免疫层析纳米金试纸研究方法进展
纳米金免疫层析法定量检测尿RBP
纳米金免疫层析法定量检测尿RBP作者：徐宽沈鹤柏朱龙章来源：《上海师范大学学报·自然科学版》2013年第02期摘要：应用纳米金免疫层析技术（双抗夹心法）和柠檬酸三钠还原法建立一种对尿RBP 的快速定量检测方法，并在此基础上研制出快速检测试纸条。
该试纸条用纳米金免疫层析定量分析仪可在15 min内实现RBP定量检测，检测限为150 μg/L（相当于150 ng/mL），检测范围为150～5000 μg/L。
与尿微量白蛋白（ALB）、转铁蛋白（TRF）、β2-微球蛋白（β2-MG）、尿纤维连接蛋白（FN）、溶菌酶（LZM）等肾脏疾病标志物无交叉反应。
该方法特异性强、检测灵敏度高、范围广、简便快捷，在近端肾小管的损伤、糖尿病肾病等肾脏疾病的早期诊断及过程监控中具有较为广泛的临床应用。
关键词：尿RBP；纳米金；免疫层析；定量检测中图分类号： O 648 文献标识码： A 文章编号： 1000-5137（2013）02-0154-070 前言视黄醇结合蛋白（Retinol Binding Protein，RBP）是体内一类将VitA从肝脏中转运至靶组织以及实现VitA细胞内转运代谢的特异性运载蛋白，在协助VitA发挥生理功能中起着不可替代的作用[1]。
研究发现RBP广泛存在于正常人的体液中，属于α1-球蛋白[2]。
RBP主要以视黄醇和前白蛋白结合的复合物形式存在，当复合物中视黄醇与靶细胞结合后，复合物中的视黄醇结合蛋白便与前白蛋白分离而从肾小球滤出，并由近端肾小管上皮细胞吸收、降解[3]。
近年来的深入研究表明，RBP含量的改变能够敏感地反映近端肾小管的损伤，实现糖尿病、肾病的早期诊断[4]。
彭彦孟等[5]在采用ELISA法对241例肾脏疾病患者的尿RBP进行检测以探讨尿RBP在早期肾小管损伤的诊断价值。
实验发现，肾损伤患者的尿RBP较正常对照组明显增高；同时，尿RBP在酸性环境中稳定性好且不易被破坏，是反映肾小管受损的敏感指标。
基于光电检测与信息处理技术的纳米金免疫层析试条定量测试的研究
光电检测与信息处理技术
信号处理：在光电检测中，信号处理技术用于提取、增强和还原光信号，提高检测的准确性和稳定性。
图像处理：图像处理技术用于对光电检测获取的图像进行预处理、特征提取和模式识别，实现高精度和高效率的检测。
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信息处理技术：通过计算机图像处理和数据分析技术，对纳米金免疫层析试条的测试结果进行定量分析和解释，为临床诊断和治疗提供科学依据。
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作用：光电检测与信息处理技术的结合，使得纳米金免疫层析试条定量测试更加准确、快速和便捷，为医学诊断和治疗提供了有力的技术支持。
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应用前景：随着科技的不断进步和创新，光电检测与信息处理技术在纳米金免疫层析试条定量测试中的应用将更加广泛和深入，为医学领域的发展做出更大的贡献。
汇报人：
基于光电检测与信息处理技术的纳米金免疫层析试条定量测Hale Waihona Puke 的研究目录添加目录标题
研究背景与意义
纳米金免疫层析试条工作原理
光电检测与信息处理技术
纳米金免疫层析试条定量测试方法研究
实验结果与讨论
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研究背景与意义
纳米金免疫层析试条的原理与技术特点
实际应用案例及效果评估
与其他检测方法的比较及优势
缺乏实际应用验证：目前的研究成果尚未在实际应用中进行验证，需要进一步开展相关研究。
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拓展应用领域，提高检测灵敏度和特异性
纳米金免疫层析试条定量测试技术的进一步研究
加强与其他领域的交叉融合，推动技术创新
推动纳米金免疫层析试条定量测试技术的产业化发展
纳米金磁复合微粒表面修饰及在免疫层析中的应用研究博士学位论文
纳米金磁复合微粒表面修饰及在免疫层析中的应用研究中文摘要免疫层析作为临床检测常用的床边诊断（POCT：Point-of-Care Test）技术，具有简单、经济、快速等优点，受到广大医务工作者和患者的亲睐，此外这项技术还广泛应用于家庭和海关，野外勘测等场所。
然而，传统的产品仅提供定性或半定量检测结果，通过胶体金在层析试纸条表面形成条带灰度的半定量检测使其灵敏度和准确度均受到一定限制。
近年来人们着手探索更新一代的纳米材料（如量子点或磁性纳米粒）在该领域的应用，通过荧光信号或磁学信号不仅可保持现有产品快速的特点，还可实现高灵敏准确定量的目的。
基于新一代标记材料的免疫层析方法的建立，在心内科、急诊、食品安全或动植物检疫的定量检测等领域具有重要意义。
纳米金磁微粒是由金组分与四氧化三铁纳米粒子组成的复合材料。
四氧化三铁纳米粒子具有超顺磁特性，而金壳层保证其具备等离子体共振吸收和高效偶联生物分子的性能。
以纳米金磁微粒替代胶体金应用于免疫层析检测，可结合其磁学、光学和免疫层析的优势，实现快速，准确高灵敏定量检测。
通过化学法原位还原制备纳米金磁微粒，以稀盐酸处理去除样品中四氧化三铁纳米粒子，探讨巯基化试剂（SH-PEG-COOH）对纳米金磁微粒表面的修饰效果及其在不同缓冲液中的抗团聚能力。
进一步选择价格低廉的阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠为修饰剂，探讨纳米金磁微粒修饰后材料的单分散性、稳定性以及磁学性能等。
研究了抗人绒毛膜促性腺激素（hCG）单抗和抗小分子半抗原吗啡的单抗在其表面的固定化，基于双抗体夹心和竞争法的免疫层析原理，分别以固定抗体的纳米金磁微粒为载体，不但实现了吗啡的定性检测，还建立了hCG目视化定性和磁信号定量检测的方法，结果表明：1. 纳米金磁微粒等离子体共振吸收峰在544 nm，饱和磁化强度在38.5 emu/g；1 mg 的金磁微粒可偶联130 µg的牛血清白蛋白。
透射电镜表征呈球形，粒径约30 nm，体系中含较多10 nm左右的四氧化三铁纳米粒子。
侧流免疫层析实验实验报告
侧流免疫层析实验实验报告侧流免疫层析是一种基于抗原、抗体免疫反应的经典床旁检测技术。
