实验3 细胞核的分离与核酸的鉴定

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细胞核的分离

实验四细胞核的分离

[实验目的]

1. 为了研究细胞核及其组分。

2. 定量分析细胞核的生化组分及其它一些特殊成分。

[实验原理]

1956年由chauveau等人提出，用高密度介质来分离细胞核。由于细胞核的密度较大，在高密度介质中，在高速离心条件下沉降下来，从而达到与细胞质其它成分分开来的目的。chauveau 的方法是将动物肝脏直接在2.2mol/l蔗糖溶液中匀浆，然后高速离心40 000g 1小时，细胞核沉淀到底部，线粒体和完整细胞，包括红血球漂浮在液面，通过一步操作即可分离得到细胞核。其后又有不少研究者对此方法进行了改进，例如加进氯化钙、氯化镁、氯化钾等改变分离介质的渗透压；选择介质的ph以及不同的高密度蔗糖溶液离心方法等。这样减少了细胞核的脆性，防止聚集，维持恒定的ph，就能保持细胞核的精细结构。虽然这一方法比较简单，能得到较高纯度的细胞核，也已被广泛采用，但实验需要高速离心机，这在一般实验室不能进行，此方法要用高浓度的蔗糖，如果要分离大量的细胞核，也很不经济。

目前在一般实验室中更多的是用柠檬酸分离细胞核，在柠檬酸介质中分离细胞核可以显著地除去附着在细胞核膜上的细胞质成分。由于柠檬酸降低了溶液的ph值，这样可以减少细胞核的破碎率，并能分离得到较高分子质量的核酸，可能是由于核糖核酸（一种酸溶性蛋白）被柠檬酸除去，以及二价阳离子被柠檬酸螯合所致。

柠檬酸的浓度对分离细胞核的质量有较大影响。通常在较低的ph值时，可以得到较高的细胞核。但在过酸条件下，可能引起细胞核成分的改变和酶的失活。为了研究细胞内核酸，一般常在ph值为4，甚至在ph值为2.5时分离细胞核。如为了分离细胞核的酶，则需要较温和的条件，此时可以在ph值为6～6.2的极稀柠檬酸溶液中分离细胞核。

单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法

单细胞测序的细胞核的分离和纯化方法主要包括以下步骤：

1. 酶解：使用胶原酶和胰蛋白酶等酶将组织样本消化，将细胞间的连接分解，使细胞分散成单个细胞。

2. 离心：通过离心将单个细胞收集到管底部，形成细胞沉淀。

3. 洗涤：去除细胞沉淀中的组织残留物和杂质。

4. 重悬浮：将单个细胞重新悬浮在适量的缓冲液中，以便后续处理。

5. 过滤：通过过滤膜或滤器将细胞核与其他细胞成分分离，收集细胞核。

需要注意的是，上述步骤仅为一种参考方法，实际操作可能因实验条件、样本类型等因素而有所不同。因此，在进行单细胞测序实验前，请详细阅读相关文献，了解并优化适合自己实验的细胞核分离和纯化方法。同时，务必遵循实验室安全规范，确保实验过程的安全性。

核酸的分离与纯化

核酸完整性 *** ** ** ** *
成本 ** ** *** *** *
工时 *** *** ** ** *
安全性 * ** *** *** **
实验室常见样本核酸提取方法
——血清样本核酸提取方法：
血清中可能存在的核酸及其来源： DNA：HBV，HCMV，EBV等； RNA：HCV，HIV等
胞外游离核酸（循环核酸）
核酸提取时应遵循以下原则: 1、保证核酸分子一级结构的完整性; 2、排除其他分子污染。
核酸提取方法
大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括：
细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化
每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。
核酸提取方法——细胞裂解
细胞裂解可通过以下几种方法实现：
实验室常见样本核酸提取方法
——血清样本核酸提取方法：
血清中微生物来源RNA提取方法： 1、酚氯仿法；繁琐，手工操作重复性较差
2、磁珠法；方便，易于自动化，重复性很好，成本较高
实验室常见样本核酸提取方法
——血清样本核酸提取方法：
血清中循环核酸提取方法： 1、酚氯仿法；
2、磁珠法；
人类基因组、发生肿瘤时异常升高；-孕妇的循环核酸亦可来源于胎儿。
主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或链酶蛋白酶) 以使细胞破裂,核酸释放。

