病理科工作流程

止将水分带入二甲苯。
8.二甲苯后两步宜慢，以利于无水乙醇彻底脱净。封片后若
切片成云雾状，说明最后一步二甲苯不纯。
六、程序控制的自动组织切片染色机
• 徕卡-AUTO Stainer XL型自动染色机
• 一、结构与功能
1.带有全透明的机盖，可随时观察染色机的工作情况； 2.设有干燥加热装置。对切片再一次烘烤，去除切片残余水分；
二、全密闭程序控制自动组织脱水机
1、全密闭式程序控制自动组织脱水机的结构
控制面板、处理槽、石蜡箱、试剂柜等
2、全密闭式程序控制自动组织脱水机的功能
可设定密码、延时功能、小标本当日完成、加温功能、 报警功能等
3、全密闭式程序控制自动组织脱水机程序的设置
二、全密闭程序控制自动组织脱水机
试剂 甲醛 甲醛 甲醛 乙醇 乙醇 乙醇 无水乙醇 无水乙醇 无水乙醇 浓度 10% 10% 10% 80% 95% 95% 100% 100% 100% 时间 1h 1h 1h 1h 1h 1h 1h 1h 1h
熔蜡器、全自动组织包埋、冷台一体机 最常用的包埋石蜡熔点为56~58℃、58~60℃
三、组织包埋制作技术
• 全自动组织包埋、冷台一体机
三大组成部分：1.石蜡缸及出蜡口；2.左右储存槽 （100~120块）；3.工作台面以及镊子加热孔 功能：温度调节（65~70℃）、时钟调节（24h）、工作时 间设定（每周的工作日期）、开关机时间设定（6~10： 30）、冷台装置（0~-15℃）、流量控制。 维护与保养：选择质量好的切片石蜡，注意定期清理熔蜡储 槽，并加入少许二甲苯清洗管道，以保证石蜡流出畅通， 并在每日工作完成后清洗机器外貌。散热孔要经常清理。
病理科常规技术室工作流程及 日常工作质量控制
2016年8月30日
病理科工作流程
接受标本（编号、登记）——固定——标 本取材、记录——脱水——常规制片（包
特殊染色
埋、切片、染色）—— 免疫组化 |——————
归档
目录
一、组织脱水、透明、浸蜡 二、全密闭程序控制自动组织脱水机 三、组织包埋制作技术 四、石蜡组织切片制作技术 五、苏木素-伊红染色技术 六、程序控制的自动组织切片染色机 七、全自动组织玻片封片机
试剂
浓度
时间
二甲苯
二甲苯 二甲苯 石蜡 石蜡
30min
45min 60min 30min 1h
石蜡
1h
二、全密闭程序控制自动组织脱水机
4、全密闭式程序控制自动组织脱水机液体的更换规 律及原则
理论上讲每次更换液体应该将脱水机内的液体全部更换。
（1）一般固定液每周更换一次。若组织块较多（每天 200~300块），固定液没三天更换一次。 （2）脱水剂梯度酒精每周更换一次（150块/天，如果每天 处理300块左右，应该3天更换一次乙醇）。方法是将第2缸 的80%乙醇倒弃，95%乙醇及无水乙醇依次迁移。 （3）透明二甲苯10~15天更换一次，二甲苯第一缸倒弃，第 二缸前移。 （4）石蜡必须干净无杂质。建议1500~2000块将第一缸石蜡废弃。
2.二甲苯的容器要密闭，严禁液体外溢。必须在通风橱柜中
进行操作。
3.苏木精-伊红的染色时间应根据组织不同、固定液不同、 固定时间、环境温度、染色液新旧、切片厚薄及染片数量 来决定。 4.苏木精染色后不宜在水中停留时间过长，防止染色质变 蓝后不易分化；伊红染色后水洗时间要短，否则易脱色。
整个过程要在显微镜下观察控制染色效果（理论）。
二、操作程序
1.染色前检查染色缸中的染色液量是否充足，染色缸的位置 排列是否正常，确认进水开关开启； 2.打开主电源插座的电源开关及仪器的总开关； 3.显示屏上显示出主菜单，按stain键，机械手移动到每个染 色缸的部位进行自检，仪器进入工作状态； 4.将装载切片的染色栏放入染色机，按load键； 5.自动染色机对每一个染色架染色结束后，停留在退出位置， 蜂鸣提示染色程序完成，按Exit键； 6.染色程序全部结束后，关闭仪器电源，将染色机内的染色 缸盖好。
二、全密闭程序控制自动组织脱水机
5、全密闭式程序控制自动组织脱水机液体的操作方 法
从取材室与取材医师完成标本核对后，将组织拿至脱水机， 此刻脱水机界面如下图所示
1.确认清洗程序完成，打开处理槽盖。 2.擦净槽盖面及槽内水气，槽内残渣。 3.将脱水栏按顺序平稳放好，盖紧槽盖、确认锁定。 4.选择层数(level)、选择并确认使用的程序(Progress Select) ，立即开始 (Immediate Start )处理组织。
三、组织包埋制作技术
• 石蜡包埋法及质量控制
1.包埋时要核对组织块与标本盒的标记是否一致（黄盒x几）。 2.严禁污染及交叉污染（随时纱布擦拭台面）。 3.根据组织的大小选择不同的包埋模具。 4.根据组织的不同结构层次、特点、标记面，包埋时应加以注意，如食 管黏膜或标注立埋的则需要立（垂直）埋。 5.皮肤组织包埋时应将组织块45°倾斜放入石蜡中包埋，2块及以上组织 并列倾斜包埋。 6.食管黏膜、胃肠类黏膜视黏膜组织大小、长短、厚薄，或90°垂直包 埋，或卷曲包埋。 7.肾、肝、前列腺、乳腺等穿刺标本视组织大小，包埋时平整的放入石 蜡中，轻轻按平，切片时才能切全，用力过重会使组织破碎，过轻会 使组织包埋不平，切片不完整。
