遗传实验13 粗糙链孢霉
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1、菌种活化：把野生型和缺陷型菌种从冰箱取 出，分别接在两支土豆培养基试管斜面上，
28OC温箱培养５天。培养到菌丝上部有分生孢 子产生。
２、杂交
（１）同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的分 生孢子或菌丝，25 OC温箱进行混合培养。注意 要贴好标签，写明亲本菌株及杂交日期。杂交 后５－７天就能看到许多棕色的原子囊果出现， 以后原子囊果变黑变成子囊果，在７－１４天 左右，就可在显微镜下观察。
另外一种方法：在杂交培养基上接种一个亲 本菌株，25 OC培养５－７天后即有原子囊果出 现。同时准备好另一亲本菌株的分生孢子，悬浊 于无菌水中（近于白色的悬浊液），将此悬浊液 加到形成原子囊果的培养物表面，使表面基本湿 润，继续25OC培养。原子囊果在加进分生孢子 一天后即可开始增大变黑成子囊果，７天后即成 熟。
（5）和（6）子囊型的形成与（3）和（4）类似， 也是两个染色单体发生了交换，不过交换不是发生 在第2条染色单体与第3条染色单体之间，而是发生 在1，3或2，4两条染色单体之间。
ห้องสมุดไป่ตู้
粗糙链孢霉lys+与lys-杂 交子囊孢子的排列顺序
(1)、(2)为非交换型 (3)、（4)、(5)、(6)为交换型子囊 (7)、（8)、(9)、(10)是由转换造成的异常比例
图中（3）和（4）的形成。由于Lys基因与着丝粒 间发生了一个交换，Lys+/Lys-在第一次减数分离时 没有分离，到第二次减数分裂（M2）时，带有Lys+ 的染色单体才和带有Lys-的染色单体相互分开，所 以称为第二次分裂分离。然后再经一次有丝分裂， 形成4个孢子对，顺序是＋＋--＋＋--或--＋＋-＋＋。这是第二次分裂分离子囊。
（3）最后用过的针及玻片要用开水煮过洗 净。
在显微镜下观察记录子囊孢子在子囊中的排列顺序，将 结果记入下表。
红色面包霉性状遗传杂交实验结果
子囊类型 非交换型 （1）＋＋＋＋――――
（2）――――＋＋＋＋ （3）＋＋――＋＋―― 交换型 （4）――＋＋――＋＋ （5）――＋＋＋＋―― （6）＋＋――――＋＋ 合计 其它类型
子囊数
链孢霉的子囊果和子囊
(a)成熟的子囊果； (b)散开的子囊
未交换型子囊 交换型子囊
交换型子囊
交换型子囊
未交换型子囊
未交换型子囊
作业：
记录每个完整子囊的类型，计算 Lys基因的着丝粒距离。
绘显微镜下观察到的杂交子囊的 图。
分析红色面包霉的子囊孢子分离 和交换现象与高等植物的性状分 离和交换有什么不同，本实验结 果说明了什么？
［实验目的］ 1． 掌握粗糙链孢霉的杂交技术； 2． 统计杂交结果，计算基因图距。
[实验材料]
粗糙链孢霉野生型菌株，Lys+,接合型A.
粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，Lys-, 接合型a.