核酸分离与纯化的技术路线与原则

核酸包括DNA 、RNA两类分子，在细胞内均与蛋白质结合成核蛋白。真核生物基因组中，95%DNA 为双链线性分子，存在于细胞核中，5%为双链环状分子，存在于细胞器中；原核生物DNA 及质粒DNA 为双链或单链环状分子；RNA 为单链线性分子，主要存在于细胞质中。DNA 与RNA 性质的不同导致对其分离与纯化的条件也不相同。

一、核酸分离与纯化的原则

(1)保证核酸一级结构的完整性。生物的遗传信息全部贮存在核酸一级结构中，而且核酸的一级结构还决定其高级结构的形式及和其他大分子结合的方式。所以，所提取的核酸一级结构的完整性直接影响着后续实验中对其结构与功能研究的质量。因此，在制备核酸的过程中，要做到：尽量简化操作程序，缩短提取过程；避免过酸、过碱等化学因素对核酸链中磷酸二酯键的破坏，在pH 值4～10条件下进行操作；操作时动作要轻缓，提取的样品小包装保存，以免诸多的物理因素对核酸的降解；避免细胞内及环境中核酶对核酸的生物性降解。

(2)排除其他生物大分子的污染，如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应尽可能降

低到最低程度，特别是提取DNA 分子时应除去RNA 分子，反之亦然。

(3)排除核酸样品中有机溶剂和过高浓度的金属离子。

二、分离与纯化的技术路线

(一)核酸的释放

通常情况下DNA 及RNA 均位于细胞内，因此核酸分离与纯化的第一步就是制备单个细胞，再破碎细胞，从而释放核酸。破碎细胞的方法包括机械法与非机械法两大类。机械法又可分为液体剪切法与固体剪切法；非机械法可分为干燥法与溶胞法。由于溶胞法采用适宜的化学试剂与酶，能有效地裂解细胞，方法温和，能保证较高的核酸获得率，并能较好地保持核酸的完整性，从而得到广泛的应用。

细胞核的分离与鉴定

预期结果：在低、高倍镜下，可以观察到经.0.1%碱性固绿染色的小白鼠肝细胞的细胞核体被染成绿色。说明这是碱性蛋白，即细胞核已游离出来。
２.离心技术
细胞内各种结构的比重和大小等都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同介质和不同转速的离心，将细胞各种组分分级分离出来(cell fractionation)。
组织细胞匀浆分级分离分析
差速沉降离心法
离心方法
密度梯度区带离心法
速率区带离心法等密度区带离心法
4、将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机以 2500r/min离心15min,弃去上清液。
5、用6mol 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液悬浮沉淀物，以2500r/min离心15min 弃去上清液，将残留液体用气管吹成悬液，滴一滴于干净的载盖玻片上，制成涂片②，自然干燥。 6、固定，将制备好的涂片放入70%的乙醇中固定 5min,晾干。 7、三氯醋酸处理，将已固定的涂片侵入90℃5%的三氯醋酸溶液中处理20min.取出用细水冲洗玻片上的三氯醋酸至冲尽，用滤纸吸玻片上多余的水分。
细胞核的分离和鉴定
实验原理
细胞核的鉴定，因为细胞核中主要含DNA，而DNA是碱性蛋白，因此将分离出来的核体经三氯醋酸处理后，屏风，抽提掉核酸后，用碱性固绿染色，可使细胞核内碱性蛋白呈现出来。吸出法

细胞核的分离与纯化及RNA、DNA的定量测定-1201共19页文档

表2. DNA的定量结果
试管编号原始吸光度值
1（细胞质液） 2（细胞核液）
提取液中DNA浓度（ug/ml） DNA占总DNA的百分比
1. 酸性溶液，取用要小心。 2. 混匀要充分，并且要注意安全，防止液体溢出。 3. 沸水浴操作时，要注意自己和别人的安全。 4. 离心完后，一定先将上清液转出到另一试管，
纯化的细胞核
5ml 0.02mol/L NaOH溶解细胞核
待测样品
二、RNA的定量测定
1. 水解：取试管二支，编号，按下表操作：
试剂（ml）
1
2
细胞质液
1.0
-
细胞核液
-
1.0
1mol/LKOH
1.0
1.0
混合各管
沸水浴(10min)
冷却
加入5%三氯醋酸 (8ml)
搅匀后离心
2000r/min；5min
DNA 胞质内(2%)
胞核内(10%)
RNA 胞质内(90%)
结论：DNA主要存在于细胞核， RNA主要存在于细胞质。
三、核酸的鉴定
核酸
核苷酸
戊糖碱基磷酸
• 定糖法（戊糖的差异）
（1）核糖核酸RNA的测定
地衣酚法: RNA
CHO
ＯＨˉ 水解
β－ D－核糖 + Pi + A.G.C.U

