彗星试验步骤
彗星实验步骤Comet assay
水稻植株彗星实验步骤
通过将Singh和Gichner等人建立的碱性彗星实验方案应用于水稻（Oryza sativa L.）来确定原发性DNA损伤。
所有的实验步骤都是在冰床上避光进行的。
1、对于每一盆水稻，取鲜叶0.1 g，用刀片切碎，加入2个100 μL装有三羟甲基氨基甲烷盐酸提取缓冲液（Tris-HCl提取液，0.1 M，pH=7.5，4℃保存）的离心管中；
2、每个离心管中取75 μL含细胞核样本添加到150 μL低熔点琼脂糖凝胶（LMPA，1%）中，混合；
3、取75 μL上述混合物，沉积在用正常熔点琼脂糖凝胶（NMPA，1%）制备的载玻片上，然后盖上盖玻片；
4、重复步骤3，每个样品制备3张载玻片，4℃保存15min；
5、在载玻片上添加一层LMPA以保护含有核的凝胶层；
6、将载玻片置于含有强碱性缓冲液（0.3 M NAOH和1 M EDTA，pH＞13）的电泳槽中浸泡15 min，诱导DNA的展开和变性；
7、电泳，电压为25 V，电流为30 mA，持续5 min，将DNA片段从未受损的DNA链中分离出来，温度4℃，避光；
8、观察载玻片，每张载玻片分析30个核，利用连接到图像分析系统的摄像机对彗星进行了检测，并利用图像软件分析；
9、彗星尾部端点强度（TI）与DNA损伤水平呈线性关系。
彗星试验步骤范文
彗星试验步骤范文彗星试验是一种用于检测和评估新药物或化合物的毒性和安全性的实验方法。
下面是彗星试验的步骤：1.实验前准备：-准备细胞培养物：选择一种常用的哺乳动物细胞系，如人肺细胞株。
培养细胞，并确保细胞处于稳定的生长状态。
-准备测试物溶液：将待测试的化合物溶解在适当的溶剂中，以得到所需的浓度。
根据先前的研究或文献，确定起始浓度和待测物的浓度范围。
2.计算细胞培养物数量：根据实验设计和所需的浓度范围，计算出需要的细胞数量。
3.处理细胞：将细胞分为多个处理组和对照组。
每个处理组使用不同浓度的待测物处理细胞，对照组仅使用培养基或溶剂作为对照。
4.孵育细胞：将处理后的细胞培养物放入恒温培养箱中孵育。
按照特定的条件（温度、湿度、CO2浓度等）进行培养。
5.细胞收集：在设定的时间点，收集细胞并通过离心将细胞沉淀下来。
清除培养基及其他杂质。
6.细胞裂解：使用一种适当的裂解液（如悬浮剂），将细胞裂解并释放核酸。
7.准备凝胶：准备琼脂糖凝胶，通常是用琼脂糖粉末和缓冲液混合制备。
8.凝胶电泳：将裂解液样品和标准DNA样品分别加载到琼脂糖凝胶孔中。
使用电场使DNA片段从样品中迁移出来。
9.DNA染色：使用DNA染料（如Ethidium bromide）染色凝胶，以可视化DNA片段。
10.凝胶成像和分析：使用紫外线照明或分子影像系统观察凝胶上DNA片段的大小和形状。
使用适当的软件测量和分析DNA损伤程度。
11.数据分析：将实验结果转化为数值形式，使用统计学方法进行数据分析，如计算DNA损伤指数或计算细胞生存率。
比较不同浓度的样品与对照组的差异。
12.结果解读：根据实验结果，评估待测物的毒性和安全性。
根据不同浓度的处理组的DNA损伤程度，确定药物是否具有潜在的毒性。
13.结论和报告：对实验结果进行解读，并得出结论。
根据实验结果撰写报告，包括实验设计、方法、结果和结论。
需要注意的是，彗星试验作为一种初步的毒性评估方法，通常需要与其他细胞毒性测试方法结合使用，以全面评估待测物的安全性。
彗星实验步骤范文
彗星实验步骤范文彗星是一种天体现象，指的是在太阳系内绕太阳运行的一类小天体。
彗星的核心主要由冰和岩石组成，当与太阳接近时，晶体冰会热化并以气体形态释放出来，形成彗尾。
彗星实验可以帮助我们更好地理解彗星的形成和性质。
以下是彗星实验的步骤：材料：-一块冰块-一盆水-一小束干冰-一台射灯或强力手电筒-一个黑暗的室内或夜晚的户外空间步骤1：准备冰块和水在一盆水中放入一块冰块，确保冰块完全浸泡在水中。
这样可以模拟太阳系中的彗核。
步骤2：制作彗尾将一小束干冰放在碗中或任何合适的容器中。
干冰是固态二氧化碳，具有非常低的温度，当它接触到周围的空气时，会迅速蒸发并形成气体。
这模拟了彗星接近太阳时晶体冰的热化过程。
确保干冰不会直接接触到水。
步骤3：创建黑暗环境将彗星模型置于黑暗的室内或夜晚的户外空间中。
这样可以让彗尾更加清晰可见。
步骤4：使用射灯或手电筒将射灯或强力手电筒对准盆中的冰块，并打开它。
这样可以模拟太阳的辐射对彗核的加热作用。
步骤5：观察彗尾的形成当射灯或手电筒照射到冰块上时，干冰会迅速蒸发，并产生一道透明或白色的气体云。
这个气体云模拟了彗尾的形成，它会围绕彗核散开。
步骤6：测量和记录使用测量工具可以测量彗核的直径，以及彗尾的长度和宽度。
同时，记录彗尾的颜色和形态。
步骤7：改变实验条件尝试改变冰块的形状、大小和温度等条件，观察和记录彗尾的变化。
这有助于了解不同条件对彗尾的影响。
步骤8：分析和总结根据观察和记录的数据，分析彗尾的形成和特征。
比较不同实验条件下彗尾的差异，并总结出彗尾的性质和形成机制。
总结：通过这个实验，我们可以更好地理解彗星的形成和性质。
彗尾的形成是由彗核受到太阳辐射的加热而导致晶体冰热化释放出来的气体所形成的。
实验中可以通过改变不同的条件，观察和比较彗尾的差异，更深入地了解彗尾的形成机制。
此外，实验还可以帮助我们理解彗星的形态特征，如彗核的大小、彗尾的长度和宽度等。
在实验的基础上，我们可以进行更深入的研究，以便更好地了解和探索太阳系中的彗星现象。
彗星实验
彗星实验(Comet assay),又称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis，SCGE),各种理化因子作用细胞后引起的DNA链的断裂可用该方法检测[1～3]，并在统计学基础上对损伤程度做出评估[4]。
本实验对Singh 等[5]建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。
