植物组织过氧化氢含量的测定

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过氧化氢酶活力的测定实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。

h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

植物过氧化氢(H2O2)说明书

植物过氧化氢（H2O2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞上清及相关液体样本中过氧化氢（H2O2）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢（H2O2）水平。

用纯化的植物过氧化氢（H2O2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢（H2O2）,再与HRP标记的过氧化氢（H2O2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的过氧化氢（H2O2）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢（H2O2）浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定

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植物叶片中过氧化氢含量测定方法的改进

5、离心：将反应后的离心管放入离心机中，离心10分钟，分离出上层清液。 6、检测：将上层清液滴加到光电倍增管上，记录光子数。
7、结果计算：根据光子数计算过氧化氢浓度。
三、注意事项
1、实验过程中要保持温度和pH值的稳定，以免影响实验结果。 2、选取的植物组织要健康、无病虫害，以保证实验结果的可靠性。
二、实验步骤

1、准备试剂和设备：准备好过氧化物酶、底物、缓冲液、离心管、离心机、光电倍增管等。
2、样品处理：选取健康的植物组织，用蒸馏水冲洗干净，然后用滤纸吸干表面水分。将组织切成小块，放入离心管中。
3、添加试剂：向离心管中加入适量的缓冲液、过氧化物酶和底物，充分混合均匀。
4、反应：将离心管放入37℃恒温摇床中反应30分钟。
本次演示旨在探讨一种快速测定植物叶片叶绿素含量的方法，为相关研究提供参考。
方法介绍
目前，测定植物叶片叶绿素含量的方法主要包括分光光度法、光谱法、荧光法等。其中，分光光度法是最常用的方法之一。本实验采用分光光度法中的 Arnon-Noory公式，通过测量叶片在663nm和645nm处的吸光度来计算叶绿素含量。该公式已被广泛应用于叶绿素含量的快速测定。
3、测量吸光度：将研磨好的匀浆倒入比色杯中，加入适量的80%丙酮溶液，充分摇匀后，在分光光度计上分别测量663nm和645nm处的吸光度。
4、数据处理：根据Arnon-Noory公式计算叶绿素含量。
1、不同植物的叶绿素含量存在差异
2、不同部位的叶片叶绿素含量也有所不同
结论
通过实验，我们探讨了一种快速测定植物叶片叶绿素含量的方法，并发现不同植物及不同部位叶片的叶绿素含量存在差异。这些差异可能是由植物本身的生物学特性、环境因素等共同作用的结果。

[指南]过氧化氢的测定方法

过氧化氢的测定方法三、过氧化氢酶的活性----紫外吸收法[原理] H202在240nm波长下有强吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240）随反应时间而降低。

根据测量吸光的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

[仪器与用具] 紫外分光光度计；离心机；研钵；容量瓶250ml1个；刻度吸管0.5ml2支；2ml1支；10ml试管3支；恒温水浴锅。

[试剂] 0.2mol?L-1pH7．8磷酸缓冲液(内含1％聚乙烯吡咯烷酮)；0．1mol?L-1H202(用0．1mol?L-1高锰酸钾标定)。

[方法]1．酶液提取称取新鲜小麦叶片或其他植物组织0．5g，置研钵中，加入2-3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。

混合均匀，将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000r.min-1下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，5℃下保存备用。

2．测定取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表42-2顺序加入试剂。

25℃预热后,逐管加入0.3ml0.1mol的H2O2，每加完1管立即记时，并迅速倒入石英比色杯，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按式42-3计算酶活性。

3．结果计算以1min内A240减少0．1的酶量为1个酶活单位(u)。

过氧化氢酶的活性（u.g-1min-1）=式中 Aso--加入煮死酶液的对照管吸光值；As1,As2-样品管吸光值；Vt--粗酶提取液总体积(ml);V1--测定用粗酶液体积(ml);FW--样品鲜重(g); 0．1-A20每下降0．1为1个酶活单位(u);t-加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。

