土壤微生物生物量的测定方法氯仿熏蒸

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氯仿薰蒸浸提法测定土壤微生物生物量磷

一、采样与样品预处理（同微生物生物量碳）

土壤样品的采集方法和要求与测定其它土壤性质时没有本质区别。采集到的新鲜土壤样品立即去除植物残体、根系和可见的土壤动物(如蚯蚓)等,然后迅速过筛(2～3 mm)，或放在低温下(2～4℃)保存。如果土壤太湿无法过筛，进行晾干时，必须经常翻动土壤，避免局部风干导致微生物死亡。过筛的土壤样品调节到田间持水量的50%左右，在室温下于密闭装置中预培养1周，密闭容器中要放入两个50mL的烧杯，分别加入水和稀NaOH，以保持其湿度和吸收释放的CO2。预培养后的土壤最好立即分析，若需要放置一段时间，在低温下(2～4℃)最好不要超过10d。

二、方法—氯仿薰蒸浸提法（FE）

1、方法原理

土壤经氯仿薰蒸处理，微生物被杀死，细胞破裂后，细胞内容物释放到土壤中，导致土壤中的可提取的磷大幅度增加。通过测定浸提液中磷的增加量，估算土壤微生物量磷。浸提液中磷用钼锑抗比色法测定。

2、仪器及设备

培养箱；真空干燥器；真空泵；往复式振荡机(速率200rev/min)；冰柜；分光光度计3、试剂

1.无乙醇氯仿：量取500 mL 氯仿于1000 mL的分液漏斗中，加入50mL硫酸溶液

[ϕ(H2SO4)=5%]，充分摇匀，弃除上层硫酸溶液，如此进行3次。再加入50 mL去离子水，同上摇匀，弃去上部的水分，如此进行5次。得到纯氯仿存放在棕色瓶中，并加入约20g无水K2CO3，在冰箱的冷藏室中保存备用。（试剂浓硫酸ϕ(H2SO4)=95~98% ，稀释19倍）

2.0.5mol/L NaHCO3：42.0g NaHCO3(化学纯)溶于800mL水中，用0.5mol/L NaOH调节溶

土壤微生物生物量的测定方法

土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）

基本原理

新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生

物生物量碳，用一定体积的LK

2SO

溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微

生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

实验仪器

自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

实验试剂

1）无乙醇氯仿（CHCL

）；

2）L硫酸钾溶液：称取87g K

2SO

溶于1L蒸馏水中

3）工作曲线的配制：用L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、

70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下，

仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）

操作步骤

土壤的前处理（过筛和水分调节略）

熏蒸

称取新鲜（相当于干土，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO

，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。

抽真空处理

熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完

氯仿熏蒸浸提法测定土壤微生物碳氮

采用氯仿熏蒸0.5 mol/L K2SO4浸提法测定土壤微生物量碳、氮。首先将土样在25℃下密封培养7d 左右，然后称取预处理土样6 份放入烧杯中，将 3 份其置于底部有少量Na OH、200 m L 水和去乙醇氯仿的真空干燥器中，抽真空后保持氯仿沸腾3～5 min，然后，将干燥器移置在黑暗条件下25℃熏蒸土壤24 h，再次抽真空完全去除土壤中的氯仿。将熏蒸好的土壤转移到200 m L 提取瓶中，加入0.5 mol/L K2SO4浸提液（水∶土质量比为4∶1）。另外3 份做未熏蒸空白试验，每份重复3 次，分别测定浸提液中的有机碳和全氮含量。其中浸提液中的可溶性有机碳采用总有机碳分析仪（Phoenix 8000，美国）测定，由熏蒸与未熏蒸土样有机碳的差值除以转换系数，计算得到微生物量碳。浸提液中土壤可溶性全氮采用碱性过硫酸钾氧化法测定，浸提液中无机氮采用流动分析仪测定，土壤可溶性有机氮是可溶性全氮和无机氮的差值。熏蒸与未熏蒸土样的全氮的差值除以转换系数，计算得到微生物量氮。微生物量碳、氮的转换系数为0.45。土壤的有机质、全氮、全磷、有效磷、速效钾、NO3--N、NH4+-N、pH 值采用常规的土壤农化分析方法测定。

土壤微生物生物量的测定方法氯仿熏蒸

土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）

1.1 基本原理

新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器

自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂

1）无乙醇氯仿（CHCL

）；

2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K

2SO

溶于1L蒸馏水中

3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、

70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下，

仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）

1.4 操作步骤

1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）

1.4.2 熏蒸

称取新鲜（相当于干土10.0g，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml 小烧杯中。将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO

