拟南芥植物组织培养
拟南芥培养基配置
1．1 播种和发芽拟南芥可在非无菌条件下，生长在土壤或人工配制的各种培养基中。
作为栽植的容器，可根据各自条件置于花盆或格状分离的多穴塑料盘中。
常用的混合物有泥炭藓、营养土、蛭石和珍珠岩等，例如珍珠岩∶蛭石∶泥炭藓=1∶1∶1的混合物，表土、堆肥或腐殖质土∶珍珠岩或蛭石=1∶1，1∶2或2∶1的混合物。
如果用于营养研究则可以蛭石类惰性物质作培养介质，施以配有营养物质的水溶液。
栽培拟南芥的介质均要求有良好的排水性，因此一般混合砂子、蛭石等惰性介质，保持良好的排水，防止过湿引起真菌和昆虫幼虫滋生。
播种前土壤混合物进行高压灭菌处理 30min，以杀死可能存在于混合物中的任何害虫。
在把土壤混合物置于花盆或其他容器中后，将整个容器置于水或营养液中，靠毛细管作用浸湿介质，然后将处理洗净来的种子，用尖头烧融后的移液管小心移至土表，均匀播下。
如果播种量较大，可用浓度为0．1g/100mL琼脂或砂子事先均匀混合后播种。
种子发芽期间必须保持高湿度，故容器可用塑料膜复盖，保持一周左右方可揭去。
[1]将播有种子的容器移至低温或相应低温条件下，在 2～4℃下放置 2～4d，从而于吸胀条件下破除种子休眠，这对新鲜收获的拟南芥种子尤为必要。
对大多数拟南芥品系来说其种子是中度休眠的，收获已久的这类生态型的拟南芥种子可免于低温处理，而有些生态型甚至需长达7d的低温处理。
干种子的低温处理往往是无效的。
低温处理后，将盆移至温室或生长室，在22℃ 左右发芽，夜温可比日温低2℃，用 2000lx的荧光灯给予光照，光周期为18h光 /6h暗（也可24h光照[2]），在 5d左右可见拟南芥发芽。
拟南芥发芽需光，故防止种子被土覆盖。
1．2 生长发育条件的控制[3]拟南芥一般是冬性一年生植物，自然条件下种子在秋天发芽，幼年期度过冬天，花分生组织在春季分化，种子在夏季成熟脱落。
大多数实验室栽植的拟南芥品种在发芽后 4周开花，而在 4～6周后采集种子。
拟南芥植物组织培养
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。
方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。
二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。
（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。
如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。
）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。
（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。
MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
（如不行，可适当添加琼脂）。
四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
拟南芥——精选推荐
拟南芥拟南芥培养⽅法的进展研究拟南芥( Arabidopsis thaliana) 是⼗字花科拟南芥属植物, 虽然没有经济价值, 但具有⽣育期短, 植株个体⼩及基因组⼩等特点,因⽽长期以来⼀直被⽤来作为分⼦⽣物学和传统遗传学研究的模式实验材料, 作为⾼等植物中具有最少基因组的物种,在科学研究中的地位也是极为重要得。
为了与国际接轨, 近年来国内已引⼊了拟南芥作为实验材料。
室内培养不仅可以得到试验所需的材料,也可以打破⾃然条件的限制对拟南芥进⾏各种诱导,为拟南芥新品种的培养和种性的改良提供便利条件,掌握拟南芥室内培养技术对顺利开展植物发育⽣物学的研究具有重要的意义。
但是,拟南芥属于较难培养的植物,许多因素制约着它的正常⽣长和发育，⽐如，拟南芥种⼦特别⼩, 幼苗很弱, 易夭折, 给它的培养带来⼀定的困难。
⽬前,国内很少有实验室具备国外⼈⼯⽓候室培养拟南芥的全⽅位调控条件, 在拟南芥培养⽅⾯存在成活率低、培养周期长等问题。
因此, 掌握拟南芥的培养技术⾮常重要。
拟南芥室内培养⽅法研究拟南芥室内培养⼀般从种⼦春化开始,经历消毒、育苗、移栽、后期管理、种⼦收集及保存等阶段。
通常采⽤⽔培和⼟培两种⽅法。
1种⼦的春化春化作⽤(verna lization)是某些⾼等植物具备成花能⼒所必需的,即通过适当长度和强度的冷处理诱导开花抑制蛋⽩基因沉默,从⽽使植物具备开花能⼒.近年来的研究已经表明春化过程中特定抑制蛋⽩表达沉默的原因部分是由于染⾊体上特定位点的组氨酸的共价修饰. 种⼦播前需在湿润条件下置4℃冰箱内低温处理3~4 d，对于已在冰箱内保存⼀个⽉以上的种⼦可不必低温处理。
2种⼦的消毒拟南芥种⼦的消毒主要是⽤次氯酸钠溶液和酒精，不同浓度的溶液对种⼦上的病毒和细菌有不同的杀灭作⽤，结合⽂献资料，在本⼈第⼆课堂的实验中（《拟南芥三种培养⽅法的⽐较》），对⽐了三种不同的消毒⽅法，探索消毒⽅法旨在寻找出⼀种对拟南芥种⼦伤害最⼩，并且最有效的消毒⽅法。
拟南芥培养攻略
拟南芥培养全攻略拟南芥又名阿拉伯芥，属十字花科，为二年生草本植物。
具有植株形态小，平铺直径5cm ，高30cm ；生长区域小，易于培养；基因组小，只有5条染色体，15700万个碱基对，27000个基因；生长速度快，周期短，一个世代大约只需要6周的时间；可自花授粉，也可以在不同种质系间杂交，种子多，每株每世代可产数千粒种子等特点。