注意:凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。

【思考题】1、影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?2、过氧化氢酶与哪些生化过程有关?参考文献【1】Mukherjee S P,Choudhuri M A.Determination of glycoalte oxidase activety H2O2 content and catalase activity.Physiol Plant.1983(58):167-170【2】蒋明义，郭绍刚，渗透胁迫下稻苗铁催化的膜脂过氧化作用.植物生理学报.1996.22(1):6-12【3】林植芳，李双顺等.衰老叶片和叶绿体中H2O2的积累与膜脂过氧化的关系，植物生理学报.1998,14(1):16-22【4】邹琦.植物生理生化实验指导.北京：中国农业出版社，1995【5】【美】吉尔鲍特GG.缪辉南，陈石根等译.酶法分析手册.上海：上海科学技术出版社，1982实验材料：小白菜注意事项：1、三角瓶、容量瓶等务必要清洗干净。

植物细胞过氧化氢的测定方法_张小莉

植物学报Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ２００９，　４４　（１）：　１０３−１０６，　ｗｗｗ．ｃｈｉｎｂｕｌｌｂｏｔａｎｙ．ｃｏｍ收稿日期：　２００７－１２－１１；　接受日期：　２００８－０２－１９基金项目：　国家自然科学基金（Ｎｏ．３０５３０４３０）＊　通讯作者。

Ｅ－ｍａｉｌ：　ｓｏｎｇｃｐ＠ｈｅｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．技术方法．植物细胞过氧化氢的测定方法张小莉１，２，　王鹏程１，　宋纯鹏１＊１河南大学生命科学学院，　河南省植物逆境生物学重点实验室，　开封４７５００１；　２河南省中医学院，　郑州　４５０００８摘要过氧化氢是重要的活性氧之一，　激素等发育信号和胁迫刺激可以诱导细胞内Ｈ２Ｏ２的产生和积累，　继而调控植物的气孔运动、生长发育、衰老和逆境应答等诸多生理过程。

准确测定植物细胞内Ｈ２Ｏ２的含量及变化模式是系统研究Ｈ２Ｏ２信号转导及其生物学功能的一个关键技术。

该文以拟南芥为实验材料，　介绍了目前植物细胞Ｈ２Ｏ２的主要测定方法，　包括激光共聚焦显微检测、紫外分光光度计检测和ＤＡＢ组织染色，　在此基础上比较分析了上述方法在灵敏度、检测范围、定量、成本以及耗时等方面的差异，　为相关研究选择合适的Ｈ２Ｏ２检测技术提供参考。

关键词激光共聚焦显微成像，　ＤＡＢ染色，　过氧化氢，　分光光度法张小莉，　王鹏程，　宋纯鹏　（２００９）．　植物细胞过氧化氢的测定方法．　植物学报　４４，　１０３－１０６．过氧化氢是活性氧（ａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ，　ＡＯＳ）的一种，　多种外界刺激或细胞内信号分子都可以导致细胞内Ｈ２Ｏ２的积累。

Ｈ２Ｏ２不仅具有损伤生物大分子、产生细胞毒害的能力，　而且还被证明可以作为信号分子，　在气孔运动、生物和非生物胁迫应答、细胞程序性死亡、激素应答以及生长发育调控过程中起重要作用（Ｎｅｉｌｌ　ｅｔ　ａｌ．，　２００２；　Ｌａｌｏｉ　ｅｔ　ａｌ．，　２００４；　Ｃｈｅｎｇ　ａｎｄ　Ｓｏｎｇ，２００６）。

过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒说明书

过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC3590规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体100 mL×1瓶（自备）4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三液体12 mL×1瓶4℃保存试剂四液体60 mL×1瓶4℃保存标准品液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：丙酮自备。

2、试剂二：临用前加入6 mL浓盐酸充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存。

3、标准品：1mmol/mL H2O2标准液。

产品说明：H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。

H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。

一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。

技术指标：最低检出限：0.002 μmol/mL线性范围：0.0097-1.5 μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织样本的制备：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取全部上清液（注意吸取干净），置冰上待测。

