硅胶层析柱的填装方法

硅胶柱层析色谱基本知识汇总

1.充填法：湿法和干法

湿法：将硅胶和展开剂溶剂配成悬浊液（Slurry）装柱。

干法：在柱子中装入干硅胶填实，再加入展开剂流过浸润硅胶。

在柱子中装入硅胶固定相虽然有这两种不同的办法，但是只要手法得当，把硅胶填充实，两种装法的分离效果没有明显区别。

2.分离效果和流动向的极性

硅胶柱的分离效果与和他相同固定相的TLC一致，洗脱（展开）距离变长，分离效果(△Rf)变好。也就是说，固定相长度越长，分离效果越好。另外，流动相极性越小，产物流出的速度越慢

3.open column chromatography和Flash chromatography

open column也称常压柱，是通过重力使展开剂流出，Flash chromatography是由空气泵将流动相加压流出。

4.经验？理论？

最开始过柱子的人，成败可能确实取决于个人运气和手法吧？个人觉得经验和理论都很有必要。

那么这里就给大家介绍一下Still的flash chromatography的要点吧。

1.TLC上想要物质的点的Rf= 0.35～0.45的展开剂来洗脱效果最佳。

2. 参照列表中，柱子的尺寸和所需的溶剂量。（ref: 2a, Table 1 ）

3.固定相(Silica gel)的长度（高度）在15cm（或以下）的话可以用干法装柱，流动相全部加入，浸润硅胶，此过程反复1～2次。

4.粗产物用展开剂或者更小极性的溶剂溶解，打开柱子下方活塞，轻轻上样。

5.在不破坏硅胶表面平整的情况下，加入流动相，并用试管接取。

6. 能接20根试管的话，可以用TLC检测6～20根试管里有没有所要物质，当然如果接到20根还有，只能继续直到没有物质流出。

我的过硅胶柱的经验

一、装柱

装柱子（添硅胶）时，常用的有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。

不论干法还是湿法，硅胶（称为固定相更为广义）的上表面一定要平整，并且硅胶(固定相）的高度一般为15cm左右（长度没有绝对之说,根据自身情况而定，制备的大柱可以长达一米），太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压（土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气，当然不加压也可以)用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。（我一般都用湿法装柱）

干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧（湿法也要敲的，效果好点），至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实（一般柱子不敢用油泵抽,怕把柱子抽裂了）。接着是用淋洗剂"走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该情况，比较不好处理，可以缓慢改变溶剂，且置于通风处）,容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显)，二氯甲烷更为明

显.虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来,严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。

硅胶柱层析的方法

硅胶柱层析是一种常用的色谱分离技术，它基于样品成分在硅胶柱上的吸附和解吸过程，通过不同组分在硅胶上的吸附和解吸速度差异来实现分离和纯化。

硅胶柱层析的方法主要包括制备硅胶柱、样品处理、样品加载、洗脱和分析收集等步骤。

第一步是制备硅胶柱。首先，选择合适的硅胶填料，常用的有粉末状硅胶和硅胶凝胶。粉末状硅胶适用于高效液相色谱（HPLC），硅胶凝胶适用于柱层析。然后，将硅胶填充到柱子中，通常使用的是玻璃柱，选择直径和长度适当，填充过程需要控制填充的均匀度和压实度，确保硅胶柱的质量。

第二步是样品处理。根据需要，可以采取不同的处理方法。例如，如果样品中有杂质或固体颗粒，可以首先使用滤纸或过滤膜进行过滤；如果样品中有有机溶剂，可以先进行浓缩或萃取。处理后的样品应保持干燥和无杂质，以免对硅胶柱的分离产生干扰。

第三步是样品加载。将处理后的样品加入硅胶柱中，一般通过重力或压力的方式进行。样品的进样量应适中，既不能太多导致硅胶柱失效，也不能太少导致分离效果不理想。如果样品中有多个组分需要分离，可以采用多次加载的方式，每次加载后等待吸附完成再进行下一次加载。