因此，拟南芥是植物科学，包括遗传学和植物发育研究中的模式植物之一（图1）。
在2000年，拟南芥成为了第一个基因组被完整测序的植物。
尽管拟南芥生长周期短，且易于培养，但根据不同的实验需求，在培养过程中，对光照、水分及湿度等各种条件的控制有所差别，利用PERCIVAL AR 系列拟南芥培养箱可设置不同的生长环境，满足不同的实验需求。
一、 正常培养 简单的拟南芥培养，可用于基因表达、器官发育、基因突变等研究。
1、 首先把拟南芥种子放到滤纸上，用70%酒精进行消毒处理，再用无水酒精进行处理（也可选择20%漂白剂以及0.05% Triton X-100 非离子表面活性剂做杀菌处理20分钟）。
用无菌水冲洗5遍，然后将种子点到MS 培养基上，pH5.9,另加0.9%琼脂以及2%蔗糖。
2、 把种子放到4℃黑暗条件下进行春化48h-72h 左右，在长日照或短日照条件下催芽，然后转到PERCIVAL AR 系列培养箱中（图2）。
利用Intellus 控制器，编辑简单的昼夜模式，设定光照时间16小时（黑暗8小时）或者光照14小时（黑暗10小时）；选配Q22连续光强调节装置，设定光照强度为100-150umol/m 2.s;设定箱体内温度为光照条件下20-22℃，黑暗条件下18-20℃；选配湿度控制系统，设定箱体内相对湿度70%。
3、 出苗大约7~10天，然后移入土中培养，采用底部灌溉方式浇水（利用土壤的毛细作用）。
在第一次浇水前，可使土壤完全干燥，以后每隔7~10天浇一次水。
4、 土壤可用营养土、蛭石以及珍珠岩比例10:1:1的比例配置，也可直接用堆肥、蛭石以及草炭等进行混合。
拟南芥培育方法
拟南芥培育方法—通用指南一、原理拟南芥作为高等植物的模式生物被全世界的植物生物学实验室广泛研究。
然而，照顾好这种小植物可能不是那么容易。
这里介绍一个马里兰大学帕克学院的HevenSze实验室的通用指南。
Sze实验室及其他实验室的成员为建立这个在实验室培育拟南芥的通用指南做出了许多努力。
二、步骤1. 准备种植用土我们使用Miracle-Gro混合土（2立方英尺一袋）与Miracle-Gro珍珠岩（8夸脱一袋）来培养拟南芥，在一个可以放下2袋混合土的大容器中和土，1袋混合土（2立方英尺）混入半袋珍珠岩（4夸脱）。
注意：Sze实验室在装土之前经常将土灭菌！（方法如下）（1）将干土放入灭菌容器中，直至与顶部相差一英寸，将土拍实。
（2）用铝箔纸将容器封住，在每一个容器上放一张灭菌用胶带，缠好。
确保容器外没有土，放入灭菌锅。
（3）用常规/秒速/快速模式灭菌30~50 min，灭菌模式及时间取决于灭菌的容器数量。
（4）当温度降至室温，将土放入花盆，轻轻压实。
记住将灭菌土保存好，避免种子或菌类污染。
灭过菌的土至少可以使用两星期，如无需要请不要多次灭菌。
（5）将花盆用去离子水浸没（不要超过土表面）用humidomes覆盖，使其吸水3-6小时或过夜。
吸水后应该还保存约1英寸高的水，如果没有请添水。
（6）此时的土可以用于种植拟南芥。
2. 种子消毒方法A（1）取适量种子（野生型、突变体或互补株系）置于一个EP管中，加1 ml 消毒溶液。
消毒溶液：20%Chlorox消毒液0.05%Tween-20用新灭过菌的无菌水配制。
（2）用振荡器以最大速度震荡20-30秒。
（3）放置7-10 min，偶尔震荡一下。
（4）8 000 rpm 离心5秒。
（5）仔细将水倒出。
（6）加1 ml 无菌水，震荡重旋种子。
（7）8 000 rpm 离心5秒，倒去上清。
（8）重复步骤6-7，重复四次。
（9）将灭菌的种子移到底部铺有无菌滤纸的小Fisher盘（100×15 mm）中。
拟南芥(Arabidopsis thaliana)等三种被子植物幼苗的结构、发育和演化分析
（ｂ）（ｃ围１—１生长素运输减弱情况下的拟南芥叶脉式样的发育基冈分析已表明器官水平上的维管模式也是被位置信息控制。
拟南芥ＡＶＢｌ基冈突变体不仅转换外韧维管柬为周术维管束．而且破目：苇的环状维管束式样””。
ａｖｂｌ突变体中，人鼙的维管柬分支进入髓，类似单子叶植物茎的维管模式。
这表明当决定环状维管组织的位置信息被破坏，维管束会在髓形成。
研究ａｖｂｌ突变体中生｝：＝素输出载体的分布信息很有意义。
决定维管束模式的位置信息的重要性在几个器官极性突变体如用６∥”和ａｇｏ”…中体现。
这些突变体在叶中显示变换的维管模式。
ＹＡＢＢＹ基冈编码转录闻子…”，ＡＧＯ基冈编码一个未知功能的蛋白质…”Ｊ。
其它影响维管模式的突变体也被分离｛ｌ；来（表卜Ｉ，卜２）。
大量的突变体是根据子叶或真叶的变化被分离。
这些突变体山现不连续的、随意的或者减少的叫脉”。
”’“。
’“１。
近来，一个在根和盾片状１，仃变换的维管模式的玉米突变体被发现”…。
所有的维管模式突变体揭示了植物生长和发育在其它方面的缺陷，这也表明人母被影响的基闻参与到植物止常发育的重要过程。
突变体中相关基冈的分离和它们功能的深入研究将有利『＾分析参与到维管模式形成的路径。
ＴＡＢＬＥ】一１ＭｕｔａｎｔｓａｆｆｅｃｔｉｎｇｖａｓｃｕｌａｒＮＩ纠｝ｌ、ａｎｄｆ（｝ｔ｝ｈｐａＩｔｅｒｎ、ｉｆｌ表卜１影响茎和根维管模式的突变体中国农业人学坝｝学位论文猜～青史献综述细胞组成的中央顶端Ｋ，其中的原始细胞比其它原套细胞人，而上ｉ有较人的核平』】液泡，冈而染色较浅：另一个区域是原始细胞和叶原基之间顺端的侧而医，它由较小的．染色深的细胞组成，这些细胞分裂比较频繁。
原体ｎ：被子机物中，根据内部排列，可分为两个类型。