教案2-细胞核的分离

细胞核的分离与纯化

我们知道每一个细胞内部都是由多个结构组成的，比如说有细胞核，线粒体，内质网，高尔基体等，如果要研究细胞内这些部位的结构和功能，以及细胞器在细胞活动中所起的作用时，那么首先必须将其从生物材料中提取出来，进行分离纯化和测定之后，然后才能进行更深入的研究。我们今天就以小鼠的肝细胞核的提取为例，来了解一般分离提取的基本原理和方法。

通过本次实验，要求我们达到以下两个目的，1：掌握离心技术的原理和使用方法2：掌握细胞核分离的原理和方法。那关于离心机的原理及使用方法我们在第一次实验课上已经讲过了，那么在这里我只强调两点，就是在使用的时候首先要注意配平原则并且规范操作，一定要注意安全，安全是第一的。那接下来我们就看一下细胞核的分离原理。

由于细胞内不同结构它的比重和大小是不同的，在同一离心场内的沉降速度也是不相同的。因此我们可以首先将我们的生物材料研磨成匀浆，然后通过离心的方法分离出细胞质和粗制细胞核，细胞核粗制品加入0.25mol/L蔗糖—柠檬酸溶液（含Ca2+,可防止细胞核凝集，维持细胞核的正常形态），混匀制成匀浆，然后选用高渗蔗糖—柠檬酸溶液作为梯度介质，调整离心力，通过密度梯度离心的方法进行离心，可以使细胞核单独沉淀于离心管底部，从而将细胞核与其他比重相接近的亚细胞结构分离开。在这里我要告诉大家细胞器沉降的先后顺序是细胞核、线粒体、溶酶体和其他微体、核糖体和大分子。那接下来我们看一下在这个实验中需要用到哪些试剂？

实验试剂：1，生理盐水2, 1.5%柠檬酸3,0.25mol/L蔗糖—柠檬酸溶液4，0.88mol/L蔗糖—柠檬酸溶液5，核洗液6，0.02mol/L NaOH溶液，关于各试剂的作用我们在操作的时候会说到。接下来我们看一下具体的操作步骤。

