高效液相色谱法测定南果梨中绿原酸的含量_辛广

2004, Vol. 25, No. 4食品科学※分析检验高效液相色谱法测定南果梨中绿原酸的含量辛　广１，２，刘长江２，侯冬岩１，吴俊青１（１．鞍山师范学院化学系，辽宁　鞍山 １１４００５；２．沈阳农业大学食品学院，辽宁　沈阳 １１０１６１）摘 要：目的：建立测定南果梨中绿原酸含量的高效液相色谱法。

方法：Ｃ１８色谱柱（２５０×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇－０．４％磷酸溶液（２５：７５）；检测波长：３２７ｎｍ。

结果：精密度试验：　ＲＳＤ为１．９％，ｎ＝６；加样回收率：９８．５％～１０２．６％，ＲＳＤ为１．６％～２．１％。

结论：南果梨果心、果肉、果皮中绿原酸的含量分别为１．７８５、０．２７１、０．７１４　ｍｇ／ｇ。

关键词：高效液相色谱法；南果梨；绿原酸Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　Ａｃｉｄ　ｏｆ　Ｎａｎｇｕｏｌｉ　Ｐｅａｒ ｂｙ ＨＰＬＣＸＩＮ　Ｇｕａｎｇ１，２，ＬＩＵ　Ｃｈａｎｇ－ｊｉａｎｇ２，ＨＯＵ　Ｄｏｎｇ－ｙａｎ１，ＷＵ　Ｊｕｎ－ｑｉｎｇ１（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｎｓｈａｎ Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｎｓｈａｎ １１４００５，　Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ，　Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０１６１，　Ｃｈｉｎａ　）Ａｂｓｔｒａｃｔ　：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｎｅｗ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ（ＣＧＡ）ｉｎ　Ｎａｎｇｕｏｌｉ　ｐｅａｒ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＣＧＡ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｓｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　Ｃ１８　ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，１０μｍ） ｗｉｔｈ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　ａｔ　３２７ｎｍ，　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ　ＣＨ３ＯＨ－０．４％　Ｈ３ＰＯ４　（２５：７５）．Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ＣＧＡ　ｗａｓ　９８．５％～１０２．６％，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　（ＲＳＤ）　ｗａｓ　１．６％～２．１％　（ｎ＝５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＧＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｒｅ　ｐｅｅｌ　ａｎｄ　ｐｕｌｐ　ｏｆ　Ｎａｎｇｕｏｌｉ　ｐｅａｒｗｅｒｅ　１．７８５，　０．２７１　ａｎｄ　０．７１４ｍｇ／ｇ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；Ｎａｎｇｕｏｌｉ　ｐｅａｒ；ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ中图分类号：Ｑ９４６．８１ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００２－６６３０（２００４）０４－０１５０－０３收稿日期：２００３－０８－０３基金项目：辽宁省教育厅高等学校科学研究资助项目（２０２４２０１０５５）作者简介：辛广（１９６６－），男，副教授，在职博士，从事农产品贮藏与加工及生物分析的教学、研究工作。

