白苏子和紫苏子生品及其炮制品中迷迭香酸的含量测定_黄亮辉
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JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 12期 2010年 12月
白苏子和紫苏子生品及其炮制品中 迷迭香酸的含量测定
黄亮辉 , 苏 琪 , 赵婷婷 , 孙文基 ＊ (西北大学陕西省生物医药重点实验室 , 陕西 西安 710069)
摘要 目的 :测定白苏子和紫苏子生品及其不同炮制品中 迷迭香酸 的含量 。 方法 :采用 RP-HPLC测定迷迭香 酸的含量 , 色谱柱 :WelchC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm )柱 ;流动相 :甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (39∶61);流速 1.0 mL/ min;检测波长 330 nm;柱温 28 ℃。 结果 :白苏子经炒制后迷迭香酸含量升 高 , 单紫苏子和双紫苏子则相应降 低 ;白 苏子 、单紫苏子和双紫苏子经蜜制 、制霜后 迷迭香酸含量均下降 , 蜜制品下降 幅度更大 。 结 论 :苏 子经加热处 理后 , 迷迭香酸含量易下降 。
样品含量按干燥品计算 , 结果见表 1、图 1。
表 1
样品测定结果 (n=3)
样品规格
迷迭香酸含量 /%
RSD/%
白苏子 炒白苏子 蜜白苏子 白苏子霜 单紫苏子 炒单紫苏子 蜜单紫苏子 单紫苏子霜 双紫苏子 炒双紫苏子 蜜双紫苏子 双紫苏子霜
0.1 92 0.2 04 0.1 68 0.1 73 0.3 39 0.3 36 0.2 91 0.3 30 0.5 21 0.5 08 0.4 03 0.4 90
JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 12期 2010年 12月
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品购于中药 固体制 剂制造 技术国 家工程 中心 (批 号 :1189-090422, 供含量测定用 );甲醇为色谱纯和 分析纯 , 水为重蒸水 , 磷酸为分析纯 。 2 药材炮制工艺 2.1 苏子 取原药材 , 除去杂质 , 洗净 , 干燥 。 2.2 炒苏子 取净苏子置锅内 , 用文火炒至有爆 裂声香气逸出时 , 取出放凉 。 2.3 蜜苏子 取炼蜜用适量开水稀释后 , 加入净 苏子拌匀 , 闷透 , 置锅内 , 用文火炒至深棕色 , 不黏手 为度 , 取出放凉 。每苏子 100 kg, 用炼蜜 10 kg。蜜 炙苏子偏于润肺止咳 。 2.4 苏子霜 取净苏子炒至爆裂 , 取出碾碎 , 用洁 布或吸油纸包裹 , 压榨去油 , 至油几净 , 手捏松散成 粉 , 取出研细 。苏子霜用于脾虚患者 。 3 方法与结果 3.1 色谱条件 参照相关条件〔5, 6〕并试验确定色 谱条件 , 色 谱柱 :WelchC18 (250 mm ×4.6 mm, 5 μm)柱 ;流动相 ∶甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (39∶61);流 速 1.0 mL/min;检测波长 330 nm;柱温 28 ℃。 理论 塔板数以迷迭香酸计算为 3730。 3.2 对照品溶液的制备 精密称取迷迭香酸对照 品 10.0 mg, 加甲醇溶解并定容至 50 mL, 配制成浓 度为 200 μg/mL对照品溶液 , 避光冷藏 。 3.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约 0.5 g, 精 密称定 , 置 具塞 锥形 瓶中 , 精密 加入 80%甲醇 50 mL, 密塞 , 称定重量 , 超声 (500 W, 50 kHz, 35 ℃)60 min, 放冷 , 再称定重量 , 用 80%甲醇补足减失的重 量 , 摇匀 , 0.2 μm微孔滤膜过滤 , 取续滤液 , 即得 。 3.4 系统适应性实验 3.4.1 线性关系 考察 :精 密吸取 “ 3.2”项下迷迭 香酸对照品溶 液配制 成浓度 分别 为 4、10、 20、40、 80、120 μg/mL的 对照品溶液 , 进样 20 μL, 以对照 品浓度为横坐标 , 峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 得回归方程 :Y=56874X-108145, R2 =0.9994。 结果 表明对照品在 4 ～ 120 μg/mL范围内线性关系良好 。 3.4.2 精 密度 试 验 :精 密吸 取 “ 3.4.1”项 下 80 μg/mL对照品溶液 20 μL连续进样 6 次 , 按 “ 3.1” 项下色谱条件测定 , RSD=0.50% (n=6), 表明仪 器精密度良好 。 3.4.3 重复 性试验 :精 密 称取 单紫 苏子 6 份按 “ 3.3”项下方法制备供试品溶液 , 进样 20 μL, 根据 RSD=0.54% (n=6), 表明方法重复性良好 。 3.4.4 稳定性试验 :精密称取白苏子 、单紫苏子和 双紫苏子约 0.5 g, 按 “3.3”项下方法制备供试品溶 液 , 分别在 0、2、4、6、12、24 h进样 20 μL, 根据测定