[实验器具和药品]
器具：显微镜，钟表镊，解剖针，接 种针，载玻片，试管，培养皿。药品： ５％次氯酸钠。
[实验步骤]
实验十三 粗糙链孢霉生活史及杂交
［实验原理］
粗糙链孢霉属于真菌中的子囊菌纲。 粗糙链孢霉的菌丝体是单倍体（n=7）， 每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。由 菌丝顶端断裂形成分生孢子。
分生孢子有两种，小型分生孢子中含 有一个核，大型分生孢子中含有几个核。 分生孢子萌发成菌丝，可再生成分生孢 子，周而复始，这是粗糙链孢霉的无性 生殖过程。
链孢霉（Neurospora crassa）的生活史
图8-19
粗糙链孢霉的菌株有两种不同的接合型， 用A,a 或mt+, mt-表示，他们受一对等位 基因控制。不同结合型菌株的细胞接合产 生有性孢子，这过程称为有性生殖。有性 生殖可以通过两种方式进行。
一是产生原子囊果，内附有产囊体，若 另一接合型的分生孢子落在这原子囊果的 受精丝上时，分生孢子的细胞核进入受精 丝，到达产囊体，形成接合型基因的异核 体。
粗糙链孢霉的子囊和子囊型
本实验用赖氨酸缺陷型（记作Lys-）与野生型（记作 Lys+）杂交，得到的子囊孢子分离为4个黑的（＋），4 个是灰的（-）。黑的孢子是野生型；赖氨酸缺陷型孢 子成熟迟，所以呈灰色。根据黑色孢子和灰色孢子在子 囊中的排列顺序，可有6种子囊类型。
子囊型（1）和（2）的产生如图。第一次减数分裂 （M1）时，带有Lys+的两条染色单体移向一极，而带有 Lys-的两条染色单体移向另一极。Lys+/Lys-这对基因在 第一次减数分裂时分离，称第一次分裂分离。第二次减 数分裂（M2）时，每一染色单体相互分开，形成四分体， 顺序是＋＋——或——＋＋，再经过一次有丝分裂，成 为（1）和（2）子囊型。形成这两种子囊型时，在着丝 粒和基因对Lys+/Lys-间未发生过交换，是第一次分裂分 离子囊。
３、显微镜观察步骤：
（１）在长有子囊果的试管中加少量无菌水，摇 动片刻，把水倒在空三角瓶中，加热煮沸，以防 止分生孢子飞扬。
（２）取一载玻片，滴一滴５％次氯酸钠， 然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上， 用另一载玻片盖上，用手指压片，将子 囊果压破，置显微镜下（１０Ｘ１５倍） 检查，即可见到３０－４０个子囊。
二是不同接合型的菌株的菌丝连接， 两种接合型的细胞核发生融合形成合子， 产生子囊果。
粗糙链孢霉的子囊和子囊型
其中，1 和2 是 未交换的，称第一 次分裂分离子囊； 3-6 都是发生交换 的，称第二次分裂 分离子囊。
因此，统计第二 次分裂分离子囊占 总子囊数的比例， 乘以0.5，就可决定 某一基因与着丝粒 之间的重组值。重 组值去掉%（即乘以 100），即为该基因 图距。
28OC温箱培养５天。培养到菌丝上部有分生孢 子产生。
２、杂交
（１）同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的分 生孢子或菌丝，25 OC温箱进行混合培养。注意 要贴好标签，写明亲本菌株及杂交日期。杂交 后５－７天就能看到许多棕色的原子囊果出现， 以后原子囊果变黑变成子囊果，在７－１４天 左右，就可在显微镜下观察。
另外一种方法：在杂交培养基上接种一个亲 本菌株，25 OC培养５－７天后即有原子囊果出 现。同时准备好另一亲本菌株的分生孢子，悬浊 于无菌水中（近于白色的悬浊液），将此悬浊液 加到形成原子囊果的培养物表面，使表面基本湿 润，继续25OC培养。原子囊果在加进分生孢子 一天后即可开始增大变黑成子囊果，７天后即成 熟。
（5）和（6）子囊型的形成与（3）和（4）类似， 也是两个染色单体发生了交换，不过交换不是发生 在第2条染色单体与第3条染色单体之间，而是发生 在1，3或2，4两条染色单体之间。
ห้องสมุดไป่ตู้
粗糙链孢霉lys+与lys-杂 交子囊孢子的排列顺序
(1)、(2)为非交换型 (3)、（4)、(5)、(6)为交换型子囊 (7)、（8)、(9)、(10)是由转换造成的异常比例
图中（3）和（4）的形成。由于Lys基因与着丝粒 间发生了一个交换，Lys+/Lys-在第一次减数分离时 没有分离，到第二次减数分裂（M2）时，带有Lys+ 的染色单体才和带有Lys-的染色单体相互分开，所 以称为第二次分裂分离。然后再经一次有丝分裂， 形成4个孢子对，顺序是＋＋--＋＋--或--＋＋-＋＋。这是第二次分裂分离子囊。
（3）最后用过的针及玻片要用开水煮过洗 净。
在显微镜下观察记录子囊孢子在子囊中的排列顺序，将 结果记入下表。
红色面包霉性状遗传杂交实验结果
子囊类型 非交换型 （1）＋＋＋＋――――
（2）――――＋＋＋＋ （3）＋＋――＋＋―― 交换型 （4）――＋＋――＋＋ （5）――＋＋＋＋―― （6）＋＋――――＋＋ 合计 其它类型
子囊数
链孢霉的子囊果和子囊
(a)成熟的子囊果； (b)散开的子囊
未交换型子囊 交换型子囊
交换型子囊
交换型子囊
未交换型子囊
未交换型子囊
作业：
记录每个完整子囊的类型，计算 Lys基因的着丝粒距离。
绘显微镜下观察到的杂交子囊的 图。
分析红色面包霉的子囊孢子分离 和交换现象与高等植物的性状分 离和交换有什么不同，本实验结 果说明了什么？
［实验目的］ 1． 掌握粗糙链孢霉的杂交技术； 2． 统计杂交结果，计算基因图距。
[实验材料]
粗糙链孢霉野生型菌株，Lys+,接合型A.
粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，Lys-, 接合型a.
[实验器具和药品]
器具：显微镜，钟表镊，解剖针，接 种针，载玻片，试管，培养皿。药品： ５％次氯酸钠。
[实验步骤]
实验十三 粗糙链孢霉生活史及杂交
［实验原理］
粗糙链孢霉属于真菌中的子囊菌纲。 粗糙链孢霉的菌丝体是单倍体（n=7）， 每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。由 菌丝顶端断裂形成分生孢子。
分生孢子有两种，小型分生孢子中含 有一个核，大型分生孢子中含有几个核。 分生孢子萌发成菌丝，可再生成分生孢 子，周而复始，这是粗糙链孢霉的无性 生殖过程。
链孢霉（Neurospora crassa）的生活史
图8-19
粗糙链孢霉的菌株有两种不同的接合型， 用A,a 或mt+, mt-表示，他们受一对等位 基因控制。不同结合型菌株的细胞接合产 生有性孢子，这过程称为有性生殖。有性 生殖可以通过两种方式进行。
一是产生原子囊果，内附有产囊体，若 另一接合型的分生孢子落在这原子囊果的 受精丝上时，分生孢子的细胞核进入受精 丝，到达产囊体，形成接合型基因的异核 体。
粗糙链孢霉的子囊和子囊型
本实验用赖氨酸缺陷型（记作Lys-）与野生型（记作 Lys+）杂交，得到的子囊孢子分离为4个黑的（＋），4 个是灰的（-）。黑的孢子是野生型；赖氨酸缺陷型孢 子成熟迟，所以呈灰色。根据黑色孢子和灰色孢子在子 囊中的排列顺序，可有6种子囊类型。
子囊型（1）和（2）的产生如图。第一次减数分裂 （M1）时，带有Lys+的两条染色单体移向一极，而带有 Lys-的两条染色单体移向另一极。Lys+/Lys-这对基因在 第一次减数分裂时分离，称第一次分裂分离。第二次减 数分裂（M2）时，每一染色单体相互分开，形成四分体， 顺序是＋＋——或——＋＋，再经过一次有丝分裂，成 为（1）和（2）子囊型。形成这两种子囊型时，在着丝 粒和基因对Lys+/Lys-间未发生过交换，是第一次分裂分 离子囊。
３、显微镜观察步骤：
（１）在长有子囊果的试管中加少量无菌水，摇 动片刻，把水倒在空三角瓶中，加热煮沸，以防 止分生孢子飞扬。
（２）取一载玻片，滴一滴５％次氯酸钠， 然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上， 用另一载玻片盖上，用手指压片，将子 囊果压破，置显微镜下（１０Ｘ１５倍） 检查，即可见到３０－４０个子囊。
二是不同接合型的菌株的菌丝连接， 两种接合型的细胞核发生融合形成合子， 产生子囊果。
粗糙链孢霉的子囊和子囊型
其中，1 和2 是 未交换的，称第一 次分裂分离子囊； 3-6 都是发生交换 的，称第二次分裂 分离子囊。
因此，统计第二 次分裂分离子囊占 总子囊数的比例， 乘以0.5，就可决定 某一基因与着丝粒 之间的重组值。重 组值去掉%（即乘以 100），即为该基因 图距。