GE离子交换层析柱

GE离子交换层析柱 protocol 5ml（举例
子）
Preparation
1. Buffer:
（pH 根据蛋白的 pI 进行调整，pH 尽量远离 pI。

pH>pI,过 Q 柱；pH>pI,过 S 柱）
A: 50mM Tris-HCl
B: 50mM Tris-HCl 1M NaCl
过滤除杂质，4℃静置过夜除气泡。

2. Protein:
用滤器过滤除质；或者分装于 EP 管，14000rpm，4℃离心 20min，去除沉淀。

3 .Prepare enough tubes
有流速时，禁止将泵的探头暴露到空气中!!! 柱子在仪器上时，无论何时均要限压!!! Procedure
1 打开仪器总开关，电脑。

检查：泵的探头是否放入纯水中。

洗泵：Manual--pump--pump basic wash--A on ,B on--insert--execute
洗系统：Manual--pump--flow--10ml/min--insert--execute
Manual--other--End time--volume--40 ml
2 安装柱子
给流速：Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute(仪器显示系统压力为*Mpa)限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--+*)Mpa--insert--execute 是 Hitrap Q 柱子的最大限压)
装柱子：先装上面，再下面，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。

3 清洗柱子
限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--+*)Mpa--insert--
execute
给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute（低流速下装柱子）Manual--other--End time--volume--10 ml
（第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子，必须先用纯水洗以上。

CV：柱体积，
其中 Hitrap Q HP5ml 的 CV 是
5ml）停流速：End
装溶液：将 A 泵放入 buffer A, 将 B 泵放入 buffer B。

（必须在零流速下操作）限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--+*)Mpa--insert--
execute 低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--execute
Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute
清洗至基线走平（大约需要 20ml）高盐洗：
Manual--pump--gradient--100%B--insert--execute
Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute
清洗至基线走到平
低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--
execute Manual--pump--flow--3ml/min--
insert--execute 清洗至基线走平
停流速：End
4 上样品
选择合适的上样环，例如 5ml loop.
用纯水清洗 loop 三次，再用 buffer A 清洗 loop 三次，赶走气泡；同时清洗上样口。

将样品置于上样口，用针筒抽吸样品进入 loop。

（切忌吸入气泡）
5 运行程序
File--设定的程序--show detail--确认无误--
START。

特别注意更改压力，上样量大小。

6 清洗柱子（同3）
限压力（勿忘）--低盐洗--高盐洗--低盐
洗最后还要用水洗柱子。

停流速：End
装溶液：将 A 泵，B 泵用水清洗后，放入纯水中。

（必须在零流速下操作）水洗：Manual--pump—gr adient--0%B--insert--execute
Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute
清洗至基线走平
7 卸柱子
限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--+*)Mpa--insert--execute 是 Hitrap Q 柱子的最大限压，*：系统压力)
给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute
卸柱子：先卸下面，再卸上面，卸下的柱子置于 4℃保存。

（低流速下卸柱子）。