物安全柜，酒精消毒手套和操作台。
2.取两只小的细胞培养皿，一只1.5mL的离心管，在离心管中加入H(+) 1mL，在培养皿中各加入解剖液或PBS 2mL，带到取组织操作显微镜旁。
3.取两只大的玻璃培养皿装满冰，用于保持操作环境低温状态，一只放于显微镜下，一只放于旁边，用于解剖取组织，分别把两只小的细胞培养皿放到其上面。
4.取鼠，6-8天（小脑颗粒细胞），剪下小鼠脑部，剪开脑部外皮，从脑部前端剪开，用镊子撕开头骨，取出脑，放入小培养皿中，取出小脑，放于显微镜下。
小脑是长条状。
5.在显微镜下，使用专用镊子，把小脑表面的膜撕去，除去小脑中的血管，正反两面，完成后，小脑是雪白的。
注意操作环境的低温，尽量在少菌环境下操作。
6.把处理好的小脑放入H(+)的离心管中，可以两个一起放置。
带到细胞房。
取材过程在保证组织活性的情况下越快越好。
三、消化1.取3只1.5mL的离心管，各加入H(+)，前2只加入1mL，第3只加入0.5mL。
2.清洗组织，把组织从1，2，3号离心管中逐次清洗，时间各1min，在3号管中，用灭菌过的直头剪刀，剪碎组织至1mm的片段。
3.放置，沉淀，去上清，加入H(-) 1mL，转至15mL离心管中。
4.放置，沉淀，去上清。
5.加入2-3mL的H(-)，用移液枪吹打数次，放置，沉淀，去上清；重复1-2次。
(新)实用哺乳动物细胞培养手册
实用哺乳动物细胞培养手册细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。
细胞培养目的与用途1、科学研究：药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。
(2) 疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(3) 基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。
(4) 细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。
(5) 单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。
基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2、生物制药(1) 疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(2) 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
13、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
造 血祖细胞培养技术实验手册
造血祖细胞培养技术实验手册造血祖细胞是一种具有潜在造血能力的干细胞，在医学和科学研究中具有重要的应用前景。
本实验手册将介绍一种常用的造血祖细胞培养技术，旨在帮助研究人员更好地了解和应用该技术。
一、实验前准备1.1 器材准备- 培养箱和培养皿- 显微镜和玻片- 无菌离心管和移液管- 离心机和摇床- 安装有CO2气体剂量控制的培养箱1.2 试剂准备- 培养基：将DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）加入含10%胎牛血清的离心管中，并通过0.22μm的滤器灭菌。
- 培养因子：包括SCF（Stem Cell Factor）、TPO（Thrombopoietin）、Flt3-L（Fms-like Tyrosine Kinase 3 Ligand）和IL-3（Interleukin-3），按照生产商说明制备。
二、实验步骤2.1 抽取造血祖细胞- 用无菌针头针刺拟鼠尾静脉，并收集尾血到无菌离心管中。
注意避免受到外界污染。
- 将含有2ml PBS（磷酸盐缓冲液）的离心管加入正确的转速离心机中，离心10分钟。
将上清液中的红细胞抛弃，保留上清液。
2.2 培养造血祖细胞- 将步骤2.1得到的上清液分装到多个培养皿（每个皿中含有3x10^6 造血祖细胞），并加入制备好的培养基和培养因子。
- 将培养皿放入预先调节好的CO2培养箱中，保持37°C和5% CO2浓度的条件下培养。
- 每隔48小时，用显微镜观察细胞扩增情况，并记录细胞数目和形态。
2.3 细胞检测- 通过流式细胞术或染色法检测细胞分化和表型。
- 进一步检测是否形成了造血单元，例如通过CFU-GM（Granulocyte-Macrophage Colony Forming Unit）的检测。
2.4 细胞存储- 当细胞数量充足时，用低温保存液将细胞冷冻存储以备后续实验。
三、注意事项3.1 严格遵守无菌操作- 所有实验器材和试剂都需经过严格的无菌处理，避免细菌和其他污染物的干扰。
ips培养技术手册
ips 培养技术手册IP细胞培养技术手册1. 引言细胞培养技术是一种重要的生物学研究方法，用于研究细胞生物学、药理学、毒理学等领域。
IP细胞培养技术是一种特殊的细胞培养方法，通过使用IP细胞培养基和特定的培养条件，可以有效地培养和维持细胞。
本手册将介绍IP细胞培养技术的基本步骤和注意事项。
2. 材料与设备2.1 材料•IP细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养瓶•双抗（青霉素和链霉素）•细胞培养相关试剂2.2 设备•CO2培养箱•细胞培养超净工作台•细胞计数仪3. 细胞培养步骤3.1 细胞复苏1.从-80°C冰箱中取出细胞冻存管。