最初，研究人员采用纳米金制备层析试纸条，用于尿人绒毛膜促性腺激素检测，即我们熟知的胶体金。
但检测结果依赖人工判读，且检测灵敏度低、假阴性率高。
随后，一些对层析膜进行简单图像采集、处理的仪器相继出现，LFIA结果判读实现自动、半定量化。
近年来，LFIA不断发展，检测性能得到很大提升，已逐步向定量检测过渡，其可检测样品多样（如全血、血浆、汗液、唾液，尿液等），并且能对核酸进行检测。
本文综述了LFIA检测系统的研究进展以及LFIA的商品化应用现状，以期为相关领域提供参考。
一、LFIA结构及定量检测侧流免疫层析试纸条由样品垫、结合垫、层析膜、吸水纸和聚氯乙烯底板五部分组成。
单克隆抗体和二抗被预先固定在层析膜上以形成测试线或对照线，加入含待测物的样品后，待测物与结合垫上的标记抗体结合，随层析作用进一步被固定在T线上的单抗捕获。
过量的标记抗体被C线上的二抗捕获，通过特定检测仪器读取T/C线上的标记物信号强度，并代入预先绘制的标准曲线，在保留LFIA优点的同时实现了LFIA对待测物的定量分析。
对于完整的LFIA定量检测系统而言，标记物、层析膜、检测仪是保障定量结果快速、灵敏、准确的基础。
在近十年里，已研发出不同信号类型的灵敏标记物以及多种新型层析膜材料，还设计了一系列价格合理、结构紧凑的检测设备用于免疫层析结果的记录和量化。
特别地，为保证定量结果溯源性，对试验中所使用的标记物、耗材、试剂、仪器及检测程序均可开展量值溯源工作，以使LFIA产品的检测结果溯源至国家或国际标准。
可用经典的蛋白和分子检测方法，作为验证LFIA诊断效能的参比方法，如酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应等。
LFIA实现定量检测使得检测结果不受主观因素制约，大大提高了其在即时检测领域的应用深度与广度。
下文就实现LFIA定量检测的三个重要组成部件即标记物、检测仪器、层析膜以及取得的应用进展进行详细阐述。
免疫层析试纸条检测技术的研究进展
免疫层析试纸条检测技术的研究进展周梦婕; 李小盼; 代荣阳【期刊名称】《《检验医学与临床》》【年(卷),期】2019(016)022【总页数】5页(P3382-3386)【关键词】免疫层析; 胶体金试纸条; 荧光试纸条; 纳米酶试纸条【作者】周梦婕; 李小盼; 代荣阳【作者单位】西南医科大学生物化学与细胞生物学系四川泸州 646000; 中国科学院生物物理研究所蛋白质与多肽药物实验室北京 100101; 吉尔生物科技(天津)有限公司天津 300270【正文语种】中文【中图分类】R446.1; R446.6免疫层析试纸条检测技术是20世纪70年代兴起的适用于患者床旁检测或家庭检测的检验技术，相较于酶联免疫吸附试验(ELISA)，其具有普适性、快捷性等优点。
免疫层析试纸条检测技术具有操作简便、结果快速且稳定、不需要大型设备及成本低廉等优点，因此在临床诊断等领域迅速普及。
免疫层析试纸条检测技术随着纳米标记材料的不断进步(从胶体金到荧光微球、量子点，再到纳米酶)而不断发展，展现出巨大的潜能。
免疫层析试纸条的应用范围也从生物大分子检测扩展到环境监测、食品卫生检测、疾病筛查与诊断等多个领域。
本文从多个方面对免疫层析试纸条检测技术的发展进行总结，并对其未来进行展望。
1 免疫层析试纸条检测技术免疫层析试纸条检测技术是基于免疫标记技术和色谱层析技术发展起来的一种可用于检测抗原、抗体或半抗原的检测技术。
其特点是应用抗原-抗体特异性的免疫学反应和层析技术，并以干片式试纸的形式，达到快速、特异、准确地显色以检测待测物的目的，同时该技术不需依赖专业技术人员和大型仪器设备[1]。
其检测原理：基于毛细管床自发运送液体从样品垫至结合垫，通过液体层析将样品与示踪颗粒共同带往信号产生膜，发生抗原抗体结合反应。
示踪颗粒在信号发生区显色或产生其他信号反应，10 min左右即可直观地观察到检测结果。
该技术成本低，省去了洗涤、分离等诸多烦琐的步骤，操作快捷、简便，是床旁诊断(POCT)的一种主要形式。
金免疫层析实验报告
金免疫层析实验报告引言金免疫层析法（Gold Immunochromatography Assay）是一种基于免疫学原理的快速检测技术。
该技术采用金纳米颗粒作为检测试剂，通过抗原与抗体的特异性反应，形成可见的信号变化。
金免疫层析法具有简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点，被广泛应用于临床诊断、食品检测、环境监测等领域。
实验目的本次实验旨在利用金免疫层析技术，检测样品中特定抗原的存在与浓度。
实验原理金免疫层析法利用抗原与抗体的特异性结合作用，将金纳米颗粒标记的抗体与待检样品中的抗原结合后形成复合物。
复合物随着样品在载体上的移动，最终在检测线上与免疫试纸上固定的抗原结合，形成显色线。
实验所使用的金纳米颗粒表面修饰有一定的功能基团，例如硫酸根、羧基等，使其可与抗体发生静电或化学键结合。
金纳米颗粒的较大表面积也有利于增加抗原与抗体的结合。
一般而言，复合物越大，在免疫试纸上显色越明显。
实验材料与方法材料- 免疫试纸- 待检样品- 金纳米颗粒标记的特异性抗体溶液- 阴性对照液- 阳性对照液方法1. 取一张免疫试纸，标记好控制线和检测线的位置。
2. 使用吸管或移液器将待检样品滴到样品孔中，待样品被吸收进入试纸后等待一段时间。
3. 向样品孔中加入金纳米颗粒标记的特异性抗体溶液，使其与待检样品中的抗原结合。
4. 等待一段时间使样品与抗体充分反应。
5. 加入阴性对照液，观察免疫试纸上是否出现控制线。
6. 加入阳性对照液，观察免疫试纸上是否出现控制线和检测线。
7. 根据实验结果判断待检样品中特定抗原的存在与浓度。
实验结果与分析我们使用金免疫层析法检测了多个待检样品中某特定抗原的存在与浓度。
实验结果显示，在免疫试纸上出现了与阳性对照液相同的控制线和检测线，表明待检样品中存在目标抗原，并且存在的浓度超过了试剂盒的最低检测浓度。
而阴性对照液只出现了控制线，没有出现检测线，验证了实验方法和试剂盒的准确性。
值得注意的是，金免疫层析法在一定程度上受到非特异性反应的干扰。
基于静电纺丝纳米纤维膜免疫层析试纸条的构筑及性能研究
基于静电纺丝纳米纤维膜免疫层析试纸条的构筑及性能研究基于静电纺丝纳米纤维膜免疫层析试纸条的构筑及性能研究摘要：随着生物医药领域的快速发展，免疫层析试纸条作为一种便捷、快速、经济高效的检测方法，受到了广泛的关注。
