分子排阻柱色谱法
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分子排阻柱色谱法
分子排阻柱色谱法是一种用于分离高分子量化合物的色谱技术。
这种色谱法也被称为凝胶色谱法。
它主要应用于大分子化合物,如蛋白质、多糖、核酸等的分离和分析。
以下是分子排阻柱色谱法的基本原理和步骤:
原理:
1.分子排阻效应:分子排阻柱色谱法利用凝胶柱(如琼脂糖或聚
丙烯酰胺凝胶)中的分子排阻效应。
大分子化合物在凝胶中的
排阻效应导致它们在柱上运动速度较慢,而小分子则能够更快
地通过凝胶。
2.大小分子的分离:样品通过柱时,大分子被凝胶阻挡,相对较
小的分子则能够穿过凝胶颗粒的间隙,实现分子的分离。
步骤:
1.样品准备:样品通常需要经过适当的前处理,如蛋白质的变性、
样品的过滤等。
2.柱选择:选择适当的分子排阻柱,柱内填充有凝胶。
凝胶的孔
径大小取决于待分离分子的分子量。
3.载气流动:通常使用溶剂或缓冲液作为载气,通过柱内凝胶,
使样品分子在柱中排阻。
4.检测:使用适当的检测器检测通过柱的化合物,如紫外可见光
检测器、荧光检测器等。
5.数据分析:根据各组分在柱中的保留时间,可以得到样品中各
分子的相对含量和分子量。
分子排阻柱色谱法广泛应用于生物化学、生物医学、生命科学等领域,尤其是在对生物大分子进行分离和纯化方面具有重要意义。