2.将冻存管放入37°C水浴中快速融化。
3.轻柔地将细胞悬液转移至离心管中。
4.加入适量培养基，轻轻吹打细胞，使其均匀分散。
5.将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入适量培养基，混匀。
3.2 细胞培养1.将细胞悬液转移至细胞培养皿中。
2.将细胞培养皿放入CO2培养箱中，37°C、5% CO2条件下培养。
3.每隔一天更换一次培养基。
3.3 细胞传代1.弃去培养皿中的培养基。
2.加入适量胰蛋白酶，轻轻摇晃，使细胞分散。
3.等待细胞消化至适当程度后，加入适量培养基终止消化。
4.使用细胞刮刀将细胞从培养皿壁上刮下。
5.离心收集细胞，弃去上清。
6.加入适量培养基，轻轻吹打细胞，使其均匀分散。
7.将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入适量培养基，混匀。
4. 注意事项1.操作过程中应严格遵守无菌操作原则，避免污染。
2.使用新鲜、合格的细胞培养基和试剂。
3.细胞培养过程中应避免剧烈震荡，以免损伤细胞。
4.定期观察细胞生长状况，如细胞密度、形态等，及时调整培养条件。
5.细胞传代时，应注意控制胰蛋白酶的浓度和消化时间，避免过度消化。
5. 结语IP细胞培养技术是一种有效的细胞培养方法，通过遵循正确的操作步骤和注意事项，可以获得高质量的细胞。
希望本手册对您的研究工作有所帮助。
如有其他问题，请随时与我们联系。
人胚胎干细胞培养手册范本
干细胞之家操作指南运输和保存：人胚胎干细胞〔hESCs和PMEFi被装在含90％FCS和10％二甲基亚砜的冻存管中,hESCs4×105/管,可接种一个3.5cm培养皿〔或六孔板的一个孔,PMEFi4×106/管,可接种一块六孔板。
冻存管用干冰运输,收到后,hESCs投入液氮,PMEFi放入－80℃保存。
培养条件：温度：37±0.5℃CO2浓度：5.1±0.6％相对湿度：85-100%主要技术：1．细胞培养：当进行hESC培养时,总的培养原则必需遵守,所有的操作都应该在相应的细胞培养间和超净台内按无菌技术进行。
此外,通过安装空气处理和过滤设备减少空气颗粒制造一个相对洁净的空间。
当接触和细胞有关的一切试剂和材料时,应该带手套〔包括开冰箱门。
工作间在使用前后要用70％的异丙醇彻底消毒。
2．培养液和材料所有的培养液和试剂在使用前都要用0.2µm的滤膜过滤；培养瓶和TC材料在拿进培养间之前都应该用70％异丙醇消毒。
3．细胞处理为了便于操作,最好不要同时处理两个以上的标本。
操作时,在室温和低CO2的时间不要太长。
所有的细胞离心：室温,500－600g,5分钟。
干细胞之家培养液准备：MEF和hESCs培养液在无菌条件下进行,完成后用0.2µm的滤膜过滤。
当准备hESCs培养液时,保持一致性很重要。
如有可能,尽量使用相同的试剂。
使用满足于附录提供的血清替代品尤为重要。
生长因子应该最后添加,需要强调的是bFGF进行重悬时需要蛋白载体,在少量培养液中不要试图重悬它。
MEF培养液：hESCs培养液：冷冻培养液：90％FCS+10%二甲基亚砜, 0.2µm的滤膜过滤,4℃保存。
明胶准备：用超纯水配制0.1％明胶溶液,加热确保明胶完全溶解,使用前高压或0.2µm 的滤膜过滤。
明胶包被：干细胞之家://stemcell8接种细胞前,用0.1％明胶溶液包被培养皿,37℃至少30分钟,分别用1.5或4ml包被35mm或10cm培养皿。
细胞培养操作指南
细胞培养操作指南1，原代细胞培养原代培养需要严格要求：（1）取材时需要去除脂肪和坏死的组织(2)为减少对组织的损伤，需用锋利的器具(3)适度离心以去除用于解离的酶（4）由于原代培养组织细胞的存活率很低，故用于原代培养的细胞的密度应高于正常的传代培养的细胞密度。
（5）营养丰富的培养基比单一的培养基更可取，如果要添加血清，胎牛血清比牛马的血清更好。
(6)对于取材部位易于感染（如皮肤）应先用70%乙醇消毒，在无菌条件下切除组织，尽快转移入BSS或培养基中。
不要再培养室取材，因为动物可引入微生物污染。
若必须推迟，可保存在4℃，72h。
1. 剪切组织先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除粘附的结缔组织等非培养所需组织。
再次清洗后，用手术剪将组织剪成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。
静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。
2. 消化分离消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。
3. 培养细胞悬液用计数板进行细胞计数，用培养液将细胞数调整为2～5×105 cells／m1，或实验所需密度。
分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。
置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。
一般3～5d，原代培养细胞可以粘附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3 d后换液，一般7～14 d可以长满瓶壁，进行传代。