土壤微生物量碳氮测定方法

1.23.1 土壤微生物碳的测定——TOC-V CPH有机碳分析仪

一、方法原理

土壤有机碳的测量方法主要有两种，即氯仿熏蒸培养法和氯仿熏蒸—直接浸提法。

1．氯仿熏蒸培养法[1]：土壤经氯仿熏蒸后再进行培养，测定培养时间内熏蒸与未熏蒸处理所释放CO2之差来计算土壤生物量碳。

2．氯仿熏蒸直接浸提法[2]：土壤经氯仿熏蒸后直接浸提进行，测定浸提液中的碳含量，以熏蒸和不熏蒸土壤中总碳的差值为基础计算土壤微生物含碳量。

直接提取法与氯仿熏蒸培养法相比，直接提取法具有简单、快速、测定结果的重复性较好等优点。直接提取法测定土壤微生物量的碳的方法日趋成熟。现在氯仿熏蒸—K2SO4提取法已成为国内外最常用的测定土壤微生物碳的方法。本实验以氯仿熏蒸直接浸提法为例介绍土壤微生物量碳氮的浸提与测定。

二、主要仪器

振荡机、真空干燥器、真空泵、TOC-V CPH有机碳分析仪。

二、试剂

1．氯仿（去乙醇）：普通氯仿一般含有乙醇作为稳定剂，使用前要去除乙醇。将氯仿按照1︰2（v/v）的比例与蒸馏水一起放入分液漏斗中，充分振动，慢慢放出底部氯仿，重复3次。得到的无乙醇氯仿加入无水CaCl2，以除去氯仿中的水分。

2．0.5 mol·L-1 K2SO4浸提液：43.57 g分析纯K2SO4 定溶至1 L。

四、操作步骤

称取过2 mm筛的新鲜土样12.5 g六份，置于小烧杯中。将其中三份小烧杯放入真空干燥器中，干燥器底部放3个烧杯，其中一个放氯仿，烧杯内放少许玻璃珠（防爆），另一个放水（保持湿度），再放一杯稀NaOH。抽真空时，使氯仿剧烈沸腾3-5 min，关掉真空干燥器阀门，在暗室放置24 h。熏蒸结束后，打开干燥器阀门，取出氯仿，在通风厨中使氯仿全部散尽。另三份土壤放入另一干燥器中，但不放氯仿。

熏蒸培养法测量土壤微生物生物量碳

一、实验原理：

用氯仿杀死土壤中的微生物，并接种新的土壤，培养微生物使之释放二氧化碳。测量一定时间内熏蒸土壤与为熏蒸土壤中微生物释放的二氧化碳量来估算土壤中微生物的生物量碳。

二、实验步骤：

1.氯仿去乙醇。用锡箔纸包裹分液漏斗（纵向留出一条细缝，以便观察分层情况）。向分液漏斗中加入氯仿和氯仿一半体积的蒸馏水，盖上分液漏斗的盖子，上下摇晃数次。静置片刻，放出分液漏斗下层的氯仿。

2.抽气。用细筛筛选250g土壤于500mL烧杯中，并将烧杯至于干燥器中。干燥器内放入盛有少量蒸馏水的小烧杯。另取100mL干燥的烧杯一个，向其中加入50mL去乙醇氯仿和干燥的玻璃珠（防止氯仿爆沸，且要铺满整个烧杯底部）后，将之放入干燥器中。在盖子内侧贴上一条蒸馏水润湿的滤纸条。盖好干燥器的盖子，用真空泵抽气至氯仿沸腾，关闭干燥器的活塞。把干燥器放入遮光恒温（25℃）的条件下培养24小时。

3.排出氯仿。取出干燥器内的氯仿和湿润的滤纸条，在次抽气三分钟后打开盖子散发土壤中的氯仿，如此连续反复三次，就能排出土壤中的氯仿。

4.另筛取250g土壤，不熏蒸。分别在熏蒸土壤和未熏蒸土壤中加入1g新鲜土壤且充分混匀。调节土壤水分至罪大含水量的55％。将两份土壤各放入一个未放干燥剂的干燥器中。在干燥器中放入盛有20mL蒸馏水的烧杯盛有100mL 1mol/L NaOH溶液，盖好盖子，培养十天。

5.滴定。取出NaOH溶液，取25mL于250mL容量瓶中，定溶。从容量瓶中取出20mL于150mL三角瓶中，用1mol/L的HCl溶液调节Ph至10。再用0.05mol/L的HCl溶液滴定至Ph为8.3，继续滴定至Ph为3.7，记录Ph从8.3到3.7所消耗HCl溶液的体积。

