双相萃取方法
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双水相 体系
双水相萃取过程的步骤：
双水相 分配
图3.1 双水相萃取的工艺流程图
细胞匀浆液
PEG
第一 步双 水相 萃取
+盐（或是葡聚糖）
分离机
下相 细胞碎片 杂蛋白 （核酸、多糖）
上 相（PEG相） （目标产物）如prot、E +盐 第二步双水相萃取
静置分层 下 相（盐相） 核酸多糖 上 相（PEG相） 目标产物
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.5.5温度的影响 分配系数对温度的变化不敏 感，这是由于成相聚合物对 蛋白质有稳定化作用，所以 室温操作活性收率依然很高， 而且室温时粘度较冷却时低， 有助于相的分离并节约了能 源开支。
16
2.6 双水相中的分配平衡
研究表明，生物分子的总分配系数 c
Kp
2
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.5.3离子环境对两相体系分配的影响 在双水相体系中加入电解质,由于阴、阳离子在两相中的 分配差异,形成穿过相界面的电位, 从而影响带电大分子 物质在两相中分配。如在PEG/Dextran系统中加入NaClO4 或KI时,可增加上相对带正电荷物质的亲和效应,并使带负 电荷的物质进入下相;
双水相萃取
1896年Beijerinck观察到当把明胶与琼脂或把明胶和可溶性 淀粉的水溶液混合时，先得到一混浊不透明的溶液，随后分成两 相，上相含有大部分明胶，下相含有大部分琼脂(或可溶性淀粉)。 再如下图中，2.2％的葡聚糖水溶液与等体积的0.72％甲基纤维 素钠的水溶液相混合并静置后，可得到两个粘稠的液层。
(2)盐的种类和浓度
盐的种类(离子组成)影响蛋白质、核酸等生物大分子 的分配系数，盐浓度不仅影响蛋白质的表面疏水性，而且 扰乱双水相系统，改变各相中成相物质的组成和相体积比。
例：PEG/葡聚糖体系中上
下相的PEG和葡聚糖浓度
随NaCl浓度的增大而改变， 这种相组成即相性质的改 变直接影响物质的分配系 数，如图：
疏水作用 PEG/Dx和PEG/无机盐等双水相系统的上相 (PEG 相 ) 疏 水 性 较 大 ， 相 间 的 疏 水 性 差 用 疏 水 性 因 子 HF (hydrophoblc factor)表示。HF（相间疏水性差）可通过测定疏 水性已知的氨基酸在其等电点处的分配系数Ks测算
ln K S HF ( RH B)
3.2双水相萃取的特点
(1) 条件温和 双水相萃取体系中两相中的大部分(质量 分数>0.7)是水,所形成的两相不涉及有机溶剂, 对被 分离的物质不会起破坏作用, 所使用的聚合物有时还 对被分离物质起保护作用, 无三废处理之需,所以特别 适合生物活性物质的分离提纯; (2) 操作方便 所使用的设备简单, 操作方便, 即使在常 温下操作亦不易导致失活; 由于是双水相,两相间的表 面张力小,有利于萃取, 且可直接与后续提纯工序相连 接, 无需进行特殊的处理; (3) 回收率高 提纯倍数可达2-20倍, 如体系选择适当, 回收率可达80%-90%以上,且分离速度快。
2.2
双水相萃取的原理
双水相萃取是依据物质在两相间的选择性分配，但萃 取体系的性质不同。当物质进入双水相体系后，由于表面 性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的 存在和环境的影响，使其在上、下相中的浓度不同。 通 过控制一定的条件，可以得到合适的分配系数，从而达到 分离纯化之目的。