注意事项：1. 无菌操作细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强各个环节的无菌操作观念，以预防为主，一旦污染，一般是很难消除。
2. 培养液所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。
由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养液的要求有一定的差异，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。
细胞培养手册
TM细胞培养基手册MEDIUM HANDBOOK（2007）生物秀北京清大天一生物技术有限公司BEIJING TSINGHUA SKYWING BIO TECH Co.，LTD绪论现代生物制药技术快速发展，采用动物细胞大规模培养生产抗体药物、基因工程药物、人用以及兽用疫苗等生物制品日益增长。
据IMS Health的统计数据，2004年全球生物制药产业（基因重组产品）的市场已达450亿美元，其中哺乳动物细胞表达的产品销售额占70％。
这些生物制品生产的核心技术之一——动物细胞大规模培养技术也在快速发展，近20多年的发展焦点主要集中在细胞系、细胞培养基和细胞生物反应器等三个方面的突破。
其中，关于细胞培养基的重要作用，瑞士联邦科技学会（洛桑）生物工艺学教授Florian Wurm博士曾撰文强调：“培养基并不是细胞培养中唯一一种重要因素，但确实是最重要的一种。
”细胞是病毒、蛋白的表达载体，细胞培养的质量直接影响蛋白表达量或病毒生产效率。
所以，通过筛选、驯化等方法，获得优质的宿主细胞株是整个生产工艺的基础，而好的细胞培养基则是筛选、驯化出优质细胞的重要基础。
同样，生物反应器的不断发展也离不开细胞培养基，以转瓶、反应器为主要细胞生产设备，配合微载体培养、悬浮培养等高密度培养技术，均需要相适应的细胞培养基才能充分发挥作用。
细胞培养基实际上就是生物技术产业的一个“菜篮子"工程，它的用途是给细胞提供营养物质使细胞健康快速的成长，因此只要用到细胞的生物技术产品就必须要用到细胞培养基。
在将来细胞培养产率提高的日子里，细胞培养基将会扮演越来越重要的角色，一些国际细胞培养技术专家指出：“许多细胞的培养产率可能就是通过培养基和培养策略的最优化而得到提高的。
因此不管培养基是不是最要紧的因素，它都应引起我们足够的重视。
”细胞培养基从1903年开始发展到现在，技术革新进展非常迅猛，从199、MEM、DMEM、RPMI1640等基础细胞培养基，发展到当今的无血清细胞培养基。
细胞培养标准操作程序(SOP)
细胞培养标准操作程序（SOP）1．目的：为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。
2．适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。
3．操作规程：3.1 培养液、PBS、胰蛋白酶的配制3.1.1 1000ml培养液的配制1、准备用品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH仪、2～3天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3粉、1000ml无菌玻璃瓶（100ml×10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3个过滤器、注射器。
紫外线照台30min。
2、将培养粉用900ml新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。
3、充分搅拌，按说明添加成分（如Invitrogen公司的RPMI-1640配制1000ml需加NaHCO3粉2.0g，Invitrogen 公司的DMEM需加NaHCO3粉3.7g等），再充分搅拌。
无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。
4、用1M（1mol/L）HCl 调PH至7.0左右（细胞适宜在PH7.2～7.4生长，配制好后PH值会升高0.2～0.3，故配时调PH至7.0左右）。
5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml。
6、配青霉素 80万/瓶 + 4ml 蒸馏水溶解配链霉素100万/瓶 + 4ml 蒸馏水溶解取0.5ml青霉素和0.4ml链霉素加入到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml，充分搅拌混匀。
7、在无菌操作台里用0.22um的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20℃保存备用。
注意：（1）配制培养液及调节培养液PH值所使用的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。
一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。
（2）准备的100ml×10个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。
细胞培养技术操作规范
细胞培养技术操作规范细胞培养是一项重要的实验技术，用于研究细胞的生物学特性及其在疾病治疗和药物开发中的应用。
为了确保实验结果的准确性和可重复性，需要遵循一系列的操作规范。