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告

实验名称：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告

实验目的：通过实验，掌握分离酵母核糖核酸的技术和方法，

了解酵母核糖核酸的结构和组成，为深入研究生物分子提供基础

知识。

实验原理：酵母是常见的单细胞真菌，其细胞内含有多种生物

分子，其中包括核糖核酸，其主要作用是传递遗传信息。酵母核

糖核酸在组成上分为核糖体RNA和转运RNA两类，其中核糖体RNA分子量较大，可以通过葡萄糖等物质的离心分离、盐析和凝

胶过滤等方法进行纯化。

实验步骤：

1.将酵母菌株培养至对数生长期，并收集其含有核糖核酸的细胞。

2.将酵母菌细胞裂解，并加入一定量的盐，使其发生盐析反应。

3.将含有核糖核酸的盐析液进行凝胶过滤，通过分子量筛选，

分离出核糖体RNA。

4.对分离出的核糖体RNA进行电泳实验，检测该分子的分子量和组成。

实验结果：

1.通过盐析实验，成功从酵母菌细胞中分离出核糖体RNA，依

据电泳图谱，该分子的分子量约为20kD。

2.通过对核糖体RNA的电泳图谱进行分析，可以发现，在核糖体RNA中，存在大约四分之三的核糖核酸分子为16S rRNA，其

它分子为其他转运RNA。

结论：通过本次实验，我们成功地从酵母菌的细胞中分离出核

糖体RNA，掌握了酵母核糖核酸的分离和组分鉴定等技术和方法，为深入研究生物分子提供了基础研究支持。

细胞生物学中的细胞核结构和功能研究方法

细胞生物学中的细胞核结构和功能研究方法细胞核是细胞中最重要的器官之一，承担着细胞遗传物质的储存和

调控生物活动的重要功能。为了深入了解细胞核的结构和功能，科学

家们开展了许多研究，并探索了各种研究方法。本文将介绍一些常用

的细胞生物学中关于细胞核的研究方法及其原理，包括细胞核染色、

免疫荧光染色、核酸杂交技术和细胞核分离与纯化技术等。

一、细胞核染色

细胞核染色是一种通过在细胞核中使用染色剂来使其显现出颜色的

方法，以便观察细胞核的结构和功能。常用的细胞核染色方法有血片

染色和组织切片染色。

1. 血片染色：血片染色是一种常见的观察细胞核的方法，通过将血

液标本涂布于载玻片上，并应用染色剂（如吉姆萨染剂）进行染色，

使细胞核显色。可以通过显微镜观察和分析细胞核的形态、大小和数

量等。

2. 组织切片染色：组织切片染色是一种观察细胞核的方法，将组织

标本切割成薄片，并使用染色剂（如苏木精和伊红）进行染色。通过

显微镜观察组织切片，可以获得关于细胞核形态、分布和功能的信息。

二、免疫荧光染色

免疫荧光染色是一种利用抗体与目标分子结合并标记荧光物质来可

视化细胞核中特定蛋白或核酸序列的方法。这种方法能够在细胞水平

上直观地显示细胞核中的特定结构和分子。

免疫荧光染色的原理是：首先，制备与目标分子特异性结合的抗体；然后，将该抗体与荧光探针结合，形成荧光标记的抗体；最后，将荧

光标记的抗体应用于细胞样本上，通过荧光显微镜观察，可以看到特

定蛋白或核酸序列在细胞核中的位置和分布情况，从而了解其结构和

功能。

三、核酸杂交技术

核酸杂交技术是一种通过将标记有荧光、放射性同位素或其他探针

核酸的提取操作和鉴定

（二）基因组DNA的提取－ CTAB法 CTAB提取缓冲液的改进配方
组份
终浓度
Tris-
EDTA
HCl
（pH8.
（pH8.0）0）
100
20
mM
mM
NaC l
1.4 M
CTAB
3%(W /V)
PVP40
5%(W /V)
β-巯基乙醇
2%（V/V）使用前加入
❖ PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶
➢ 变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中，从而可通过离心将两者分开。
细胞器DNA－差速离心法
线粒体和叶绿体是生物体内半自主性细胞器，自身可编码蛋白，它们的比重和大小一定，因而在同一离心场内的沉降速度也一定，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。
核酸的提取操作和鉴定
核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。
一、核酸的分类
DNA (脱氧核糖核酸)
主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA
（cpDNA），质粒DNA。
RNA（核糖核酸）

核酸化学—核酸的提取、分离和含量测定

核苷 nucleoside
磷酸 phosphate
嘌呤碱 purine base 或嘧啶碱 pyrimidine base
（碱基 base）
核糖 ribose 或脱氧核糖 deoxyribose
（戊糖 amyl sugar）
（一）戊糖Pentose
组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为 βD-2-脱氧核糖；RNA所含的糖则为β-D-核糖。
DNA和RNA分别有四种基本核苷酸。
二、DNA的二级结构
（一）DNA二级结构的典型双螺旋结构模型
1953年，Jamse. Wstson和Francis. Crick 在前人研究的基础上，推导出DNA的双螺旋结构模型及DNA复制机制。
James Watson (23y)
丹麦哥本哈根
Francis Crick (35y)
HOCH2 O
OH
HH
H
H
OH OH
D-核糖
Ribose
HOCH2 O
OH
HH
H
H
OH H
D-2-脱氧核糖
Deoxyribose
（二）碱基（Base）核酸中的碱基分为两类：嘌呤碱：腺嘌呤A 、鸟嘌呤G 嘧啶碱：胞嘧啶C 、胸腺嘧啶T、尿嘧啶U
嘌呤（Purine）
腺嘌呤Adenine
NH 2 N

核酸分离鉴定实验报告

引言：

核酸分离鉴定是一项重要的实验技术，广泛应用于生物学、医学和法医学等领域。通过分离和鉴定核酸，我们可以了解生物体的基因组结构、基因表达以及遗传变异等信息，为研究生物学问题提供了有力的工具。本实验旨在通过核酸分离鉴定的方法，对样本中的DNA进行提取、纯化和鉴定。

