苦味酸法测定血清肌酐课件
肌酐检测标准化 ppt课件
正常人每天更新是恒定的，约更新2%，由肾排出，人体血液中 肌酐 的生成可有内、外源性两种如在严格控制饮食条件和肌肉活动 相对稳定的情况下，血浆肌酐 的生成量和尿的排出量较为恒定。
肌酐的测定
在控制外源性来源、未进行剧烈运动的条件下，肌酐的血中浓度主 要取决于GFR，在肾功能受损，GFR下降到临界水平时血中肌酐浓度 明显上升，随损害程度加重上升速度也加快。
稀释作用而比常人偏低，据调查多在35.2～52.8μmol/L水平。如孕妇 Scr>70.4μmol/L应视为有升高倾向。 3.剧烈肌肉活动后血肌酐和尿肌酐都有一过性增加。 4.进肉食对Scr和Ucr有一定影响。根据对健康人观察，摄取烹饪肉食后24小时内Scr可增加34-44μmol/L，可超出正常值上限，约12小时后接近 正常水平。 5. Jaffé（雅费氏）法主要缺点是特异性差，血中丙酮、丙酮酸、叶酸、 抗坏血酸、葡萄糖、乙酰乙酸等都能在此反应中呈色，因而被称为“非 肌酐色原”。此外，一些头孢类药物如甲氧噻吩头孢菌素也可与苦味酸 反应显色而引起正干扰。
eGFR估算方程比较对象。
血清Cystatin C是近几年被评价较多的反映GFR的指标，大量临床 实践表明，血清Cystatin C诊断GFR下降较血清肌酐的特异性和敏 感度要高，与CCr相比较也稍有优势。其测定采用的是颗粒增强免 疫比浊法，测定成本目前还较高。因为测定价格、适用于生化分析 仪的高通量检测方法刚刚问世不久以及主要基于Cystatin C估算的 GFR方程发表不长时间尚需进一步验证等诸多因素，因此尚未见到 有关以Cystatin C为诊断指标的CKD患病率的流行病学研究的资料 。
苦味酸法测定血清肌酐PPT课件
九、方法学评价
1.化学法：即苦味酸法，该法成本低廉，方法简便 ，但试剂具毒性和腐蚀性。
2. 酶法：准确度和灵敏度高，采用两点速率法， 适合于自动生化分析仪检测。
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加入物（ml） 空白管
标准管
S1
S2
测定管(U) U1 U2
血清
——
133μmol/L肌酐
标准应用液
——
—— 0.15
—— 0.15 0.15 0.15 —— ——
生理盐水
0.15
—— —— —— ——
R1
0.75
0.75 0.75 0.75 0.75
R2
0.75
0.75 0.75 0.75 0.75
1.血标本无溶血，应及时处理。 2.工作液开盖混合后，应置2-8度避光保存，稳定期3天。
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八、临床意义
肌酐经肾小球滤过后不被肾小管重吸收，通过肾 小管排泄。只有当GFR下降到正常的1/3时，Scr才明 显上升，是反眏GFR减退的后期指标。 增高：见于各种原因引起的肾小球滤过功能减退：各种 肾病，急慢性肾衰竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎 等。 降低：见于尿崩症、进行性肌萎缩、白血病、贫血等
肌酐（CRE）是人体内肌酸代谢的最终产物， 由肾排出，少部分来自食物，大部分在体内生成， 血肌酐的浓度主要取决于GFR。 血肌酐的测定对中晚期肾疾病临床意义较大。 肌酐测定方法有化学法和酶法。 酶法主要有三种类型：肌氨酸氧化酶法、肌酐氨基 水解酶法和肌酐亚氨基水解酶法。
血清肌酐测定
血清肌酐测定（生化分析仪）
（一）检测目的
规范血清肌酐（cr）检测实验，确保检测结果的准确性和重复性。
（二）标本米集
1.血肌酐测定一般可以采用血清或血浆。血清应新鲜无溶血；如用血浆，主张用肝素抗凝血浆。
2.稳定性：在4C冰箱可保存3天，在25C以下可保存较长时间。
3.建议使用带分离胶的真空采m管，并及时分离血清。
（三）测定方法
1.方法：两点法波长：490-510nm 温度：25C、30C或37C 比色杯光径:
1cm 将Ri与R n按1:1混和均匀，配成工作液，工作液预先保温到测试温度。