本研究基于静电纺丝技术构筑了一种新型的纳米纤维膜免疫层析试纸条，并对其性能进行了详细研究。
通过优化静电纺丝工艺参数，得到了平滑、均匀的纳米纤维膜，其孔隙率为65%，孔径大小分布在100-500 nm之间。
然后，我们将兔IgG单抗固定在纳米纤维膜上，并进行了一系列的性能测试，包括灵敏度、选择性和稳定性等方面。
结果表明，所构筑的纳米纤维膜免疫层析试纸条对兔IgG单抗具有良好的灵敏度和选择性，并且在不同的储存条件下具有较好的稳定性。
引言：免疫层析试纸条是一种基于免疫学原理的快速检测试纸，广泛应用于临床医学、食品安全、环境监测等领域。
传统的免疫层析试纸条多采用纸质或膜基质作为载体，具有使用方便、结构简单、成本低廉等优点，但在灵敏度和稳定性方面存在一定的限制。
近年来，纳米技术的发展为免疫层析试纸条的改进提供了新的思路。
具体而言，静电纺丝技术是一种制备纳米纤维膜的有效方法，其能够制备出具有大比表面积和高孔隙率的纳米纤维膜，从而提高免疫层析试纸条的灵敏度和选择性。
材料与方法：1. 材料：聚乳酸（PLA），氯化钠（NaCl），聚乙烯醇（PVA），兔IgG单抗。
2. 静电纺丝纳米纤维膜构筑：将PLA和PVA按一定比例混合，并加入NaCl为助剂，在室温下搅拌均匀。
将混合溶液注入静电纺丝装置，通过控制电压和距离等参数，制备出纳米纤维膜。
3. 兔IgG单抗固定：将制备好的纳米纤维膜浸入兔IgG单抗溶液中，室温下静置一段时间固定兔IgG单抗。
4. 免疫层析试纸条组装：将固定了兔IgG单抗的纳米纤维膜粘贴在质控线、检测线和吸收垫上，分别组装成免疫层析试纸条。
5. 性能测试：测试所构筑的免疫层析试纸条的灵敏度、选择性和稳定性。
两种方法制备纳米金原位增敏金标免疫层析试验的比较
㊃论著㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2020.19.008两种方法制备纳米金原位增敏金标免疫层析试验的比较*孙卫民,康嘉乐,邓聪,林敏,任鹏丽广州医科大学附属第二医院检验科,广东广州510260摘要:目的比较两种化学方法制备纳米金的增敏效果,找出相对合适的制备纳米金增敏金标免疫层析试验的方法㊂方法以金标免疫层析试验检测血浆绒毛膜促性腺激素(H C G)为基础,用盐酸羟胺和抗坏血酸还原氯金酸制备纳米金颗粒,判断纳米金原位所形成的纳米颗粒颜色,检测其灵敏度㊂结果盐酸羟胺还原法增敏血浆H C G金标免疫层析试验,相对增敏前检测灵敏度提高约16倍,且重复性较好㊂抗坏血酸还原法增敏血浆H C G金标免疫层析试验,相对增敏前检测灵敏度提高约4倍㊂结论盐酸羟胺还原法制备纳米金对血浆H C G金标免疫层析试验增敏倍数较高,重复性较好,试验结果可靠,可推广使用㊂关键词:纳米金;金标免疫层析试验;增敏中图法分类号:R446.6文献标志码:A文章编号:1672-9455(2020)19-2777-03C o m p a r i s o n o f t w o m e t h o d s f o r p r e p a r i n g g o l d n a n o p a r t i c l e s i n s i t u s e n s i t i z a t i o n g o l dl a b e l i m m u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s t*S U N W e i m i n,K A N G J i a l e,D E N G C h o n g,L I N M i n,R E N P e n g l iD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,t h e S e c o n d A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f G u a n g z h o u M e d i c a l U n i v e r s i t y,G u a n g z h o u,G u a n g d o n g510260,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o c o m p a r e t h e s e n s i t i z i n g e f f e c t s o f t w o c h e m i c a l m e t h o d s f o r p r e p a r i n g g o l d n a n o-p a r t i c l e s,a n d t o f i n d a r e l a t i v e l y s u i t a b l e m e t h o d f o r p r e p a r i n g g o l d n a n o p a r t i c l e s t o e n h a n c e t h e s e n s i t i z a t i o n g o l d l a b e l i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s t.M e t h o d sB a s e d o n t h e g o l d-l a b e l e d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s t t o d e t e c t p l a s m a c h o r i o n i c g o n a d o t r o p i n(HC G),g o l d n a n o p a r t i c l e s w e r e p r e p a r e d b y r e d u c i n g c h l o r o a u r i c a c i d w i t h h y d r o x y l a m i n e h y d r o c h l o r i d e a n d a s c o r b i c a c i d,a n d t h e c o l o r o f n a n o p a r t i c l e s f o r m e d b y g o l d n a n o p a r t i-c l e s i n s i t u w