五、苏木精—伊红染色技术
5.HE染色成败关键在于盐酸酒精分化及返蓝，一定要在镜 下控制，严格掌握时间。肉眼观察：切片由原来的深蓝色变成红
色至粉红色时即恰到好处，再冲水返蓝
6.切片脱水时在低浓度酒精中的时间不宜过长，因其对伊 红有分色及褪色作用。 7.在无水乙醇中脱水时间应稍长，保证最后一步酒精要纯，防
5.脱水程序处理完成，按（drain all chamber）将处理槽内的石蜡排空。 6.打开处理槽盖，取出脱水栏，将槽内残蜡擦拭干净。 7.盖好处理槽盖，按（flush start）清洗，整个处理程序完成。
二、全密闭程序控制自动组织脱水机
• 备注：
• 1.如果脱水过程中，有需要继续添加的组织，选择Lid Release键，然后将盖子打开，将组织放入脱水机，然后 按屏幕பைடு நூலகம்Restart所对应的按键即可 • 2.每次脱水完成前、后都应擦拭反应缸，脱水完成后，取 出组织，应将组织篮放入反应缸中运行冲洗程序，以脱去 反应缸及其组织篮中的石蜡以方便取材。 • 3.应定期检测石蜡液面，正常情况下每周检测一次，如一 段时间内标本过多或者过少，可以适当减少或者增加检测 周期，防止出现石蜡液面不够的情况。 • 4.脱水机需要定期擦拭保养，并填写设备维护保养记录。
切片带有热量进入二甲苯脱蜡速度快；能保持染色机内温度恒定，染 色效果好。
3.带有多个试剂槽，可移动，可变换，密封效果好； 4.具有装载、下载的通道； 5.设有水洗缸，可进行水流控制； 6.机械手臂可横向及纵向运动，带有抖动功能，幅度可调。 7.内置软件，精确的孵育时间；
六、程序控制的自动组织切片染色机
六、程序控制的自动组织切片染色机
三、试剂质控
1.建立档案 详细记录每天的染色数量，及时更换液体。（160180张切片轮转脱水酒精，1400-1600张切片轮转脱蜡二甲苯及透明二甲苯， 1400-1600张更换脱二甲苯的酒精、苏木素、盐酸酒精及伊红）
2.苏木精染色液每天要过滤后使用。（氧化膜） 3.根据工作量，经常添加或更换脱蜡用二甲苯，切片从干燥加热
五、苏木精—伊红染色技术
• 苏木精伊红染色手工操作程序及注意事项
• 染色程序：二甲苯Ⅰ（脱蜡）——二甲苯Ⅱ（脱蜡）——
3min 1min 1min 3s左右 20s 10s 1min 1min 1min 5-10min 10s 1min 1min 3min 3-5min
无水乙醇Ⅰ——无水乙醇Ⅱ——自来水冲洗——苏木素——
五、苏木精—伊红染色技术
• 二、返蓝的目的与控制：苏木精染色后经1%盐酸酒精液 分化；切片是在酸性环境中，这时颜色是红褐色。切片进 入弱碱性自来水冲洗或用返蓝液（0.5%氢氧化氨水溶液） 在碱性环境中就会由红褐色变成蓝色。 • 三、分化液、返蓝液的配制： 1.分化液 浓盐酸1ml，70%乙醇99ml。 2.返蓝液：氢氧化氨0.5ml，蒸馏水99.5ml。
自来水冲洗——1%盐酸酒精分化——自来水冲洗（去分
化）——伊红（醇溶）——自来水冲洗——85%乙醇（脱水）——
95%乙醇（脱水）——无水乙醇（脱水）——无水乙醇（脱水）——
二甲苯Ⅰ（透明）——二甲苯Ⅱ（透明）——二甲苯Ⅲ（脱蜡）
五、苏木精—伊红染色技术
• 染色的注意事项：
1.脱蜡要彻底。透明状，与温度、时间、二甲苯使用的时间及脱蜡 片数有关。
一、组织脱水、透明、浸蜡
• 组织浸蜡
1.组织浸蜡的目的：组织经过脱水、透明后用的石蜡、火 胶棉、明胶等支持剂浸入组织内，使组织变硬并将组织包 裹在内，有利于切片，这个过程称为浸蜡。 2.组织浸蜡的方法：经数次石蜡浸泡（一般为3~4个步骤， 每步50~60min）置换出组织内的透明剂，使纯净的石蜡浸 入组织内。浸蜡用的石蜡熔点一般为58~60℃。 3.浸蜡剂的种类：石蜡（最广泛应用）、火胶棉、明胶
一、组织脱水、透明、浸蜡
• 组织脱水
1.脱水的目的和原则：组织经固定后，含有大量水分，组 织在透明浸蜡前必须进行脱水，就是用某些溶剂将组织内 的水分逐渐置换出来，以利于透明剂和石蜡的渗入，这个 过程称为脱水。原则1.脱干净但又不过脱水；2.脱水剂自 低浓度至高浓度进行。 2.常用脱水剂：乙醇、丙酮 3.常用脱水顺序是：70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、 95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ。
三、组织包埋制作技术
• 包埋的定义：组织块经过固定、脱水、透明剂（石蜡、
火胶棉、树脂、塑料等）浸透，用包埋剂（石蜡、火胶棉、 树脂、塑料等）包成块的过程称为包埋。
• 常用包埋方法：石蜡包埋法、火胶棉包埋法、树脂包埋