GST-FF层析填料说明书

Glutathione Sepharose 4 Fast Flow

原理

谷胱甘肽S-转移酶是一种经常被使用的Tag，可以使含有谷胱甘肽S-转移酶的重组蛋白的纯化和检测更加容易，为了使产物的纯化更简单，GST融合蛋白的一步纯化是可用的。

纯化简要概述

结合缓冲液：140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4 , 1.8mM KH2PO4, pH 7.3

洗脱缓冲液：50mM Tris-HCl, 10mM 还原型谷胱甘肽, pH 8.0

1，用5倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。

2，上样。

3，用5-10倍柱体积的结合缓冲液平衡分离柱，直到基线，即所有未结合物质都被冲洗出柱子。

4，用5倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱。

5，用5-10倍体积的结合缓冲液冲洗柱子。

使用注意

1，样品上样期间和洗脱期间，保持较低的流速是非常重要的，因为GST和谷胱甘肽互相间的结合动力学作用是相对较低的。其结合容量是依赖于蛋白质的特性，因此其产量是依赖于蛋白质的类型而变化的。使用较低的流速或者将样品反复流过柱子几次，或许可以提高产量。

2，柱子的重复使用取决于样品的特性。对同一样品重复使用时，需考虑避免交叉污染的问题。

在位清洗

1，用2-3倍柱体积的，高端pH值为（0.1M Tris-HCl,0.5M NaCl,pH8.0）和低端pH值为（0.1M 醋酸钠,0.5M NaCl,pH4.5）的缓冲液交替冲洗柱子。

2，重复循环3次。

3，立即用3-5个柱体积的结合缓冲液再平衡柱子。

沉淀蛋白质的去除

1，用2倍柱体积的6M的盐酸胍冲洗柱子。

2，立即用5倍柱体积的结合缓冲液冲洗柱子。

通过疏水性互相作用结合到柱子上的物质的去除

1，用3-4倍柱体积的70%的乙醇冲洗柱子（或者2倍柱体积的非离子型去污剂如1%的曲拉通-100冲洗柱子）。

2，立即用5倍柱体积的结合缓冲液冲洗柱子。

当填料在室温状态下暴露在0.1M柠檬酸盐（pH4.0），0.1M NaOH，70%的乙醇或者6M盐酸胍2小时后，其结合能力没有显著地丢失。当填料暴露在1%的SDS 14天后，其结合能力没有明显的丢失。

储存

用5个柱体积的20%的乙醇在中性pH值的条件下冲洗介质和柱子，在4°-8°条件下储存。