用超净工作台上的紫外消毒灯[可发射波长为254 nm的紫外线(Ultraviolet，UV)，属于UVC波段范围]作为DNA损伤的诱导因子[7～9]，诱导K562细胞DNA损伤，用改良彗星实验检测损伤程度，验证改良的实验系统是否可靠，同时筛选并评价DNA损伤的分析指标。
1 材料与方法1.1 细胞K562细胞，来源于第四军医大学免疫学教研室，37 ℃、5％ CO2培养箱中培养，取对数期细胞进行实验。
1.2 紫外线照射装置紫外消毒灯(ZSZ-20型，20 W，天津市紫晶特种光源有限公司)。
1.3 主要试剂和仪器培养基：10％新生牛血清(杭州四季青公司)，90％RPMI-1640培养液(Hyclone公司)；双抗(青、链霉素，100 UI/ml)；TritonX-100(Genview分装)；二甲基亚砜、肌苷酸钠(Sigma分装)；低熔点琼脂糖(FMC 分装)；常熔点琼脂糖(Spanish分装)。
其余生化试剂均为分析纯。
电泳仪：由西北大学物理系提供；电泳槽：DYC33A型(北京市六一仪器厂)；显微镜：Leica DM LB 2 (Leica 公司)；彗星图象分析软件：CASP软件(casp-1.2.21.4 实验分组及UV处理收集对数生长的K562细胞，台盼蓝染色计数，细胞活力大于95％，用Hank's(pH7.4)调整细胞密度至1×105/ml，接种于塑料培养皿中(ф=35 mm，2 ml/plate)，然后进行紫外线照射(0.3 mW/cm2)。
实验分为对照组和8个照射组，各照射组分别照射3、5、10、40，60、120、180、240 s，对照组不进行紫外线照射，之后进行彗星实验。
体内彗星试验
附件15体内彗星试验In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay1 范围本规范确定了体内彗星试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料的遗传毒性检测。
2 试验目的评价化妆品用原料的遗传毒性。
3 定义3.1 碱性单细胞凝胶电泳：在单个细胞或细胞核水平检测DNA损伤的一种敏感技术。
3.2 彗星：经过电泳后细胞核的形状，形似彗星。
细胞核部分形成彗星头部，在电场力的作用下脱离细胞核的DNA片断形成彗尾。
3.3 “刺猬状”细胞：显微图像下由小或模糊不清的头以及大的弥漫性尾组成的细胞。
3.4 尾部DNA含量：反应总强度（彗头与彗尾之和）中彗星的强度。
可反应DNA片断的数量，用百分比表示。
3.5 最大耐受剂量：试验期内引起动物产生轻微毒性效应的最高剂量，在这个剂量下，动物产生明显的临床体征，如异常行为或反应，轻微的体重下降或靶组织细胞毒性，但是并不会引起死亡或痛苦。
4 试验原理DNA双螺旋结构在强碱性溶液中（pH>13）会松弛，在电场力的作用下，正常的DNA 保留在原位不动，而单链或双链DNA断裂所形成的DNA片断在会向阳极移动，形成彗星状。
DNA片断所形成的彗星状拖尾的长度及强度可以反应DNA片断的大小和数量。
通过检测尾部DNA含量（%）等终点指标可以评价DNA损伤程度。
5 试验基本原则动物染毒一定时间后处死并解剖动物，获取靶器官，制备单细胞悬液。
单细胞悬液与琼脂糖混合后经过裂解过程去除细胞膜，并暴露于强碱性溶液（pH>13）中进行DNA解旋，经过电泳、固定、染色，在荧光显微镜下观察，通过分析软件对彗星状细胞进行分析，判定DNA损伤程度。
每个样品需分析足够数量的细胞进行最终结果评价。
6 溶液的配制（所有溶液均现用现配）6.1 0.5%(w/v) 低熔点凝胶低熔点胶以0.5%(w/v)的浓度溶于D-PBS（无Ca2+、Mg2+和酚红）溶液中，并利用微波炉加热。
彗星试验
单细胞凝胶电泳分析法单细胞凝胶电泳分析法(彗星分析法)治愈癌症是一个难题,长期以来科学家们一直在苦苦探索.我们目前知道,致癌的过程与许多因素有关，但如果我们能阻止其中的任何一个步骤，癌细胞便无法形成。
因此,探测致癌物质的技术与癌细胞的及时发现就显得尤其重要！然而截至目前为止，科学家们仍无法研究出一种简易基因测试法或综合的方法来检测出可能的致癌物。
因此，致癌物对ＤＮＡ的作用仍是癌症研究的一个重要课题。
遗传毒物学为一专门研究化学及各类物质对人体遗传基因影响的科学。
人体每天暴露在大量的化学物质当中，为了诊测这些物质对人体ＤＮＡ的影响，科学家们发明了多种测定方法，然而，多年来人们所使用的这些测试方法却不能准确与快速的辨识出会使人体致癌的物质。
为了解决这些问题，单细胞凝胶电泳法（Single Cell Gel Assay）应运而生，通常亦称之彗星分析法（Comet Assay）。
它之所以称为彗星分析法是因为被破坏的DNA形似彗星，此方法已被证实是最具敏感性又最具快速性的方法。
研究人员使用这种方法可在２４小时内获得初步结果，在十天之内能得到结论性的证据。
此种测定方法速度远快于其它方法，不仅可以测出某种物质是否是致癌物，而且还可测出被破坏细胞的损害程度。
彗星分析法是用来判别某种物质是否是致癌物，并衡量其对人体ＤＮＡ修补的影响程度，这一分析过程是将健康的人体白血球接触于被测试的物质后，然后再用彗星分析法来进行测试，如果被测试的物质是致癌物质，那么ＤＮＡ将被破坏，而被损坏的ＤＮＡ将开始游离细胞核，形成彗星形状。
ＤＮＡ受到致癌物质的损坏愈大，ＤＮＡ碎段就愈多，愈小的ＤＮＡ碎段游离的速度就愈快，也游离愈远，因而形成了彗星的尾部，而较大的一些碎段位置则靠近细胞核，因而形成彗星的头部。
ＤＮＡ碎段的游动的程度不同 使它呈现出彗星状，使研究人员能很容易看清细胞的损害程，彗星的长度与ＤＮＡ的损害程度有关，此长度是指从细胞核到彗星尾端的距离，也就是说，彗星尾端愈长，细胞的损害程度愈大。
彗星实验
彗星实验收集目标细胞：处死小鼠后，迅速分离肝脏，选取最左叶肝脏，在4℃放置2h的PBS溶液中多次清洗，直至看不到血液。