材料与方法：

1. 实验所需材料：

- 细胞样本：选择合适的生物样本，如人体组织、血液、植物叶片等。

- 细胞破碎缓冲液：含有细胞破碎酶和蛋白酶抑制剂的缓冲液。

- DNA提取缓冲液：含有离子、洗涤剂和蛋白酶的缓冲液。

- 乙酰酸：用于沉淀DNA。

- 乙醇：用于洗涤DNA。

- 离心管、离心机、恒温水浴等实验仪器。

2. 实验步骤：

1）取适量的细胞样本，加入细胞破碎缓冲液，使细胞破碎释放DNA。

2）加入DNA提取缓冲液，与细胞破碎缓冲液中的DNA结合形成DNA-缓冲液复合物。

3）通过离心将DNA-缓冲液复合物沉淀到离心管底部。

4）去除上清液，加入乙酸使DNA沉淀。

5）离心沉淀，去除上清液。

6）加入乙醇洗涤DNA，去除杂质。

7）离心洗涤液，去除乙醇。

8）将离心管倒置晾干，使DNA干燥。

9）加入适量的无菌水溶解DNA。

结果与讨论：

经过上述步骤，我们成功地从细胞样本中提取和纯化了DNA。通过电泳分析，

我们可以观察到DNA带状图谱，判断DNA的纯度和完整性。在电泳图中，我

们可以看到DNA分子呈现出明显的带状条带，条带的大小和形态可以反映

DNA的大小和形态多样性。同时，我们可以通过比对DNA的条带与已知DNA

核酸的鉴定实验报告

引言：

核酸是生物体内一种重要的生物大分子，它包含了生物体遗传信息的全部内容。通过对核酸的鉴定实验，我们可以了解到生物的遗传特征、亲缘关系和疾病的

发生机制等重要信息。本次实验旨在通过核酸的鉴定，探究生物体的遗传特征

和亲缘关系，并进一步了解核酸在生物学中的重要作用。

实验方法：

本次实验采用了聚合酶链式反应（PCR）和凝胶电泳两种方法进行核酸的鉴定。首先，我们需要提取待鉴定生物体中的DNA。这一步骤需要将待鉴定生物体的

组织样本经过裂解、蛋白酶处理和酒精沉淀等步骤，最终得到纯净的DNA样本。接下来，利用PCR技术扩增DNA。我们需要设计一对特异性引物，使其能够识别并扩增我们感兴趣的DNA片段。通过PCR反应，DNA片段可以被扩增成数

以百万计的拷贝，以便后续的分析和检测。

最后，我们将扩增后的DNA样本进行凝胶电泳分析。将DNA样本与DNA分

子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，经过电泳后，根据DNA片段的大小，我们可以观察到不同大小的DNA条带，并通过与标准品的比对，确定待鉴定样本中的DNA片段大小。

实验结果：

通过实验，我们成功地提取了待鉴定生物体的DNA，并进行了PCR扩增和凝胶电泳分析。在凝胶电泳图上，我们观察到了明显的DNA条带，这表明我们成功地扩增了感兴趣的DNA片段。

根据实验结果，我们可以进一步分析待鉴定生物体的遗传特征和亲缘关系。通过比对不同个体的DNA条带，我们可以观察到它们之间的差异和相似性。如果两个个体的DNA条带相似度高，那么它们很可能具有较近的亲缘关系；相反，如果DNA条带差异较大，则说明它们之间的亲缘关系较远。

实验十六动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定实验报告

实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定__实验报告实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定

一、实验目的

1.掌握动物组织中核酸的提取方法；

2.了解核酸的基本组成成分；

3.学会利用分光光度计测定核酸含量；

4.通过实验，加强理论与实践的结合，提高实验技能。

二、实验原理

核酸是生物体内的一种重要生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两种。在动物组织中，DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。核酸的提取通常采用酚-氯仿抽提法，其原理是利用两种物质的极性差异进行分离。酚（Phenol）是一种弱酸，可与水形成氢键，但与氯仿（Chloroform）不溶，因此可以将酚相和水相分离。在水相中，氯仿与水互不相溶，而酚与氯仿互溶，因此可以将酚从水相中去除。通过多次抽提，可以将DNA和RNA有效分离。

三、实验步骤

1.实验准备

（1）实验材料：动物组织（肝脏、肌肉等）、研钵、离心管、移液器、枪头、称量纸、酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、70%乙醇、0.15mol/L NaCl溶液、0.01mol/L Tris-HCl缓冲液（pH=7.0）、0.001mol/L EDTA溶

