HPLC法测定水杨酸钠注射液中水杨酸钠的含量
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水杨酸钠(sodium salicylate)又名邻羟基苯甲酸钠,为 白色或微显淡红色的细微鳞片,或白色粉末及球状颗粒, 用于风湿症等。水杨酸钠注射液由水杨酸钠加适宜的抗 氧剂和金属络合物制成的灭菌水溶液。静脉注射用于马、 牛、羊、猪、犬的风湿症,是 1 种解热镇痛药。目前,查阅到 水杨酸钠相关分析研究内容均不涉及高效液相色谱法[1-6], 仅查阅到水杨酸钠注射液的国内标准。其含量测定采用 双相滴定法。该法操作烦琐,且乙醚存在刺激性大、沸点 低、易燃等不安全性。为了避免使用乙醚对人体产生的刺 激麻醉作用及其危险性,同时提高专属性,本试验拟采用 高效液相色谱法对水杨酸钠含量进行测定,为水杨酸钠含 量的测定提供可行的方法。
(Hubei Province Institute of Veterinary Drug, Hubei Wuhan 430070)
Abstract: The experiment established a high performance liquid chromatography method to determine the content of sodium salicylate in sodium salicylate injection. An octadecylsilane-bonded silica gel column was used with wateracetonitrile-glacial acetic acid (197∶100∶3) as the mobile phase, a flow rate of 1.0 mL/min, a column temperature of 30 ℃, and a detection wavelength of 230 nm. The results show that sodium salicylate has a good linearity in the range of 25~500 mg/L, the correlation coefficient is R=0.999 7, the average recovery rate is 99.8% (n=9), and the RSD is 0.3%. The method is simple, accurate and reproducible, and can be used for the quality control of sodium salicylate injection. Key words: Sodium salicylate injection; Determination; HPLC
3
20170901
103.8
103.1
3 讨论 3.1 提取方法的考察
水杨酸钠在水中易溶,在乙醇中溶解。分别采用水和 流动相溶解稀释,均可较好溶解,但水溶解后相同条件采集 的色谱图中溶剂产生的色谱峰较大,故选择流动相溶解。 3.2 流动相的选择
查阅相关文献,先后考察多种流动相[7-12]。反相色谱 系统的流动相常用甲醇-水系统和乙腈-水系统,用紫外末 端波长检测时宜选用已经乙腈-水系统,减少盐溶液对色 谱系统的污染,提高色谱系统的稳定性,最终选用氟苯尼 考及其制剂的含量测定方法的流动相。选择此色谱条件 实现 1 种方法两种应用,能够节约成本、提高效率,从某种
100 mL 量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对
照品溶液。
供 试 品 溶 液 :精 密 量 取 水 杨 酸 钠 注 射 液 5 mL,置
100 mL 量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量
取上述供试品溶液 5 mL,置 100 mL 量瓶中,加流动相溶解
并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。 2 结果与分析 2.1 线性与范围(见图 1)
文章编号 :1672-9692(2021)06-0010-03
The determination of sodium salicylate in sodium salicylate injection by HPLC
Chen Xiangdan, Wang Jun*, Gong Bo, Dong Shuxiang
(a)阴性供试品溶液
程度上还能控制非法添加物。 3.3 检测波长的选择
水 杨 酸 钠 的 光 谱 图 最 大 吸 收 波 长 为 230 nm 和 296 nm。在本试验色谱条件下,在 296 nm 处水杨酸钠、氟 苯尼考及甲砜霉素的混合对照品中的氟苯尼考及甲砜霉 素基本不出峰,而在此色谱条件下 230 nm 处水杨酸钠、氟 苯尼考及甲砜霉素 3 个成分均能分离良好,根据吸收大,干 扰小的原则最终选择 230 nm。 4 结论
表 2 样品含量测定结果
Tab.2 Results of contents determination of samples (labelled amount/%, n=3)
样品编号
批号
HPLC 方法测得 含量/%
原方法测得 含量/%
1
170401
98.6
97.8
2
20170101
101.9
100.6
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HPLC 法测定水杨酸钠注射液中水杨酸钠的含量
2021 年 第 6 期
HPLC 法测定水杨酸钠注射液中水杨酸钠的含量
陈向丹,王 峻*,龚 波,董书香 (湖北省兽药监察所,湖北 武汉 430070)
摘 要 :试验建立高效液相色谱法测定水杨酸钠注射液中水杨酸钠含量的方法。采用十八烷基硅烷键合硅胶
色谱柱,水-乙腈-冰乙酸 (197∶100∶3) 为流动相、流速 1.0 mL/min、柱温 30 ℃,检测波长 230 nm。结果表
最终色谱条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱, 以水-乙腈-冰乙酸(197∶100∶3)为流动相、流速1.0 mL/min、 检测波长 230 nm、柱温 30 ℃、进样量 10 µL。 1.3.2 溶液的制备
2021 年 第 6 期
现代畜牧兽医