将肝组织至于含有2 mL4℃PBS 溶液的小烧杯中，用小剪刀剪碎（2-3 mm）。
台盼蓝排斥法检测细胞活力，细胞存活率大于95%方可用于实验，调整细胞密度为5×105-106个/ml。
此步在暗室中进行。
制片：取100 μL置于45℃预热的0.75% NMA滴加于载玻片一侧，迅速盖上盖玻片（24 mm×50 mm），注意不要产生气泡，至4 ℃凝固约20分钟后轻轻移去盖玻片。
吸取10 μL待检测的细胞悬液与100 μL 37℃预热的0.75% LMA混匀，迅速将细胞混悬液滴加到第一层凝固的NMA上，再迅速盖上盖玻片使其均匀铺开，同样需避免起泡。
将玻片至4℃凝固约30 min，操作注意避光，每只动物制作三张平行片。
裂解：轻轻移去盖玻片，将载玻片水平轻缓浸入4℃预冷的裂解液（pH= 10），于4℃避光放置1 h。
解旋：轻轻拿出载玻片，浸入PBS缓冲液5 min，用滤纸吸去多余水分后放入电泳槽。
玻片并列放置，不留空隙。
将新鲜配置的冰冷电泳缓冲应用液轻轻倒入电泳槽，使液面完全覆盖载玻片，放置20 min解旋。
避光进行。
电泳：根据预实验，设置电泳仪25V、300 mA电泳20 min。
避光进行。
中和：切断电源，小心取出玻片，置染缸，中和缓冲液浸洗，3次×5 min/次。
脱水保存：从电泳仪中轻轻取出载玻片，浸入PBS缓冲液2次×5 min/次。
吸干周围水分后放入乙醇脱水，约1 h后取出自然晾干保存。
染色：在玻片上滴加EB染色液50 μL（5 μg/mL）染色，盖上新盖玻片。
用滤纸吸去多余染料，于2 h内使用荧光显微镜镜检。
镜检：EB染色后，未受损细胞在镜下表现为为圆形荧光核心，只有彗星头部，没有明显的尾。
受损细胞则有彗星尾伸向正极，形成一个亮的头部和尾部，形似彗星。
彗星实验
彗星实验(Comet assay),又称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis，SCGE),各种理化因子作用细胞后引起的DNA链的断裂可用该方法检测[1～3]，并在统计学基础上对损伤程度做出评估[4]。
本实验对Singh 等[5]建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。
用超净工作台上的紫外消毒灯[可发射波长为254 nm的紫外线(Ultraviolet，UV)，属于UVC波段范围]作为DNA损伤的诱导因子[7～9]，诱导K562细胞DNA损伤，用改良彗星实验检测损伤程度，验证改良的实验系统是否可靠，同时筛选并评价DNA损伤的分析指标。
1 材料与方法1.1 细胞K562细胞，来源于第四军医大学免疫学教研室，37 ℃、5％ CO2培养箱中培养，取对数期细胞进行实验。
1.2 紫外线照射装置紫外消毒灯(ZSZ-20型，20 W，天津市紫晶特种光源有限公司)。
1.3 主要试剂和仪器培养基：10％新生牛血清(杭州四季青公司)，90％RPMI-1640培养液(Hyclone公司)；双抗(青、链霉素，100 UI/ml)；TritonX-100(Genview分装)；二甲基亚砜、肌苷酸钠(Sigma分装)；低熔点琼脂糖(FMC 分装)；常熔点琼脂糖(Spanish分装)。
其余生化试剂均为分析纯。
电泳仪：由西北大学物理系提供；电泳槽：DYC33A型(北京市六一仪器厂)；显微镜：Leica DM LB 2 (Leica 公司)；彗星图象分析软件：CASP软件(casp-1.2.2，/index.php下载)；CO2培养箱：BB16HF型(上海力申科学仪器有限公司)；环地牌紫外辐照计(北京师范大学光电仪器厂)。
1.4 实验分组及UV处理收集对数生长的K562细胞，台盼蓝染色计数，细胞活力大于95％，用Hank's(pH7.4)调整细胞密度至1×105/ml，接种于塑料培养皿中(ф=35 mm，2 ml/plate)，然后进行紫外线照射(0.3 mW/cm2)。
彗星试验方法
试剂配制
1.磷酸缓冲液（PBS）2.琼脂糖溶液 3.裂解液 4.Tris-Hcl 缓冲 液 (pH=7.5) 5. 电 泳 缓 冲 液 （ pH>13 ） 6. 中 和 Leabharlann 7. 染 色 液 8.0.5%台盼蓝
载玻片凝胶体的制备
1.55ul 正常熔点琼脂糖铺底胶、 2.110ul 低熔点琼脂糖铺第一层胶、 3.75ul 琼脂糖细胞悬浮液铺第二层胶、 4.75ul 低熔点琼脂糖第三层胶
染色
室温下待玻片胶体表面水分干燥后，滴加 30μ l 5μ g/ml 的溴 化乙锭到胶体表面，盖上盖玻片染色。20 分钟后就可用荧光 显微镜镜检。
观察
将载玻片编为盲片，在荧光显微镜下用 515～560nm 的激发波观察，目镜 10×， 物镜 20～40×。每个处理制作两张载玻片凝胶体，每个计数 50 个细胞，共计 100 个。用来统计细胞拖尾率用 X2 比较对照组和处理组的差异；每个载玻片凝胶体用 图像采集系统采集 25 个细胞，共采集 50 个细胞。
分析
用 CASP 图像分析软件来分析彗星图像。
细胞的裂解
将预冷的电泳液倒入电泳槽中，液面高于载玻片 0.25cm，保 证液面浸没所有玻片，电泳槽置于 4℃冰箱中，避光解旋 30 分钟。
DNA 电泳
室温下，稳压 25V，电流 300mA，电泳 30 分钟。电流可通 过调节液面高低来调节。电泳槽放置到托盘中，四周铺冰块来 降低电泳液的温度。
中和
从电泳槽中取 出玻片， 放置到方 形盒中，倒 入预冷的 0.4mol/LTris-HCl 缓冲液，置于冰箱中，中和 5 分钟后，倒掉 反应液，重新加入预冷的 Tris-HCl 缓冲液。重复三次，每次 反应 5 分钟，共计 15 分钟。
毒鼠强遗传毒理——彗星实验
彗星试验一、实验原理正常细胞核是由DNA和蛋白质构成，DNA的双螺旋以核小体的组蛋白为核心形成超螺旋结构，再进一步形成高级结构，形成染色质，染色质的缠绕形成细胞核。