2.原理：苦昧酸法。在碱性溶液中，苦味酸与肌酐作用生成橘红色的苦味酸肌酐复合物，在505nm波长监测吸光度，吸光度的速率变化（△ A/ min）与肌酐浓度呈正比。
（五）校准
1.校准物的准备与保存，严格按照购置说明执行。
2.校准频率：
（1）新仪器设备在开始使用时。
（2）设备进行重要维护保养以及发生故障维修之后。
（3）试剂盒在仪器上28天后。
（4）试剂批号更改后。
（5）更换试剂厂家后。
（6）由室内质控结果决定。
（7）定期校准，可由实验室根据检测系统（仪器与试剂）的情况自行决定校准周期。（六）质量控制
1.质控品：质控品应选择稳定、瓶问差小、基质效应小的物质。同时，因为是定量检测项目，所以应选择两个不同浓度水平的质控品，这样有利于在不同的医学决定性水平上监测方法的性能。
2.质控方法的选择。备选的质控规则如下：
1 2s（一个质控结果超出i 土 2SD为违背此规则，提示警告）。
13s（一个质控结果超过i 土3SD为违背此规则，提示失控，存在随机误差）。
血清肌酐苦味酸法测定
血清肌酐（Creatine）苦味酸法测定
1.实验原理
不去除蛋白的Jaffe碱性苦味酸连续监测比色法。肌酐与苦味酸在碱性条件下形成橙红色复合物，在固定的时间内吸光度增加速率与样品中肌酐浓度呈正比。
肌酐+ 苦味酸肌酐苦味酸复合物
2. 标本采集
2.1 病人准备：早晨空腹采血（空腹12小时左右），静脉采血。
2.2 类型：血清，肝素血浆，尿液。
3. 标本存放：血清、血浆的稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存至少可稳定3个月。尿液的稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定6天；-20℃保存可稳定6个月
对尿液用蒸馏水作1:49稀释后检测，结果乘50后报告。
4. 标本运输：常温条件下运输
5. 标本拒收的标准：细菌污染的标本不能作测定。
6. 实验材料
6.1 上海申能肌酐检测试剂盒（142 1717170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）。
6.1.1 试剂组成：
试剂1（R1）：氢氧化钠0.16mol/L
试剂2（R2）：苦味酸 4.0mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂1中含氢氧化钠。请按以下条例处理：R36/38: 刺激眼睛和皮肤。S26:如与眼睛接触应立即用大量水冲洗并请医生诊视。S37/39:戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。S45:如发生事故或感觉不适立即请医生诊视。试剂2中含苦味酸。吸入、接触皮肤、吞咽将会中毒。戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。如与皮肤接触应立即用聚乙二醇400（DAB8）或大量水冲洗。如情况严重，立即请医生诊视。使用实验室试剂应采取必要的预防。
肌酐的测定
丙酮酸 + ATP
乳酸脱氢酶
丙酮酸 + NADH +H+
乳酸 + NAD+
340nm比色
• 2.肌酐亚氨水解酶法：
肌酐酶水解
肌酐
N-甲基内酰 + NH3
溴酚蓝电极
或离子电极
测NH3
酶法优点：特异性高、准确性好
缺点：酶试剂昂贵、来源困难、不易保存
（三）高效液相色谱法：
准确性、特异性好，一般作为参考方法
肌酐的测定
• 血清非蛋白含氮化合物的一种，肌肉组 织中肌酸或磷酸肌酸代谢的最终产物。
• 肌酐的排出量相当恒定，不受食物蛋白 质含量及尿量的影响而与肌肉发达程度、 性别及年龄有关。
• 肌酐的来自百度文库定是临床诊断的重要指标。
• 分类： （一）化学法：碱性苦味酸法
1.漂白土碱性苦味酸法 2.阳离子交换树脂法 3.速率法 4.双PH法（二次读数法） （二）酶法： 1.肌酐酰胺水解酶法 2.肌酐亚氨水解酶法 （三）高效液相色谱法
• 3.速率法（动力学法）： 根据肌酐和碱性苦味酸形成复合物
的速度与非肌酐干扰物的不同，且肌酐 的反应速度与浓度成正比的原理。