PEG = 聚乙二醇(polyethylene glycol) Kpi = 磷酸钾 DX= 葡聚糖(dextran)
图2.4
(3) pH的影响
pH值影响蛋白质的解离度，调节pH值可改变蛋白质 的表面电荷数，从而改变分配系数。
(4) 温度的影响
温度影响双水相系统的相图，因而影响蛋白质的分配 系数。但一般来说，当双水相系统离双节线足够远时，温 度的影响很小，1～2度的温度改变不影响目标产物的萃取 分离。
3
双水相萃取的工艺流程
3.1.2 PEG的回收
在大规模双水相萃取过程中，成相材料的回收和循环使 用，不仅可以减少废水处理的费用，还可以节约化学试剂， 降低成本。 PEG的回收有两种方法： ①加入盐使目标产物转入富盐相来回收PEG； ②将PEG相通过离子交换树脂，用洗脱剂先洗去PEG，再 洗出蛋白质。
3.1.3 无机盐的循环 将含无机盐相冷却,结晶,然后用离心机分离收集。除此之外还有电 渗析法、膜分离法回收盐类或除去PEG相的盐。
（2）高聚物-低分子物质体系，以高聚物/无机盐
体系为常见，如PEG/硫酸盐、PEG/磷酸盐
等（盐析作用）。
表2.1常见的各种双水相系统
类 型 形成上相的聚合 物
聚乙二醇 非离子型聚合物/ 非离子型聚合 物 聚丙二醇 聚乙烯吡咯烷酮 高分子电解质/非离子型聚合物 高分子电解质/高分子电解质 聚合物/ 低分子量化合物 聚合物/ 无机盐 羧甲基纤维素钠 葡聚糖硫酸钠 葡聚糖 聚乙二醇 硫酸铵 聚乙二醇 羧甲基纤维素钠 丙醇 磷酸钾 聚乙烯醇 聚乙二醇
上相产品
+
盐
第三步双水相萃取
静置分层
下 相（盐相）
上相
超滤法
（PEG可循环使用）
提纯产品 图3.2 三步两水相萃取酶的流程
多步萃取的目的是为了获得较高的纯化倍数。
• 双水相体系在工业上主要用于从发酵液、细胞培养液中分离 细胞碎片，提取酶或蛋白质。图是用PEG/无机盐体系通过2步 萃取从产氨短杆菌中回收延胡索酸酶的流程，主要由3部分组 成（ 1）目的产物的萃取；（2） PEG 的循环；（ 3）无机盐的 循环。
双水相萃取分离影响因素
外加电场的影响 当在两相分界的垂直方面上加上电场时由于电位差增加而使 分配系数发生改变 如用PEG8000 /DextranＴ 500体系分离
肌红蛋白,在外加48.1Ｖ/cm的电场强度40 min后,分配系数
Ｋ从0.81变为38.7,上相回收率从44.7%增高到98.0% 。
图1.2 双水相体系的形成
二、双水相萃取分离原理
------即为什么会有双水相现象以及如 何利用其进行萃取分离
2.1双水相系统形成原理 2.2、双水相系统相图 2.3 双水相萃取分离计算 2.4双水相系统类型 2.5.双水相萃取分离影响因素
2.1双水相系统形成原理 两种水溶性聚合物溶液混合，形成单一相还是两相， 主要取决于两种因素：系统熵的增加；分子间的作用 力(氢键、电荷力、疏水作用、范德华力、构象效应)。 熵的增加与分子数目有关，而与分子大小无关；分子 之间的相互作用力可看作分子中各基团相互作用力之 和，随分子量的增加而增加。分子量大的聚合物以摩 尔计的相互作用能超过混合熵的增加而起主导作用， 进而决定聚合物溶液混合发生的现象。当两种聚合物 之间互不相溶，而排斥，它们的线团结构无法互相渗 透，导致一种分子为同种分子所包围，在达到平衡后， 形成了互不相溶的各自富含单一种聚合物的两相。
FZ ln K P ln K 0 RT
K0 为溶质净电荷为零时的分配系数；F为法拉利常数；Z为溶质的净电荷； 为相间电位差
因此，荷电溶质的分配系数的对数与溶质的净电荷数成正比, 由于同一双水相系统中添加不同的盐产生的相间电位不同，故 分配系数与静电荷数的关系因无机盐而异.