南果梨是秋子梨系统（Ｐｙｒｕｓ　ｕｓｓｒｉｅｎｓｉｓ　Ｍａｘｉｍ）中的优良品种，是辽宁鞍山、海城、辽阳东部低山丘陵区特产水果，已有一百年的栽培历史。

现有栽培约５００多万株，产量约６０多万吨。

南果梨是呼吸跃变型果实［１］，自然条件下南果梨后熟１５～２０ｄ色泽鲜艳、香气浓郁、肉质细腻、酸甜多汁，含可溶性固形物１５．５％～１６．７％，达到最佳食用品质。

以后随衰老加剧，果心、果皮、果肉开始褐变，最后软烂。

为了提高南果梨的经济效益，可采用低温贮藏，条件为：温度－０．５～０．５℃、相对湿度８５％～９５％，可贮藏到来年４月份。

在贮藏过程中，南果梨果心、果皮及果肉易发生酶促褐变，在出库较晚的３、４月份更为严重。

它不仅影响南果梨的感官，也极大降低了其营养价值，从而大大降低南果梨的商品价值。

前人经过大量研究证明多酚类是引起水果酶促褐变的底物。

有学者曾用层析法初步断定绿原酸是南果梨酶褐变的底物之一［２，３］。

对其他植物中的绿原酸的定量分析已有大量报道［４～１０］，但对南果梨的绿原酸定量研究不多，用ＨＰＬＣ法测量南果梨中的绿原酸研究还未见报道。

本文用ＨＰＬＣ法测量南果梨不同部位绿原酸含量，为探索南果梨贮藏及加工过程中绿原酸含量变化提供可靠方法。

１材料与方法１．１试材、药品和仪器南果梨 九月中旬采于辽宁鞍山唐家房。

绿原酸标样 Ｓｉｇｍａ公司；甲醇为色谱纯，乙醇，三氯乙酸，磷酸均为分析纯；Ｗａｔｅｒｓ　５１０高效液相色谱仪 美国。

１．２实验方法１．２．１实验条件的选择１．２．１．１色谱条件美国Ｗａｔｅｒｓ　５１０高效液相色谱仪；４８６紫外检测器；色谱柱：迪马公司Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ ５μｍ　２５０×４．６ｍｍ151※分析检验食品科学2004, Vol. 25, No. 4Ｃ１８；流动相：甲醇－０．４％磷酸溶液（２５：７５）；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：室温；进样体积：５μｌ；检测波长：对标样溶液进行２００～４００ｎｍ扫描，发现绿原酸在３２７ｎｍ有最大吸收峰，因此检测波长为３２７ｎｍ。

１．２．１．２标准品溶液制备及线形范围精密称取绿原酸对照品１５．６ｍｇ，置于５０ｍｌ容量瓶中，加入９９．５％无水乙醇稀释至刻度，摇匀（０．３１２ｍｇ／ｍｌ），精密吸取１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ｍｌ，分别置１０ｍｌ容量瓶中，加９９．５％无水乙醇稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液各５μｌ，进样，测定浓度（ｍｇ／ｍｌ）与峰面积之间关系，求得回归方程：Ｙ＝４７１６７２５Ｘ＋５６０９．０１４（ｒ＝０．９９９６），绿原酸在０．０３１～０．１８７ｍｇ／ｍｌ范围内呈良好的线性关系（如图１）。

１．２．１．３精密度试验精密吸取相同浓度的绿原酸对照品溶液（０．０４９９ｍｇ／ｍｌ）５μｌ，注入液相色谱仪，连续进样６次，ＲＳＤ为１．９％。

１．２．１．４加样回收率试验精密量取绿原酸对照品溶液（０．８６８ｍｇ／ｍｌ）０．６、１．０、１．４ｍｌ分别置１０ｍｌ容量瓶中，各加已测知含量样品（０．１４５ｍｇ／ｍｌ）１．０ｍｌ，无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

以上述条件与方法测定，结果见表１。

表１ 加样回收率实验结果（ｎ＝５）编号加入量（ｍｇ／ｍｌ）回收率（％）ＲＳＤ（％）１０．０６７９８．５１．６２０．１０１９９．９１．８３０．１３９１０２．６２．１１．２．２样品的测定１．２．２．１样品制备称取一定量南果梨果皮、果心及果肉，在组织捣碎匀浆机匀浆２ｍｉｎ（２００００ｒ／ｍｉｎ），称取研好的南果梨果皮、果心及果肉各２ｇ，移入２５ｍｌ容量瓶中，加入１ｍｌ９％三氯乙酸溶液，然后用无水乙醇定容至刻度。

先用玻璃漏斗过滤，再用针头过滤器过滤，得到绿原酸待测液。

１．２．２．２含量测定：在本色谱条件下，对照品与样品的色谱图见图２。

采用外标法测定了南果梨果皮、果心及果肉中绿原酸含量，结果见表２。

表２ 样品含量测定结果样品含量（ｍｇ／ｇ）ＲＳＤ％果肉０．２７１果皮０．７１４１．４果心１．７８５２结论与讨论２．１实验过程中，对制备南果梨中绿原酸待测液是否加三氯乙酸溶液进行了比较研究。