POD 测定方法

植物体POD的测定※<原理>了解过氧化氢酶活性测定的几种方法，掌握用愈创木酚法分别测定过氧化氢酶和过氧化物酶的活性。

过氧化物酶广泛颁布于植物的各个组织器官中。

在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量。

※<实验材料、试剂与仪器设备>1、实验仪器722型分光光度计、离心机、秒表、电子天平、研钵2、实验试剂愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)、反应混合液［100mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)50mL，加入愈创木酚28uL，加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19uL，混合均匀保存于冰箱中］3、实验材料任何植物材料※<实验步骤>1、粗酶液的提取称取植物(小麦叶片)材料0.1g，加20mmol/LKH2PO4 5mL，于研钵中研磨成匀浆，以10000r/min离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO45mL溶液提取一次，全并两次上清液。

2、酶活性的测定取比色皿2只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，上述酶液1mL(如酶活性过高可适当稀释)，立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔30s读数一次。

以每分钟表示酶活性大小，即以△OD470/min.mg蛋白质表示，蛋白质含量测定按Folin法进行。

※<结果计算>以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA470/[min.g(鲜重)]表示之。

也可以用每min 内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(u)表示。

过氧化物酶活性[u/(g.min)]=式中：ΔA470——反应时间内吸光度的变化。

W——植物鲜重，g。

VT ——提取酶液总体积，mL。

Vs ——测定时取用酶液体积,mL。

植物组织中过氧化氢的组织器官定位

一、实验目的通过DAB组织染色，掌握植物细胞过氧化氢的组织器官定位的原理和方法。

二、实验原理DAB组织染色法是对过氧化氢进行原位定位染色的方法。

DAB 即联苯二胺，是过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物。

在过氧化物酶的催化下，DAB 可以与过氧化氢发生反应，产生棕色沉淀，该棕色沉淀不溶于水和乙醇。

因此利用DAB染色可以对叶片或植株进行组织化学原位检测，通过观察产生的棕色斑点便可检测过氧化氢的聚集情况。

DAB 组织化学染色法能够较快速地检测植株或组织内过氧化氢的产生，其优势在于在光学显微镜下取得较好的细胞定位，组织特异型高，成本较低，但在亚细胞分析技术中它的定位不精确，因而只能作为一种定性检测过氧化氢的方法。

三、实验试剂及仪器实验材料：施肥的小白菜植株和未施肥的小白菜植株；实验试剂：pH 3.8 DAB，95%乙醇，固定液；实验所需仪器：真空泵，烘箱，水浴锅，烧杯，剪刀，镊子。

四、实验步骤分别取施肥和未施肥的小白菜的根和叶片少许，用自来水洗净，放入装有10ml pH 3.8 DAB的烧杯里，将烧杯置于真空泵抽真空10min至叶片不冒气泡为止，将烧杯取出后置于25℃烘箱中1h。

经过DAB的根系取出后经自来水清洗后，观察根系的变褐情况；经过DAB的叶片放置在装有20ml 95%乙醇的烧杯中去除叶绿素，45℃水浴直至叶片绿色完全脱去为止，将叶片放入固定液中，观察叶片的变褐情况。

五、实验结果和讨论从左到右依次是未施肥，施肥，未染色的对照。

与未被染色的根系相比，对照组和实验组根系均有变褐的现象，但变褐的程度不明显。

叶片未能观察到变褐的现象，其原因可能是染色的时间太短，所取材料多，染色效果不好；叶片的脱色时间短，未能脱去全部绿色，所以看不出叶片有变褐的现象。

过氧化氢酶活力的测定实验报告

h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

过氧化氢酶活性测定实验报告

过氧化氢酶活性测定实验报告
《过氧化氢酶活性测定实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过测定过氧化氢酶活性，探究该酶在生物体内的重要作用，并了解其在氧化还原反应中的作用机制。