彗星实验又称单细胞凝胶电泳实验，它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单，双链缺口损伤的程度。
当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。
在中性条件下，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来。
由于这些DNA的分子量小且碱变性为单链，所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA 向正极迁移形成“彗星”状图像，而未受损伤的DNA部分保持球形。
DNA受损越严重，产生的断链和断片越多，长度也越小，在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多，迁移的距离就愈长。
通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。
毒鼠强的中毒机制尚不清楚，但有文献显示，毒鼠强的致惊厥作用可能是拮抗γ-氨基丁酸（γ-GABA）的作用，造成脑细胞凋亡。
因此，本实验通过检测不同剂量的毒鼠强对大鼠脑组织细胞DNA的损伤情况，探讨细胞DNA损伤与毒鼠强的毒作用间的关系。
二、试验目的：检测毒鼠强与细胞DNA损伤的关系。
三、试剂与器材（一）试验细胞来源：大鼠脑细胞（大鼠采用SD大鼠）（二）试剂1、毒鼠强纯品（98.5%，公安部物证鉴定中心提供）2、无钙、镁磷酸盐缓冲液（PBS缓冲液）将Nacl4.0g，KH2PO40.1g，KCL0.2g，Na2HPO40.58g,Na2HPO4·12H2O.45g，溶于500ml蒸馏水中。
3、琼脂糖用无钙、镁磷酸盐缓冲液配置4、细胞裂解液Nacl73.05g，Na2EDTA·2H2O18.6g，Tris（三羟甲基氨基甲烷）0.61g，肌氨酸钠5g，双蒸水400ml，先加入一些NaOH在磁力搅拌器上加热溶解。
小鼠肝细胞彗星实验试剂配制及步骤
小鼠肝细胞彗星实验试剂配制及步骤①1%正常熔点琼脂糖NMA：10mL 0.1g NMA (PBS配制) 微波炉加热②0.7%低熔点琼脂糖LMA：10mL 0.07g LMA (PBS配制) 水浴锅37℃保温③细胞裂解液（4℃）：（2.5mM）NaCl +（100mM）Na2EDTA +（10mM）Tris 调pH=101000mL：146.1g NaCl 37.22g Na2EDTA 1.22g Tris500mL：73.05g NaCl 18.61g Na2EDTA 0.61g Tris （配500mL：先300mL灭菌水溶解4g NaOH ，加热溶解，然后加其他，调pH=10）④电泳缓冲液（现用现配，可先配10×）：（1mM Na2EDTA + 300mM NaOH pH＞13）10×：100mL：0.3722g Na2EDTA + 12g NaOH300mL：1.1166g Na2EDTA + 36g NaOH⑤中和缓冲液：0.4mol/L Tris-HCl (pH=7.5)1000mL：48.456g Tris，尽量少水溶解，HCl 调pH 7.5500mL：24.228g Tris⑥EB染色剂（4℃暗处保存）：2ug/mL 先配10×: 20ug/mL10×：100mL：0.2g EB 蒸馏水稀释步骤：①脱颈处死取小鼠肝0.5g，PBS冲洗，冰上剪碎→10mL EP管→加5ml PBS溶液匀浆，过四层纱布，离心：1000r 10min 4℃。
弃上清液，重新悬浮加5ml PBS。
②1%NMA 100ul加到载玻片上（水浴锅上预热防凝），盖上盖玻片迅速低温。
③700ul 0.7% LMA + 200ul 悬浮液→1.5mL EP管，取90ul加到载玻片上，盖上盖玻片低温。
④放入细胞裂解液，4℃冰箱裂解1h 至1.5h。
⑤水洗三次，电泳液中中和20min，电泳。
厦门大学-操作讲义-实验八.彗星试验单细胞凝胶电泳(SCGE)
用浓度为2μg/ml的PI染色液4℃染色5min。染色结束，用 预冷的PBS漂洗2min，弃PBS，50%甘油保湿。3h内阅完 玻片。
13
操作步骤
(10)镜检
使用荧光正置显微镜观察玻片，仪器参数设置为490nm激 发光(蓝绿色，看见红色荧光)、200倍观察、TIFF格式保存 文件。阅片时要保持玻片湿润，先低倍大体观察，再选择 有代表性区域阅片。
应用：是检测DNA微损伤的新方法， 在国际遗传毒性检测程序工作会议上已得到认可。 检测诱变剂、射线等对DNA的损伤、 监测环境污染物对机体的遗传损害、 研究毒物致癌机制，等
4
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)
特点： ①实验流程短(一天可完成实验); 图像获取和数据分析可隔日 完成； ②在单细胞水平上对DNA损伤进行可视性检测； ③准确性好、灵敏度高。
铺好的玻片完全浸入临用配制的预冷细胞裂解液中，4℃ 水 平放置，裂解2 h。
(5) 解链
将载玻片小心浸入预冷的解链电泳液中，4℃水平放置， 解 链0.5h。
(6) 电泳
接通电源，在300mA和25V条件下电泳20min。(调节液面)
12
操作步骤
(7) 中和
电泳结束，将载玻片小心转移到托盘，浸入中和液中和 20min。中和后用冰水洗2次，2min/次。
(11)单细胞凝胶电泳结果分析
每片随机观察100个细胞，计数彗星细胞百分率，用目镜 测 微尺测量彗星细胞尾矩，进行统计学分析。 统计学分析：采用SPSS软件进行单因素方差分析，各组 间 两两比较采用q检验。
14
实验记录
表1 不同剂量镉处理LO2细胞中彗星细胞百分率和尾长比较
彗星实验
彗星实验(Comet assay),又称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis，SCGE),各种理化因子作用细胞后引起的DNA链的断裂可用该方法检测[1～3]，并在统计学基础上对损伤程度做出评估[4]。