１．一般被子植物型（ｕｓｕａｌａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｔｙｐｅ），该类型原体分为■个医域（ａ）中央博细胞ｆ×：（ｂ）肋状分生卅纵区；（ｃ）周同分生组织区。
２．们入掌利（ｏｐｕｎｔｉａｔｙｐｅ），这种类型多了一个ｆｘ，印形成层过渡区，这个区域是帽状的．存在丁中央母细胞和肋状分生鲴移ｌ及周围分生组纵之间，它住间隔朋时高度和直径相当人，接近产生州。
拟南芥培养攻略
拟南芥培养攻略The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020拟南芥培养全攻略拟南芥又名阿拉伯芥，属十字花科，为二年生草本植物。
具有植株形态小，平铺直径5cm，高30cm；生长区域小，易于培养；基因组小，只有5条染色体，15700万个碱基对，27000个基因；生长速度快，周期短，一个世代大约只需要6周的时间；可自花授粉，也可以在不同种质系间杂交，种子多，每株每世代可产数千粒种子等特点。
因此，拟南芥是植物科学，包括遗传学和植物发育研究中的模式植物之一（图1）。
在2000年，拟南芥成为了第一个基因组被完整测序的植物。
尽管拟南芥生长周期短，且易于培养，但根据不同的实验需求，在培养过程中，对光照、水分及湿度等各种条件的控制有所差别，利用PERCIVAL AR 系列拟南芥培养箱可设置不同的生长环境，满足不同的实验需求。
一、正常培养简单的拟南芥培养，可用于基因表达、器官发育、基因突变等研究。
1、首先把拟南芥种子放到滤纸上，用70%酒精进行消毒处理，再用无水酒精进行处理（也可选择20%漂白剂以及% Triton X-100 非离子表面活性剂做杀菌处理20分钟）。
用无菌水冲洗5遍，然后将种子点到MS培养基上，,另加%琼脂以及2%蔗糖。
2、把种子放到4℃黑暗条件下进行春化48h-72h左右，AR系列培养箱图在长日照或短日照条件下催芽，然后转到PERCIVAL AR 系列培养箱中（图2）。
利用Intellus 控制器，编辑简单的昼夜模式，设定光照时间16小时（黑暗8小时）或者光照14小时（黑暗10小时）；选配Q22连续光强调节装置，设定光照强度为100-150umol/;设定箱体内温度为光照条件下20-22℃，黑暗条件下18-20℃；选配湿度控制系统，设定箱体内相对湿度70%。
3、 出苗大约7~10天，然后移入土中培养，采用底部灌溉方式浇水（利用土壤的毛细作用）。
拟南芥种植方法
培养基上点种子：之蔡仲巾千创作1.种子处置1.1 种子消毒处置在培养基中点样前, 必需对种子进行消毒, 防止感菌, 具体方法为：先将种子倒在干净的纸上, 挑去年夜的杂质, 再将种子倒入EP管中, 加入1mL70%酒精, 振荡10min, 将种子放在超净台中吹干.1.2 点样将消毒处置后的种子, 可以利用牙签点到培养基上, 每次仅点一粒种子, 根据培养皿的年夜小, 确定一个里面能够点几多个种子, 每个90mm培养皿上年夜约种30粒种子, 防止植株长年夜后影响根与子叶的发育.1.3 春化种子点样完毕后, 将培养基密封, 置于4℃冰箱里放置72h后, 放回温室.土培法：1.种种子前, 要将营养土用自来水混匀后, 121℃灭菌30min, 待土冷却后, 装入种植拟南芥的方盒中, 再将方盒放入红色托盘中.2.将要点的种子平铺在称量纸上, 用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标识表记标帜, 以免遗种某个盒子.（每个小盒子种5粒种子, 每个年夜方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室, 并用一个干净的托盘盖在上面, 年夜约两天后就可以翻开上面的托盘, 待植物长出4片叶子时, 可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍.4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内, 保证温室温度恒定在22℃, 空气湿度70—80%, 光照强度100—150μmol/m2/s, 每天浇两次纯洁水, 上午9点左右一次, 下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中）, 营养液要灌在盆底.浇水注意事项：1）水不成以浇的过多或过少, 用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀, 托盘四个角的方向如果喷壶喷不到, 可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时, 喷壶的水柱不成以太年夜, 以免把植物连根拔起；4）当植株呈现花芽时, 一定要保证水分的供应, 增进果实的发育.当植株结有豆荚时, 可以适当的减少供水量, 每两三天浇一次水即可, 以利于种子的成熟.开花后的植物不能再用喷壶浇水, 要从盆底灌水, 但不成以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后, 待植物吸收完水后, 可以将盆底过剩的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫, 叶片发黄, 开花期提前等；7）如果做生理实验, 植物一旦受到胁迫, 需要把植物抛弃, 重新种植, 以免实验数据禁绝确.注：温室202光照时间：9:00—19:00为短日照, 有利于营养生长温室203光照时间：6:00—22:00为长日照, 有利于生殖生长5.