第四步是洗脱。洗脱是分离和纯化的关键步骤。一般来说，先用无极性溶剂进行洗脱，逐渐增加溶剂的极性，以使吸附在硅胶上的样品逐渐解吸出来。洗脱的速度和温度也会影响分离效果，需要根据具体情况进行优化。在洗脱过程中，可以采集不同洗脱时刻的洗脱液，以便后续的分析和检测。

最后一步是分析和收集。通过对洗脱液的分析，可以确定各个组分的含量和纯度。一般可以使用紫外可见光谱分析或其他检测方法进行定量分析。根据分析结果，可以对样品进行收集，用于进一步的研究或生产应用。

硅胶过柱子操作流程

硅胶过柱子操作流程是一种常见的实验操作，主要用于分离和纯化物质。下面是详细的操作步骤：

一、准备工作

1. 准备好硅胶柱，确保硅胶柱的清洁，无尘无杂质。

2. 准备好待分离的物质，将其溶解在适当的溶剂中，形成均匀的溶液。

3. 确定洗脱剂的种类和比例，根据待分离物质的性质选择合适的洗脱剂。

二、填充硅胶柱

1. 将填充孔（一般为玻璃微漏斗）插入硅胶柱底部，注意保持漏斗口与硅胶柱顶部平齐。

2. 慢慢加入待分离物质的溶液，同时注意控制加入溶液的速度，以免溶液过快渗入硅胶中造成硅胶柱破裂。

3. 当溶液的颜色或透明度发生明显变化时，应停止加入溶液，此时溶液已基本通过整个硅胶柱。

三、开始分离

1. 打开水龙头，将洗脱剂缓慢滴入硅胶柱内，使待分离物质开始分离。

2. 在分离过程中，应密切关注溶液的颜色和透明度的变化，以及硅胶柱内溶液的流速。

3. 当溶液的颜色或透明度发生显著变化时，表示待分离物质已基

本分离完毕。

四、收集分离物

1. 关闭水龙头，停止洗脱剂的滴入。

2. 从硅胶柱顶部或填充孔中取出分离物，进行必要的处理和分析。

五、硅胶柱的处理

1. 分离完毕后，应将硅胶柱内的溶液倒掉，并用蒸馏水冲洗硅胶柱，以确保其干燥干净。

2. 将硅胶柱放置在干燥通风的地方，等待下次使用。

六、注意事项

1. 在填充硅胶柱时，应避免溶液过快渗入硅胶中造成硅胶柱破裂。

2. 在开始分离时，应密切关注溶液的颜色和透明度的变化，以及硅胶柱内溶液的流速。

3. 在收集分离物时，应注意避免溶液溅出或洒落。

4. 在处理硅胶柱时，应注意避免硅胶颗粒的破碎或飞扬。

硅胶柱层析——精选推荐

硅胶柱层析

硅胶柱层析原理

硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

硅胶柱层析流动相

极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

硅胶柱层析惯用方法

1.称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4.压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5.上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

湿法装柱

湿法装柱，干法上样-解析

在产品旋蒸时加入1-2勺硅胶粉（看柱子的大小），旋蒸至梨形瓶内的有机相的产物均匀附着在硅胶颗粒上，用小勺将瓶壁上附着的硅胶层刮下来（如果有），粉末保存在此瓶中。用于后续的干法上样。

装柱：

1.取出柱层析硅胶粉于一250ml的烧杯中，向其中加入适量定好的洗脱剂（即用相同

机型的有机溶剂装柱）用玻璃棒搅拌至均匀。

2.安装好装置后，打开柱子的旋塞，下方放一个三角瓶接着留下来的溶剂。将调好的

硅胶-洗脱剂溶液倒入柱子中，倒一部分，就在上方接双联球对体系加压，使柱子压实直到硅胶柱的高度到达整柱的约三分之二（期间用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗一下柱子，最后稍微弹一下柱子使硅胶面水平）。之后继续开着柱子旋塞使硅胶柱上方的洗脱剂液面下降至硅胶面上方2cm，关掉旋塞。加入中性氧化铝，铺一层氧化铝层约2-3cm,加完后用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗一下柱子，将壁上的中性氧化铝粉末冲下来，稍微弹一下柱子使液面水平。开旋塞使液面在氧化铝层上方2cm。关掉旋塞。