实验方法：
1. 提取过氧化氢酶：将待测样品（如动植物组织、细胞等）在低温下破碎，利用离心等手段分离出过氧化氢酶。

2. 过氧化氢酶活性测定：将提取的过氧化氢酶与过氧化氢底物反应，通过监测底物消耗速率或产物生成速率来测定酶的活性。

实验结果：
通过实验测定，我们得到了不同样品中过氧化氢酶的活性数据。

观察到在不同条件下，过氧化氢酶活性呈现出明显的差异，这表明过氧化氢酶的活性受到环境条件的影响。

实验结论：
通过本实验，我们深入了解了过氧化氢酶在生物体内的重要作用，以及其在氧化还原反应中的作用机制。

同时，我们也发现了过氧化氢酶活性受到环境条件的影响，这为进一步研究酶的调控机制提供了重要的参考。

总结：
过氧化氢酶活性测定实验为我们提供了深入了解生物体内氧化还原反应的重要手段，为进一步研究酶的功能和调控机制提供了重要的参考。

希望通过这一实验，能够加深我们对生物体内酶的认识，为生物医学领域的研究和应用提供更
多的可能性。

植物过氧化氢(H2O2)说明书

本文由上海哈灵生物科技有限公司提供上海哈灵试剂供应商感谢您阅读本文植物过氧化氢(H2O2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相关液体样本中过氧化氢(H2O2)的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化氢(H2O2)水平。

用纯化的植物过氧化氢(H2O2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢(H2O2)，再与HRP标记的过氧化氢(H2O2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的过氧化氢(H2O2)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物过氧化氢(H2O2)浓度。

试剂盒组成：样本处理及要求：1. 组织标本：切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

分装后一份待检测，其余冷冻备用。

2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.3. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

过氧化氢含量测定

过氧化氢含量测定一、实验原理过氧化氢与硫酸钛反应生成过氧化物-钛复合物黄色沉淀，可被硫酸溶解后，在415nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与过氧化氢浓度呈线性关系。

二、仪器与试剂仪器和用具：研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml ×8支；离心机；分光光度计。

试剂：100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30%分析纯H2O2 57μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

三、实验方法1，制作标准曲线：取10ml离心管，编号试剂 1 2 3 4 5 6 7 100umol/L H2O2 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.04℃下预冷丙酮 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 5%硫酸钛 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1浓氨水 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.14000r/min 离心5min，弃上清液留沉淀，然后再向每管中加2mol硫酸 5ml，摇匀，待沉淀溶解后，在415nm波长下比色，测其吸光值，绘制标准曲线。

2，样品提取与测定（1）称取小麦叶片1g左右，剪碎加2ml预冷丙酮和少量石英砂，研磨成匀浆后，转入离心管中，再用5ml预冷丙酮洗研钵，加入离心管中，4000r/min 离心5min，弃上清液即为样品提取液。

（2）取样品提取液1ml，弃上清液，沉淀用丙酮反复洗（去除绿色），3-5次，然后加入硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后4000r/min 离心5min，弃上清液留沉淀，加入5ml硫酸，摇匀，待沉淀溶解后在415nm波长下比色，测其吸光值。

3，结果计算植物组织中H2O2含量（umol/g.FW）=1..vFWvtcc：浓度（umol） vt：总体积ml v1：测定体积ml 四、实验结果1，绘制标准曲线2，其他数据FW=1.008g vt=7ml A（样品）=1.472 3，计算结果植物组织中H2O2含量（umol/g.FW）=1..vFWvtc=12.2314五、实验分析1，本次试验在研磨小麦叶片时，由于丙酮易挥发，所以研磨不充分，而且冲洗研钵时也不完全，导致样品的损失。

植物组织中过氧化氢含量的测定

植物组织中过氧化氢含量的测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。

H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。

因此，植物组织中H2O2含量与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量。

一、实验原理H2O2与硫酸钛生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在410nm波长下比色测定。