种子的收集和保管拟南芥种子处在长角果中, 当逐渐成熟时, 长角果由绿变黄, 最后成褐色.当长角果变黄时, 可以开始单个收集长角果, 但此时种子中含有较多的生长抑制剂.因而, 当长角果变褐时及时收集, 可获得成熟又易发芽的种子.收获的种子应立即脱粒、清洁、干燥.种子的收集：在桌面上铺几张干净的纸, 戴上手套, 将要收种的植物的花序用手将种子搓揉到纸上, 再将纸上的年夜的杂质挑去后, 将种子装到信封中, 密封后将装有种子的信封置于干燥环境下, 在室温条件下放置 2-3 周即可进行蕴藏.种子的贮存可根据贮存的目的分歧, 分为短时间、中期、长期贮藏.一般短、中期贮藏是将种子贮存在4℃, 而长期贮藏是坚持在-20℃温度下.当取用长期贮藏的种子前, 先将贮存种子的容器预热到室温, 或者将其置于37℃水浴 10min, 以尽量使冰害降至最低.。
[转载]拟南芥培养
![[转载]拟南芥培养](https://img.taocdn.com/s3/m/d965915f68eae009581b6bd97f1922791688bed3.png)
[转载]拟南芥培养一、拟南芥播种种子装入dorf管内，20μl种子加1ml 75% 乙醇消毒1分钟；吸去乙醇，加入1ml 50%次氯酸钠：50%无菌水：0.05%吐温（or 5%漂白粉），震荡洗涤15-20分钟；稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠或漂白粉，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）；将种子用接种环均匀铺于MS培养基上，用封口膜封口，放入4℃冰箱内冷处理2-3天（春化）。
MS培养基的用量：直径为9cm的培养皿用25ml，直径为6cm 的培养皿用12.5ml。
加培养基时先将凝固的培养基用微波炉高温5分钟左右至全部解冻，然后慢慢冷却至不太烫手时倒板，如要加潮霉素等抗生素也是在此次加，加入后摇匀然后倒板。
倒板后至自然冷却即可铺种，如水分较多或板不够硬，亦可于倒板后将培养皿盖打开晾10分钟左右（此时超净台要关闭）。
种子的杀菌、清洗、铺板等过程在超净工作台上无菌操作，操作者进入超净工作台要用酒精棉球擦拭手、器具、超净台，防止感染细菌、真菌。
二、MS固体培养基制备1．培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ，20×) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ，200×) mg／LKI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ，200×) mg／LFeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ，200×) mg／LⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
拟南芥培养基配置
1．1 播种和发芽拟南芥可在非无菌条件下，生长在土壤或人工配制的各种培养基中。
作为栽植的容器，可根据各自条件置于花盆或格状分离的多穴塑料盘中。
常用的混合物有泥炭藓、营养土、蛭石和珍珠岩等，例如珍珠岩∶蛭石∶泥炭藓=1∶1∶1的混合物，表土、堆肥或腐殖质土∶珍珠岩或蛭石=1∶1，1∶2或2∶1的混合物。
如果用于营养研究则可以蛭石类惰性物质作培养介质，施以配有营养物质的水溶液。
栽培拟南芥的介质均要求有良好的排水性，因此一般混合砂子、蛭石等惰性介质，保持良好的排水，防止过湿引起真菌和昆虫幼虫滋生。
播种前土壤混合物进行高压灭菌处理 30min，以杀死可能存在于混合物中的任何害虫。
在把土壤混合物置于花盆或其他容器中后，将整个容器置于水或营养液中，靠毛细管作用浸湿介质，然后将处理洗净来的种子，用尖头烧融后的移液管小心移至土表，均匀播下。
如果播种量较大，可用浓度为0．1g/100mL琼脂或砂子事先均匀混合后播种。
种子发芽期间必须保持高湿度，故容器可用塑料膜复盖，保持一周左右方可揭去。
[1]将播有种子的容器移至低温或相应低温条件下，在 2～4℃下放置 2～4d，从而于吸胀条件下破除种子休眠，这对新鲜收获的拟南芥种子尤为必要。
对大多数拟南芥品系来说其种子是中度休眠的，收获已久的这类生态型的拟南芥种子可免于低温处理，而有些生态型甚至需长达7d的低温处理。
干种子的低温处理往往是无效的。
低温处理后，将盆移至温室或生长室，在22℃ 左右发芽，夜温可比日温低2℃，用 2000lx的荧光灯给予光照，光周期为18h光 /6h暗（也可24h光照[2]），在 5d左右可见拟南芥发芽。
拟南芥发芽需光，故防止种子被土覆盖。
1．2 生长发育条件的控制[3]拟南芥一般是冬性一年生植物，自然条件下种子在秋天发芽，幼年期度过冬天，花分生组织在春季分化，种子在夏季成熟脱落。
大多数实验室栽植的拟南芥品种在发芽后 4周开花，而在 4～6周后采集种子。
MS培养基配置与拟南芥的种植
一、拟南芥播种种子装入dorf管内，20μl种子加1ml 75% 乙醇消毒1分钟；吸去乙醇，加入1ml 50%次氯酸钠：50%无菌水：0.05%吐温（or 5%漂白粉），震荡洗涤15-20分钟；稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠或漂白粉，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）；将种子用接种环均匀铺于MS培养基上，用封口膜封口，放入4℃冰箱内冷处理2-3天（春化）。