3.上干样：将得到的硅胶-样品粉末倒在一张纸上，接着转移到硅胶柱上（此时旋塞关

闭），用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗一下原先存放样品-硅胶粉末的梨形瓶和柱子（此时旋塞关闭），取出一细铁丝在样品层中小心搅拌，不要破坏样品

层下方的中性氧化铝层，将样品层中夹带的空气泡赶出。打开旋塞，使液面下降至被分离样品面上方2cm，再次加入中性氧化铝，使得样品层上方铺一层氧化铝层（约2-3cm），用吸管吸取柱子下方锥形瓶内的洗脱剂冲洗柱子。

硅胶干柱层析的操作方法

七年级下册数学教学工作总结

时间过得真快，一学期又结束了，下面是我个人对这一学期的教学工作总结：

一、政治思想素质

平时积极参加学校组织的各类集体活动，认真学习学校下达的上级文件，关心国内外大事，注重政治理论的学习。配合组里搞好教研活动，每周按时参加升旗仪式。服从安排，保持与决策层的高度一致性。

二、业务能力

1、教学能力，作为一名教师，我始终把“教书育人、为人师表”作为已任，把成为优秀的教师作为自己的目标，孜孜追求。任现职以来，我要求自己不断增强业务素养，深入钻研教材，认真进行教学研究。教学中，我坚决贯彻因材施教的原则，始终把学生的“学”放在教学的核心位置上。在教学方法的设计上，突出落实激发学生的主体意识，激发学生的求知欲望。每一节课都要设计学生参与的情境，来引导和训练学生学习。

2、班主任工作工作总结，教书育人是教师的天职。在班主任工作中，我每天早来晚走、周六周日也难得休息，每接一个班，都从整顿班风入手，培养学生的集体荣誉感，与学生建立起“师生+朋友”的关系，在日常管理上坚持“三到位”（课前两分钟到位、课间操到位、自习课到位），使班级工作顺利开展。

3、教育科研教师的生命力来自教育科研，教师的未来和未来的教师，都将与教育科研联系起来。

4、学生竞赛辅导多名学生参加数学竞赛并获奖。

5、继续教育一直以来多次参加各类机构的培训，并获得证书。

三、今后的设想

在今后的工作中，我将采取各种方式方法，寻找有效途径，提高教学效率，努力使自己成为一名优秀的教师。不管能否晋级，今后我仍将一如既往，以的热情、全部的精力投身到教育事业中去，无愧于教师的称号。

层析操作-周炳

柱层析操作规程

一．装柱

将层析柱洗净、干燥，底部塞一小块脱脂棉，柱子大小根据样品量而定，装柱长度一般为柱高1/2-2/3，常用的柱子装填15cm即可。硅胶粉用层析硅胶

200-300目，较粗的分离可以用100-200目，较难分离的可以用300-400目。硅胶粉的用量根据样品量而定，一般物质用30-70倍质量硅胶粉，较难分离物质用100倍质量硅胶粉。

1.干装法：将硅胶通过小漏斗倒入柱内，应不间断地形成一细流慢慢加入柱内，同时用橡皮槌轻轻敲打色谱柱，使装填均匀，有条件可以用油泵抽。柱装填好后，打开下端活塞，从上端倒入洗脱剂冲柱，以排尽柱内空气，并保留一定液面。

