高效液相色谱法同时测定苯妥英钠和卡马西平的血药浓度

高效液相色谱法同时测定苯妥英钠和卡马西平的血药浓度
苏煌财;林玉仙;张宏
【摘要】Objective:To establish an HPLC method for determining plasma level of Phenytoin、Carbamazepine.% 目的：建立了高效液相色谱法同时
测定人血浆中苯妥英钠(DPH)、卡马西平(CBZ)的药物浓度.方法：以symmetryshield RP18柱(5.0μm,3.9×150mm)为色谱柱.流动相为甲醇∶水为50：50,流速1.0mL·min-1.Waters2487双波长紫外检测器,检测波长210nm.苯乙酮为内标物.结果：线性范围为苯妥英钠(2.2~33.0)μg.mL-1 r=0.9994；卡马西平(2.0~30.0)μg·mL-1, r=0.9998；平均回收率分别为97.5%、98.2%,高、中、低浓度样品的日间和日内测定相对标准偏差RSD<2%.结论：本法适用于苯妥英钠、卡马西平的血药浓度测定.
【期刊名称】《药品评价》
【年(卷),期】2012(000)026
【总页数】3页(P30-32)
【关键词】高效液相色谱法;苯妥英钠;卡马西平;血药浓度
【作者】苏煌财;林玉仙;张宏
【作者单位】福州市第一医院临床药学科福建福州 350009;福州市第一医院临床药学科福建福州 350009;福州市第一医院临床药学科福建福州 350009
【正文语种】中文
【中图分类】R969.4
苯妥英钠(phenytoin sodium，DPH)、卡马西平(carbamazepine，CBZ)是临床
常用的一线抗癫痫药物。

苯妥英钠临床常用于癫痫大发作治疗，卡马西平是癫痫单纯和复杂部分性发作的首选药物。

苯妥英钠、卡马西平在药物动力学方面存在较大个体差异，卡马西平治疗窗口狭窄，治疗量与中毒量很接近，因此临床上需要进行监测用药[1,2]。

苯妥英钠和卡马西平临床经常有联合用药情况，建立高效液相色
谱法同时测定人血清中苯妥英钠(DPH) 、卡马西平(CBZ)的药物浓度是很有必要的，已有文献报道[3,4]。

本研究采用简便、快速、灵敏、重现性好的高效液相色谱法
来同时测定苯妥英钠和卡马西平的血药浓度。

1 试药与仪器
1.1 试药标准品：苯妥英钠(批号200401，中国药品生物制品检定所)、卡马西平(批号9503，中国药品生物制品检定所)；内标：苯乙酮(德国进口)。

流动相：甲醇(国药集团化学试剂有限公司) 为色谱纯；盐酸(分析纯)；二重蒸馏水。

1.2 仪器 Waters高效液相色谱仪，包括515型溶剂泵，7725i手动进样器，Waters 2487双波长紫外检测器，Empower软件。

TG-328电光分析天平(上海
精密科学仪器有限公司)；1612-3型台式高速离心机(上海医疗器械有限公司手术
器械厂)；XW-80A漩涡混合器(上海医大仪器厂)；PHS-3C型精密酸度计(上海大
普仪器有限公司)。

2 测定前处理
2.1 色谱条件以Symmetryshield RP18(5.0μm ,
3.9×150mm)色谱柱，甲醇:水(50:50)为流动相；使用前经0.45μm微孔滤膜过滤。

流速：1.0mL·min-1,柱温：25℃，进样量：20μL，检测波长：210nm，灵敏度：0.5AUFS。

2.2 标准品配置精密称取苯妥英钠1.2mg、卡马西平1.0mg，分别置于25mL的
容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得苯妥英钠(浓度为44mg·L-1)、卡马西平(浓度为40mg·L-1)储备液，将以上两种储备液定量稀释成一系列苯妥英钠、卡马西平标准储备液。

苯乙酮4℃密度为1.028，取5mL定容至25mL，再取100μL定容至50mL即得到41.12mg·L-1。

2.3 样品处理精密量取血浆0.1mL，精密加入内标20μL及0.1M盐酸15μL，精密加入甲醇200μL，漩涡混匀3min，10000r·min-1 [1]离心4min，取上清液20μL，进样分析。