MS培养基的用量：直径为9cm的培养皿用25ml，直径为6cm的培养皿用12.5ml。
二、MS固体培养基制备1．培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ，20×) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ，200×) mg／LKI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ，200×) mg／LFeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ，200×) mg／L ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
实验室拟南芥常用种植方法
贮存过程中影响种子寿命的主要是温度和含水量。温度越高，含水量越多，则种子寿命 越短。因此刚采集的种子必须要经过干燥才能保存。最安全的种子干燥的方法是将采集的种 子置于干燥环境下，在室温条件下放置 2-3 周便可。
种子的贮存可根据贮存的目的不同，分为短期、中期、长期贮藏。一般短、中期贮藏是 将种子贮存在 4℃，而长期贮藏是保持在-20℃温度下。当取用长期贮藏的种子前，先将贮 存种子的容器预热到室温，或者将其置于 37℃水浴 10min，以尽量使冰害降至最低。为了 及时了解贮存过程合适与否，一般对种子定期进行生活力测定，而种子发芽率是测定其生活 力的最佳选择。
拟南芥实验室的常用种植方法刘金亮西北师范大学生命科学学院730070摘要拟南芥由于其生活周期短种植和生长不受季节限制并且为自花受粉植物而作为实验最常用的模式植物因此拟南芥如何能够在实验室较好较快地生长便成为实验成败的关键由于拟南芥存在多种生态性各实验室均有各自适合栽培种植的方法如在土壤石英砂琼脂等均可种植但土壤种植种子萌发率低生长过程中受其它方面影响大故本方法重点介绍利用琼脂无菌培养基培养幼苗和移植相结合的方法来快速种植拟南芥该过程主包括种子的处理琼脂无要菌培养基上种子的培养和幼苗的移植以及成熟后种子的保存
过厚或过薄。过薄，点种子后水分蒸发快，培养基有可能干涸；过厚，种子发芽后，有可能 使叶子浸入平板中，影响幼苗后期发育并且过厚平板易开裂。
1.2 种子处理 1.2.1 种子消毒处理
在培养基中点样前，必须对对钟子进行消毒，防止感菌，具体方法为：利用 1%Naclo 浸泡 10min，离心后，倒掉 Naclo，然后用无菌蒸馏水洗涤 5-6 遍，时间间隔为 1min，注意 的是 Naclo 浓度不易过高和种子处理时间不易过长，有可能伤害种子。
自制培养箱探究拟南芥种植培养条件
自制培养箱探究拟南芥种植培养条件摘要：拟南芥是生物学研究的模式之物之一，培养拟南芥可以为学习孟德尔杂交实验奠定基础。
在新疆干燥，偏见气候，无光照培养箱条件下，探索拟南芥种植培养方法。
关键词：拟南芥种植培养一、拟南芥培养的意义拟南芥（Arabidopsis thaliana），又称鼠耳芥，分布广泛，一年生草本，高20-35厘米，十字花科，总状花序顶生，花朵直径约3mm，花瓣4片，白色，匙形。
长角果线形，长0.5～2厘米，每个含20～30粒种子。
拟南芥的特点是植株小，生命周期短，易培养，春型拟南芥萌发后3周左右就可开花，能在6周内完成一个世代，严格自花传粉，基因高度纯合，染色体有5对，每个染色体组有7000万个碱基对，拟南芥基因组测序已完成。
因其以上优点，成为遗传学研究的好材料，被称为植物中的果蝇，是目前公认的五大模式生物之一。
在高中生物教材中，孟德尔豌豆杂交实验是开启遗传学学习的首要也是重要篇章，孟德尔两大遗传学定律的提出，是以豌豆杂交实验为基础展开。
在普通高中生物学课程标准（2017年版）中提出，为帮助学生打成对概念3“遗传信息控制生物性状，并代代相传”的理解，促进学生生物学学科核心素养的提升，应展开模拟植物或动物性状分离的杂交实验[1]。
该实验可在一定程度上帮助学生理解性状分离比形成的核心原因，为促进学生将理论与实际相结合，同时体验科学家的探索历程，笔者想利用与豌豆生殖方式类似的拟南芥模拟重复孟德尔豌豆杂交实验，而这一实验的基础是在现有条件下培养拟南芥，为学生模拟孟德尔实验奠定基础。
二、拟南芥培养条件初步探索拟南芥在世界各地分布广泛，生活适应能力强，实验室培养一般采用无菌种植，即，在无菌条件下，种子经过75%酒精消毒，晾干后播种于MS或1/2MS固体培养基，春化48h，春化结束后，转入光照培养箱培养10天以上。
条件为16小时光照（8000LX），8小时黑暗交替，待长出真叶后移苗至以蛭石，草炭土按照1:3比例混合，提前3-6小时吸水的土壤中，并用保鲜膜覆盖1-2天。
初代培养实训结果总结报告
一、引言植物组织培养技术是植物生物学和生物技术领域的一个重要分支，它通过在人工控制的条件下，利用植物细胞的全能性，实现植物的无性繁殖、快速繁殖、品种改良以及种质资源的保存等目的。
初代培养作为植物组织培养的第一步，对于后续的培养阶段至关重要。
本实训旨在通过实际操作，掌握初代培养的基本原理、技术流程和注意事项，并总结实训结果。
二、实训目的1. 熟悉初代培养的基本原理和技术流程。
2. 掌握外植体消毒、接种、培养等操作技能。
3. 了解不同植物种类在初代培养中的生长特点。
4. 总结初代培养的实训结果，分析影响因素。