2.湿装法：将硅胶加入适量最初使用的洗脱剂，超声搅拌，调成混悬液，打开柱子下端活塞，徐徐将混悬液倒入柱子，使洗脱剂慢慢流出，带动硅胶缓慢沉于柱的下端。待加完吸附剂后，继续使洗脱剂流出，直到硅胶的沉降不再变动。注意整个操作过程不要将气泡压入硅胶中，而且要始终保持吸附剂上端有溶剂，切勿流干。将多余洗脱剂放出至上面保持有1cm高液面为止，关上活塞。

二．上样

多采用干法上样（拌样法）：将样品用尽量少的易挥发溶剂溶解，加入样品约5倍量的硅胶（100-200目）拌匀，置空气中挥尽溶剂，或在旋转蒸发器里于适温下蒸干，研匀后均匀置于装好硅胶的柱顶，尽量使样品平整，并在柱顶放一块圆形滤纸，上端保留少量液体。对于在溶剂中溶解度很大的样品可以采用湿法上样，即将样品溶液（尽量少）加入，直接吸附在硅胶粉上。

三．洗脱

1.洗脱剂的选择，常用的有机溶剂极性：石油醚

一种样品溶解度小的，同等条件下尽量选择毒性较小的。初始洗脱剂配比的选择：薄层试验，使待分离组分的Rf值介于0.1~0.2之间的展开系统可选为柱色谱的洗脱剂。

层析柱的干法湿法填充和相关知识

层析柱装填及相关常识

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。

1、柱子可以分为：加压，常压，减压

压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。

2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好

柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。3、关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品

层析柱的干法湿法填充及相关知识

层析柱装填及相关常识

注：

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。

1、柱子可以分为：加压，常压，减压

压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。

2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好

柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。现在见到的柱子径高比一般在1：5〜10,书中写硅胶量是样品量的30〜40倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2〜0.4,杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cmx20cm的柱子）；如果相差不到0.1,就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。

硅胶柱填装

硅胶的预处理

我们以浓盐酸浸泡硅胶14小时，然后用蒸馏水洗涤硅胶4次后，将起进行减压抽滤，后不断加蒸馏水冲洗。在1小时之后，抽滤的水呈中性，但仍然含有氯离子。经过4小时不断的冲洗才使得抽滤液中基本不含氯离子。晾干一周后，在110℃烘箱中活化2小时。

活化后的硅胶加石油醚浸泡并搅拌均匀。在装柱时，宜使用口径较大的玻璃漏斗置于层析柱上部，注入1/2高的石油醚，打开下部活塞，然后尽量均匀地将硅胶倾入漏斗，这样可以防止层析柱中形成断层(这一步是实验的关键步骤)。

装柱

装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。

干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出

层析柱的干法湿法填充和相关知识

月的。否则有可能产生高额流量费。慢慢演唱者:张学友所属专辑:黑与白新歌+精选1985-2004

心慢慢疼慢慢冷慢慢等不到爱人

付出一生收回几成

情不能分不能恨不能太轻易信任真爱一回尽是伤痕

泪慢慢流慢慢收慢慢变成了朋友

寂寞的夜独自承受

爱不能久不能够不能太容易拥有伤人的爱不堪回首慢慢慢慢没有感觉慢慢慢慢我被忽略你何忍看我憔悴没有一点点安慰慢慢慢慢心变成铁慢慢慢慢我被拒绝

你何忍远走高飞要我如何收拾这爱的残缺

泪慢慢流慢慢收慢慢变成了朋友寂寞的夜独自承受

爱不能久不能够

不能太容易拥有伤人的爱不堪回首慢慢慢慢没有感觉慢慢慢慢我被忽略你何忍看我憔悴

没有一点点安慰慢慢慢慢心变成铁慢慢慢慢我被拒绝你何忍远走高飞要我如何收拾这爱的残缺

慢慢慢慢没有感觉慢慢慢慢我被忽略0毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。

3、关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品

可以湿柱，也可以干柱。不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。也是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加压、常压、减压，随需而定。因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。如果样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。哪位做过可以提出来大家参详参详。