a s d e t e r m i n e d a n d i t s s e n s i t i v i t y w a s d e t e c t e d.R e s u l t s H y d r o x y l a m i n e h y d r o c h l o r i d e r e d u c t i o n m e t h o d s e n s i t i z e d t h e p l a s m a H C G g o l d-l a b e l e d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s t.T h e d e t e c t i o n s e n s i t i v i t y w a s a-b o u t16t i m e s h i g h e r t h a n t h a t b e f o r e s e n s i t i z a t i o n,a n d t h e r e p e a t a b i l i t y w a s g o o d.A s c o r b i c a c i d r e d u c t i o n m e t h o d s e n s i t i z e d t h e p l a s m a H C G g o l d-l a b e l e d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s t,a n d t h e d e t e c t i o n s e n s i t i v i t y w a s a b o u t4t i m e s h i g h e r t h a n t h a t b e f o r e s e n s i t i z a t i o n.C o n c l u s i o n H y d r o x y l a m i n e h y d r o c h l o r i d e r e d u c t i o n m e t h o d w h i c h p r e p a r e g o l d n a n o p a r t i c l e s h a s a h i g h e r s e n s i t i v i t y t o p l a s m a H C G g o l d-l a b e l e d i mm u n o c h r o m a-t o g r a p h i c t e s t,g o o d r e p e a t a b i l i t y,a n d r e l i a b l e t e s t r e s u l t s,w h i c h c a n b e w i d e l y u s e d.K e y w o r d s:n a n o g o l d;g o l d l a b e l i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s t;s e n s i t i z a t i o n金标免疫层析试验作为一种临床快速检测技术,因其省去了标本预处理步骤,以及大型仪器设备检测㊁数据处理和传输等大量繁琐的过程,可直接快速地得到可靠的结果,广泛应用于临床㊂目前床旁金标免疫层析试纸条大多采用肉眼直接判读,结果易受标本中的水或血㊁标记物纳米金等渗透不均的干扰,且大多适用于定性或半定量检测,使其应用范围受到一定限制[1-2]㊂由于纳米金颗粒直径偏小,影响肉眼观察的灵敏度㊂因此,该技术虽然操作简便㊁成本低,但其灵敏度不够高,易导致误检和漏检,留下安全隐患㊂为提高金标免疫层析试验的灵敏度,有研究通过生物素亲和素系统,免疫金银染色法进行银加强试验,对膜进行化学修饰和对二抗进行修饰制作增敏剂等技术,在一定程度上提高了试验的灵敏度[3-5]㊂但这些方案操作复杂㊁试验时间较长㊁成本高,不太适合实时快速的临床床边检测㊂因此,构建既灵敏又快速的检测技术成为亟待攻克的技术难题㊂本研究以血浆绒毛膜促性腺激素(H C G)金标免疫层析试验为基础,以改性溶液做预处理,盐酸羟胺和抗坏血酸两种还原剂还原氯金酸制备纳米金颗粒,在原位上增大纳米金的粒径,以期提高金标免疫层析试验灵敏度㊂比较这两种化学方法制备纳米金的增敏效果,找出相对合适制㊃7772㊃检验医学与临床2020年10月第17卷第19期 L a b M e d C l i n,O c t o b e r2020,V o l.17,N o.19*基金项目:广东省医学科研基金项目(A2017050)㊂作者简介:孙卫民,男,副主任技师,主要从事生化免疫技术相关研究㊂备纳米金增敏金标免疫层析试验的方法,为提高金标免疫层析试验灵敏度,扩大临床应用范围提供一定的基础㊂1材料与方法1.1仪器与试剂 P r e c i s a240A电子分析天平㊁金标免疫层析试纸条购自北京蓝十字生物药业有限公司;盐酸羟胺(分析纯)购自广州化学试剂公司;抗坏血酸购自湖南省娄底市化学品有限公司;氯金酸(分析纯)购自北京化学试剂公司;磷酸盐缓冲液购自苏州赛默飞世尔仪器有限公司;吐温20购自美国S i g m a公司;壬基酚聚氧乙烯醚购自上海麦克林生化科技有限公司㊂1.2方法1.2.1改性溶液的配制100m L的磷酸盐缓冲液加入C a C l2和M g C l2使终浓度分别为1.0mm o l/L 和0.5mm o l/L,同时加入1m L吐温20和1m L壬基酚聚氧乙烯醚,充分混匀备用㊂1.2.2盐酸羟胺增敏法 A液:用去离子水配制1%的氯金酸;B液:用磷酸盐缓冲液配制0.4m o l/L盐酸羟胺㊂1.2.3抗坏血酸增敏法 A液:用去离子水配制1%的氯金酸;B液:用磷酸盐缓冲液配制0.5%抗坏血酸㊂1.2.4标本制备将患者血浆(H C G浓度为256.8000m I U/m L)用生理盐水倍比稀释为:未稀释㊁1ʒ2.5㊁1ʒ5㊁1ʒ10㊁1ʒ20㊁1ʒ40㊁1ʒ80㊁1ʒ160㊁1ʒ320(浓度依次约:256.8000m I U/m L㊁102.7200m I U/m L㊁51.3600m I U/m L㊁25.6800 m I U/m L㊁15.8400m I U/m L㊁6.4200m I U/m L㊁3.2100m I U/m L㊁1.6050m I U/m L㊁0.8025 m I U/m