三、实训内容与方法1. 外植体选择与消毒实训中，我们选择了三种植物作为研究对象，分别为拟南芥、番茄和马铃薯。
首先，从田间采集新鲜植株，选取茎段、叶片等外植体，并采用70%酒精和5%次氯酸钠溶液进行消毒处理。
2. 接种与培养将消毒后的外植体接种到含有植物生长调节剂的MS培养基上，置于培养箱中，温度控制在25±1℃，光照强度为2000lx，光照时间为12小时/天。
3. 观察与记录定期观察外植体的生长状况，记录其愈伤组织形成、芽萌发、根生长等过程，并分析影响因素。
四、实训结果与分析1. 拟南芥初代培养结果拟南芥外植体在初代培养中表现出较好的生长势。
消毒后的外植体在接种后3-5天开始愈伤组织形成，1周左右出现芽点，2周左右芽长至1-2厘米。
芽苗生长旺盛，根系发达。
2. 番茄初代培养结果番茄外植体在初代培养中生长速度较慢。
消毒后的外植体在接种后5-7天开始愈伤组织形成，1周左右出现芽点，2周左右芽长至1-2厘米。
芽苗生长较慢，根系较弱。
3. 马铃薯初代培养结果马铃薯外植体在初代培养中生长势较差。
消毒后的外植体在接种后7-10天开始愈伤组织形成，1周左右出现芽点，2周左右芽长至1-2厘米。
芽苗生长缓慢，根系较弱。
4. 影响因素分析（1）外植体种类：不同植物种类在初代培养中的生长特点存在差异，可能与植物的生长周期、组织分化能力等因素有关。
罗云熙生物实验报告
实验目的：通过本次实验，了解和掌握植物组织培养的基本原理和操作技术，学习植物细胞脱分化、再分化以及诱导生根和发芽的过程，提高实验操作能力和科学探究能力。
实验时间：2023年X月X日实验地点：XX大学生物实验室实验材料：1. 植物材料：拟南芥种子2. 培养基：MS培养基3. 植物激素：生长素（IPT）、细胞分裂素（Kinetin）4. 实验器具：无菌操作台、超净工作台、移液枪、培养皿、剪刀、镊子、酒精灯、酒精、消毒液等实验步骤：1. 材料预处理：将拟南芥种子用消毒液浸泡30分钟，然后用无菌水冲洗干净，放入无菌培养皿中。
2. 植物组织培养：将预处理后的拟南芥种子接种于MS培养基中，置于光照培养箱中，温度设置为25℃，光照时间为12小时/天。
3. 细胞脱分化：在培养基中加入适量的生长素和细胞分裂素，诱导拟南芥种子细胞脱分化。
观察细胞形态的变化，记录脱分化过程。
4. 再分化：当细胞脱分化到一定程度后，降低生长素和细胞分裂素的浓度，诱导细胞再分化。
观察再分化过程中细胞形态的变化，记录再分化过程。
5. 诱导生根和发芽：将再分化后的细胞转移到含有生长素和细胞分裂素的培养基中，诱导细胞生根和发芽。
观察生根和发芽过程，记录生根和发芽数量。
实验结果：1. 细胞脱分化：在培养基中加入适量的生长素和细胞分裂素后，拟南芥种子细胞逐渐脱分化，形成愈伤组织。
细胞体积增大，细胞壁变薄，细胞核增大，染色质疏松。
2. 再分化：降低生长素和细胞分裂素的浓度后，愈伤组织逐渐再分化，形成芽和根。
芽呈绿色，叶绿体发育良好；根呈白色，生长迅速。
3. 诱导生根和发芽：将再分化后的细胞转移到含有生长素和细胞分裂素的培养基中，诱导细胞生根和发芽。
经过一段时间后，大部分细胞成功生根和发芽，形成完整的植物个体。
实验分析：本次实验成功地进行了拟南芥种子细胞脱分化、再分化以及诱导生根和发芽的过程。
结果表明，生长素和细胞分裂素在植物组织培养中起着重要作用。
拟南芥种植及处理基本方法
1 培养基MS培养基（Sigma公司）B5培养基（pH 5.5）改良的1/4 Hoagland 培养液（mM, pH6.0）：2 植物材料的常规种植拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。
置于23 o C，16/8 h的光照培养间中生长。
3 拟南芥种子的表面灭菌处理1）拟南芥种子在4 C下春化3-5天。
2）在超净台上用70%酒精处理种子2-5分钟。
3）弃去酒精，用无菌水洗1-2次。
4）将种子用15% Bleach （KAO公司）处理15分钟，间歇振荡。
5）用无菌水洗4-6次，每次充分振荡混匀。
6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar中。
7）均匀地将种子播撒在B5培养基平皿中。
4 植物材料的水培体系拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒/皿，生长2周后，小心地将其转入水培体系中。
水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成。
培养皿中盛适当的液体培养基（通常用上述改良的1/4 Hoagland培养液）；锡箔纸上留出相距适当的小洞后，盖于培养皿之上。
将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中。
塑料膜覆盖，2-3天后揭去。
整个体系置于光照培养间中生长，每3-6天更换一次培养液。
5 拟南芥T-DNA插入突变体的筛选方法到网站/tdnaprimers.html输入salk号设计引物LP、RP T-DNA LB：LBb1: GCGTGGACCGCTTGCTGCAACTLBa1: TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG用于PCR扩增。
采用双引物法，分别用LP＋RP，BP＋RP扩增基因组DNA。
方法：1)将拟南芥突变体种子播种于MS培养基平皿中，生长2周后，将其转入蛭石中，待长至抽苔期准备DNA的提取。
2)DNA提取缓冲液的配制：3)剪取一片叶于1.5 ml Eppendorf管中，液氮充分研磨。