土壤微生物量碳氮测定方法

1.23.1 土壤微生物碳的测定——TOC-V CPH有机碳分析仪

一、方法原理

土壤有机碳的测量方法主要有两种，即氯仿熏蒸培养法和氯仿熏蒸—直接浸提法。

1．氯仿熏蒸培养法[1]：土壤经氯仿熏蒸后再进行培养，测定培养时间内熏蒸与未熏蒸处理所释放CO2之差来计算土壤生物量碳。

二、主要仪器

振荡机、真空干燥器、真空泵、TOC-V CPH有机碳分析仪。

二、试剂

2．0.5 mol·L-1 K2SO4浸提液：43.57 g分析纯K2SO4 定溶至1 L。

四、操作步骤

土壤微生物生物量的测定方法汇总

操作步骤：

1.准备工作：采集土壤样品，并将土壤样品分为适量的小样品。

2.氯仿熏蒸：将一定量的小样品放入氯仿熏蒸瓶中，然后加入适量的氯仿，并快速将瓶口封紧。

3.震荡：用震荡器对氯仿与土壤样品进行充分的混合震荡，使氯仿充分与土壤样品接触。

4.放置：将瓶子放置在室温下静置一段时间，一般为24小时，使土壤样品中的微生物充分溶解到氯仿中。

5.分液：将上清液和沉淀物分离。上清液中含有溶解在氯仿中的微生物细胞，沉淀物中含有没有溶解的土壤颗粒和其他杂质。

6.校验：对上清液进行校验，可以采用PFLA（没有悬浮杂质时的上清液）或PFLA-Na2CO3（有悬浮杂质时的上清液）校验液。

7.测定：将校验液填入比色皿中，使用分光光度计对比色皿中的液体进行测定，并记录吸光度值。

原理：

氯仿熏蒸法通过将土壤样品与氯仿混合，可以将土壤中的微生物细胞全部溶解到氯仿中。通过将溶解在氯仿中的微生物细胞与校验液比色，在分光光度计上测定吸光度值，从而确定土壤中微生物的生物量。

氯仿熏蒸法的优点：

1.操作简单，不需要复杂的设备和技术支持。

2.适用于各种类型的土壤，包括砂土、壤土、黏土等。

3.测定结果可靠，具有较高的重复性和准确性。

氯仿熏蒸法的缺点：

1.只能测定细菌和放线菌等氧气需氧微生物，不能测定厌氧微生物的生物量。

2.氯仿对环境和人体有一定的毒性和危险性，操作时需要注意安全。总结：

氯仿熏蒸法是一种常用的测定土壤微生物生物量的方法。通过将土壤样品与氯仿混合，将微生物细胞溶解到氯仿中，然后通过比色法测定吸光度值，从而确定土壤中微生物的生物量。氯仿熏蒸法操作简单，适用于各种类型的土壤，且结果可靠。但需要注意操作时的安全性。除了氯仿熏蒸法外，还有其他一些方法也可用于测定土壤微生物生物量，如酚酸法、磷酸化氧化法等，可以根据实际需求选择合适的方法进行测定。

土壤微生物量测定方法

一、土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸－K2SO4提取-碳分析仪器法）

1、试剂

（1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 2（v : v）加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。

（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L-1]：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳，从而影响滴定终点判断和测定的准确度。配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱，可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d。待碳酸钠沉降后，取56 ml 50%氢氧化钠上清液（约19 mol L-1），用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。

（3）硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5 mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾，用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L，盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h即可。

（4）六偏磷酸钠溶液[ρ（Na）= 5 g 100 ml-1，pH 2.0]：称取50.0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH 2.0，用高纯度去离子水定容至1 L。要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制；由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)

土壤微生物生物量的测定方法

1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）

1.1 基本原理

1.2 实验仪器

自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂

1）无乙醇氯仿（CHCL3）；

2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中

3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、

70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下，

仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）

1.4 操作步骤

1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）

1.4.2 熏蒸

称取新鲜（相当于干土10.0g，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。

一种土壤微生物生物量磷的测定方法与流程

土壤微生物生物量磷是评估土壤肥力和生态系统中磷循环的重要指标。本文将介绍一种测定土壤微生物生物量磷的方法及其操作流程，以期为土壤学研究及相关领域提供参考。

一、测定方法概述

土壤微生物生物量磷（Microbial Biomass Phosphorus, MBP）的测定通常采用化学提取法，结合磷的测定手段，来评估土壤中微生物生物量磷的含量。本文介绍的方法为氯仿熏蒸法，该法能够有效提取土壤微生物生物量磷，并结合紫外分光光度法或其它磷测定方法进行定量分析。