结果计算得白苏子 、单紫苏子和双紫苏子的 RSD分
别为 0.54%、1.03%和 0.26%(n=6), 表明供试品
溶液 24 h内稳定 。
3.4.5 回收率试验 :精密称取已知含量的单紫苏
子 6份 , 各约 0.25 g, 再分别精密加入迷迭香酸对照
品约 0.85 mg, 按 “3.3”项下方法制备供试品溶液 ,
便以它作 为紫苏子的含量测定 成分〔5〕 。 本 文以迷 迭香酸含量为指标 , 考察白苏子和紫苏子生品及其 炮制品中迷迭香酸的含量 , 为白苏子和紫苏子炮制 品的质量控制提供可靠依据 。 1 仪器与试药
WatersAlliance2695 高 效液 相色谱 仪 , Waters 2487紫外检测器 , Empower色谱工作站 ;SartoriusBT 25 S型 (max=21 g, d=0.01 mg)、梅特 勒 -托利多 AL104型 (max=110 g, d=0.0001 g)和天东衡 HX1001T型 (max=1 kg, d=0.1 g)电子天平 , 昆山 KQ500DE型数控超 声波清洗机 , 尚朋堂 SR-1605A电 磁炉 。
ContentDetermination
唇形科紫苏属一年生草本植物苏 Perillafrutescens(L.)Britt.有一个种 、三个变种和七个变型 , 三 个变种分别为白苏 Perillafrutescens(L.)Britt.var. typica(Makino)Makino、紫苏 Perillafrutescens(L.) Britt.var.acuta(Thunb.)Kudo和 皱紫 苏 Perilla frutescens(L.)Britt.var.crispa(Thunb.)Decne, 紫 苏有叶两面紫色 (其种子简称为双紫苏子 )和面绿 为 Perilla frutescens (L.) Britt. var. acuta (Thunb.) Kudoform.discolor(Makino) Kudo〔1〕 。 苏子为苏的干燥 成熟果实 , 能降气消痰 、平喘和润 肠 〔2〕 。中国药典只收载紫苏子 , 但白苏子常在市场 上流通 。紫苏子 含迷迭香酸 〔3〕 , 该酸具有 抗炎 、抗 氧化和免疫抑制等多种活性 〔4〕 , 2010年版中国药典
关键词 白苏子 ;紫苏子 ;炮 制品 ;迷迭香酸 ;含量测定 中图分类号 :R283.1 文献标识码 :A 文章编 号 :1001-4454(2010)12-1856-03
DeterminationofRosmarinicAcidinSeedsandItsProcessedProductsof Perillafrutescensvar.typicaandPerillafrutescensvar.acuta
白苏子和紫苏子为 2009年 10月采收于西北大 学果园 , 经西北大学胡正海教授鉴定 ;迷迭香酸对照
作者简介 :2010-07-19 基金项目 :黄亮 辉 (1986-), 男 , 硕士研究 生 , 主要从 事天然药 物化学成 分的分离 与分析研 究 ;Tel:029-88304569, E-mail:lianghuihuang@ 。 ＊通讯作者 :孙文基 , Tel:029-88304569, Fax:029-88304368, E-mail:cxbml@。
PFAandPFADarepronetodeclinebyheat-processing. Keywords SeedsofPerillafrutescensvar.typica;SeedsofPerillafrutescensvar.acuta;ProcessedProducts;RosmarinicAcid;
1.3 1 0.2 8 0.4 2 1.8 6 1.8 0 2.3 6 2.5 9 1.7 5 0.9 5 0.6 9 1.1 5 1.5 9
4 讨论 4.1 本实验考察了流动相甲醇 ∶0.1%甲酸水溶液 (40∶60、37∶63、36∶64、35∶65)和甲醇 ∶0.1%磷酸水 溶液 (40∶60和 39∶61), 发现比例 分别为 36∶64 和 39∶61时 , 样品色谱图中迷迭香酸峰达到基线分离 , 保留时间分别为 34.5 min和 22.9 min, 后者用时较 少 , 故选用甲醇 ∶0.1%磷酸水溶液 39∶61作流动相 。 4.2 考虑到光照和温度 〔7〕对迷迭香酸稳定性影响 较大 , 在制备供试品溶液过程中应使样品尽量避光 , 长时间放置需 低温保存 。 本 实验用超声法 制备样 品 , 考察了超声时间 10、20、30、40、50、60、90和 120 min对迷迭香酸提取率的影响 , 发现超声 60 min后 迷迭香酸含量达到最大 , 但超声时间对提取率影响 不大 。超声 60 min与中国药典方法回流 2 h效果差 不多 , 批量处理样品超声法更快捷 。 4.3 苏子大小区别明显 , 白苏子 、单紫苏子和双紫 苏子的千粒重分别为 1.7341、1.1440和 0.5234 g。 通过苏子的 HPLC图 , 可以清楚的区别白苏子与紫