L),再以雅培I2000全自动化学发光免疫分析仪检测结果为阴性的血浆作为阴性对照㊂按金标免疫层析试纸条说明书操作检测,检测完毕后用照相机拍照存档㊂1.2.5H C G测定增敏下限的确定待试纸条按1.2.4检测完毕,将样品垫㊁金标垫和上端的吸水纸剪掉,注意不要损伤硝酸纤维素膜㊂将各试纸条分别放入改性溶液浸泡5m i n,取出用去离子水冲洗干净,用吸水纸吸去多余的水分,让试纸条保持一定的倾斜角度,先加A液10μL氯金酸溶液,再加B液80μL盐酸羟胺溶液或80μL抗坏血酸溶液,使其沿试纸条依次通过测试线和控制线,10m i n内读取结果㊂1.3统计学处理采用E X C E L软件对数据进行处理分析㊂2结果2.1 H C G测定增敏下限的确定试验结果表明抗坏血酸组:未增敏前以>25.0000m I U/m L为阳性, 256.8000m I U/m L㊁102.7200m I U/m L㊁51.3600 m I U/m L㊁25.6800m I U/m L为弱阳性,其余均为阴性㊂增敏后以>6.4000m I U/m L为阳性,256.8000 m I U/m L㊁102.7200m I U/m L㊁51.3600m I U/m L㊁25.6800m I U/m L㊁15.8400m I U/m L㊁6.4200 m I U/m L均出现阳性带,且颜色逐渐偏低,3.2100 m I U/m L㊁1.6050m I U/m L和阴性对照显示阴性结果㊂两次检测结果比较显示基于纳米金增敏H C G检测下限可达6.4200m I U/m L,相对增敏前,灵敏度提高约4倍㊂盐酸羟胺组:未增敏前以>25.0000m I U/m L为阳性,256.8000m I U/m L㊁102.7200m I U/m L㊁51.3600m I U/m L㊁25.6800m I U/m L为弱阳性,其余均为阴性㊂增敏后以>6.4000m I U/m L为阳性, 256.8000m I U/m L㊁102.7200m I U/m L㊁51.3600 m I U/m L㊁25.6800m I U/m L㊁15.8400m I U/m L㊁6.4200m I U/m L㊁3.2100m I U/m L㊁1.6050 m I U/m L均出现阳性带,且颜色逐渐偏低,0.8025 m I U/m L和阴性对照显示阴性结果㊂两次检测结果比较显示基于纳米金增敏H C G检测下限可达1.6050m I U/m L,相对增敏前,灵敏度提高约16倍㊂2.2重复性试验将6.4200m I U/m L㊁1.6050 m I U/m L溶液按盐酸羟胺还原法继续用同一批次的金标免疫层析试纸条分别作4份检测,连续5d,检测结果均稳定不变,表明该技术增敏结果重复性较满意㊂3讨论金标免疫层析试验以纳米金作为示踪标记物,把纳米金颗粒光学检测的灵敏度及免疫反应的特异度相结合,应用于抗原抗体反应㊂因其简便㊁快速㊁安全,在急诊医学㊁输血医学㊁现场诊断及个体自我体检等方面广泛应用,是床旁检验的主要技术手段㊂金标免疫层析试纸条的吸水垫处加待测液体样品,液流向试纸条的测试区移动,液流经过结合释放区时,膜上预固的金标特异性抗体(或抗原)被溶解,与待测物反应而形成金标抗原抗体复合物㊂液流前移至检测区,其上的抗体(或抗原)结合并固定纳米金标记的复合物,通过纳米金标记物浓集呈现紫红色,为阳性反应[6]㊂该检测技术虽优势很突出,但因依靠其自身所具有的颜色进行结果判断,需颗粒大量聚集达到肉眼可见的效果㊂临床中部分标本因水平低,结合的金标抗体少,肉眼观察时呈现很浅的颜色甚至无法识别,因此判断为阴性,实则是假阴性结果㊂因此,该方法检测灵敏度较低,从而限制了金标免疫层析试纸条在临床对检测灵敏度要求较高项目中的应用[7]㊂为提高金标免疫层析试纸条的灵敏度,研究人员进行了多方面的尝试,通过研制产生特定光㊁电或磁信号的纳米材料,增强反应信号,提高增敏效果[8-12]㊂本研究采用已在临床使用成熟的H C G试剂为基础作增敏研究㊂试验中未增敏时H C G浓度为15.8400 m I U/m L㊁6.4200m I U/m L㊁3.2100m I U/m L㊁㊃8772㊃检验医学与临床2020年10月第17卷第19期 L a b M e d C l i n,O c t o b e r2020,V o l.17,N o.191.6050m I U/m L均表现为阴性㊂当使用改性溶液处理金标免疫层析试纸条表面,分别采用盐酸羟胺与氯金酸和抗坏血酸与氯金酸两种方式在试纸条原位制备纳米金,试纸条检测区原本少量的纳米金结合新产生的纳米金,呈黑褐色,从而放大检测信号,肉眼可判断,其中抗坏血酸还原法检测灵敏度提高约4倍,盐酸羟胺还原法检测灵敏度提高约16倍㊂结果进一步证实了笔者前期原位增敏的推断[13]㊂氯金酸水溶液中的金离子在不同还原剂的作用下还原成金原子,并聚集成微小的金核,在其表面吸附负离子(A u C l2-)和部分正离子(H+)形成吸附层,依靠静电作用形成稳定的胶体溶液㊂使用改性溶液破坏金核表面的吸附层,使新制备的金核与标记单克隆抗体的胶体金颗粒结合,在试纸条的检测区形成更大的 金壳 ,随着胶体金粒径的增大,胶体金颜色加深,表现为黑褐色,从而放大检测信号,提高肉眼的判读能力,达到增敏的效果㊂本研究提高了肉眼判读金标结果的灵敏度,但不同判读者肉眼判读的主观性差异较大,判读结果的误差也较大,仍存在一些局限性㊂因此将该增敏方案联合特定的免疫检测仪器,对结果进行判读,避免肉眼判读的主观误差,以及这两类增敏方法在不同项目或不同厂家的金标免疫层析技术上的普遍适用性等方面作进一步研究,将更有助于提高其实际应用价值㊂综上所述,快速氧化还原法制备纳米金对金标免疫层析试验有一定增敏效果,不同的还原剂增敏效果不同㊂其中盐酸羟胺还原法制备纳米金对血浆H C G 金标免疫层析试验相对抗坏血酸还原法增敏倍数较高,重复性较好,试验结果可靠,更加适合用于制备纳米金以达到增敏金标免疫层析试验的目的,为扩大金标免疫层析试验的应用范围提供一定的基础㊂参考文献[1]T A N A K A R,Y UH I T,N A G A T A N I N,e t a l.A n o v e le n h a n c e m e n t a s s a yf o r i mm u n o c h r o m a t og r a phi c t e s ts t r i p s u s i n g g o l d n a n o p a r t i c l e s[J].A n a l B i o a n a l C h e m, 2006,385(8):1414-1420.