二、测定流程

1.土壤样品的采集与预处理

（1）在研究区域内选择具有代表性的土壤采样点。

（2）使用不锈钢或玻璃采样器采集表层土壤（0-20cm）。

（3）将采集的土壤样品混合均匀，去除植物残体和石头等杂质。

（4）将土壤样品分成两份，一份用于测定土壤微生物生物量磷，另一份用于测定土壤全磷。

2.氯仿熏蒸

（1）将预处理后的土壤样品放入干燥器中。

（2）将干燥器内的氯仿蒸汽浓度调节至5%，熏蒸24小时。

（3）熏蒸过程中，保持干燥器内温度恒定，避免氯仿蒸汽浓度下降。

3.土壤微生物生物量磷的提取

（1）熏蒸后的土壤样品取出，立即加入100mL 0.5mol/L NaHCO3溶液。

（2）将提取液在恒温振荡器中振荡1小时，以充分提取土壤微生物生物量磷。

（3）提取液过滤，收集滤液，用于后续磷的测定。

4.土壤全磷的测定

（1）将另一份预处理后的土壤样品进行消解。

（2）消解后的样品采用磷的测定方法（如紫外分光光度法）进行全磷含量的测定。

土壤微生物量碳测定方法

土壤微生物量碳（Soil microbial biomass carbon，SMBC）是指活体微生物在土壤中的碳含量，是土壤微生物数量的指标之一，反映了土壤中微生物活动的水平。测定土壤微生物量碳的方法有多种，包括气体护膜冻融法、氟化钠浸提法、氯仿蒸腾法等。下面将介绍常用的土壤微生物量碳测定方法。

一、气体护膜冻融法（gas chromatographic method with chloroform fumigation extraction，CFE-GC）

气体护膜冻融法是一种基于微生物细胞内的总碳测定方法。具体操作步骤如下：

1.取一定量土壤样品，将样本均匀摊在烟斗滤纸上；

2.用氯仿制备一定浓度的蒸腾液；

3.将氯仿蒸腾液均匀喷洒在土壤样品表面；

4.将喷洒后的土样与烟斗滤纸一起放入长颈瓶中，用橡皮塞封口；

5.将长颈瓶放入液态氮中，使其迅速冷冻；

6. 将冷冻后的样品研磨至细腻，并与含量已知的标准样一起送入气相色谱仪（gas chromatograph，GC）进行测定；

7.根据标准曲线计算土壤微生物量碳含量。

二、氟化钠浸提法（NaF method）

氟化钠浸提法是一种利用氟离子抑制土壤中微生物的酶活性，从而测定微生物量碳含量的方法。具体操作步骤如下：

1.取一定量土壤样品，加入含有一定浓度的氟化钠溶液；

2.震荡混合一段时间，使土壤中的微生物碳与氟离子进行结合；

3.将样品置于高速离心机中离心，分离土壤颗粒与液相；

4.将上清液倒入瓶中，加入酸进行中和；

5.酸中和后，将溶液进行干燥，得到土壤微生物量碳的干重；

土壤微生物量碳氮的测定

土壤微生物量的测定

一、土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸－K2SO4提取－碳自动分析法）

1、试剂配制

（1）去乙醇氯仿制备：市售氯仿一般含有少量乙醇作为稳定剂，所以，使用前必须将其中的乙醇去掉。方法是量取适量的分析纯氯仿，按1 2（v : v）的比例与蒸馏水或去离子水一起放入分液漏斗中，充分摇动1min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。纯化后的氯仿置于暗色试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。注意：氯仿具有致癌作用，所有操作必须在通风橱中进行。

（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1mol L-1]

（3）硫酸钾浸提剂[c（K2SO4）= 0.5mol L-1]：取1742.6 g分析纯硫酸钾，用研钵磨成粉末装，倒于25L塑料桶中，加蒸馏水至20L，盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1），溶解24 h。

（4）六偏磷酸钠溶液（5%，pH2.0）：50.0g分析纯六偏磷酸钠溶于800ml双蒸水，用分析纯浓磷酸调节至pH2.0，再用双蒸水定容至1L。注意：六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制，且由于其易粘于烧杯底部，加热时常因受热不均使烧杯破裂。

（5）过硫酸钾溶液（2%）：20.0g分析纯过硫酸钾溶于双蒸水，定容至1L。注意：过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放，使用期最多为7d。

（6）磷酸溶液（21%）：37ml 85%分析纯浓磷酸与188ml双蒸水混合。

（7）邻苯二甲酸氢钾标准溶液[ρ（C6H4CO2HCO2K）= 1000mg C L-1]：2.1254g分析纯邻苯二甲酸氢钾（称量前先经105℃烘2～3h），溶于双蒸水，定容至1L。