本实验对Singh等[5]建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。
用超净工作台上的紫外消毒灯[可发射波长为254 nm的紫外线(Ultraviolet，UV)，属于UVC 波段范围]作为DNA损伤的诱导因子[7～9]，诱导K562细胞DNA损伤，用改良彗星实验检测损伤程度，验证改良的实验系统是否可靠，同时筛选并评价D N A损伤的分析指标。
1 材料与方法1.1 细胞K562细胞，来源于第四军医大学免疫学教研室，37 ℃、5％CO2培养箱中培养，取对数期细胞进行实验。
1.2 紫外线照射装置紫外消毒灯(ZSZ-20型，20 W，天津市紫晶特种光源有限公司)。
1.3 主要试剂和仪器培养基：10％新生牛血清(杭州四季青公司)，90％ RPMI-1640培养液(Hyclone公司)；双抗(青、链霉素，100 UI/ml)；Triton X-100(Genview分装)；二甲基亚砜、肌苷酸钠(Sigma分装)；低熔点琼脂糖(FMC分装)；常熔点琼脂糖(Spanish分装)。
其余生化试剂均为分析纯。
电泳仪：由西北大学物理系提供；电泳槽：DYC33A型(北京市六一仪器厂)；显微镜：Leica DM LB 2 (Leica 公司)；彗星图象分析软件：CASP 软件(casp-1.2.21.4 实验分组及UV处理收集对数生长的K562细胞，台盼蓝染色计数，细胞活力大于95％，用Hank's(pH7.4)调整细胞密度至1×105/ml，接种于塑料培养皿中(ф=35 mm，2 ml/plate)，然后进行紫外线照射(0.3 mW/cm2)。
实验分为对照组和8个照射组，各照射组分别照射3、5、10、40，60、120、180、240 s，对照组不进行紫外线照射，之后进行彗星实验。
彗星实验
1.制片第一层胶: 将预热45℃的80ul, 0.6% 的正常熔点琼脂糖(NMA ) 滴在磨砂载玻片的磨砂面上, 迅速用一干净玻片边缘将胶铺平, 或加盖盖玻片压平胶面, 将玻片臵保湿盒内,4℃,10 min 使胶凝固。
第二层胶: 将10ul 待测细胞悬液盒75ul, 0.6% 的低熔点琼脂糖(LMA ) 在37℃混匀,滴在第一层胶板上(加盖玻片者需先轻轻揭去盖玻片) , 迅速加干净的盖玻片使胶铺平, 将玻片臵保湿盒内, 4℃,10 min使胶凝固。
第三层胶: 在凝固的LMA 层上滴加37℃,0.6%LMA,盖上盖玻片,使其凝固。
铺第一层胶的目的是使第二层胶平整、附着紧密, 铺第三层胶的目的是对第二层胶中的细胞起保护作用。
2.裂解移去盖玻片, 将载玻片水平浸入新配臵的预冷4℃裂解液( 2.5 mol/LNaCl, 100mmol/L Na2EDTA,10 mmol/L Tris, 1%肌氨酸钠, pH = 10, 用前加入1% 体积的Triton X2100, 10%二甲亚砜) 中至少1小时。
此步骤的目的是溶解细胞膜及核膜, 除去蛋白质、RNA 等, 仅存留核骨架。
3.解旋从裂解液中取出载玻片, 用蒸馏水浸泡或PBS 冲洗, 洗去胶表面的盐溶液然后将载玻片臵于水平电泳槽中, 倒入新配制的碱性电泳缓冲液(1 mmol/L Na2EDTA,300 mmol/L NaOH, pH = 13), 约没过胶面0.25cm 左右, 碱解旋20～40 min, 以便使DNA 在碱性条件下解旋成单链DNA,使DNA 断片在电泳场中易于迁移。
4.电泳电压25V,电流300mA,低温避光,电泳20～40min。
5.中和将载玻片取出,用0.4 mmol/L Tris 缓冲液(pH = 7.5) 中和2～3 次, 每次5～15 min, 以除去碱和去污剂,以免影响染色效果。
6.染色观察根据显微镜的滤镜种类选择染色剂。
常用吖啶橙(2mg/L)、溴化乙啶(20mg/L)、碘化丙啶(2.5～5.0 mg/L )、4,6-联脒-2-苯基吲哚(5 mg/L )或苯并嗯唑啉2-2喹啉等, 用量50～ 100ul, 滴臵胶板上, 盖上盖玻片, 24小时内检测, 时间过长将导致荧光减弱。
彗星实验
彗星实验————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期：ﻩ彗星实验(Cｏｍet ａsｓay)，又称单细胞凝胶电泳(Ｓiｎglｅ celｌ geｌeleｃtrophｏreｓｉs,SCGE),各种理化因子作用细胞后引起的DNA链的断裂可用该方法检测[１～3],并在统计学基础上对损伤程度做出评估[4］。
本实验对Ｓｉnｇh等[５]建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。
用超净工作台上的紫外消毒灯［可发射波长为254 nm的紫外线(Ulｔraviｏlet,UV），属于UＶC波段范围]作为DＮA损伤的诱导因子[7～9]，诱导K562细胞ＤNA损伤，用改良彗星实验检测损伤程度,验证改良的实验系统是否可靠,同时筛选并评价ＤNＡ损伤的分析指标。
１材料与方法1.1 细胞K５６2细胞，来源于第四军医大学免疫学教研室，37 ℃、5% ＣＯ2培养箱中培养，取对数期细胞进行实验。
1.2 紫外线照射装置紫外消毒灯(ZSＺ-20型,２0 W，天津市紫晶特种光源有限公司）。
1．３主要试剂和仪器培养基：10％新生牛血清(杭州四季青公司）,９0% RPMI-1640培养液(Hyclonｅ公司）;双抗(青、链霉素，1０0 ＵＩ/mｌ);Trito ｎＸ-10０(Ｇenｖiew分装)；二甲基亚砜、肌苷酸钠（Sigma分装)；低熔点琼脂糖(FMＣ分装)；常熔点琼脂糖（Spaｎish分装)。
其余生化试剂均为分析纯。
电泳仪：由西北大学物理系提供;电泳槽:DYＣ33A型(北京市六一仪器厂)；显微镜:Ｌeｉｃａ DM LB 2 (Ｌeｉｃａ公司)；彗星图象分析软件:CAＳP软件(cａsp-1．2.２,下载);CＯ２培养箱：BB16HＦ型(上海力申科学仪器有限公司);环地牌紫外辐照计（北京师范大学光电仪器厂）。
