姜黄素对Tca8113细胞周期各时相的影响

姜黄素对Tca8113细胞周期各时相的影响【摘要】目的:探讨姜黄素对Tca8113 (人舌癌细胞株）细胞株的诱导分化作
用及对细胞周期各时相的影响。

方法:应用MTT比色法和流式细胞仪检测姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率及细胞周期的改变，并通过电子显微镜观察其亚
细胞结构的改变。

结果:姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显抑制作用，且呈剂量依赖性。

流式细胞仪分析，G 1期细胞增高，S期细胞减少，G 2 .M期细胞相
对增多。

亚细胞结构:细胞空化，核仁不规则。

结论:姜黄素能够抑制Tca8113 细胞增殖，阻止G 1期细胞向S期的进程。

S期细胞减少，G 2 .M期细胞增多，促进Tca8113细胞凋亡。

【关键词】姜黄素;细胞周期;Tca8113细胞株
姜黄素（Curcumin)是从中药姜黄中提取的酚性色素，具有多方面的药理
作用[1]，如抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤等。

我们应用Tca8113细胞为靶点，探讨姜黄素对其增殖的细胞周期各时相的改变, 旨在为舌癌治疗提供理论依据，兹将结果报告如下：
1材料和方法
1.1材料Tca8113细胞株，由北京医科大学口腔医院蕙赠;姜黄素购于上
海化学试剂采购站（分析纯）；RPMI1640培养基、MTT (塞唑蓝）购于美国Sigma公司;胎牛血清购于长春生物制品研究所。

1.2方法
1.2. 1 MTT比色法取对数生长期的Tca8113细胞。

经0.25%胰蛋白酶消化，收集细胞，调细胞数为2X10 8 .L。

接种丁•96孔塑料培养板内，每孔100M 1.
孔。

分别加入10、20、40g.L姜黄素，每个浓度6复孔，同时设空白对照组，共4组。

培养24h，于培养结束前6h加入MTT试剂20p 1.孔，终浓度为0.5g.L。

继续培养6h后加入酸化异丙醇50|J 1.孔。

振荡5min，使MTT还原产
物完全溶解，用酶标仪在550波长处测定各孔吸光度A值，计算肿瘤细胞抑制
率。

肿瘤细胞抑制率=(1-加药孔细胞A值+对照孔细胞A值）X100%
1.2.2应用流式细胞仪检测Tca8113细胞周期各时相变化及凋亡率，细胞
培养及分组同1.2.1，培养结束后，胰蛋白酶消化。

收集细胞，PBS洗2次，离
心弃上清，用70%冷乙醇固定，上机前过4S目网，调细胞数为1X10 9 .L，测
定细胞周期各时相变化。

1.2.3透射电镜观察Tca8113细胞亚结构改变，收集经姜黄素作用的Tca8113细胞。

离心弃上清，用2. 5%戊二醛固定，1%锇酸后固定。

环氧树脂包
埋。

超薄切片，醋酸铅-铀双重染色，透射电镜观察并拍照。

1.2.4统计学分析组间比较用t检验，数据以均数标准差（_x±s)表示。

2结果
2.1不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率的影响见表1。

表1不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率的影响（略）
表1结果表明，不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率随着药物浓
度
的增加而升高，与对照组相比差异非常显著。

2. 2不同沈度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响见表2。

表2结果表明，随着姜黄素浓度增加，作用时间间延长，效果越明显，
其
凋亡率亦上升，20g. L组姜黄素对Tca8113细胞凋亡率可达11. 5%。

表2不同浓度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响（略）
3讨论
近年来，细胞周期的研究取得令人注目的成绩，特别是细胞周期中不同
时
相的改变为肿瘤预防和治疗提供了重要的理论依据。

我们应用MTT比色法测定姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率，结果表明。

姜黄素可明显抑制Tca8113细胞增殖，与对照组相比差异非常显著，且具有
时
间剂量依赖性。

MTT试剂可被哺乳动物活细胞中线粒体脱氢酶还原成蓝色
甲颗粒，且甲生成的量与活细胞数量及细胞活化状态呈线性关系[2]。

因此被广泛用于抗肿瘤药物的筛选。

流式细胞仪结果显示，不同浓度的姜黄素对Tca8113细胞增殖周期均有
明
显影响，组间比较差异均显著，结果显示G 1期细胞增多，S期细胞减少，
G
2 .M期细胞相对增多，G 1期细胞又称细胞复制前期，是指细胞从有丝分裂
到
DNA复制之前，G 1期是制造产生rRNA、mRNA, tRNA及核蛋白体，所以说G 1
期是细胞复制周期运行的关键，同时G 1期也是药物等因素作用的敏感点[3]。

因而抑制细胞周期的G 1期的RNA及核蛋
白体的合成，可间接的使肿
瘤细胞的RNA合成减少，延缓肿瘤细胞的增殖。

G 2 .M期细胞增多是细胞
损伤
的普遍反应，多种细胞损伤剂不仅可引起G 1期细胞停滞，亦可引起G 2 .M 期细胞阻滞[4]。

我们的结果显示，姜黄素对Tca8113细胞G 1期阻滞，G 1期细胞堆积，不能进入S期，阻滞G 1期细胞向S期的进程，从而使
G 2 .M期细胞相对增多，细胞凋亡率升高。

电子显微镜观察所见，细胞肿胀、细胞核变小，细胞质高度空化。

总之, 根据我们的实验结果，证明姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显的抑制作用，为
舌癌治疗提供了理论依据。

【参考文献】
[1]孙春艳，刘新月，陈燕.姜黄素抗肿瘤机制研究进展[J].国外医学肿瘤学分册，2003, 30 (5) :354-357.
[2]肖冬梅，孙关林，苏卉.三氧化二砷对K562细胞周期的影响及其机
制研究[J].中华医学杂志，1999，29 (5) :306-307.
[3]周秀敏，林菊生.DNA损伤修复与肿瘤的关系[J].国外医学•肿瘤
学分册，2003，30 (4) :261-263.
[4]B erchemG，BosselerM，MineN, etal. Nanomolar rang Docetaxel treatment sensitizes MCF-7cell to chemotherapy induced apop-tosis，induces G2M arrest and phosphorylates Bcl-2 [J] .Anti-cancer Res，1999， 19 (1A) :535-540.。