干扰物质：
a.快反应物质 最初30s内反应 b.慢反应物质 120s以后反应 肌酐反应：31~60s 该法有助于解决反应的特异性，可消除 某些非化学反应的干扰且简单、快速
生化--肾脏疾病检验 图文
NH4＋ + α - 酮戊二酸 + NADH 谷氨酸脱氢酶 L - 谷氨酸 + NAD＋ + H2O
本法线性上限血清/血浆为50mmol/L，特异性好，不受其它含氮化合物干扰。
5.临床意义
①仅对慢性肾功不全、尿毒症的诊断有价值， 用于判断预后。
2.参考区间
成人 0.6～2.5 mg/L
3.临床意义
同Cr、Bu 及Ccr。更显著、更灵敏
二、肾小管功能检查
新疆医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室
（一） 近端肾小管功能检查 1.β 2—微球蛋白测定 β 2—MG 由人体有核细胞，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞产
生 ，生成较恒定，分子量11.8kD ，自由滤入原尿在 近端小管几乎全部重吸收，并被分解、破坏。 参考区间：
成人血清 1～2 mg/L （肾小管阈值 5mg/L） 尿液 < 0.3 mg/L
临床意义
尿β 2–MG
近曲小管早期受损敏感指标（须结合血浓度
)
血β 2–MG （1）肾小球滤过功能受损（较肌酐更灵敏 ）
（2）恶性肿瘤、炎症疾病、肝炎、类风关
2.α 1-微球蛋白（α 1-microglobulin，α 1-MG） 肝细胞和淋巴细胞产生，分子量26～33kD、产生
肌酐生化方法学
肌酐生化方法学
肌酐（Creatinine）是一种由肌肉代谢产生的废物，通常通过肾脏排出体外。肌酐生化方法学是用于测定血清或血浆中肌酐浓度的实验方法。
1. 碱性苦味酸法：这是最常用的肌酐测定方法之一。在碱性条件下，肌酐与苦味酸反应生成红色化合物，通过比色法或分光光度法测定其吸光度，进而计算肌酐浓度。
2. 酶法：利用肌酐酶将肌酐转化为氨和肌酸，然后通过测定氨或肌酸的生成量来计算肌酐浓度。酶法具有较好的特异性和准确性。
3. 干化学法：使用纸片或试纸等干式试剂，通过颜色变化或比色法来测定肌酐浓度。这种方法通常用于快速检测，但准确性可能稍低。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种分离和分析化合物的技术，可以用于肌酐的定量测定。HPLC 法具有高分辨率和准确性，但设备和操作相对复杂。
5. 质谱法：利用质谱仪对肌酐进行分析，通过检测肌酐的特定离子或碎片来确定其浓度。质谱法具有高灵敏度和准确性，但设备昂贵。
在选择肌酐生化方法时，需要考虑实验要求、设备条件和准确性等因素。不同方法可能在灵敏度、特异性、操作简便性和成本等方面有所差异，因此应根据具体情况进行选择。无论使用哪种方法，都应遵循标准操作程序，并进行质量控制以确保结果的准确性和可靠性。
临床血清肌酐测定方法、羟苯磺酸钙药物作用及血肌酐测值干扰影响和要点总结
临床血清肌酐测定方法、羟苯磺酸钙药物作用及血肌酐测值干扰影响和要点总结
血清肌酐测定方法
血清肌酐是评价肾小球滤过功能的重要指标，其检测方法主要有苦味酸法和肌氨酸氧化酶法。苦味酸法会受到维生素C、丙酮酸、丙酮、乙酰乙酸、葡萄糖、蛋白质、胆红素等多种物质的干扰，不适宜用于黄疸、溶血等情况下患者的血清肌酐测定，特异性较差。
酶法与苦味酸法相比，具有样本量小、速度快、特异性高等优点，使用酶法代替苦味酸法血清肌酐测定。
羟苯磺酸钙
羟苯磺酸钙，化学名为2，5-二羟基苯磺酸钙，是广泛应用于临床微血管保护剂，用于治疗糖尿病视网膜病变，具有抑制视网膜微动脉瘤形成和减轻出血渗出等作用。
适应证包括慢性肾功能不全、慢性静脉功能不全、色素沉着性紫癜性皮肤病、白内障、肝脏缺血-再灌注损伤、阻塞性黄疸等。
保护血管药理机制主要体现在以下两个方面: ① 羟苯磺酸钙可增加微血管壁阻力，降低其病理性高通透性，减少出血与渗出；② 羟苯磺酸钙降低血液黏稠度，抑制血小板活化与聚集，防止血栓形成引起血管狭窄或堵塞。
羟苯磺酸钙对酶法检测肌酐干扰