进样 20 μL, 测 得 平 均 回 收 率 为 99.3%, RSD =
2.98% (n=6), 表明方法符合要求 。
3.5 样品含量测定 精密称取白苏子和紫苏子生
品及其炮制品各约 0.5 g, 按 “ 3.3”项下方法制备供
试品溶液 , 进样 20 μL, 按 “3.1”项下色谱条件测定 ,
HUANGLiang-hui, SUQi, ZHAOTing-ting, SUNWen-ji
(BiomedicineKeyLaboratoryofShaanxiProvince, NorthwestUniversity, Xi′an710069, China) Abstract Objective:TodeterminethecontentofrosmarinicacidinseedsanditsprocessedproductsofPerillafrutescensvar. typica(PFT), Perillafrutescensvar.acuta(PFA)andPerillafrutescensvar.acutaform.discolor(PFAD).Methods:Thecontentof rosmarinicacidwasdeterminedbyRP-HPLCwithWelchC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)column, usingmethanol-phosphonicacidsolution(39∶61)asmobilephaseatflowrateof1.0 mL/min.UVdetectionwavelengthwassetat330 nmandcolumntemperaturewas setat28 ℃.Results:ThecontentofrosmarinicacidinroastedseedsofPFTishigherthaninitsseeds, butthatofPFAandPFADare lower;ThecontentofrosmarinicacidinseedsofPFT, PFAandPFADdeclineaftertheseedsarehoney-pocessedandmadeintofrostlikepowder, andthatofhoney-processedonedeclinebyalargermargin.Conclusion:ThecontentofrosmarinicacidinseedsofPFT,
JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 12期 2010年 12月
白苏子和紫苏子生品及其炮制品中 迷迭香酸的含量测定
黄亮辉 , 苏 琪 , 赵婷婷 , 孙文基 ＊ (西北大学陕西省生物医药重点实验室 , 陕西 西安 710069)
摘要 目的 :测定白苏子和紫苏子生品及其不同炮制品中 迷迭香酸 的含量 。 方法 :采用 RP-HPLC测定迷迭香 酸的含量 , 色谱柱 :WelchC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm )柱 ;流动相 :甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (39∶61);流速 1.0 mL/ min;检测波长 330 nm;柱温 28 ℃。 结果 :白苏子经炒制后迷迭香酸含量升 高 , 单紫苏子和双紫苏子则相应降 低 ;白 苏子 、单紫苏子和双紫苏子经蜜制 、制霜后 迷迭香酸含量均下降 , 蜜制品下降 幅度更大 。 结 论 :苏 子经加热处 理后 , 迷迭香酸含量易下降 。
样品含量按干燥品计算 , 结果见表 1、图 1。
表 1
样品测定结果 (n=3)
样品规格
迷迭香酸含量 /%
RSD/%
白苏子 炒白苏子 蜜白苏子 白苏子霜 单紫苏子 炒单紫苏子 蜜单紫苏子 单紫苏子霜 双紫苏子 炒双紫苏子 蜜双紫苏子 双紫苏子霜
0.1 92 0.2 04 0.1 68 0.1 73 0.3 39 0.3 36 0.2 91 0.3 30 0.5 21 0.5 08 0.4 03 0.4 90
JournalofChineseMedicinalMaterials 第 33卷第 12期 2010年 12月