19
（2）
系数的贡献。
2.6.1 双水相系统中的作用力
17
（1）静电作用 非电解质型溶质的分配系数不受静电作用 的影响，利用相平衡热力学理论可推导下述分配系数表达式：
ln Kp = -Mλ/RT
Kp-分配系数；M-溶质的相对分子质量；λ-与溶质表面性质和成相系 统有关的常数; R-气体常数，J/(mo1．K)；T-绝对温度，K。
2.2、双水相系统相图
系线
PEG (%)
两相区
双节线
均相区
葡聚糖（%） 临界点
PEG/葡聚糖系统相图
相图中TCB连线为一双节点线，双节点线下方为单相区；双 节点线上方为两相区。如果系统组成处于该区，如M点时， 系统分为两相，而上相和下相的组成分别为通过M点与双节 点线相交的T和B点相对应的组成。上相主要含有PEG，下相 主要含有葡聚糖或盐。两相平衡时，符合杠杆规则。当用υT 代表上相体积，υB代表下相体积时，则
形成下相的聚合物
葡聚糖
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.5.1聚合物及其分子量的影响 聚合物的相对分子量降低、浓度升 高有利于增大溶质的分配系数。不 同聚合物的水相系统显示出不同的 疏水性，
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.2.2pH值的影响 pH值的变化会导致组成体系的物 质电性发生变化,也会使被分离物 质的电荷发生改变,从而影响分配 的进行。例如在PEG/盐组成的体 系中,通常可在相当小的pH变化范 围内,使蛋白质在其中的分配系数 有很大的改变。
c1
c1 :下相中溶质的总浓度;c2:上相中溶质的总浓度。
生物分子的总分配系数Kp取决于溶质与双水相系统间 的各种相互作用，其中主要有静电作用、疏水作用和生物 亲和作用等。
ln K p ln KE ln KS ln K A
KE,KS,KA分别为静电作用、疏水作用、亲和作用对溶质分配
υT BM υB MT
式中 BM为B点到M点的距离，MT为M点到T点的距离。M点 向下移动时，系线长度缩短，两相差别减少，到达C点时， 系线长度为0，两相间的差别消失而成为一相。因此，C点成 为系统的临界点。
2.4双水相系统类型
（1）高聚物-高聚物体系，以聚乙二醇PEG/ Dextran（葡聚糖）和PEG／Dextran硫酸 盐体系为常见；(分子间的斥力）
图3.3 双相萃取的 工艺流程
双水相连续萃取工艺流程图
3.1.1目的产物的萃取
目标产物的萃取一般分为两步： 第一步 ：原料匀浆液与PEG和无机盐在萃取器中混合,然后进入 分离器分相。通过选择合适的双水相组成,一般使目标蛋白质分 配到上相(PEG相) ,而细胞碎片、核酸、多糖和杂蛋白等分配到 下相(富盐相) 。 第二步： 在上相中加入盐,形成新的双水相体系,从而将蛋白质 与PEG分离,以利于使用超滤或透析将PEG回收利用和目的产物 进一步加工处理。
a、成相聚合物分子量
分子量越小，蛋白质容易分配于富含该聚合物的相中。 例： PEG/Dextran形成的双水相体系中，降低PEG聚合物 的分子量，则蛋白质易分配于富含PEG聚合物的相中，使 分配系数（KP）增大；而将Dextran分子量减小，则会导 致分配系数的降低。
b、成相聚合物浓度 当接近分配的临界点蛋白质均匀分配于两相中，分配 Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipisicing elit, sed do eius 系数接近1； mod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Ut enim ad
图1.1 葡聚糖与甲基纤维素钠的双水相体系
1.2 双水相现象以及双水相萃取分离
双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种 盐溶于同一溶剂时, 由于聚合物之间或聚合物与 盐之间的分子空间阻碍作用 ,无法相互渗透 ,当 聚合物或无机盐浓度达到一定值时,就会分成不互 溶的两相 ,因为使用的溶剂是水 ,所以称为双水 相。 双水相萃取分离：双水相萃取是利用物质在不相 溶的两水相间分配系数的差异进行萃取的方法
因此，溶质的分配系数的对数与相对分子质量之间呈线性 关系，在同一个双水相系统中，若λ >0，不同溶质的分配系数 随相对分子质量的增大而减小。同一溶质的分配系数8
实际的双水相系统中通常含有缓冲液和无机盐等电解质， 当这些离子在两相中分配浓度不同时(即分配系数≠1)，将在 两相间产生电位差，此时，荷电溶质的分配平衡将受相间电位 的影响，从相平衡热力学理论推导溶质的分配系数表达式为
minim veniam, quis nostrud exercitation ullamco laboris nisi ut aliqui 成相聚合物的总浓度或聚合物/盐浓度的比例增加时 p ex ea commodo consequat.