本文档旨在提供细胞培养技术的操作规范，以帮助研究人员顺利进行实验。
实验室准备- 实验室应保持干净整洁，设施设备应处于正常运行状态。
- 所有使用的试剂和培养物应检查保质期，并妥善存放在适当的温度下。
- 工作平台及工作台面应进行消毒处理，以防止细菌和真菌的污染。
- 所有使用的器械和培养罐应在使用前进行高压蒸汽灭菌。
细胞培养操作细胞培养器具的准备- 使用无菌操作进行所有操作，包括试剂和培养基的添加、培养器具的取用等。
- 使用带无菌手套的清洁无菌工作台进行操作。
- 细胞培养器具（如培养瓶、孔板等）在使用前应进行高压蒸汽灭菌处理，确保无菌状态。
培养基的准备- 准备培养基前应检查其成分和配比是否正确，确保培养基的质量。
- 使用无菌操作取出所需量的培养基，并避免直接接触细胞培养器具。
- 遵循培养基的配制方法和步骤，确保其与细胞的适应性。
细胞的分离与传代- 分离细胞时，使用胰酶等消化酶进行细胞的释放，并遵循操作步骤和浓度要求。
- 记录分离细胞的季度数，避免过度传代，以保持细胞的稳定性和特性。
- 合理设置细胞传代次数和细胞数量，避免细胞过早进入衰老状态。
培养条件和操作- 确保培养器具与细胞接触的表面无菌、干净，避免细胞污染或黏附的问题。
- 控制培养环境的温度、湿度和二氧化碳浓度，以满足不同类型细胞的生长要求。
- 定期更换培养基，确保细胞得到足够的营养物质和生长条件。
- 注意培养器具和试剂的使用方法和操作顺序，避免对细胞生长和健康产生负面影响。
细胞培养操作的记录与管理- 记录每次细胞培养的详细信息，包括培养时间、细胞密度、培养基配制方法等，以便于实验结果的追溯和分析。
- 管理细胞的库存，包括标识、记录和储存，以确保细胞的可追溯性和可重复性。
- 定期检查细胞的污染和变异情况，及时采取必要的措施防止实验结果的偏差。
细胞室工作手册
细胞室工作手册进入细胞室之前洗手，擦干。
如果要给细胞换液或传代，则带一只洁净的烧杯（200或500ml）。
进入细胞室开门进入缓冲间，并迅速将门关好，换鞋，穿工作服。
进入细胞室，关好门，戴乳胶手套，喷洒70％酒精。
试剂的配制及使用细胞培养最常用到的试剂包括：基础培养基DMEM、血清、PBS、胰酶溶液、氰链霉素DMEM：每袋培养基溶于800ml超纯水中，加3.7克NaHCO3，溶解后定容至1L，滤器过滤后储存于4℃冰箱。
PBS：NaCl 8.0gKH2PO4 0.2gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g(无水) 2.8976g（12H2O）胰酶：称取2.5克胰酶至100mlPBS中，磁力搅拌3小时，用滤纸过滤后，用胰酶滤器过滤10ml每管分装于15ml离心管中，-20℃储存。
试剂的使用：培养基检验：在使用培养基培养细胞之前，需要确定培养基是否有污染。
取一瓶DMEM培养基，开盖取6ml至培养皿内，培养箱内培养24小时后显微镜下观察。
无污染时，加入100×的氰链霉素，备用。
血清分装：每管10ml分装至15ml离心管中，储存于-20℃，使用时，取一管提前在4℃化冻。
细胞培养需要灭活血清时，用60℃水浴30min。
配制培养基：在50ml离心管中加入36mlDMEM，4ml血清胰酶：储液浓℃为2.5％，-20℃储存，使用时，取一管提前在4℃化冻。
用PBS稀释20倍后使用。
器皿使用：包括培养皿和离心管的使用，取存放器皿的密封袋至超净台内，紫外照射30min后，开封取出培养皿或离心管，将密封袋开口扎好，放回物品柜。
枪头的使用：枪头盒用报纸包裹后在121℃40min灭菌，干燥箱内烘干后，将灭菌枪头放在细胞室物品柜内。
使用时，将报纸拆开后立即放入超净台内，紫外照射30min。
放在超净台内的枪头及各微量移液器均不得拿出超净台。
细胞换液将用到的培养基、移液管及盛废液的烧杯放入超净台中紫外照射30分钟紫外消毒后，打开日光灯、风机及升降板，点燃酒精灯从培养箱中取出细胞培养皿，放在靠近酒精灯的地方取镊子，在酒精灯上来回烧两遍，用镊子从饭盒中取出一只5ml移液管，小心将移液管套在移液器上，手持移液器在火焰上将移液管来回烧两遍。
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细胞培养完整手册常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品柜（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum 和培养用液）。
无菌操作基本技术无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 ％过氧乙酸擦拭。
2.CO2 孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75 ％酒精擦拭或者0.5 ％过氧乙酸，再用紫外灯照射。
3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30 分钟。
4.实验后灭菌：用75 ％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