结果表明：加入三氯乙酸的样品中绿原酸含量稳定、回收率高，所测高效液相色谱图中绿原酸峰无杂质干扰。

未加入三氯乙酸的样品因未除去梨中的蛋白质，蛋白质极易变性，容易堵塞色谱柱，而且对绿原酸峰也有干扰，因此会影响分离效果。

２．２曾选用乙腈－０．４％磷酸溶液（１７：８３）作流动相，结果绿原酸出峰时间过早，分离效果不好。

而且，乙腈对环境的污染特别严重。

选用甲醇—磷酸溶液也完全可以达到预期的分离效果，相比之下，甲醇对环境的污染要低于乙腈。

而用甲醇－０．４％磷酸溶液（１５：８５）、（２０：８０）2004, Vol. 25, No. 4食品科学※营养卫生作流动相分离效果也较好，但出峰时间太长。

因此，经反复实验得到文中所选流动相较合适，分离度较好。

２．３南果梨果心中绿原酸的含量最高为１．７８５ｍｇ／ｇ是果肉的６．５９倍，果皮的２．５倍。

与南果梨在采后果心褐变强于果皮、果肉的现象一致，进一步说明了绿原酸是南果梨采后酶褐变的底物之一。

参考文献：［１］吴震，别小妹，王和福．南国梨果实后熟过程生理生化变化的研究［Ｊ］．沈阳农业大学学报，１９９７，２８（２）：１１１－１１５．［２］周亚凤，马岩松，张平．　南果梨酶促褐变的生化机制［Ｊ］．北方果树，１９９９，（１）：８－１０．［３］马岩松，车芙蓉，张平，等．南国梨多酚氧化酶最适合作用酶促褐变底物的分析确定［Ｊ］．食品科学，２０００，２１（１）：１１－１３．［４］魏明，苏启表．　气相色谱法测定烟草中的绿原酸［Ｊ］．　郑州轻工业学院学报（自然科学版），２００１，１１（３）：５０－５２．［５］王巧，毕开顺．　反相高效液相色谱法测定杜仲中绿原酸的含量［Ｊ］．　河北医科大学学报，２００１，２２（１）：３３－３４．［６］朱玉，陈浩．薄层色谱法分析葵花仁粕中的绿原酸［Ｊ］．　色谱，２００１，１９（１）：８２－８４．［７］孙增先，李永溟．　双波长比值光谱法测定银黄口服液中绿原酸和黄芩苷的含量［Ｊ］．　中国现代应用药学，２００１，１８（１）：５５－５７．［８］孙玉刚，李应会．流动注射电致化学发光法测定香烟中的绿原酸［Ｊ］．分析化学，２００１，２９（４）：４９５－４９５．［９］刘吉金．　薄层扫描法测定玄冬冲剂中绿原酸的含量［Ｊ］．　药物分析杂志，２０００，２０（２）：１３１－１３２．［１０］赵敬湘，张婷，等．　毛细管区带电泳法测定中药金银花中绿原酸的含量［Ｊ］．　中草药，２０００，３１（６）：４３２－４３２．生理条件下ＰＤＦ对Pb2+、Cu2+、Zn2+、Ca2+的吸附研究吕金顺，王小芳　（天水师范学院化学系，甘肃　天水 ７４１０００）摘 要：在生理条件下（ｐＨ２和ｐＨ７，３７℃），用马铃薯膳食纤维（ＰＤＦ）对金属离子Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋进行吸附试验。

结果表明，两种酸度条件下ＰＤＦ对Ｐｂ２＋的吸附较大，对Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋的吸附较小，对Ｃａ２＋吸附很小；ＰＤＦ用量增大（减小），吸附量（ｑｅ）减小（增大）。

ＰＤＦ　对重金属离子的吸附表明ＰＤＦ具有较好的生理活性。

用作膳食纤维时应根据需求，按照已研究的用量与吸附量关系配制。

其吸附作用是化学吸附与物理吸附的综合结果。

ＰＤＦ的疏松结构和红外光谱中较多的醛羧基团证明了这一点。

吸附数据线形拟合表明物理吸附符合Ｌｉｇｎｉｕｒ单分子层吸附机理。

关键词：马铃薯膳食纤维（ＰＤＦ）；金属离子（Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋）；吸附机理Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ＰＤＦ　Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋　ｕｎｄｅｒ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ＣｏｎｄｉｔｉｏｎＬＶ　Ｊｉｎ－ｓｈｕｎ，ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｆａｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ｔｉａｎｓｈｕｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｔｉａｎｓｈｕｉ ７４１０００，　Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　（ｐＨ２　ａｎｄ　ｐＨ７，３７℃），ｔｈｅ　Ｐｏｔａｔｏ　Ｄｉｅｔａｒｙ　Ｆｉｂｅｒ（ＰＤＦ）　ｍａｄｅ　ｂｙ　ｓｐｅｎｔ　ｓｔａｒｃｈｔａｋｅｎ　ｆｒｏｍ　ｐｏｔａｔｏ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｉｔｓ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｔｏ　ｓｕｃｈ　ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ　ａｓ　Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋　ａｎｄ　Ｃａ２＋．　Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｓｈｏｗｅｄ，ｕｎｄｅｒ　ｔｗｏ　ａｃｉｄｉｔｙ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｂｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ＰＤＦ　ｔｏ　Ｐｂ２＋　ｗａｓ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｔｏ　Ｃｕ２＋　ａｎｄ　Ｚｎ２＋，　ｗｈｉｌｅ　ｔｈａｔ　ｔｏ　Ｃａ２＋ｗａｓ　ｔｈｅ　ｗｅａｋｅｓｔ．　Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｒ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｆ　ＰＤＦ　ｉｔｓ　ａｄｓｏｒｂｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　（ｑｅ）　ｔｏ　ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ　ｗｏｕｌｄ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｏｒ　ｉｎｃｒｅａｓｅ．收稿日期：２００３－０８－０４基金项目：甘肃省自然基金资助项目（ＺＳ０３１－Ａ２５－０２５－Ｄ）作者简介：吕金顺（１９５８－），男，副教授，从事天然有机与农副产品开发研究。