，系统远离平衡点，此时两相性质的差别增加，蛋白 质容易趋向于某一极。
其中，RH为氨基酸的相对疏水(relativehydrophobicity)， 是通过测定氨基酸在水和乙醇中溶解度的差别确定的，并设 疏水性最小的甘氨酸的RH＝0。所以上式中 B为
KGly 为 甘氨酸分配系数。
B ln KGly / HF
2.6.2 影响分配平衡的因素
(1)成相聚合物的分子量和浓度
双水相萃取过程的步骤：
双水相 分配
图3.1 双水相萃取的工艺流程图
细胞匀浆液
PEG
第一 步双 水相 萃取
+盐（或是葡聚糖）
分离机
下相 细胞碎片 杂蛋白 （核酸、多糖）
上 相（PEG相） （目标产物）如prot、E +盐 第二步双水相萃取
静置分层 下 相（盐相） 核酸多糖 上 相（PEG相） 目标产物
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.5.5温度的影响 分配系数对温度的变化不敏 感，这是由于成相聚合物对 蛋白质有稳定化作用，所以 室温操作活性收率依然很高， 而且室温时粘度较冷却时低， 有助于相的分离并节约了能 源开支。
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2.6 双水相中的分配平衡
研究表明，生物分子的总分配系数 c
Kp
2
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.5.3离子环境对两相体系分配的影响 在双水相体系中加入电解质,由于阴、阳离子在两相中的 分配差异,形成穿过相界面的电位, 从而影响带电大分子 物质在两相中分配。如在PEG/Dextran系统中加入NaClO4 或KI时,可增加上相对带正电荷物质的亲和效应,并使带负 电荷的物质进入下相;
双水相萃取
1896年Beijerinck观察到当把明胶与琼脂或把明胶和可溶性 淀粉的水溶液混合时，先得到一混浊不透明的溶液，随后分成两 相，上相含有大部分明胶，下相含有大部分琼脂(或可溶性淀粉)。 再如下图中，2.2％的葡聚糖水溶液与等体积的0.72％甲基纤维 素钠的水溶液相混合并静置后，可得到两个粘稠的液层。
(2)盐的种类和浓度
盐的种类(离子组成)影响蛋白质、核酸等生物大分子 的分配系数，盐浓度不仅影响蛋白质的表面疏水性，而且 扰乱双水相系统，改变各相中成相物质的组成和相体积比。
例：PEG/葡聚糖体系中上
下相的PEG和葡聚糖浓度
随NaCl浓度的增大而改变， 这种相组成即相性质的改 变直接影响物质的分配系 数，如图：
疏水作用 PEG/Dx和PEG/无机盐等双水相系统的上相 (PEG 相 ) 疏 水 性 较 大 ， 相 间 的 疏 水 性 差 用 疏 水 性 因 子 HF (hydrophoblc factor)表示。HF（相间疏水性差）可通过测定疏 水性已知的氨基酸在其等电点处的分配系数Ks测算
ln K S HF ( RH B)
3.2双水相萃取的特点
(1) 条件温和 双水相萃取体系中两相中的大部分(质量 分数>0.7)是水,所形成的两相不涉及有机溶剂, 对被 分离的物质不会起破坏作用, 所使用的聚合物有时还 对被分离物质起保护作用, 无三废处理之需,所以特别 适合生物活性物质的分离提纯; (2) 操作方便 所使用的设备简单, 操作方便, 即使在常 温下操作亦不易导致失活; 由于是双水相,两相间的表 面张力小,有利于萃取, 且可直接与后续提纯工序相连 接, 无需进行特殊的处理; (3) 回收率高 提纯倍数可达2-20倍, 如体系选择适当, 回收率可达80%-90%以上,且分离速度快。
2.2
双水相萃取的原理
双水相萃取是依据物质在两相间的选择性分配，但萃 取体系的性质不同。当物质进入双水相体系后，由于表面 性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的 存在和环境的影响，使其在上、下相中的浓度不同。 通 过控制一定的条件，可以得到合适的分配系数，从而达到 分离纯化之目的。