5.定期检测下列项目：钢瓶之CO2 压力；CO2培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)；无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75 ％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75 ％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5 ％稀盐酸中12 小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g ：浓硫酸200ml ：蒸馏水1000ml ）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15 次，最后蒸馏水冲洗3-5 次和用双蒸水过 3 次。
5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。
6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15 磅时，维持20-30 分钟。
7.高压消毒后烘干二、旧的玻璃器皿的洗消：1.刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。
2.泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12 小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗3 次。
3.烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。
4.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5 分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15 磅时，调节电开关维持20-30 分钟即可。
（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上）5.烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。
金属器械洗消：金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75 ％酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗，再烘干或空气中晾干。
放入铝制盒内包装好在高压锅内15 磅高压（30 分钟）消毒，再烘干备用。
橡胶和塑料：橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸馏水冲干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序：1.针式滤器帽不能泡酸液, 用NaOH 泡6-12 小时, 或者煮沸20 分钟, 在包装之前要装好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上( 凹向上) ，然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15 磅30 分钟消毒，再烘干备用。
注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。
2.胶塞烘干后用2 ％氢氧化钠溶液煮沸30 分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30 分钟），自来水洗净，烘干。
然后再泡入盐酸液30 分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。
最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。
3.胶帽，离心管帽烘干后只能在2 ％氢氧化钠溶液中浸泡6-12 小时（切记时间不能过长），自来水洗净，烘干。
然后再泡入盐酸液30 分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。
最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。
4.胶头可用75 ％酒精浸泡5 分钟，然后紫外照射后使用即可。
5.塑料培养瓶，培养板，冻存管.6.其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸气消毒，可用70 ％酒精浸泡消毒。
塑料培养皿打开盖子，放在超净台台面上，直接暴露在紫外线下消毒。
也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用2—3 周时间洗除残留的氧化乙烯。
用20000—100000rad 的r 射线消毒塑料制品效果最好。
为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆，可在纸包装后，用密写墨水作好标记。
其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水，在包装纸上作一记号，平时这种墨水不带痕迹，一经高温，即出现字迹，从而可以判定它们是否消毒。
密写墨水的配制：氯化钻(CoC12·6H2o) 2g ，30％盐酸10m 1，蒸馏水88m1 。
注意事项：1.严格执行高压锅的操作规程：高压消毒时，先检查锅内是否有蒸馏水，以防高压时烧干，水不能过多因为其将使空气流畅受阻，会降低高压消毒效果。