[2]Y A G E R P,E DWA R D S T,F U E,e t a l.M i c r o f l u i d i c d i a g-n o s t i c t e c h n o l o g i e s f o r g l o b a l p u b l i c h e a l t h[J].N a t u r e, 2006,442(711):412-418.[3]WA N G X J,Z HA N W B.D e v e l o p m e n t o f a n i mm u n o-c h r o m a t o g r a p h i c t e s t t ode t e c t w h i t e s p o t s y n d r o m e v i r u so f s h r i m p[J].A q u a c u l t u r e,2006,255(1/4):196-200.[4]C H I A O D J,S H Y U R H,HU C S,e t a l.C o l l o i d a l g o l d-b a s e d i mm u n oc h r o m a t o g r a p h i c a s s a y f o rde t e c t i o n of b o t-u l i n u m n e u r o t o x i n t y p e B[J].J C h r o m a t og r B A n a l y t T e ch n o l Bi o m e d L i f e S c i,2004,809(1):37-41.[5]N A O K I N,R Y O U T,T E R U K O Y,e t a l.G o l d n a n o p a r t i-c l e-b a s ed n o ve l e n h a n c e m e n t m e t h o df o r t h e d e v e l o p m e n t o f h igh l y s e n si t i v e i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c t e s t s t r i p s [J].S c i T e c h n o A d v M a t e r,2006,7(2):270-275. [6]曾念寅,李玉榕,杜民.纳米金免疫层析试条定量检测的研究[J].生物医学工程研究,2015,34(4):259-264. [7]G A O X F,X U L P,Z HO U S F,e t a l.R e c e n t a d v a n c e s i n n a n o p a r t i c l e s-b a s e d l a t e r a l f l o w b i o s e n s o r s[J].J B i o m e d S c i,2014,6(1):41-57.[8]Q U E S A D A-G O N ZÁL E Z D,S E N A-T O R R A L B A A,W I C A K-S O N O W P,e t a l.I r i d i u m o x i d e(I V)n a n o p a r t i c l e-b a s e d l a t e r a l f l o w i m m u n o a s s a y[J].B i o s e n s B i o e l e c t r o n,2019,132(1):132-135.[9]S H E N M,C H E N Y,Z H U Y,e t a l.E n h a n c i n g t h e s e n s i t i v i t y o f l a t e r a l f l o w i m m u n o a s s a y b y c e n t r i f u g a t i o n-a s s i s t e d f l o wc o n t r o l[J].A n a l C h e m,2019,91(7):4814-4820.[10]Y A N G W,L I X B,L I U G W,e t a l.A c o l l o i d a l g o l d p r o b e-b a s e d s i l v e r e n h a nc e m e n t i m m u n o c h r o m a t o g r a p h i c a s s a y f o r t h e r a p id de t e c t i o n of a b r i n-a[J].B i o s e n s B i o e l e c t r o n,2011, 26(8):3710-3713.[11]C HO I H,S E O S M,P A E K E H,e t a l.I mm u n o g o l d-s i l-v e r s t a i n i n g-o n-a-c h i p b i o s e n s o r b a s e d o n c r o s s-f l o w c h r o m a t o g r a p h y's[J].J C h r o m a t o g r B A n a l y t T e c h n o lB i o m e d L i f e S c i,2010,878(2):271-277.[12]P A R O L O C,E S C O S U R A-MU N I Z A,M E R K O C I A.E n-h a n c e d l a t e r a l f l o w i mm u n o a s s a y u s i n g G o l d n a n o p a r t i-c l e s l o a d e d w i t h e n z y m e s[J].B i o s e n s B i o e l e c t r o n,2013, 40(1):412-416.[13]孙卫民,黄远荀,邓小燕,等,纳米金快速增敏免疫层析试验的研究[J].现代预防医学,2013,39(14):2683-2685.