中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白量子点荧光定量检测试剂标准化操作流程

1 项目简介
NGAL 是一种在肾小管受到损伤时分泌到血液和尿液中的蛋白质，是肾脏结构损伤的标志物。

一般在肾脏损伤发生两个小时之后即可明显升高，用于急性（AKI）和慢性肾损伤（CKD）的早期诊断、严重程度判断以及预后评估。

2 项目临床应用
2.1 心脏手术、脓毒症、大手术、造影剂、肾毒性药物导致的AKI 的早期诊断和危险分层。

2.2 急诊、外伤、ICU 患者肾功能的常规检测
2.3 器官移植术后肾功能恢复的评估
2.4 肾脏替代治疗的上机和撤机评估指标
2.5 糖尿病、高血压、心力衰竭、红斑狼疮患者肾损伤的早期诊断和预后评估
3 目的
保证中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测卡结果准确可靠。

4 检测原理
本产品采用双抗体夹心法，以固相免疫层析形式进行测定。

经稀释（由于NGAL 在人体内含量较高，检测中加入样本稀释液使检测结果更准确）的待检样本（全血/血清/血浆/尿液）在加样端由毛细作用力向上扩散，经过标记物垫时样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白与抗体1（鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体量子点结合物）结合为量子点标记抗体-抗原的复合物；复合物随样本继续扩散到硝酸纤维素膜上，被抗体2（鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体）的T 线（检测线）拦截，捕获复合物，形成量子点标记抗体-抗原-包被抗体的免疫复合物。

未被拦截的量子点结合物继续上行，被C 线（质控线）包被的重组人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（鼠卵巢细胞）结合，指示反应完成。

通过激发量子点而产生荧光检测信号，使用适用仪器获得定量检测结果。

样本中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量与荧光检测信号的强度在一定范围内成线性关系。

5 样本收集和储存
5.1 全血、血浆、血清、尿液样本均可用于测试。

5.2 建议使用分离胶血清（黄色帽））.
将采集血样加入并摇匀备用。

样本采集后应尽快使用，若采血后不能在 2 个小时内检测的，应放在4℃保存，不得超过2 天。

5.3 血浆的收集：取血后应尽快以3000rpm 的离心速度离心10 分钟后分离血浆，以免溶血。

分离后的血浆应尽快进行测试，血浆样本于4℃可保存7 天。

5.4 血清的收集：取血后应尽快以3000rpm 的离心速度离心10 分钟后分离血清，以免溶血。

分离后的血清应尽快进行测试，血清样本于4℃可保存7 天。

5.5 检测前样本必须充分恢复至室温。

冷冻保存的样本需完全融化、复温、混合均匀后方可使用，切忌反复冻融。

5.6 严重溶血、脂血或浑浊样本不能使用。

6 主要组成部分
6.1 名称：检测卡; 样本稀释液
6.2 组成部分：铝箔袋、干燥剂、试纸条及塑料卡。

其中试纸条由吸水纸、硝酸纤维素膜、样品垫、量子点标记物垫、聚氯乙烯板组成。

硝酸纤维素膜T 线（检测线）包被有1mg/mL 的鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，C 线（质控线）包被有0.5mg/mL 的重组人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（鼠卵巢细胞），标记物垫上含有鼠抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体量子点结合物（效价1:40）。

1 人份/袋。

含酪蛋白的50 mM pH8.0 三羟甲基氨基甲烷缓冲液
7 仪器
适用于南京诺唯赞医疗科技有限公司生产的干式荧光免疫分析仪QD-S300；广州蓝勃生物科技有限公司生产的干式荧光免疫分析仪AFS-1000、干式荧光免疫分析仪AFS2000A、干式荧光免疫分析仪AFS3000B。

8 操作步骤
8.1 使用前将试纸条充分恢复至室温，测试应在室温下进行。

8.2 从铝箔包装袋中取出检测卡，将其置于一水平、干燥的平面上。

8.3 用样本稀释液将待测样本稀释10 倍，充分混匀。

8.4 在检测卡的样品孔上加入80μL 稀释后的待测样本，依照选定的测定模式上机测定。

8.5 检测仪器的具体操作参考配套干式荧光免疫分析仪操作说明书。

9 结果判定
取本地区内健康人血清、血浆、尿液样本各200 例进行测定，通过正态分布法确定95%置信区间，测得该试剂盒的正常参考区间为：尿液中≤100 ng/mL，全血、血清和血浆中≤200 ng/mL。