PEG = 聚乙二醇(polyethylene glycol) Kpi = 磷酸钾 DX= 葡聚糖(dextran)
图2.4
(3) pH的影响
pH值影响蛋白质的解离度，调节pH值可改变蛋白质 的表面电荷数，从而改变分配系数。
(4) 温度的影响
温度影响双水相系统的相图，因而影响蛋白质的分配 系数。但一般来说，当双水相系统离双节线足够远时，温 度的影响很小，1～2度的温度改变不影响目标产物的萃取 分离。
3
双水相萃取的工艺流程
3.1.2 PEG的回收
在大规模双水相萃取过程中，成相材料的回收和循环使 用，不仅可以减少废水处理的费用，还可以节约化学试剂， 降低成本。 PEG的回收有两种方法： ①加入盐使目标产物转入富盐相来回收PEG； ②将PEG相通过离子交换树脂，用洗脱剂先洗去PEG，再 洗出蛋白质。
3.1.3 无机盐的循环 将含无机盐相冷却,结晶,然后用离心机分离收集。除此之外还有电 渗析法、膜分离法回收盐类或除去PEG相的盐。
（2）高聚物-低分子物质体系，以高聚物/无机盐
体系为常见，如PEG/硫酸盐、PEG/磷酸盐
等（盐析作用）。
表2.1常见的各种双水相系统
类 型 形成上相的聚合 物
聚乙二醇 非离子型聚合物/ 非离子型聚合 物 聚丙二醇 聚乙烯吡咯烷酮 高分子电解质/非离子型聚合物 高分子电解质/高分子电解质 聚合物/ 低分子量化合物 聚合物/ 无机盐 羧甲基纤维素钠 葡聚糖硫酸钠 葡聚糖 聚乙二醇 硫酸铵 聚乙二醇 羧甲基纤维素钠 丙醇 磷酸钾 聚乙烯醇 聚乙二醇
上相产品
+
盐
第三步双水相萃取
静置分层
下 相（盐相）
上相
超滤法
（PEG可循环使用）
提纯产品 图3.2 三步两水相萃取酶的流程
多步萃取的目的是为了获得较高的纯化倍数。
• 双水相体系在工业上主要用于从发酵液、细胞培养液中分离 细胞碎片，提取酶或蛋白质。图是用PEG/无机盐体系通过2步 萃取从产氨短杆菌中回收延胡索酸酶的流程，主要由3部分组 成（ 1）目的产物的萃取；（2） PEG 的循环；（ 3）无机盐的 循环。
双水相萃取分离影响因素
外加电场的影响 当在两相分界的垂直方面上加上电场时由于电位差增加而使 分配系数发生改变 如用PEG8000 /DextranＴ 500体系分离
肌红蛋白,在外加48.1Ｖ/cm的电场强度40 min后,分配系数
Ｋ从0.81变为38.7,上相回收率从44.7%增高到98.0% 。
图1.2 双水相体系的形成
二、双水相萃取分离原理
------即为什么会有双水相现象以及如 何利用其进行萃取分离
2.1双水相系统形成原理 2.2、双水相系统相图 2.3 双水相萃取分离计算 2.4双水相系统类型 2.5.双水相萃取分离影响因素
2.1双水相系统形成原理 两种水溶性聚合物溶液混合，形成单一相还是两相， 主要取决于两种因素：系统熵的增加；分子间的作用 力(氢键、电荷力、疏水作用、范德华力、构象效应)。 熵的增加与分子数目有关，而与分子大小无关；分子 之间的相互作用力可看作分子中各基团相互作用力之 和，随分子量的增加而增加。分子量大的聚合物以摩 尔计的相互作用能超过混合熵的增加而起主导作用， 进而决定聚合物溶液混合发生的现象。当两种聚合物 之间互不相溶，而排斥，它们的线团结构无法互相渗 透，导致一种分子为同种分子所包围，在达到平衡后， 形成了互不相溶的各自富含单一种聚合物的两相。
FZ ln K P ln K 0 RT
K0 为溶质净电荷为零时的分配系数；F为法拉利常数；Z为溶质的净电荷； 为相间电位差
因此，荷电溶质的分配系数的对数与溶质的净电荷数成正比, 由于同一双水相系统中添加不同的盐产生的相间电位不同，故 分配系数与静电荷数的关系因无机盐而异.