(收稿日期:2020-01-09修回日期:2020-05-08)(上接第2776页)[10]W A N G H,F A N G L,J I A N G J,e t a l.T h e c i s p l a t i n-i n d u c e dl n c R N A P A N D A R d i c t a t e s t h e c h e m o r e s i s t a n c e o f o v a r i-a n c a n c e r v i a r e g u l a t i n g S F R S2-m e d i a t e d p53p h o s p h o-r y l a t i o n[J].C e l l D e a t h D i s,2018,9(11):1103.[11]L I U J,B E N Q,L U E,e t a l.L o n g n o n c o d i n g R N A P A N-D A R b l o c k s C D K N1A g e n e t r a n s c r i p t i o n b y c o m p e t i t i v e i n t e r a c t i o n w i t h p53p r o t e i n i n g a s t r i c c a n c e r[J].C e l lD e a t h D i s,2018,9(2):168.[12]R I V A N D I M,P A S D A R A,HAM Z E Z A D E H L,e t a l.T h ep r o g n o s t i c a n d t h e r a p e u t i c v a l u e s o f l o n g n o n c o d i n g R N AP A N D A R i n c o l o r e c t a l c a n c e r[J].J C e l l P h y s i o l,2019, 234(2):1230-1236.[13]S I N G H R,L E T A I A,S A R O S I E K K.R e g u l a t i o n o f a p o p-t o s i s i n h e a l t h a n d d i s e a s e:t h e b a l a n c i n g a c t o f B c l-2 f a m i l y p r o t e i n s[J].N a t R e v M o l C e l l B i o l,2019,20(3): 175-193.[14]Y AMA G U C H I R,L A R T I G U E L,P E R K I N S G.T a r g e-t i n g M c l-1a n d o t h e r B c l-2f a m i l y m e m b e r p r o t e i n s i nc a n c e r t h e r a p y[J].P h a r m a c o l T h e r,2019,195(1):13-20.(收稿日期:2020-01-12修回日期:2020-05-11)㊃9772㊃检验医学与临床2020年10月第17卷第19期 L a b M e d C l i n,O c t o b e r2020,V o l.17,N o.19。
免疫层析试纸检测技术研究进展
免疫层析试纸检测技术研究进展王寅彪;刘肖;李青梅;郭军庆【期刊名称】《河南科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(035)003【摘要】目的探讨免疫层析试纸检测在即时检测中的研究现状及未来的发展方向和应用价值.方法参阅国内外发表的文献,综述免疫层析试纸在抗原、抗体、半抗原检测领域的应用及利用新纳米材料提高检测敏感度的设计策略.结果传统的免疫层析试纸主要以胶体金作为示踪物利用竞争法或夹心法对半抗原、抗原和抗体等进行检测,但存在敏感度不足及定量检测受限等问题,结合不同纳米材料进行新型试纸研发将有助于克服这些缺陷,向更高敏感性、定量、多联的检测方向发展.结论免疫层析试纸是进行即时检测和现场检测的重要工具,未来可用于对大规模群体实施检测,获取大数据,建立疾病或食品安全预警评价信息平台.【总页数】5页(P236-240)【作者】王寅彪;刘肖;李青梅;郭军庆【作者单位】新乡医学院公共卫生学院,河南新乡453003;河南省农业科学院,河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院,河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院,河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院,河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州450002【正文语种】中文【中图分类】R115;R446.6【相关文献】1.纳米颗粒在免疫层析试纸检测技术中的应用 [J], 洪文艳2.农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究 [J], 李鑫;李培武;张奇;张文;丁小霞;唐晓倩3.免疫层析试纸检测技术在猪病诊断中的应用 [J], 刘伟4.免疫层析试纸条检测技术的研究进展 [J], 周梦婕; 李小盼; 代荣阳5.胶体金免疫层析试纸条在食品安全检测中的研究进展 [J], 孟东;陈蕾;王波;墨瑾瑜;李周敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫标记技术的进展及纳米技术在其中的应用
生命科学Chinese Bulletin of Life Sciences第20卷 第5期2008年10月Vol. 20, No. 5Oct., 2008免疫标记技术的进展及纳米技术在其中的应用贾春平, 赵建龙*（中国科学院上海微系统与信息技术研究所，上海 200050）摘 要：酶免疫标记、胶体金免疫标记及荧光免疫标记技术是目前应用最广泛的免疫反应检测技术。
随着科学技术, 尤其是纳米技术的发展和生物医药等方面的需求，人们在提高检测灵敏度、简化操作步骤、有效缩短检测时间等方面，取得了很多可喜的进展。