当羟苯磺酸钙浓度大于2 μg/ml 时，羟苯磺酸钙浓度越高，对血清肌酐水平负性干扰则越明显。
羟苯磺酸钙干扰血肌酐测值
肌酐在肌酐酶的催化作用下生成肌酸，肌酸在酶催化作用下水解
生成尿素和肌氨酸，其中肌氨酸经肌氨酸氧化酶催化生成甲醛、甘氨酸、过氧化氢等。过氧化氢、4-氨基安替比林和2，4，6-三溴-3-羟基苯甲酸在过氧化物酶催化下反应生成可以进行比色反应的紫红色化合物醌亚胺。
羟苯磺酸钙对酶法检测血清肌酐存在干扰，对苦味酸法检测血清肌酐干扰。使用苦味酸法检测肌酐时，羟苯磺酸钙浓度在 64 μg /ml 以上也不会对结果产生明显干扰，羟苯磺酸钙对苦味酸法检测肌酐基本没有干扰。
血清肌酐(Crea)测定苦味酸法标准操作程序SOP文件
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-20
血清肌酐（Crea）测定苦味酸法
版序：ABCD
页码：第3页，共4页
9.6不能使用苦味算法检测婴儿的溶血标本，因为此使其HbF的浓度大于5%，在此情况下，应该使用酶法肌酐检测。
9.7 换算公式：mg/dl×88.4 =mol/l
另外，血清或血浆中的蛋白将发生非特异性的反应，为了获得准确的结果，肌酐浓度必须达到0.3mg/dl。
3 标本
3.1 血液：血清及肝素/EDTA抗凝血浆（不要用肝素铵的抗凝剂），处理方法见标本准备。
稳定性：2-8℃7天
-20℃长期储存
3.2 尿液：新鲜标本、不要冷冻、不要加防腐剂
稳定性：2-8℃4天
-20℃长期储存
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5 仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6 上机操作
见仪器作业指导书，参数设置见附表。
7 参考范围
7.1 血清/血浆(成年人)
男性：0.70-1.20mg/dl(62-106umol/l)
实验十二去蛋白苦味酸法测定血清肌酐 - 副本
速率法原理
肌酐在肌酸脒基水解酶作用下生成肌氨酸， 肌氨酸在肌氨酸氧化酶作用下生成过氧化氢， 后者在过氧化氢酶作用下与4-氨基安替比林、 ESPAS反应生成呈色产物紫红色醌亚胺，在 546nm处引起吸光度增高，通过监测546nm 处吸光度值的上升来测定肌酐的浓度
过程
过程
结果计算： 肌酐浓度(umol/L)= （△A测定 / △A标准） ×C标准 (其中△A为吸光度的变化,C标准为标准品浓度。)
注意事项
必须严格的控制反应的时间，以尽量避免 快速或慢速反应假肌酐物质的干扰 溶血产生的红细胞内非特异性物质将干扰 反应 胆红素可引起负偏差。某些全自动生化分 析仪，能设置空白速率参数，能去除胆红 素负干扰。
Hale Waihona Puke Baidu
评价
特异性 本法基本上可消除生理浓度的葡萄 糖、维生素C和蛋白质等的干扰。回收试验 96.7% ~100.4%，平均98.5%。 线性范围 肌酐在1760μmol/L范围内线性良 好。
去蛋白苦味酸法测定 血清肌酐
去蛋白苦味酸法原理
血浆或血清标本经除蛋白处理后，肌酐与 碱性苦味酸产生Jaffe反应，生成橙红色的苦 味酸肌酐复合物，在510nm和520nm间测定 吸光度，与肌酐含量呈正比。尿液标本可 稀释后直接测定。
Roche P模块 肌酐(苦味酸)说明书
16µL
稀释液(水) 71µL 20µL 16µL
cobas integra 400/400plus 系统-检测设定
血清、血浆应用参数
测定模式
吸光度
Abs.计算模式
Kinetic
反应方向
增加
波长 A/B
512/583nm
计算结果， 第一次/最后一次
40/49
反应模式
RI－S－SR
单位
µmol/L
移液参数
肌酐检测试剂盒（苦味酸法）说明书
【产品名称】 通用名称：肌酐检测试剂盒（苦味酸法） 英文名称：Creatinine Jaffé Gen.2
【包装规格】 700 tests，4×200 tests