19
（2）
系数的贡献。
2.6.1 双水相系统中的作用力
17
（1）静电作用 非电解质型溶质的分配系数不受静电作用 的影响，利用相平衡热力学理论可推导下述分配系数表达式：
ln Kp = -Mλ/RT
Kp-分配系数；M-溶质的相对分子质量；λ-与溶质表面性质和成相系 统有关的常数; R-气体常数，J/(mo1．K)；T-绝对温度，K。
2.2、双水相系统相图
系线
PEG (%)
两相区
双节线
均相区
葡聚糖（%） 临界点
PEG/葡聚糖系统相图
相图中TCB连线为一双节点线，双节点线下方为单相区；双 节点线上方为两相区。如果系统组成处于该区，如M点时， 系统分为两相，而上相和下相的组成分别为通过M点与双节 点线相交的T和B点相对应的组成。上相主要含有PEG，下相 主要含有葡聚糖或盐。两相平衡时，符合杠杆规则。当用υT 代表上相体积，υB代表下相体积时，则
形成下相的聚合物
葡聚糖
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.5.1聚合物及其分子量的影响 聚合物的相对分子量降低、浓度升 高有利于增大溶质的分配系数。不 同聚合物的水相系统显示出不同的 疏水性，
2.5.双水相萃取分离影响因素
2.2.2pH值的影响 pH值的变化会导致组成体系的物 质电性发生变化,也会使被分离物 质的电荷发生改变,从而影响分配 的进行。例如在PEG/盐组成的体 系中,通常可在相当小的pH变化范 围内,使蛋白质在其中的分配系数 有很大的改变。
c1
c1 :下相中溶质的总浓度;c2:上相中溶质的总浓度。
生物分子的总分配系数Kp取决于溶质与双水相系统间 的各种相互作用，其中主要有静电作用、疏水作用和生物 亲和作用等。
ln K p ln KE ln KS ln K A
KE,KS,KA分别为静电作用、疏水作用、亲和作用对溶质分配
υT BM υB MT
式中 BM为B点到M点的距离，MT为M点到T点的距离。M点 向下移动时，系线长度缩短，两相差别减少，到达C点时， 系线长度为0，两相间的差别消失而成为一相。因此，C点成 为系统的临界点。
2.4双水相系统类型
（1）高聚物-高聚物体系，以聚乙二醇PEG/ Dextran（葡聚糖）和PEG／Dextran硫酸 盐体系为常见；(分子间的斥力）
图3.3 双相萃取的 工艺流程
双水相连续萃取工艺流程图
3.1.1目的产物的萃取
目标产物的萃取一般分为两步： 第一步 ：原料匀浆液与PEG和无机盐在萃取器中混合,然后进入 分离器分相。通过选择合适的双水相组成,一般使目标蛋白质分 配到上相(PEG相) ,而细胞碎片、核酸、多糖和杂蛋白等分配到 下相(富盐相) 。 第二步： 在上相中加入盐,形成新的双水相体系,从而将蛋白质 与PEG分离,以利于使用超滤或透析将PEG回收利用和目的产物 进一步加工处理。
a、成相聚合物分子量
分子量越小，蛋白质容易分配于富含该聚合物的相中。 例： PEG/Dextran形成的双水相体系中，降低PEG聚合物 的分子量，则蛋白质易分配于富含PEG聚合物的相中，使 分配系数（KP）增大；而将Dextran分子量减小，则会导 致分配系数的降低。
b、成相聚合物浓度 当接近分配的临界点蛋白质均匀分配于两相中，分配 Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipisicing elit, sed do eius 系数接近1； mod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Ut enim ad
图1.1 葡聚糖与甲基纤维素钠的双水相体系
1.2 双水相现象以及双水相萃取分离
双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种 盐溶于同一溶剂时, 由于聚合物之间或聚合物与 盐之间的分子空间阻碍作用 ,无法相互渗透 ,当 聚合物或无机盐浓度达到一定值时,就会分成不互 溶的两相 ,因为使用的溶剂是水 ,所以称为双水 相。 双水相萃取分离：双水相萃取是利用物质在不相 溶的两水相间分配系数的差异进行萃取的方法
因此，溶质的分配系数的对数与相对分子质量之间呈线性 关系，在同一个双水相系统中，若λ >0，不同溶质的分配系数 随相对分子质量的增大而减小。同一溶质的分配系数8
实际的双水相系统中通常含有缓冲液和无机盐等电解质， 当这些离子在两相中分配浓度不同时(即分配系数≠1)，将在 两相间产生电位差，此时，荷电溶质的分配平衡将受相间电位 的影响，从相平衡热力学理论推导溶质的分配系数表达式为
minim veniam, quis nostrud exercitation ullamco laboris nisi ut aliqui 成相聚合物的总浓度或聚合物/盐浓度的比例增加时 p ex ea commodo consequat.
，系统远离平衡点，此时两相性质的差别增加，蛋白 质容易趋向于某一极。
其中，RH为氨基酸的相对疏水(relativehydrophobicity)， 是通过测定氨基酸在水和乙醇中溶解度的差别确定的，并设 疏水性最小的甘氨酸的RH＝0。所以上式中 B为
KGly 为 甘氨酸分配系数。
B ln KGly / HF
2.6.2 影响分配平衡的因素
(1)成相聚合物的分子量和浓度