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品购于中药 固体制 剂制造 技术国 家工程 中心 (批 号 :1189-090422, 供含量测定用 );甲醇为色谱纯和 分析纯 , 水为重蒸水 , 磷酸为分析纯 。 2 药材炮制工艺 2.1 苏子 取原药材 , 除去杂质 , 洗净 , 干燥 。 2.2 炒苏子 取净苏子置锅内 , 用文火炒至有爆 裂声香气逸出时 , 取出放凉 。 2.3 蜜苏子 取炼蜜用适量开水稀释后 , 加入净 苏子拌匀 , 闷透 , 置锅内 , 用文火炒至深棕色 , 不黏手 为度 , 取出放凉 。每苏子 100 kg, 用炼蜜 10 kg。蜜 炙苏子偏于润肺止咳 。 2.4 苏子霜 取净苏子炒至爆裂 , 取出碾碎 , 用洁 布或吸油纸包裹 , 压榨去油 , 至油几净 , 手捏松散成 粉 , 取出研细 。苏子霜用于脾虚患者 。 3 方法与结果 3.1 色谱条件 参照相关条件〔5, 6〕并试验确定色 谱条件 , 色 谱柱 :WelchC18 (250 mm ×4.6 mm, 5 μm)柱 ;流动相 ∶甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (39∶61);流 速 1.0 mL/min;检测波长 330 nm;柱温 28 ℃。 理论 塔板数以迷迭香酸计算为 3730。 3.2 对照品溶液的制备 精密称取迷迭香酸对照 品 10.0 mg, 加甲醇溶解并定容至 50 mL, 配制成浓 度为 200 μg/mL对照品溶液 , 避光冷藏 。 3.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约 0.5 g, 精 密称定 , 置 具塞 锥形 瓶中 , 精密 加入 80%甲醇 50 mL, 密塞 , 称定重量 , 超声 (500 W, 50 kHz, 35 ℃)60 min, 放冷 , 再称定重量 , 用 80%甲醇补足减失的重 量 , 摇匀 , 0.2 μm微孔滤膜过滤 , 取续滤液 , 即得 。 3.4 系统适应性实验 3.4.1 线性关系 考察 :精 密吸取 “ 3.2”项下迷迭 香酸对照品溶 液配制 成浓度 分别 为 4、10、 20、40、 80、120 μg/mL的 对照品溶液 , 进样 20 μL, 以对照 品浓度为横坐标 , 峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 得回归方程 :Y=56874X-108145, R2 =0.9994。 结果 表明对照品在 4 ～ 120 μg/mL范围内线性关系良好 。 3.4.2 精 密度 试 验 :精 密吸 取 “ 3.4.1”项 下 80 μg/mL对照品溶液 20 μL连续进样 6 次 , 按 “ 3.1” 项下色谱条件测定 , RSD=0.50% (n=6), 表明仪 器精密度良好 。 3.4.3 重复 性试验 :精 密 称取 单紫 苏子 6 份按 “ 3.3”项下方法制备供试品溶液 , 进样 20 μL, 根据 RSD=0.54% (n=6), 表明方法重复性良好 。 3.4.4 稳定性试验 :精密称取白苏子 、单紫苏子和 双紫苏子约 0.5 g, 按 “3.3”项下方法制备供试品溶 液 , 分别在 0、2、4、6、12、24 h进样 20 μL, 根据测定
结果计算得白苏子 、单紫苏子和双紫苏子的 RSD分
别为 0.54%、1.03%和 0.26%(n=6), 表明供试品
溶液 24 h内稳定 。
3.4.5 回收率试验 :精密称取已知含量的单紫苏
子 6份 , 各约 0.25 g, 再分别精密加入迷迭香酸对照
品约 0.85 mg, 按 “3.3”项下方法制备供试品溶液 ,
便以它作 为紫苏子的含量测定 成分〔5〕 。 本 文以迷 迭香酸含量为指标 , 考察白苏子和紫苏子生品及其 炮制品中迷迭香酸的含量 , 为白苏子和紫苏子炮制 品的质量控制提供可靠依据 。 1 仪器与试药
WatersAlliance2695 高 效液 相色谱 仪 , Waters 2487紫外检测器 , Empower色谱工作站 ;SartoriusBT 25 S型 (max=21 g, d=0.01 mg)、梅特 勒 -托利多 AL104型 (max=110 g, d=0.0001 g)和天东衡 HX1001T型 (max=1 kg, d=0.1 g)电子天平 , 昆山 KQ500DE型数控超 声波清洗机 , 尚朋堂 SR-1605A电 磁炉 。
ContentDetermination
唇形科紫苏属一年生草本植物苏 Perillafrutescens(L.)Britt.有一个种 、三个变种和七个变型 , 三 个变种分别为白苏 Perillafrutescens(L.)Britt.var. typica(Makino)Makino、紫苏 Perillafrutescens(L.) Britt.var.acuta(Thunb.)Kudo和 皱紫 苏 Perilla frutescens(L.)Britt.var.crispa(Thunb.)Decne, 紫 苏有叶两面紫色 (其种子简称为双紫苏子 )和面绿 为 Perilla frutescens (L.) Britt. var. acuta (Thunb.) Kudoform.discolor(Makino) Kudo〔1〕 。 苏子为苏的干燥 成熟果实 , 能降气消痰 、平喘和润 肠 〔2〕 。中国药典只收载紫苏子 , 但白苏子常在市场 上流通 。紫苏子 含迷迭香酸 〔3〕 , 该酸具有 抗炎 、抗 氧化和免疫抑制等多种活性 〔4〕 , 2010年版中国药典
关键词 白苏子 ;紫苏子 ;炮 制品 ;迷迭香酸 ;含量测定 中图分类号 :R283.1 文献标识码 :A 文章编 号 :1001-4454(2010)12-1856-03