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对 照 品 溶 液 :精 密 称 取 水 杨 酸 钠 对 照 品 25 mg,置 钠在 25~500 mg/L 范围内线性良好。
分别取不同厂家不同批号的样品,采用色谱条件进行 测定,按外标法以峰面积计算水杨酸钠的含量,同时按原
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Modern Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine
2021 年 第 6 期
含量测定方法测定含量。由表 2 可知,原方法与修订后的 方法结果基本一致,高效液相色谱法可作为水杨酸钠注射 液中主药的含量测定的参考方法。
续重复进样 6 次,测得水杨酸钠峰面积平均值为 5 953.1, RSD 为 0.1%,结果表明仪器精密度良好。 2.4 专属性(见图 2)
在色谱条件下,分别取样品空白制剂溶液、水杨酸钠 对照品溶液以及供试品溶液注入液相色谱仪。
由图 2 可知,色谱图中水杨酸钠峰与各杂质峰分离效 果好,含量测定不受其他杂质峰的干扰。 2.5 溶液的稳定性
高效液相色谱法具有经济、快捷、所用试剂毒性小、环 境友好等优点。该法操作简单、专属性强、准确度及重现 性均较好,可作为水杨酸钠注射液的含量测定的 1 种补充 方法,可为水杨酸钠注射液含量的测定提供参考。
(b)水杨酸钠对照品溶液
(c)供试品溶液
图 2 高效液相色谱图
Fig.2 The high performance liquid chromatogram
图 1 水杨酸钠标准曲线图
Fig.1 Standard curve of sodium salicylate
2.2 准确度(见表 1) 精密量取水杨酸钠注射液制剂空白 5 mL,置 100 mL
量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取上述 供试品空白溶液 5 mL,置 100 mL 量瓶中。水杨酸钠对照 品按照各主成分 80%、100%、120% 3 个水平各 3 份分别进 行添加制备供试样,按外标法以峰面积计算。由表 1 可知, 水杨酸钠平均回收率为 99.76%,RSD 为 0.3%,表明该法符
取 同 一 样 品 溶 液(批 号 20170901)(含 水 杨 酸 钠 250 mg/L),按色谱条件,在不同时间(0、2、4、6、8、10、12、 24 h)分别进样 10 µL,记录色谱峰面积,考察样品的稳定 性,测得水杨酸钠峰面积平均值为 5 952.9,RSD 为 0.1%, 结果表明,样品溶液在室温下 24 h 内性质稳定。
22.481x+134.9,R=0.999 7。可见,在此色谱条件下水杨酸 合试验分析要求、准确度高。
测定水平 80% 100% 120%
添加量/mg 20.50 20.49 20.67 25.45 25.41 25.63 30.66 30.73 30.11
表 1 回收率试验结果
Tab.1 Results of recovery tests (n=9)
精密称取水杨酸钠对照品 100 mg,置 100 mL 量瓶中, 加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液(约 1 g/L)。 分别精密量取贮备液适量,用流动相分别稀释至浓度为 25、50、100、250、500 mg/L 的溶液,各取 10 μL 进样,记录 色谱峰面积,以浓度(mg/L)为横坐标,峰面积(mAU·s)为 纵 坐 标 ,绘 制 标 准 曲 线 。 由 图 1 可 知 ,回 归 方 程 :y=
收稿日期 :2021-03-31 作者简介 :陈向丹,本科,兽医师,研究方向为兽药产品检验检 测及相关标准。 通讯作者 :王峻,硕士,正高级兽医师,研究方向为畜禽产品及 其投入品质量安全。
1 材料与方法 1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪-紫外检测器(Agilent1260 Infinity Ⅱ, OpenLAB CDS ChemiStation Edition(C.01.09[144])色谱工 作站软件)、分析天平(梅特勒 AE 240)、乙腈为色谱纯、冰 乙酸为优级纯、水(超纯水)。 1.2 药品
2.6 耐用性 在 本 研 究 的 色 谱 条 件 下 ,分 别 考 察 了 Waters
SymmetryShieldRP18(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,4 μm)以 及 Waters Xbridge C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)3 种色谱柱。结果 表明,3 种色谱柱均可使水杨酸钠分离度及理论塔板数良 好,在本研究流动相下选择温度为 25 ℃和 35 ℃时,除出 峰时间发生变化外,其余变化很小;将流动相流速调整为 0.9 mL/min 和 1.1 mL/min 进行测试。结果表明,流动相流 速的微调也仅能影响出峰时间,对峰形和理论塔板数影 响甚小。综上所述,不同品牌的色谱柱、不同流动相流速 以及不同温度,均能满足试验需要,方法耐用性较好。 2.7 样品测定(见表 2)
水杨酸钠对照品(含量:99.0%,批号:Z05A6Y2161,北 京盛世康普化工技术研究院);空白制剂:四川某已获兽药 GMP 认证企业提供;供试品:水杨酸钠注射液(四川 3 个已 获兽药 GMP 认证企业生产,含量规格均为 10%,批号分别 为:170401、20170101、20170901)。 1.3 试验方法 1.3.1 色谱条件
明,水杨酸钠在 25~500 mg/L 范围内线性良好,相关系数 R=0.999 7,平均回收率为 99.8% (n=9),RSD 为 0.3%。
该方法简便、准确、重复性好,可用于水杨酸钠注射液的质量控制。
关键词 :水杨酸钠注射液 ;含量测定 ;高效液相色谱法
中图分类号 :S 816.17
文献标识码 :A
测得量/mg
回收率/%
20.45
99.78
20.46
99.86
20.50
99.21
25.40
99.80
25.26
99.41
25.64
100.03
30.71
100.17
30.69
99.87
29.99
99.60
平均回收率/% 99.76
RSD/% 0.3
2.3 精密度 精密吸取对照品溶液(水杨酸钠 250 mg/L)10 µL,连