【预期用途】 应用于罗氏 cobas c 501, cobas c 311, cobas c 111, cobas integra 400/400plus 全自动生 化分析仪上，体外定量测定人体内血清、 血浆和尿液中的肌酐浓度。 摘要 1 血清肌酐是由机体肌酸自发脱水形成的废 物。机体中的大部分肌酸以磷酸肌酸的形 式存在于肌肉中，可作为高能储存库，可 转化为三磷酸腺苷。肌酐形成率与每 24 小时内机体中 1－2％转化为肌酐的肌酸 量相一致。 肾功能不全，特别是肾小球滤过率降低的 病人血清肌酐和尿素水平可升高。在肾脏 损害的早期，血清尿素水平的升高通常早 于肌酐水平的升高。不过由于血清中尿素 水平受饮食、水合程度以及蛋白代谢的影 响，从而抵消了这一优势。血清肌酐水平 却不受这些可影响血清尿素水平的因素的 影响，表现出一定的稳定性。因此在肾功 能筛查试验中血清肌酐的可靠性明显优于 血清尿素。 肌酐清除试验是更为敏感的检测肾小球滤 过率的试验。要进行此项试验就必须精确 同步的收集尿样（通常为 24 小时）和血 液样本。
肌酐(CRE)测定试剂盒(苦味酸法)产品技术要求lideman
肌酐（CRE）测定试剂盒(苦味酸法) 适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中肌酐的含量。
1.1包装规格
试剂1（R1）：2×80mL、试剂2（R2）：2×80mL；
试剂1（R1）：3×60mL、试剂2（R2）：3×60mL；
试剂1（R1）：2×40mL、试剂2（R2）：2×40mL；
试剂1（R1）：2×80mL、试剂2（R2）：2×16mL；
试剂1（R1）：2×60mL、试剂2（R2）：2×20mL；
试剂1（R1）：4×60mL、试剂2（R2）：1×60mL；
试剂1（R1）：1×10mL、试剂2（R2）：1×10mL；
试剂1（R1）：1×60mL、试剂2（R2）：1×60mL；
试剂1（R1）：2×30mL、试剂2（R2）：2×30mL；
试剂1（R1）：3×61mL、试剂2（R2）：3×61mL。
校准品（选配）：1×3mL。
1.2主要组成成分
1.2.1试剂组成
表1 试剂组成
1.2.2校准品的组成：单水平液体校准品，在水基质中添加肌酐（纯度：大于95%）。定值范围：（50～300）μmol/L。
注：校准品浓度具有批特异性，具体浓度见标签。
2.1 外观
液体双试剂：试剂1（R1）为无色澄清液体，试剂2（R2）为桔黄色澄清液体。校准品：无色至浅黄色澄清液体。
2.2 净含量
液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 空白吸光度
在37℃、（505nm±10%）范围内的波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应<0.3 ABS。
2.4 分析灵敏度
浓度为132.6μmol/L时，吸光度变化范围应在（0.004～0.02）ABS之间。
血清肌酐测定的两种常用方法
于等于 ２ ｍ 抗坏血酸的干扰 ， ５ｍ ｏ 乩 ｌ 当血清 中抗坏 血 酸浓 度高 于此值 后 由于抗 坏血 酸酶被 消耗 而 出现 抗坏血酸对反应的负性干扰 ；当血清中葡萄糖浓度 小 于 等于 ５ ｍ 和 轻度溶 血 （ ｂ ．３ｇ Ｌ） ０ｍ ｏｌ 乩 Ｈ ≤１ Ｓ 时 ， 干扰 可 以忽 略 。试 剂 ２中的亚 铁氰 化钾 或者 其 亚 硝基铁 氰化 钾可 以消 除胆 红素 的干扰 ，但 高浓度 的胆红素 仍然 有一定 的正 向干扰 。 肌氨 酸氧化 酶法 与苦 味 酸速率法 比较 ，线 性范 围宽 ９倍 ，精密度 和 准确度 均较 高 ，抗胆红 素 和血 红 蛋 白干 扰 的能力 均较强 。虽 然苦 味酸速 率法 比苦 味 酸终点 法是一 大进 步 ，巧妙 地利用 真假 肌酐 二者 反应 速度 时 间差来 消除快反 应 和慢反 应假 肌酐 的干 扰 ，使 特异 性提 高 ，但 仍然 受 到干扰 物 的干扰 ，尤 其是 胆红 素对肌 酐测 定 的负干扰 。其 机制 可能 为在 ５０ｎ ５ ０ｎ 胆红 素有 较强 吸收 ， Ｎ Ｏ ０ ｍ一 ２ ｍ 在 ａ Ｈ作用 下， 胆红 素转 变胆绿 素 ， ６０ｎ 处有 较强 吸收 的 在 ２ ｍ 胆 绿素 而使原 吸收 减弱 ， 盖 了肌 酐 和苦 味酸 的显 掩 色 ， 肌酐测 定值 偏低 。 使