在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。

TiSO4(TiO2)+H2O2 [TiO(H2O2)]2 （桔黄色沉淀）二、实验材料与设备1）仪器和用具研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

2）材料和试剂小麦叶片；100μmol/L H2O2丙酮试剂；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

三、实验步骤1）制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表1加入试剂。

表1测定H2O2浓度标准曲线配置表离心管号试剂（ml）1234567 100μmol/L H2O200.10.20.40.60.8 1.0 4℃下预冷丙酮 1.00.90.80.60.40.20 5%硫酸钛0.10.10.10.10.10.10.1浓氨水0.20.20.20.20.20.20.2离心5000r/min 离心5min，弃去上清夜，留沉淀2mol 硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0待沉淀完全溶解后，将其小心倒入分光光度计的比色皿中，在410nm波长下比色，记录数据，做出H2O2浓度标准曲线（图1）。

图1 标准曲线（由于R²=0.9999，可得出线性特别好）注：1、横轴为H2O2的每毫升微摩数，纵轴为A=410nm下的分光度；2、由于实验当天未作出标准曲线。

图1中的标准曲线数据为老师做出来给的。

但标准曲线要用的数据是标准方程的斜率，因此无论过氧化氢的浓度是升高或是降低，均不影响实验结果。

植物组织中过氧化氢含量测定

植物组织中过氧化氢含量测定
过氧化氢是一种常见的氧化剂，它在植物组织中的含量对于植物的生长和发育具有重要的影响。

因此，测定植物组织中过氧化氢的含量是一项非常重要的研究工作。

测定植物组织中过氧化氢含量的方法有很多种，其中比较常用的是化学法和生物学法。

化学法是通过化学反应来测定过氧化氢的含量，常用的方法有紫外分光光度法、荧光法和化学发光法等。

生物学法则是利用过氧化氢对生物体的影响来测定其含量，常用的方法有酶促荧光法、酶促发光法和酶促色谱法等。

无论采用哪种方法，测定植物组织中过氧化氢含量的过程都需要注意一些问题。

首先，样品的采集和处理要严格按照规定的方法进行，以避免样品受到污染或损伤。

其次，测定过程中要注意控制温度、pH值和反应时间等因素，以保证测定结果的准确性和可重复性。

最后，测定结果要进行统计分析和比较，以得出科学的结论。

测定植物组织中过氧化氢含量的研究已经得到了广泛的应用。

例如，在植物抗逆性研究中，过氧化氢含量的测定可以帮助我们了解植物在逆境条件下的应答机制和适应能力。

在植物生长发育研究中，过氧化氢含量的测定可以帮助我们了解植物生长发育过程中的氧化还原反应和信号传递机制。

在植物病理学研究中，过氧化氢含量的测定可以帮助我们了解植物与病原体之间的相互作用和防御机制。

测定植物组织中过氧化氢含量是一项非常重要的研究工作，它可以帮助我们深入了解植物的生长发育和逆境应答机制，为植物科学研究提供有力的支持。

二甲酚橙法用于测定植物组织中的过氧化氢

二甲酚橙法用于测定植物组织中的过氧化氢
李忠光;宋玉泉;龚明
【期刊名称】《云南师范大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2007(027)003
【摘要】文章介绍了二甲酚橙法用于测定植物组织中的H2O2,确定了适宜的测定波长、显色反应时间,以及工作试剂中适宜的Fe2+、二甲酚橙、山梨醇浓度和pH 值等参数.与其它方法相比,此方法表现出较高的灵敏度、较好的重复性、准确性和可比性.
【总页数】5页(P50-54)
【作者】李忠光;宋玉泉;龚明
【作者单位】云南师范大学生命科学学院,云南,昆明,650092;云南师范大学生命科学学院,云南,昆明,650092;云南师范大学生命科学学院,云南,昆明,650092
【正文语种】中文
【中图分类】Q944.6
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