检查安全阀是否通畅，以防高压时爆炸。
2.安装滤膜时注意光面朝上：注意滤膜光滑一面是正面，要朝上，否则起不到过滤的作用。
3.注意人体的防护和器皿的完全浸泡：A. 泡酸时要戴耐酸手套，防止酸液溅起伤害人体。
B. 从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面，会腐蚀地面。
C. 器皿浸入酸液中要完全，不能留有气泡，以防止泡酸不彻底。
细胞培养用液的配制与消毒器材与试剂：干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH 计、磁力搅拌器。
具体步骤：一、水的制备：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水。
二、PBS 的制备与消毒( 也可用于其它BSS ，如：Hanks ，D-Hanks 液的配制) ：1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0g ，KCl 0.2g ，Na2HPO4·H2O 1.56g ，KH2PO40. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml ，摇匀即成新配制的PBS 溶液。
2.移入溶液瓶内待消毒：将PBS 倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8 磅消毒20 分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
三、胰蛋白酶溶液的配制与消毒：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH 为8.0 、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+ 、Mg2+ 和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+ 、Mg2+ 的BSS ，如：D-Hanks 液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25 ％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH 到7.2 左右）或PBS （D-hanks ）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22 微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
四、抗生素溶液的配制1.所用纯净水（双蒸水）需要15 磅高压20 分钟灭菌。
2.具体操作均在超净台内完成。
青霉素是80 万单位/ 瓶，用注射器加4ml 灭菌双蒸水。
链霉素是100 万单位/ 瓶，加5ml 灭菌双蒸水，即每毫升各为20 万单位。
3.使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100 单位/ml 。
1 单位＝1 微克？4.细胞库之细胞培养基不加抗生素5.培养自ATC引进之细胞株，培养基中不加抗生素。
6.培养自其它实验室引进之细胞株，制作token freeze 前培养基须添加抗生素，待token freeze通过污染测试后，大量培养时则不加抗生素。
7.寄送活细胞时，须将培养液充满整个flask 时，则须添加抗生素。
(penicillin 100 units/ml + streptomycin 100 ug/ml)8.若要检测mycoplasma，则培养基内不可添加gentamicin，因gentamicin 会抑制mycoplasma 生长。
9.去除细菌污染之抗生素混合配方: penicillin 250 units/ml, streptomycin 250 ug/ml, neomycin 250 ug/ml, bacitracin 2.5 units/ml注意混合使用后药物毒性会增强。
10.抗生素使用种类与浓度：工作浓度.储存温度. 杀灭细菌penicillin100 units/ml -20℃G(+) bacteriastreptomycin 100 ug/ml-20℃G(+) and G(-) bacteria chlotetracycline50 ug/ml -20℃G(+) and G(-) bacteriagentamicin 50 ug/ml -20℃G(+) and G(-) bacteria, mycoplasmaamphotericin B 2.5 ug/ml-20℃yeast and moldsnystatin 50 ug/ml-20℃yeast and moldsfungizone 2.5ug/ml -20℃yeast and molds五、RPMI1640 的制备与消毒：1.溶解、调PH 值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3 的双蒸水中, 并用双蒸水冲洗包装袋2-3 次( 冲洗液一并加入培养基中), 充分搅拌至粉剂全部溶解, 并按照包装说明添加一定的药品. 然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml, 使青链霉素的浓度最终各为100 单位/ml 。