1.４实验分组及UV处理收集对数生长的K5６2细胞，台盼蓝染色计数，细胞活力大于９5％，用Han ｋ's(ｐH7.４)调整细胞密度至1×１05/mｌ,接种于塑料培养皿中（ф=３5 mm,2 mｌ/plate)，然后进行紫外线照射（0.3 mW/cｍ２)。
彗星试验方法
主要仪器数显电热恒温水浴箱、电泳仪、电子分析天平、荧光显微镜及数码成像系统、匀浆器、磁力搅拌器。
主要试剂氯化镉（CdCl2·2.5H2O），分析纯，上海亭新化工试剂厂，批号20080901。
使用时用去离子水配制成不同浓度。
正常熔点琼脂糖（NMA），低熔点琼脂糖（LMA），N-十二烷基肌氨酸钠，Triton-X-100，溴化乙锭（EB）。
氯化钠，氯化钾，磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O），磷酸二氢钾（KH2PO4），乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA），三（羟甲基）胺基甲烷（Tris），氢氧化钠（NaOH），二甲基亚砜（DMSO），盐酸（HCl）等，均为国产分析纯试剂。
主要溶液的配制磷酸缓冲液（PBS）NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4.12H2O 2.9g，KH2PO4 0.2g，无Ca2+、Mg2+双蒸水1000ml，调pH至7.4，冰箱4℃保存备用。
0.5%正常熔点琼脂糖（NMA）0.5g NMA与100ml磷酸缓冲液混合，加热溶解，冷却后冰箱4℃保存备用。
0.5%低熔点琼脂糖（LMA）0.5g LMA与100ml磷酸缓冲液混合，加热溶解，冷却后冰箱4 ℃保存备用。
细胞裂解液精确称取NaCl 146.1g，Na2EDTA 37.2 g ，N-十二烷基肌氨酸钠10 g，Tris 1.22 g，放入1000 ml烧杯中，加800ml双蒸水，磁力搅拌溶解（可加热），以4 mol/L NaOH调pH到10.0，在容量瓶中加水定容到1000 ml。
冰箱4℃保存备用。
临用前根据用量按总体积加1% Triton-X-100，10% DMSO混匀。
碱性电泳缓冲液Na2EDTA 0.186g，NaOH 6g，加500ml双蒸水定容，pH13，现配现用。
Tris-HCl中和液称取Tris 48.44g，加600ml双蒸水溶解，用浓盐酸（约13.5ml）调pH值至7.5，加水定容到1000ml，4℃保存备用。
彗星实验要点
彗星实验要点1、凋亡细胞的观察：看过国外此法作出的凋亡细胞彗星图像，很漂亮，用CASP软件分析后，其曲线呈典型的双峰，而正常细胞为单峰。
我的一些教训：观察凋亡细胞最好把电压、电流、和电泳时间均调低，否则，凋亡细胞中的DNA片断跑的太块，荧光下根本看不到凋亡细胞的尾巴。
注：我用的是中性条件，20V，200mA,20min, 凋亡细胞观察宜选用10V,100mA,10min。
朋友们如果有异议，请不吝赐教，也对我有所帮助。
2、解旋20分钟应该没问题，但是我认为您的电泳时间过长，当然我不知道您的电泳条件（电压、电流、），我认为20分钟足够了，时间长了一是浪费时间，二是彗星图像不好，不利于分析。
您的裂解时间有点短了，文献报道，最好不要少于1.5小时3、一般100ul0.5％低熔点胶中含400个细胞就足够了4、本版【图片仓库】子版有我做的彗星图像，感兴趣可以看看/bbs/post/view?bid=66&id=2729243&sty= 1&tpg=1&age=05、注意，CASP只读.tif扩展名的图像，如果你的相机拍摄的图像可以有.tif格式，就更好了，如果是.jpg格式，那还要在计算机中转换一下，不过很简单6、首先，荧光染色的东西最好马上看，否则影响结果。
其次，您的染色液量我觉得多了点，我用2ug/ml，1ml注射器1滴就可以。
第三，要忠于实验结果，图象内容不能更改，可以用ACDSEE或PHOTOSHOP转换图象格式或大小，所以，作出来的实验图象质量要好7、。
背景的选择问题，如果图片质量好的话，背景大小不同，对结果影响不是很大，如果图片背景乱七八糟，那背景框的选择肯定对结果产生很大影响。
我的建议：背景框不要太大，参考我贴的那个图。
注意，背景框可以在细胞的上面或下面，如果背景框在上面时，分析后的图像（分析后出现一个头、尾分明的图像，是基本重合在细胞上的）质量很差，很不规则，那再把背景框调到下面试试，如果还是不好，那只能说你的结果质量不好了。
(完整word版)彗星试验步骤
彗星试验步骤1.5.4 彗星试验（单细胞凝胶电泳试验）：参照文献[i]，略加改动，进行碱性单细胞凝胶电泳，具体如下。
1.5.4.1 制片将0.6%的NMPA（用PBS配制）于微波炉中加热融化后，浸泡磨砂玻片，用吸水纸将玻片滑面及四周吸干，自然晾干备用。
1.5.4.2 铺胶取1.5.3中所备细胞悬液10μl，向其中加入70μl 37℃0.7%LMPA（用PBS配制），混匀后迅速滴于37℃预热的玻片上，立即盖上盖玻片，4℃固化10min。
1.5.4.3 裂解轻轻取下盖玻片，将玻片浸于新鲜配制并预冷的细胞裂解液中，4℃避光裂解1h。
1.5.4.4 解旋从裂解液中取出载玻片，用PBS浸泡玻片3×3min。
用纸巾吸去玻片上残留的液体，置于水平电泳槽中，加新鲜配制的碱性电泳缓冲液至高于玻片表面3mm 以上，避光解旋30min。
1.5.4.5 电泳电压25V，调整液面高度使电流达到300mA，电泳25min。
1.5.4.6 漂洗及染色电泳完毕，取出玻片，用PBS浸泡2×15min，以中和强碱。
用纸巾吸去玻片上残留的液体，然后滴加20μg/ml的EB20μl，盖上盖玻片，立即置荧光显微镜下观察。
以上步骤尽量在黄光下或暗处进行，避免其他原因所致的DNA损伤。
每一剂量水平制片2张。