样 品 和碱性 苦 味 酸 混 合 后 ８ ０—１０ 才 开 始 反 应 。 ０ｓ 这样 ，在 ２ ０～８ ｓ ０ ，出现 “ 口期 ” 窗 。在 窗 口期 内
酶法与苦味酸法检测血清肌酐的相关性
19 146.1 152.5 29 521.2 392.5 39 80.0 100
20 461.8 364.5 30 500.7 370 40 760.2 559.5
3.讨论 肌氨酸氧化酶终点法由于是采用酶促反应测定肌酐，具有特异性高、反应完全的特点。
碱性苦味酸法测定肌酐由于存在较多的干扰反应（如维生素 C、酮体、葡萄糖等），一般采 取两点法进行测定，以尽可能减少干扰反应对测定的影响。但由于测定时间为固定的，所以
肌酐在低值时仍有干扰反应导致结果相对肌氨酸氧化酶法偏高，而肌酐在高值时由于反应时
2.结果 2.1 实验数据收集期间，室内质量控制均在控。 2.2 40 份样本的检测值进行方法内离群值检查、方法间离群值检查、X 值合适范围检 验，均符合要求。 2.3 两种方法测定结果均值见表-1 及表-2 2.4 使用 Microsoft Excel 工作表软件，以碱性苦味酸两点法测定结果为 Y 轴，以 肌氨酸氧化酶法为 X 轴，作线性回归，求得线性方程为 Y=0.6833X+44，相关系数 r=0.9994。
25 229.5
307 205
34 371.7
35 586.5
289 434.5
16
17
18
1165.0 1247.3 1020
853 887.5 753.5
26 228.5
27 210.0
苦味酸法测定血清肌酐 ppt课件
2020/10/15
2
精品资料
一、实验目的
1.掌握血清肌酐的测定原理和方法。 2. 了解肌酐测定的参考范围及临床意义。
2020/10/15
4
二、实验原理
在碱性条件下，血清中的肌酐（Cre）苦 味酸反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物。 检测505nm波长处吸光度的变化，可知被测血 清中的肌酐的浓度。其反应式如下：
肌酐+碱性苦味酸 OH红- 色物质
2020/10/15
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三、器材
1、主要器具
试管与试管架
微量移液器
2020/10/15
三用水浴箱
可见分光光度计
6
四、试剂
1.试剂：R1：氢氧化钠
R2：苦味酸
工作液：将R1与R2按1：1的比例混合面成。
2.肌酐标准应用液(133μmol/L)
2020/10/15
7
五、操作步骤
取试管5支，按下表操作
Leabharlann Baidu
加入物（ml） 空白管
标准管
S1
S2
测定管(U) U1 U2
血清
133μmol/L肌酐
标准应用液
—— ——
—— 0.15
—— 0.15 0.15 0.15 —— ——
生理盐水
0.15
—— —— —— ——
R1
血清肌酐(Crea)测定苦味酸法标准操作程序SOP文件
R.VOLUME(R1) [ 180 ]
S1 ABS(LOW) [ 0 ]
R.VOLUME(R2) [ 0 ]
S1 ABS(HIGH) [ 4000 ]
R.VOLUME(R3) [ 36 ]
ABSORBANCE LIMIT [ 7500/INCREASE ]
ASSAY[RATE A]
PROZONE LIMIT [ 32000/UPPER ]
REACTION TIME[10]
TECHNICAL LIMIT(LOW) [ 18 ]
Measurement POINT(1)[20]
TECHNICAL LIMIT(HIGH) [ 2210 ]
POINT(2)[ 25]
CALIBRATION METHOD [ LINEAR ]
POINT(3)[ 11 ]
CALIBRATION POINT [ 2 ]
POINT(4)[16]
SPAN POINT [ 2 ]