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拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。
方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。
二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。
（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。
如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。
）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。
（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。
MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
（如不行，可适当添加琼脂）。
四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
（短日照光照条件8小时光照，16小时黑暗，长日照光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度均为22℃。
）此处获得无菌苗的时间有异议，应该为2--3周？五、外植体的选取B5 + 5 mg／L2 ，4-D+ 0 .5 mg／L KT 培养基上诱导愈伤组织,莲座叶作外植体出愈慢，出愈率低，愈伤组织质量较差；叶柄、下胚轴和根作外植体出愈快，且愈伤组织质量好，后期易分化。
由于叶柄、下胚轴相对较短，难于收集，为了便于操作，减少污染，试验中采用根作为外植体诱导愈伤组织和诱导分化试验。
所取外植体的大小为5mm左右，不宜过大或过小。
滴落种子形成的两条直线位于平皿的上半部，可以避免伸长的根被培养基中渗出的水分所淹。
无菌苗的苗龄太短不易得到足够多的外植体，苗龄太长则外植体脱分化的时间明显延长，最适苗龄以2 --3 周为宜。
六、胚性和非胚性愈伤组织的诱导1、以MS 为诱导培养基, 附加2, 4一D 2mg/L,KT、NAA各L,水解酪蛋白300mg/L，6%蔗糖，琼脂，2、接种幼穗长度为1--2cm 左右, 置于2 8 ℃恒温箱内暗培养。
形态鉴定：幼穗接种后, 一星期左右开始长出愈伤组织。
将其置于解剖镜下观察可以发现两种不同类型的愈伤组织。
一类质地紧密, 有光泽, 乳白色或浅黄色,愈伤组织表面有许多光滑的球形突起, 呈颗粒状。
每个球状体用镊子很易从愈伤组织上分离下来。
这种愈伤组织被认为是胚性愈伤组织。
另一类质地疏松且湿软, 常伴有粘液物质, 没有光泽, 黄色至褐色, 此类愈伤组织没有一定的形态结构。
（栽培稻）NB培养基可明显提高拟南芥的愈伤组织出愈率，且以NB培养基为基础配以2，4一D 2．0 mg／L和6一BA 1．0 mg／L时，拟南芥的愈伤组织生长状态最好。
MS+ 2, 4??D 0. 5 mg/ L+ 6??BA 0. 3 mg/ L, 诱导率达87. 5%, 且愈伤组织生长较好。
培养基中添加5 g/ L 活性炭能有效地抑制外植体褐化。
MS培养基对籼稻种胚愈伤的诱导培养效果较好, NB培养基则更适合粳稻种胚愈伤的诱导培养。
诱导继代培养基为NB( N6培养基的大量元素,B5培养基的微量元素和有机物)、MS和LS基本培养基, 辅加2, 4- D( /L ), 6- BA( /L ), 30 g /L蔗糖, 10 g / L琼脂或3 g / L 植物胶。
BA对于愈伤组织诱导不可缺少，但其浓度太高易产生玻璃化；NAA单独使用利于生根，配合6一BA使用利于分化芽；获得最适愈伤组织诱导培养基为Ms+O．50 mg／L 6-BA+0．10me,／L NAA，愈伤组织诱导率可达100％。
NB培养基用途：用于植物组织培养配方：（mg/L）硝酸钾(KNO3)硫酸铵((NH4)2SO4) 氯化钙(CaCl2·2H2O) 磷酸二氢钾(KH2PO4) 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 硼酸(H3BO3)硫酸锰(MnSO4·4H2O) 2830463166 400185310硫酸锌(ZnSO4·7H2O)钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)硫酸铜(CuSO4·5H2O)氯化钴(CoCl2·6H2O)碘化钾(KI)乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA) 硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)肌醇(Myo-inositol)盐酸硫胺素(Thiamin HCl/VB1)盐酸吡哆醇(Pyridoxin HCl/VB6)烟酸(Nicotinic acid/VB5) 210010 （最后加）11水解罗蛋白（VB1 300谷氨酰胺 500脯氨酸 500PH蔗糖 30000方法一：可以用5%的次氯酸钠溶液进行表面消毒（添加%的TritonX-100，效果会更好。
）。
Triton X-100() 是一种（或称去污剂）。
分子量为（C34H62O11）。