1.5.4.7 结果观察荧光显微镜下200倍观察，激发波长515~560nm，发射波长590nm。
每一剂量水平随机观察100个细胞，记录拖尾细胞数。
计算拖尾细胞率（以下简称拖尾率），拖尾率＝(拖尾细胞数/100)×100%。
每一剂量水平用目镜测微尺测量30个拖尾细胞的全长和头长，拖尾细胞尾长（以下简称尾长，tail length，TL）＝全长－头长，计算各剂量组的平均尾长。
表1.1 MMS、MMC和NaN3的WTK1细胞彗星试验结果Table 1.1 Comet assay of MMS, MMC and NaN3 with WTK1 cell lineChemicalConc.(μg/ml)0h 20hRG a (%)Cometcell (%)TL(x±s, μm)RG a(%)Cometcell (%)TL(x±s, μm)MMS 0 100.0 6.0 3.50±1.69 100.0 3.0 3.67±3.130.625 97.2 10.0 10.38±2.92** 98.8 8.0 6.50±3.05**1.25 100.4 18.0* 24.25±4.88** 97.7 11.0 8.90±3.52**2.5 96.4 33.0** 32.08±7.40** 88.3 15.0** 18.62±4.04**5 94.8 60.0** 52.33±5.68** 86.8 44.0** 46.00±5.36** K2Cr2O7147 92.4 100.0** 78.70±4.39** －－－MMC 0 100.0 6.0 2.57±1.76 100.0 5.0 1.75±1.760.0625 100.4 6.0 3.70±1.86 96.2 9.0 3.62±1.920.125 108.1 10.0 4.04±1.52 54.6 19.0** 5.50±1.81**0.25 104.5 11.0 3.92±1.42 52.7 50.0** 22.87±3.95**0.5 87.8 17.0* 4.93±3.63 48.8 64.0** 50.17±5.80** K2Cr2O7147 105.4 100.0** 68.19±5.15** －－－NaN30 100.0 8.0 3.12±1.69 100.0 9.0 2.15±1.67 250 90.0 7.0 3.03±1.48 99.0 6.0 2.85±1.58500 102.5 8.0 3.35±1.16 97.7 9.0 3.10±1.831000 89.4 14.0 4.09±1.57 88.3 11.0 3.16±1.292000 92.2 56.0** 14.93±4.54** 86.8 52.0** 11.25±1.38** K2Cr2O7147 92.5 100.0** 72.33±6.12** －－－a Relative growth compared with corresponding solvent control*P<0.05 **P<0.01, compared with corresponding solvent control。
PH9143 DNA损伤试剂盒彗星电泳法实验方法
PH9143|DNA损伤试剂盒（彗星电泳法）DNA Damage Assay kitCatalog No：PH9143Size：☐20T Store at4℃简介DNA在自由基（如·OH）的攻击下容易发生损伤，即脱氧戊糖遭到破环，磷酸二脂键的断裂，碱基的破环或脱落，便可进一步产生单链断裂或双链断裂。
将细胞固定于低熔点琼脂糖中，取少量细胞涂在载玻片上，用碱高盐溶液破坏细胞膜，再用碱溶液使DNA分子解旋。
将载玻片置于电泳液中，在电场的作用下，DNA分子向阳极移动。
如果DNA损伤严重，碎片多，则电泳速度快。
未受损伤的DNA大分子则由于细胞膜的阻隔，滞留在原处。
用PI染色或银染，可观察到DNA受损的细胞形同彗星现象，作定性分析。
也可用相关的软件作定量分析。
组分Components20Assay StorageLysis Bufffer100mL4℃DMSO8mL4℃正常熔点琼脂糖NMA30mg4℃低熔点琼脂糖LMA30mg4℃Propidium Iodide（PL）400ul4℃避光自备试剂和仪器低速离心机、水平电泳仪、荧光显微镜、37℃和45℃恒温水浴箱、载玻片、盖玻片、平皿、微量移液器、1.5ml Microube、0.4mmol/LTris-HCl（pH7.5）缓冲液、PBS使用参考1、细胞用冰冷的PBS洗一次，离心收集，用PBS重悬使其密度为1x106个/mL；2、铺胶：下述各浓度琼脂糖凝胶均用PBS配制：第1层凝胶的制备：将载玻片的磨砂面向上，45℃预热，将预热45℃的100μL的0.5%正常熔点琼脂糖（NMA）铺于载玻片上，盖上干净的盖玻片，再置4℃下10min使NMA凝固。
第2层凝胶的制备：将10μL细胞（约104个）和75μL的0.7%低溶点琼脂糖LMA（在37℃下水浴加热至少20min使之完全溶化）混合均匀。
然后，轻轻揭去盖玻片，迅速将含细胞的LMA滴到第1层琼脂糖上，立即盖上另一干净盖玻片，置4℃10min使第2层LMA凝固。
彗星实验要点
彗星实验要点彗星是太阳系中的天体，由冰和尘埃组成。
研究彗星有助于我们了解宇宙的起源和演化过程。
在进行彗星实验时，需要注意以下要点：一、实验目的：实验的目的是观察和研究彗星的结构、成分以及行为规律，为研究宇宙的起源和演化提供数据和依据。
二、实验材料：1. 彗星模型：用于模拟真实彗星的结构和成分。
可采用球形模型，表面覆盖冰块和尘埃颗粒。
2. 光源：提供照明，以便观察彗星的亮度和行为。
3. 显微镜：用于放大观察彗星的细节和变化。
4. 光谱仪：用于分析彗星发出的光谱，确定其成分。
三、实验步骤：1. 准备工作：清洁实验器材，确保实验环境无尘、没有杂质。
2. 彗星模型的制作：按照彗星的特征，制作一个模拟彗星的球形模型，并在表面覆盖一层冰块和尘埃颗粒。