DeterminationofRosmarinicAcidinSeedsandItsProcessedProductsof Perillafrutescensvar.typicaandPerillafrutescensvar.acuta
白苏子和紫苏子为 2009年 10月采收于西北大 学果园 , 经西北大学胡正海教授鉴定 ;迷迭香酸对照
作者简介 :2010-07-19 基金项目 :黄亮 辉 (1986-), 男 , 硕士研究 生 , 主要从 事天然药 物化学成 分的分离 与分析研 究 ;Tel:029-88304569, E-mail:lianghuihuang@ 。 ＊通讯作者 :孙文基 , Tel:029-88304569, Fax:029-88304368, E-mail:cxbml@。
PFAandPFADarepronetodeclinebyheat-processing. Keywords SeedsofPerillafrutescensvar.typica;SeedsofPerillafrutescensvar.acuta;ProcessedProducts;RosmarinicAcid;
1.3 1 0.2 8 0.4 2 1.8 6 1.8 0 2.3 6 2.5 9 1.7 5 0.9 5 0.6 9 1.1 5 1.5 9
4 讨论 4.1 本实验考察了流动相甲醇 ∶0.1%甲酸水溶液 (40∶60、37∶63、36∶64、35∶65)和甲醇 ∶0.1%磷酸水 溶液 (40∶60和 39∶61), 发现比例 分别为 36∶64 和 39∶61时 , 样品色谱图中迷迭香酸峰达到基线分离 , 保留时间分别为 34.5 min和 22.9 min, 后者用时较 少 , 故选用甲醇 ∶0.1%磷酸水溶液 39∶61作流动相 。 4.2 考虑到光照和温度 〔7〕对迷迭香酸稳定性影响 较大 , 在制备供试品溶液过程中应使样品尽量避光 , 长时间放置需 低温保存 。 本 实验用超声法 制备样 品 , 考察了超声时间 10、20、30、40、50、60、90和 120 min对迷迭香酸提取率的影响 , 发现超声 60 min后 迷迭香酸含量达到最大 , 但超声时间对提取率影响 不大 。超声 60 min与中国药典方法回流 2 h效果差 不多 , 批量处理样品超声法更快捷 。 4.3 苏子大小区别明显 , 白苏子 、单紫苏子和双紫 苏子的千粒重分别为 1.7341、1.1440和 0.5234 g。 通过苏子的 HPLC图 , 可以清楚的区别白苏子与紫
进样 20 μL, 测 得 平 均 回 收 率 为 99.3%, RSD =
2.98% (n=6), 表明方法符合要求 。
3.5 样品含量测定 精密称取白苏子和紫苏子生
品及其炮制品各约 0.5 g, 按 “ 3.3”项下方法制备供
试品溶液 , 进样 20 μL, 按 “3.1”项下色谱条件测定 ,
HUANGLiang-hui, SUQi, ZHAOTing-ting, SUNWen-ji
(BiomedicineKeyLaboratoryofShaanxiProvince, NorthwestUniversity, Xi′an710069, China) Abstract Objective:TodeterminethecontentofrosmarinicacidinseedsanditsprocessedproductsofPerillafrutescensvar. typica(PFT), Perillafrutescensvar.acuta(PFA)andPerillafrutescensvar.acutaform.discolor(PFAD).Methods:Thecontentof rosmarinicacidwasdeterminedbyRP-HPLCwithWelchC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)column, usingmethanol-phosphonicacidsolution(39∶61)asmobilephaseatflowrateof1.0 mL/min.UVdetectionwavelengthwassetat330 nmandcolumntemperaturewas setat28 ℃.Results:ThecontentofrosmarinicacidinroastedseedsofPFTishigherthaninitsseeds, butthatofPFAandPFADare lower;ThecontentofrosmarinicacidinseedsofPFT, PFAandPFADdeclineaftertheseedsarehoney-pocessedandmadeintofrostlikepowder, andthatofhoney-processedonedeclinebyalargermargin.Conclusion:ThecontentofrosmarinicacidinseedsofPFT,