它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。
中Triton X-100常用浓度为1%和%，其中1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本，%的Triton X-100则常用于稀释血清，%的Triton X-100常用于LAMP（环介导等温扩增），配制BSA等。
但通常是先配制成30%的Triton X-100储备液，临用时稀释至所需浓度。
方法二：在 ep管中放<50ul的种子，＋1ml %升汞，加一滴吐温20，脱色摇床5min，种子快速离心下来，用无菌水洗涤种子4－6遍，播种于ms培养基上。
方法三：1、拟南芥种子在8% NaClO（95％乙醇稀释 V/V）的溶液中表面灭菌5-10min（如果种子多，可分几个管），期间不断震荡，使种子充分接触灭菌液体如果种子很少，就少洗几分钟）。
2、吸除灭菌液，加入1ml 95%乙醇，颠倒震荡2min，重复5-6次，洗净种子表面残留的NaClO溶液。
3、吸除洗涤液，在超净台上挥发掉残留的乙醇，将种子吹干后，盖好管盖，封口备用。
方法四：取少量种子放入管，加75%酒精+吐温20 1ml 300rpm 于37度摇床摇10min，用枪吸去乙醇，加95%乙醇1ml,吸去，重复此步骤2-3次，加300uL无水乙醇，迅速吸出放在灭好的滤纸上晾干。
一、培养基一种拟南芥的培养方法，包括以下步骤：１）对种子进行灭菌，然后将种子在２－４℃、湿润，黑暗条件下春化处理１－３天；２）将经灭菌的培养基质装到经灭菌的培养盆中，然后将培养盆放在盛有水的托盘中，静置１２－２４小时后将托盘中多余的水分倒出，将经步骤１）处理的种子播到基质表面；３）将播种后的培养盆连同底部托盘置于经灭菌的人工气候箱中，调节人工气候培养箱的环境因子控制器，使光周期为１５－１７小时光照，７－９小时黑暗；光强为３００－４００μｍｏｌｍ↑［－２］ｓ↑［－１］；光照条件下的温度为２２－２４℃，相对湿度为７０－９０％；黑暗条件下的温度为１８－２０℃，相对湿度大于９０％，经培育得到拟南芥植株。
外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。
包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等。
在操作时，最好将取材植株放在室内或较为清洁的环境中生长一段时间，不要使植株遭受雨淋，应避免用喷水的方法给植株供水。
否则当水分蒸发后，所遗留的钙斑有时会将细菌等微生物覆盖，在给外植体消毒时，这些细菌由于包埋在钙斑中难以被杀死。
随着培养的进行，这些细菌有时会从破碎的钙斑时进入培养基，从而给以后的培养埋下隐患。
无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质或特殊的基因型。
对材料的选择要有明确的目的，具有一定的代表性，以提高成功的几率，增加其实用价值。
1.选择健壮的植株组织培养用的材料，最好从生长健壮的无病虫的植株上，选取发育正常的器官或组织。
因为这些器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后比较容易成功。
此现象可能是由于外植体内部的植物激素水平能够在接种后得以维持所致。
2.选择最适的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和植物的生长发育阶段。
一般进行快速繁殖时应在植株生长的最适时期取材，如选取茎尖，这样不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高，携带细菌数量较少，在器官建成上也更为容易，因此是花卉组织培养中经常采用的部位。
此外，嫩叶、花蕾等携菌量较少，容易形成愈伤组织。
相比之下，生长时间较长的块茎、鳞茎、球茎等，往往由于携菌量较多，不易消毒而难以培养成功。
花药培养应在花粉发育到单核期时取材，这时比较容易形成愈伤组织。
3.选取适宜的大小建立无菌材料时，取材的大小根据不同植物材料而异。
材料太大易污染，也不需要；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难于成活。
一般选取培养材料的大小，在养或脱毒培养的材料，则应更小。
1、实验所使用的器材必须要严格灭菌，注意无菌操作，避免因染菌导致实验失败；2、配制贮存母液时，要算好各种成分逐次加入，等第一种成分完全溶解后再加入第二种成分，切忌“一锅煮”。
有机物质和铁盐溶液配好以后要装入棕色瓶放入电冰箱内保存，其它两种种母液可在常温下保存但最多不能超过一个月；3、pH值对培养基的硬度有影响，pH过高培养基变硬，pH过低培养基不能凝固，所以要调整好培养基的pH值；4、材料脱毒时不要在酒精中停留过长时间，以免材料被杀死。
Columbia型拟南芥愈伤组织培养研究Columbia哥伦比亚型选取Columbia型拟南芥种子，在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90 s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
采用在培养基中添加适量的维生素C、活性炭、GA。
和ABA等物质，能抑制酶的活性，减轻褐变的程度，提高愈伤组织的产物质量?。
特别是ABA在很入程度上限制了酚类物质的活性，减轻了褐变，并且提供了生长调节物质和碳源，促进了愈伤组织的生长。