WAVELENGTH(PRIMARY)[505]
DUPLICATE LIMIT(%) [ 5 ]
10.5丙酮的浓度低于50mg/dl时不会有明显干扰。
10.6乙酰乙酸浓度低于20mmol/l时不会有明显干扰。
10.7-羟丁酸的浓度低于25mmol/l时不会有明显干扰。
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工作液：将R1与R2按1：1的比例混合面成。
2.肌酐标准应用液(133μmol/L)
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五、操作步骤
取试管5支，按下表操作
加入物（ml） 空白管
标准管
S1
S2
测定管(U) U1 U2
血清
133μmol/L肌酐
标准应用液
肌酐+碱性苦味酸 OH红- 色物质
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三、器材
1、主要器具
试管与试管架
微量移液器
三用水浴箱
可见分光光度计
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四、试剂
1.试剂：R1：氢氧化钠
R2：苦味酸
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九、方法学评价
1.化学法：即苦味酸法，该法成本低廉，方法简便， 但试剂具毒性和腐蚀性。
2. 酶法：准确度和灵敏度高，采用两点速率法，适合 于自动生化分析仪检测。
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六、计算
血清肌酐（mmol/L）= ΔAU/ΔAS×133μmol/L
参考区间：男性：62-115μmol/L 女性：53-97μmol/L
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肌酐（CRE）是人体内肌酸代谢的最终产物， 由肾排出，少部分来自食物，大部分在体内生成， 血肌酐的浓度主要取决于GFR。 血肌酐的测定对中晚期肾疾病临床意义较大。 肌酐测定方法有化学法和酶法。 酶法主要有三种类型：肌氨酸氧化酶法、肌酐氨基 水解酶法和肌酐亚氨基水解酶法。
七、注意事项
1.血标本无溶血，应及时处理。 2.工作液开盖混合后，应置2-8度避光保存，稳定期3天。
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八、临床意义
肌酐经肾小球滤过后不被肾小管重吸收，通过肾 小管排泄。只有当GFR下降到正常的1/3时，Scr才明 显上升，是反眏GFR减退的后期指标。 增高：见于各种原因引起的肾小球滤过功能减退：各种 肾病，急慢性肾衰竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎 等。 降低：见于尿崩症、进行性肌萎缩、白血病、贫血等
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一、实验目的
1.掌握血清肌酐的测定原理和方法。 2. 了解肌酐测定的参考范围及临床意义。
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二、实验原理
在碱性条件下，血清中的肌酐（Cre）苦 味酸反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物。 检测505nm波长处吸光度的变化，可知被测血 清中的肌酐的浓度。其反应式如下：
—— ——
—— 0.15
—— 0.15 0.15 Baidu Nhomakorabea.15 —— ——
生理盐水
0.15
—— —— —— ——
R1
0.75
0.75 0.75 0.75 0.75
R2
0.75
0.75 0.75 0.75 0.75
混匀后，37度水浴箱放置，2分钟后，波长505nm处，空白管调零，
先读取S1、U1吸光度，5分钟后再读取S2、U2吸光度。