建议各实验室和单位建立自己的参考区间。

10 性能指标
10.1 最低检测限度：应不高于50 ng/mL。

10.2 重复性：分析内变异系数（CV）不大于12.0%。

10.3 准确度：检测质控品，相对偏差（R）不大于15.0%。

10.4 线性范围：试剂的线性范围为[50，1600] ng/mL，在此线性范围内：a）线性相关系数r≥0.9900；b）在[50，160] ng/mL 范围内，绝对偏差不超过±24 ng/mL；(160,1600] ng/mL 区间内，相对偏差不超过±15.0%。

10.5 批间差：应不大于15.0%。

11 影响因素
11.1 本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。

11.2 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子可能会干扰检测结果，须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。

11.3 常见的干扰物质及抗干扰能力分别为：血清和血浆中：血红蛋白≤5 g/L，甘油三酯≤10 g/L，胆红素≤0.2 g/L，类风湿因子≤500IU/mL；尿液干扰：尿素≤40 g/L，葡萄糖≤10 g/L。

4.当全血、血清和血浆样本中浓度高于5000ng/mL 时，尿液样本中浓度高于5000ng/mL，产生HOOK 效应时，会导致检测结果偏低。

12 安全防范
12.1 需经专业培训的检验人员，操作前请仔细阅读使用说明书，并严格按照试剂盒说明书进行操作。

12.2 处理试剂和样本时需戴一次性手套穿工作服，操作后应彻底洗手。

12.3 应保持清洁，污染按废物处理。

废物处理按照WS/T249-2005《临床实验室废物处理原则》中化学废物安全处理及感染性废物安全处理规定执行，请谨慎处理。

12.4 用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理。

12.5 遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品丢弃在标有生物污染
的垃圾筒中。

12.6 工作后的台面应消毒擦洗。

12.7 本产品仅用体外诊断。

13 参数
100 ng/mL 建议采血管：分离胶血清（黄色帽）
高于参考值提示存在肾脏结构损伤
14 注意事项
14.1 仪器使用注意事项
14.2 除厂方提供的检测卡外，不要将其它物品放入试卡承载器中；
14.3 不要将液体溅到检测仪上，这可能会导致系统失效；
14.4 切勿将检测仪从高处跌落或其他碰撞；
14.5 不要使检测仪处于机械颤动的环境中；
14.6 没有诺唯赞公司或其销售代表的书面授权，请勿拆卸检测仪；
14.7 不要在检测仪上放置重物。

这将导致检测仪性以下降或机械损坏；
14.8 只能使用检测仪专用的电源适配器；
14.9 测试结果作为预筛选参考，测试结果应由专业医疗人员进解释；
14.10 应由专业人士操作使用。

15 检测卡使用注意事项
15.1 本品为一次性使用体外诊断试剂，请勿重复使用，过期产品请勿使用；
15.2 在收集、处置、储存、混匀样本和检测过程中应采取适当的保护措施；
15.3 产品在使用前请不要开封，不要使用有明显损坏的试剂盒、包装有破损的检测卡；
15.4 不同批号的试剂不能混用，ID 芯片与检测卡不得混批号使用；
15.5 检测卡及其组件仅适用于诺唯赞检测仪；
15.6 切勿把表面被其它液体沾湿的检测卡插入检测仪，否则会污染或损坏仪器。

用过的检测卡请妥善处理，不要随意丢弃。

15.7 应避免实验环境温度过高，低温保存的检测卡需要恢复到室温后再打开，以免吸潮。

15.8 建议使用新鲜样本，若样本中有显溶血或血凝块则会干扰测试和导致错误结果，切勿使用。

15.9 铝箔袋内有干燥剂，不得内服。

15.10 与所有诊断试剂一样，最终的确认应由医生综合各检测指标及临床症状后作出。

15.11 使用本试剂过程中如有问题或建议，请与厂家联系。

16 推荐科室
肾内科、急诊、ICU、外科病房、介入科
17 试剂储存
17.1 试剂盒于4~30℃，密封状态下避光存放，有效期为18 个月；
17.2 试纸条开封后（温度4~30℃，湿度<65%），有效期为1 小时。