硅胶柱层析的操作方法及注意事项

硅胶柱层析

一、硅胶柱层析的原理

利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。

二、硅胶柱层析的操作方法及注意事项

1、装柱

操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。

有干法装柱和湿法装柱两种方法

（1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢加入管内。也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。柱装好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。

（2）湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。

匀浆法：搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

2、上样

将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，加入层析柱中硅胶面上。如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可。

我的过硅胶柱的经验

一、装柱

装柱子(添硅胶）时，常用的有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。

不论干法还是湿法，硅胶（称为固定相更为广义)的上表面一定要平整,并且硅胶（固定相)的高度一般为15cm左右(长度没有绝对之说，根据自身情况而定,制备的大柱可以长达一米）,太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压（土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气,当然不加压也可以）用淋洗剂”走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。（我一般都用湿法装柱)

干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧(湿法也要敲的，效果好点），至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。接着是用淋洗剂"走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂.通常上面加压,下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但最大的缺陷在于”走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该情况,比较不好处理,可以缓慢改变溶剂，且置于通风处)，容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显)，二氯甲烷更为明显.虽然

产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。

干法硅胶柱的操作方法

干燥硅胶柱是一种常用的色谱分离技术中的填充材料。它具有高吸附能力和较强的分离效果，广泛应用于有机合成、复杂混合物的分离和纯化等领域。下面为您详细介绍干燥硅胶柱的操作方法。

1. 准备工作：

1.1 硅胶柱的选择：根据待分离的化合物性质和实验要求，挑选合适的硅胶柱。常用的有无水硅胶和分子筛硅胶两种。

1.2 准备溶剂：根据待分离的物质特性和极性，选择合适的溶剂，准备好各种浓度的溶剂。

1.3 准备样品：将待分离的化合物溶解或悬浮在适当的溶剂中，制备样品溶液。

2. 硅胶柱的装填：

2.1 柱身准备：首先，挑选合适的柱体，根据需要选择不同直径、长度的硅胶柱。然后，在柱体底部放置一块绦布或棉花，用玻璃棒轻轻按压均匀。

2.2 装填硅胶：将事先翻晒过的干燥硅胶填充到柱体中。注意，填充时要轻轻振动柱体，使硅胶均匀分布。填充至柱体的3/4位置，用玻璃棒轻轻按压均匀，然后再填充硅胶至柱口，按压固定。

3. 硅胶柱的干燥：

3.1 密封柱体：用胶塞密封柱口，确保柱体内不漏风。

3.2 干燥：将填充好硅胶的柱体，放入烘箱中进行干燥。干燥温度和时间因硅胶的种类和含水量而异，常见的干燥温度为100-120摄氏度，干燥时间为2-4小时。

3.3 冷却：干燥后，将硅胶柱取出，待冷却至室温。

4. 硅胶柱的装备：

4.1 连接柱体：将干燥好的硅胶柱安装在适当的柱座上，并紧固好柱帽，确保柱体安全连接。

4.2 储存溶剂：准备好各种需要的浓度和体积的溶剂，并润湿硅胶柱表面。

5. 样品的进样和洗脱：

5.1 进样：使用适当的进样装置，将样品溶液缓慢地注入硅胶柱顶部的样品进样口，待样品进入柱体后，关闭进样口，以避免样品外泄。

我的过硅胶柱的经验

一、装柱

装柱子（添硅胶）时，常用的有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。

不论干法还是湿法，硅胶（称为固定相更为广义）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右（长度没有绝对之说，根据自身情况而定，制备的大柱可以长达一米），太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压（土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气，当然不加压也可以）用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。（我一般都用湿法装柱）

干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧（湿法也要敲的，效果好点），至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该情况，比较不好处理，可以缓慢改变溶剂，且置于通风处），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显），二氯甲烷更

为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。