葡萄糖氧化酶酶活测定
![葡萄糖氧化酶酶活测定](https://img.360docs.net/img0f/0gswcwwaj23k1fcbsxd-f1.webp)
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
葡萄糖氧化酶酶活测定
1 酶活单位与定义
pH6.0、30℃的条件下,每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成 D-葡萄糖酸和 H2O2 的酶量为一个单位。
2 测定原理
葡萄糖和氧反应,在葡萄糖氧化酶的作用下,生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下,生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
3 试剂和溶液
3.1 磷酸盐缓冲液(pH6.0)
称取 16.61g 磷酸二氢钠( NaH2PO4·2H2O )和 35.82g 磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),溶于无 CO2 的水中,稀释到 1000ml。
3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液
1g 邻联茴香胺加在 100ml 甲醇中搅拌溶解备用。临用时现配,取 0.1ml 加入到上述缓冲液 12ml 中混匀。
3.3 180g/l 葡萄糖水溶液
18g 葡萄糖加适量水溶解,并定容至 100ml。
3.4 0.03%辣根过氧化物酶液
称取辣根过氧化物酶(HRP,美国 Ameresco 公司)10mg,溶于 30ml 蒸馏水。
4 仪器设备
721-分光光度计、恒温水浴、秒表
5 分析步骤
5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验,使得测定△A 值在 0.25~0.4。
5.2 测定
6 结果表示与计算
X=[△ A÷(11.3×t×0.1)] ×n t—测定时间,min
0.1—样品体积,ml
11.3—消光系数
n—稀释倍数
所得结果表示至整数。