本文将分别针对酶免疫标记、胶体金免疫标记及荧光免疫标记技术三方面的进展情况，尤其是纳米标记技术在免疫反应检测中的应用进展进行综述。
关键词：免疫反应；酶免疫标记；荧光免疫标记；胶体金免疫标记；纳米技术中图分类号：N39；Q71；R730.49 文献标识码：AProgress of immuno-labeling assay and application of nano-technologyJIA Chun-ping, ZHAO Jian-long*(Shanghai Institute of Microsystem and Information Technology,Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200050,China)Abstract: Enzyme immuno-labeling assay ，gold nanoparticle immuno-labeling and fluorescence immuno-labeling assay are used most widely in immunoassay. With the development of nano-technology and the demand of biomedicine, progresses were made in improving detection sensitivity, tailing detection time,simplifying procedures and so on. This is a briefly review about the progresses in enzyme immuno-labeling assay ，gold nanoparticle immuno-labeling and fluorescence immuno-labeling assay, especially the applica-tion of nano-technology in these immunoassay.Key words: immunoassay; enzyme immuno-labeling; gold nanoparticle immuno-labeling; nano-technology文章编号 ：1004-0374(2008)04-0749-05酶免疫标记、荧光免疫标记、放射性同位素免疫标记这三大抗体标记技术以及后来迅速发展的胶体金免疫标记技术，是指在抗体分子上分别标记酶、荧光、同位素、胶体金等既易测定, 又具有高敏感性的物质。
吗啡胶体金免疫层析试纸条的研究与开发
天津大学硕士学位论文吗啡胶体金免疫层析试纸条的研究与开发姓名赵海锋申请学位级别硕士专业生物化工指导教师甘一如20070101摘要本文应用胶体金免疫层析技术进行吗啡药物滥用的尿液及唾液检测研究。
为了研制吗啡胶体金免疫层析试纸条本研究利用吗啡偶联物抗原来制备单克隆抗体采用微波加热方法制备胶体金鉴定质量后标记单克隆抗体。
将金标抗体喷涂在聚酯膜上包被在硝酸纤维素膜上制成快速检测试纸条。
首先本文在传统的微波加热法的基础上进行改进制备胶体金。
研究了不同的加热时间和还原剂对胶体金制备的影响并将改进的微波法与传统微波法、电热套法和磁力搅拌法进行比较结果表明改进的微波法更适于制备单分散性小粒径的胶体金。
本文还利用混合酸酐法将和牛血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白偶联偶联物分别作为免疫抗原和包被抗原。
再用免疫抗原免疫得到抗吗啡单克隆抗体。
最后通过比较不同的金标蛋白标记条件、不同的材料、聚酯膜上金标的喷涂量、抗原和二抗的包被浓度等对检测结果的影响确立了最佳条件成功建立了尿液和唾液联检吗啡的胶体金免疫层析方法。
该法能在分钟内完成对吗啡的检测尿样和唾液的最小检测限分别为瑚、无需借助检测仪器取样方便检测时间段宽适用于对吗啡进行现场快速检测。
本研究也可为其它药物滥用检测试纸条的研究提供借鉴。
关键词胶体金吗啡免疫层析尿样唾液独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果除了文中特别加以标注和致谢之处外论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果也不包含为获得苤鲞盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
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纳米金层析试纸条在检验检测中的应用进展
纳米金层析试纸条在检验检测中的应用进展
郑连涛;张晓霞;刘佩钰;王志进;孙睿;牛晓琳;黄帅;王晓玥
【期刊名称】《山东化工》
【年(卷),期】2024(53)6
【摘要】随着对检测技术快速化需求程度增加,可视化快速检测技术不断发展。
纳米金层析试纸条是一种新型的快速检测技术,具有可视化、特异性强、灵敏度高、检测快速、成本低廉、操作简单等优点,广泛应用于食品安全、临床诊断、病原微生物检测等多个领域。
对纳米金层析试纸条在上述领域的研究进展进行梳理和综述,并对纳米金检测技术在上述检测方面存在的问题进行了一定的分析并提出解决方案,以期进一步规范和推动该技术的发展,拓宽其应用范围。
【总页数】3页(P86-88)
【作者】郑连涛;张晓霞;刘佩钰;王志进;孙睿;牛晓琳;黄帅;王晓玥
【作者单位】德州学院医药与护理学院
【正文语种】中文
【中图分类】O651
【相关文献】
1.采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒
2.胶体金免疫层析试纸条技术及其在食品安全检测中的应用研究进展
3.基于组合胶体金纳米颗粒的免疫层析试纸条快速可视化检测海产品中副溶血性弧菌
4.胶体金免疫层析试纸条在食品安全检测中的研究进展
5.金纳米花免疫层析试纸条检测果蔬中的苯醚甲环唑
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国际检验 医学杂志 ２ ０ １ ３ 年 ９月第 ３ ４卷 第 ｌ ７ 期
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