3. 光源照明：将光源照射在彗星模型上，观察彗星的亮度变化。
4. 显微镜观察：使用显微镜放大观察彗星模型的细节，并记录下变化和特征。
5. 光谱分析：使用光谱仪对彗星发出的光谱进行分析，确定彗星的成分。
四、实验注意事项：1. 安全第一：在实验进行过程中，要遵循实验室安全规范，避免任何可能的危险。
2. 实验环境：保持实验环境的稳定和整洁，避免影响实验结果。
3. 观察细节：在观察彗星模型时，要仔细观察和记录下彗星的细节变化，包括亮度、颜色、飘尾等。
4. 精确测量：在进行光谱分析时，要确保测量的准确性和精度，注意仪器的校准。
5. 结果分析：基于实验所观察到的数据和现象，进行合理的分析和推理，得出结论。
五、实验结果与讨论：1. 根据光谱分析的结果，确定彗星中的成分，如水、氨、甲烷等。
2. 分析彗星模型的亮度变化和飘尾现象，研究彗星的活动规律和运动轨迹。
3. 结合已有的彗星观测数据和理论模型，对实验结果进行讨论和比较。
六、实验结论：实验结果表明，彗星是由冰和尘埃组成的天体，其活动和运动受到多种因素的影响。
彗星实验为研究宇宙的起源和演化提供了重要的数据和依据。
七、实验的意义与展望：通过彗星实验，我们可以更好地了解彗星的结构、成分和活动规律，进一步探索宇宙的奥秘。
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彗星试验步骤
1.5.4 彗星试验（单细胞凝胶电泳试验）：参照文献[i]，略加改动，进行碱性单细胞凝胶电泳，具体如下。
1.5.4.1 制片
将0.6%的NMPA（用PBS配制）于微波炉中加热融化后，浸泡磨砂玻片，用吸水纸将玻片滑面及四周吸干，自然晾干备用。
1.5.4.2 铺胶
取1.5.3中所备细胞悬液10μl，向其中加入70μl 37℃0.7%LMPA（用PBS配制），混匀后迅速滴于37℃预热的玻片上，立即盖上盖玻片，4℃固化10min。
1.5.4.3 裂解
轻轻取下盖玻片，将玻片浸于新鲜配制并预冷的细胞裂解液中，4℃避光裂解1h。
1.5.4.4 解旋
从裂解液中取出载玻片，用PBS浸泡玻片3×3min。
用纸巾吸去玻片上残留的液体，置于水平电泳槽中，加新鲜配制的碱性电泳缓冲液至高于玻片表面3mm 以上，避光解旋30min。
1.5.4.5 电泳
电压25V，调整液面高度使电流达到300mA，电泳25min。
1.5.4.6 漂洗及染色
电泳完毕，取出玻片，用PBS浸泡2×15min，以中和强碱。
用纸巾吸去玻片上残留的液体，然后滴加20μg/ml的EB20μl，盖上盖玻片，立即置荧光显微镜下观察。
以上步骤尽量在黄光下或暗处进行，避免其他原因所致的DNA损伤。
每一剂量水平制片2张。
1.5.4.7 结果观察
荧光显微镜下200倍观察，激发波长515~560nm，发射波长590nm。
每一剂量水平随机观察100个细胞，记录拖尾细胞数。
计算拖尾细胞率（以下简称拖尾率），拖尾率＝(拖尾细胞数/100)×100%。
每一剂量水平用目镜测微尺测量30个拖尾细胞的全长和头长，拖尾细胞尾长（以下简称尾长，tail length，TL）＝全
长－头长，计算各剂量组的平均尾长。
表1.1 MMS、MMC和NaN3的WTK1细胞彗星试验结果Table 1.1 Comet assay of MMS, MMC and NaN3 with WTK1 cell line
Chemical
Conc.
(μg/ml)
0h 20h
RG a (%)
Comet
cell (%)
TL
(x±s, μm)
RG a
(%)
Comet
cell (%)
TL
(x±s, μm)
MMS 0 100.0 6.0 3.50±1.69 100.0 3.0 3.67±3.13
0.625 97.2 10.0 10.38±2.92** 98.8 8.0 6.50±3.05**
1.25 100.4 18.0* 24.25±4.88** 97.7 11.0 8.90±3.52**
2.5 96.4 3
3.0** 32.08±7.40** 88.3 15.0** 18.62±
4.04**
5 94.8 60.0** 52.33±5.68** 86.8 44.0** 46.00±5.36** K2Cr2O7147 92.4 100.0** 78.70±4.39** －－－MMC 0 100.0 6.0 2.57±1.7
6 100.0 5.0 1.75±1.76
0.0625 100.4 6.0 3.70±1.86 96.2 9.0 3.62±1.92
0.125 108.1 10.0 4.04±1.52 54.6 19.0** 5.50±1.81**
0.25 104.5 11.0 3.92±1.42 52.7 50.0** 22.87±3.95**
0.5 87.8 17.0* 4.93±3.63 48.8 64.0** 50.17±5.80** K2Cr2O7147 105.4 100.0** 68.19±5.15** －－－NaN30 100.0 8.0 3.12±1.69 100.0 9.0 2.15±1.67 250 90.0 7.0 3.03±1.48 99.0 6.0 2.85±1.58
500 102.5 8.0 3.35±1.16 97.7 9.0 3.10±1.83
1000 89.4 14.0 4.09±1.57 88.3 11.0 3.16±1.29
2000 92.2 56.0** 14.93±4.54** 86.8 52.0** 11.25±1.38** K2Cr2O7147 92.5 100.0** 72.33±6.12** －－－
a Relative growth compared with corresponding solvent control
*P<0.05 **P<0.01, compared with corresponding solvent control。