液（pH=8.0）、0.04mol/L Na2HPO4溶液（pH=7.0）、0.04mol/L NaH2PO4

溶液（pH=7.0）、双蒸水。

（2）设备仪器：冷冻高速离心机、漩涡振荡器、电子天平、烘箱、分光光度计。

2.实验步骤

（1）样品制备：称取50-100mg动物组织，在研钵中研磨成粉末状，加入适量双蒸水，漩涡振荡器混匀。将悬浊液转移到离心管中，以12000rpm

细胞核的制备实验原理及步骤

实验3 细胞核的制备、鉴定

原理

为研究细胞核及其组成成分，如：染色质、DNA及核内小分子RNA等，需分离制备细胞核。对于所分离的细胞核，要求保持形态上的完整性，核内成分不渗漏，不污染细胞质等其他细胞器，并且能有较高的得率。根据实验的需要可以选择不同的分离细胞核的方法，通常用来分离细胞核的方法主要有二大类：第一大类有机溶剂的方法，经Allfrey改进的方法，主要包括如下操作过程：（1）将组织冷冻干燥；（2）研碎细胞；（3）利用不同比重有机溶剂使细胞核与细胞质其他成分分开。这类方法可以防止细胞核内水溶性的成分丢失，同时也能阻止细胞质的某些成分渗入细胞核内。虽然有这些优点，但这种方法不能保持细胞核的正常形态，某些酶活力可能因变性而丧失。所以一般采用非水溶剂分离细胞核，常用于定量分析细胞核的生化成分及其他一些特殊的研究目的。第二大类，1956年由Chauveau等人提出，用高密度介质来分离细胞核。由于细胞核的比重较大，在高密度介质中，在高速离心条件下被沉降下来，从而达到细胞核与细胞质其他成分分开的目的。Chauveau的方法是将动物肝脏直接在2.2mol/L蔗糖溶液中匀浆，然后高速离心40 000g 1小时，细胞核沉淀在底部，线粒体和完整细胞，包括红血球漂浮在液面，通过一步操作好可分离得到细胞核。其后又有不少研究工作者对此方法作了改进，例如加进氯化钙、氯化镁、氯化钾等，改变分离介质的渗透压；选择介质的pH以及不同的高密度蔗糖溶液离心方法等。这样减少了细胞核的脆性，防止聚集，维持恒定的pH，就能保持细胞核的精细结构。虽然这一方法比较简单，能得到较高纯度的细胞核，也已被广泛采用，但是实验需要高速离心机，这在一般实验室不能进行，另外此方法要用高浓度的蔗糖，如果要分离大量的细胞核，也很不经济。

核酸的分离与识别实验报告

核酸的分离与识别

一、实验原理

分离提纯核酸的主要过程，一般先要经过以下几个步骤：①细胞组织的破碎；②解聚核蛋白并使蛋白质变性；③除去蛋白质和多糖等杂质；④抽提和沉淀核酸等。

破碎细胞的方法有物理法（如超声波、匀浆和组织捣碎等）、化学和生化的方法（如去污剂、蛋白质变性剂和溶菌酶等）。本实验采用组织捣碎的方法，捣碎之前加入柠檬酸钠抑制DNA降解酶的作用。

在细胞核内，核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物——核糖核蛋白（RNP）和脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在的，利用在0.14mol/L盐溶液中RNP溶解而DNP溶解度最小的性质将两者分开。另外，DNP能溶于水和高浓度盐溶液。

在核酸提纯的过程中，除去蛋白质是很关键的一步。要除去蛋白质首先是使核蛋白解聚和蛋白质变性，常用的方法有：浓盐法（10%NaCI）、去污剂和有机溶剂法等。本实验中，1.71mol/L的NaCl使蛋白质变性，而后用氯仿抽提除去蛋白质。利用氯仿-异戊醇解聚分离蛋白质，从而分离DNA和蛋白质。

经上述分离纯化处理后的核酸盐溶液，再利用其不溶于有机溶剂的性质，使其在适当浓度的亲水有机溶剂（如乙醇）中成絮状沉淀析出。

二、仪器试剂

(1)主要仪器

电动组织捣碎机、大容量离心机、冰箱、具塞磨口玻璃锥形瓶、真空干燥器、烧杯等。

(2)主要试剂

NaCI(0.1mol/L)、pH=7.0柠檬酸钠混合盐溶液(0.05mol/L)、NaCI溶液(1.71mol/L)、氯仿-异戊醇溶液(体积比为24:1)、95%乙醇、无水乙醇等。

三、实验步骤、现象与结果