2.4 方法专属性按上述色谱条件和血浆处理方法检测，色谱图如图1。

各种药物保留时间分别为tR内=
3.818min、tRcbz=5.170min、tRpt=5.986min，峰形较好，血浆中杂质不干扰测定。

3 方法与结果
3.1 标准曲线的绘制精密量取苯妥英钠、卡马西平标准品储备液，分别加入空白血浆相应毫升数，配成一系列浓度苯妥英钠(2.2，
4.4，8.8，11.0，17.6，22.0，33.0 mg·L-1)、卡马西平(2.0，4.0，8.0，10.0，20.0，30.0 mg·L-1)溶液。

按本实验相应的方法项进行处理，并进行HPLC检测，采用内标法进行线性回归，测得回归方程：卡马西平Y=1.60e+005X-6.14e+004(r=0.9998)；苯妥英钠
Y=9.40e+004X-1.28e+005(r=0.9994)。

3.2 提取回收率的测定精密量取苯妥英钠、卡马西平标准品储备液，加入甲醇配制成高、中、低3个不同浓度即苯妥英钠33.0、17.6、2.2mg·L-1，卡马西平30.0、10.0、2.0mg·L-1。

取20μL进样，记录峰面积为A1；另取空白血浆
0.1mL，加入高、中、低相应浓度的苯妥英钠、卡马西平标准品储备液，按2.3项下操作，记录样品的峰面积A2，以A2/A1之值计算提取回收率。

见表1。

表1 提取回收率试验结果(n=5)Tab1 Results of recovery test(n=5)
表2 苯妥英钠和卡马西平的日内和日间精密度(n=3)Tab2 Within day and
between day precision of Phenytoin,Carbamazepine (n=3)
结果表明，高、中、低3个浓度的2种标准品的提取回收率均大于90%，RSD＜2%，满足生物样品测定的要求。

3.3 精密度考察精密量取苯妥英钠、卡马西平标准品储备液，加入空白血浆配制成高、中、低3种不同浓度的样品液各6份，在不同天内连续制备并测定3个分析批，计算苯妥英钠和卡马西平的日内和日间精密度。

见表2。

各值均小于2%，满足生物样品测定的要求。

3.4 干扰性试验根据我院的特点，在上述色谱条件下，进行地西泮、氯硝西泮、扑米酮、氨茶碱、环孢素A等多种药物的测试，均不干扰苯妥英钠、卡马西平、苯乙酮的测定。

4 讨论
本实验建立的HPLC法在灵敏度、重现性、专一性、线性范围、回收率等多方面都有明显的优势。

在测定波长的选择上，经紫外扫描后苯妥英、卡马西平在
210nm 处吸收最强且线性关系较好，故选择210nm 为测定波长，这与相应的文献报道相吻合；本实验的样品预处理简单，采用沉淀法操作简单、重现性好，且仪器的灵敏度能够达到测定要求。

考虑到用甲醇沉淀血浆的上层清液pH为8.5～9.5[5]，人体血清含Cl-的浓度为96～108mmol·L-1[6]，所以可以用0.1mol·L-1盐酸15μL，将沉淀液pH降至7.2左右，起到保护色谱柱的作用；流动相采用甲醇与水体积比50:50，这一组无干扰内标、苯妥英、卡马西平主峰，且分离都达到相应要求。

无须在流动相中加入有毒或腐蚀性的成分，可延长色谱柱的寿命。

参考文献
【相关文献】
[1]陈刚.治疗药物监测[M].北京:人民军医出版社,1988:385.
[2]沈鼎烈.癫痫治疗的现状[J].中国神经精神疾病杂志,2001,27(1):1.
[3]冯惠平,吴佳滨,李碧峰等.反相高效液相色谱法同时测定苯妥英钠、卡马西平的血药浓度[J].中国药业,2008,17(7):54-55.
[4]李朋梅,张相林,唐崑等.高效液相色谱法同时测定苯巴比妥、卡马西平及苯妥英钠的血药浓度[J].中日友好医院学报,2007,21(5):312-315.
[5]刘文英.药物分析[M].第五版,北京:人民卫生出版社,2000:88.
[6]张建国.诊断学[M].第四版.北京:人民卫生出版社,1990:463.。