MBC

土壤微生物分析方法

1. 土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸提取法）

Jenkinson and Powlson（1976）比较了γ-射线、高压灭菌、干热灭菌、氯仿熏蒸灭菌的效果，发现氯仿熏蒸灭菌处理可杀死99％以上的土壤微生物，并且未改变土壤的理化性质，且容易从土壤中除去。因此，现在多利用氯仿熏蒸法进行土壤微生物生物量的测定。

（1）原理：土壤经氯仿熏蒸处理后土壤中的微生物被杀死，造成细胞破裂，使细胞内容物释放到土壤中，导致土壤中可提取的碳增加。用盐溶液提取出由死后的微生物体内渗透出来的有机碳，通过测定浸提液中的碳含量，可以计算土壤微生物量碳。

（2）操作步骤：

①预处理：一般不需要。如果担心土壤状况可能会影响分析结果（如土壤太干，土壤中微生物生长不好等），可以将采集到的土壤调节其含水量达到最大持水量的60％，在25℃预培养1周。

②氯仿熏蒸处理（在通风橱内进行）：

在低温下保存的土壤要先从冰箱中取出，待放置到室温时再进行分析。

称取20 g过2mm筛的新鲜土样置于50 ml 小烧杯中，放入真空干燥器内，并在真空干燥器内放置一装有去乙醇氯仿的小烧杯，烧杯内可放置几片防爆沸的干净小瓷片。同时放入一小烧杯稀氢氧化钠溶液以吸收熏蒸期间释放出来的CO2，还应放一装水的小烧杯（或在干燥器底部放一层湿滤纸）以保持湿度。用少量凡士林密封干燥器，在真空泵与干燥器之间可以加一缓冲瓶以防止氯仿爆沸或由于抽真空使干燥器内外压力变化而造成干燥器破裂等现象发生，然后用真空泵抽气至干燥器内氯仿沸腾。关闭真空干燥器阀门，在25℃下暗处放置24小时。

土壤微生物生物量的测定方法(氯仿熏蒸)汇总

土壤微生物生物量的测定方法

1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）

1.1 基本原理

1.2 实验仪器

自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂

1）无乙醇氯仿（CHCL3）；

2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中

3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、

70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下，

仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）

1.4 操作步骤

1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）

1.4.2 熏蒸

土壤微生物生物量的测定方法氯仿熏蒸

土壤微生物生物量的测定方法氯仿熏蒸氯仿熏蒸法是一种在实验室中用氯仿处理土壤样品，然后测定氯仿处

理前后土壤微生物生物量差异的方法。通过加入氯仿，能够杀死土壤中的

微生物，从而减少微生物的数量，然后利用一些生物学或化学方法来测定

残留的微生物生物量。

氯仿熏蒸法的步骤如下：

1.准备土壤样品：将采集到的土壤样品经过干燥和破碎，使其能够尽

可能均匀地参与后续的熏蒸过程。

2.加入氯仿溶液：将准备好的土壤样品分装到烧杯或烧瓶中，加入一

定比例的氯仿溶液。氯仿的浓度一般为10%～30%，取决于土壤类型和研

究目的。

3.熏蒸土样：将装有土壤和氯仿溶液的容器密封，熏蒸一定的时间。

通常熏蒸时间为24～48小时。

4.蒸发氯仿：打开容器，在通风条件良好的环境中将氯仿挥发，一直

蒸发到气味完全消失。

5.提取微生物细胞：将氯仿处理后的土壤样品用适当的提取剂提取，

以从土壤中提取微生物细胞。

6.测定微生物生物量：使用适当的方法，如直接计数法、生物量焦磷

酸法或基于生物标记物的测定法，来测定氯仿处理前后土壤样品中微生物

生物量的差异。

氯仿熏蒸法的优点是操作简单、成本低廉，并且对土壤样品中的细菌、真菌和原生动物等各类微生物都具有较好的破壁效果，能够有效地杀灭土

壤中的微生物。同时，氯仿处理还可以去除土壤样品中的有机物质，从而减少后续测定中的干扰。

然而，氯仿熏蒸法也存在一些局限性。首先，由于氯仿是一种有机溶剂，熏蒸过程中可能对土壤样品的结构和性质造成一定的改变。其次，氯仿处理只能杀灭土壤中的微生物，对于土壤中的其他生物物种如线虫、螨虫等则不具备同样的杀灭效果。此外，氯仿熏蒸法只能提供微生物生物量的总量信息，无法区分不同类群的微生物。