酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg
乙肝两对半检测采用时间分辨法与酶联免疫法的效果对比
乙肝两对半检测采用时间分辨法与酶联免疫法的效果对比摘要：目的：对比分析时间分辨法与酶联免疫法的乙肝病毒血清学检验效果。
方法：利用随机抽样的方法，选取我院2014年6月至2016年6月期间收治的乙肝患者60例当作研究对象，对患者的临床资料进行回顾性分析。
分别采用时间分辨法与酶联免疫法对乙肝病毒血清学标志物进行检测，并评价不同方法对乙肝病毒的检测效果。
结果：时间分辨法的诊断符合率为98.33%，酶联免疫法的诊断符合率为78.33%，时间分辨法的诊断符合率明显高于酶联免疫法，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：相比较于酶联免疫法，时间分辨法对乙肝病毒血清学标志物的检验效果更加准确，值得临床推广应用。
关键词：乙肝病毒；血清学检验；时间分辨法；酶联免疫法；效果对比乙肝是临床上较为常见的一种疾病，据相关调查统计显示，我国乙型肝炎患者已经增长到了3×107例，而乙肝病毒携带者已经增长到1×108例，从这一方面来看，乙肝仍严重威胁着我国人民的身心健康与生命安全[1]。
临床上，较为常用的乙肝病毒血清学检验方法主要有化学发光法、时间分辨法与酶联免疫法，不同的检测方法均有各自的适用范围与优缺点[2]。
本研究通过回顾性分析60例乙肝患者的临床资料，旨在对比分析时间分辨法与酶联免疫法的乙肝病毒血清学检验效果。
1.资料与方法1.1一般资料利用随机抽样的方法，选取我院2014年6月至2016年6月期间收治的乙肝患者60例当作研究对象，对患者的临床资料进行回顾性分析。
其中男性患者34例，女性患者26例；年龄在20岁至48岁之间，平均为（35.95±11.36）岁；体质量47~73千克，平均（63.32±5.62）千克。
本组60例患者在入选后，采取5毫升空腹静脉血，使用血清分离机分离血清之后，置于低温箱内冷藏、备检。
1.2仪器与试剂：①伯乐洗板机1575；②美国伯乐iMark 型酶标仪；③AD-1235时间分辨荧光分析仪（上海新波生物技术有限公司）；④时间分辨仪所使用的试剂主要是上海新波生物技术有限公司所生产的乙肝核心抗体、乙肝表面抗体、乙肝e抗体、乙肝表面抗原、乙肝e抗原的检测试剂盒，酶联免疫法使用丽珠生物工程股份有限公司所生产的试剂盒[3]。
时间分辨荧光免疫分析法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面
时间分瓣荧 光免 峻分新
与酶 联免唼吸附试验检测 乙型肝 炎瞒毒表面抗休的 比较
唐 玲 ］ｉ ［ ｌ ｌ 德阳 ６ １ ８ ０ ０ ０） （ 四川德 阳 市第 二人 民 医院检 验科
【 摘 要 】 探讨时间分辨荧光免疫分析（ Ｔ ＲＦ Ｉ Ａ ） 与酶联免疫吸附试验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 在乙型肝炎病毒表面抗体（ Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ） 的检
本 文 分 别运 用 Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法 和 传 统 的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ一 步 法 同时 对 ９ ２ 份血清标本进行检 测，探讨 Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法定量检测 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ的优 点 及 临床 价 值 。 １ 资 料 与 方 法 １ ． １标 本 来源 医 院 门诊 、住 院病 人 以及 体 检 人 员 检测 乙肝标志物 的血液标 本。 标本均 为空腹采取静 脉血， 无溶血、 黄疸等 ；３ ５ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ离心 ３ ｍ ｉ ｎ分离血清 。 １ ． ２标本 分组 收集常规 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ定性检测 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ ｓ ／ ｃ ｏ 值＞ ０ ． ６的样 本，按 ｓ ／ ｃ ｏ值 分为 ５组：Ｓ ／ ｃ ｏ值 ｏ ． ６ ～１ ． ｏ（ 第 １组 ） １ ６例 ， ｓ ／ ｃ ｏ值 １ ． １ ～６ ． ０ （ 第 ２组 ） ２ ０ 例， ｓ ／ ｃ ｏ值 ６ ． １ ～ １ ３ ． ０（ 第 ３组 ）２ ０例 ，Ｓ ／ Ｃ Ｏ值 １ ３ ． １ ～２ ０ ． ｏ（ 第 ４组 ）２ ０例 ， ｓ ／ ｃ ０值 ＞ ２ ０ ． ０（ 第 ５ 组 ）１ ６例 。 １ ． ３ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ一步法 双抗原 夹心法 。 ｉ ． ４ Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法 Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法用镧系金属离 子 （ 铕 Ｅ ｕ ）作为 示踪物标记 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ ，采 用双抗原夹心法 ：用 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ包被 反应 板， 加入样本后 ， 样本中的 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ与 包 被 板 上 的 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ结 合 ， 再 加 入铕 标 记 的 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ后 ，形 成 双 抗 原 夹 心 的 复 合 物 。加 入 增 强剂使 Ｅ ｕ离子从反应复合物 中解离下来 ，成 为游 离的 Ｅ ｕ
时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析
时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析时间分辨荧光免疫（简称TRF）分析法是用三价稀土离子作为示物，标记蛋白质，多肽，激素，抗体，核酸探针或生物活性细胞，待反应体系发生后，用时间分辨光分析仪测定最后产物中的荧光强度，以此来判断反应体系中被测物质的浓度，笔者结合患者血清学指标乙肝五项（聚合酸链反应）性，初步探讨TRF在检测乙型肝炎病毒中的临床价值，报道如下：1 实验资料1.1 材料和仪器 200份血清均为ELISA法确诊为HBV感染者，同时抽样检测乙肝五项定量（TRF）。
乙肝五项（ELISA）试剂由万泰生物药业股份公司提供。
TRF试剂由上海新波生物技术有限公司提供，时间分辨荧光分析仪也是上海新波生物技术有限公司提供。
1.2 原理和方法1.2.1 技术原理：TRF采用了双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法，其中抗原与已包被的抗体结合成抗体抗原复合物，洗涤后再加入銪标记抗体与已结合的抗原联接成抗一抗体—抗原—抗—抗体—Eu复合物。
增强液将标记在抗体上的Eu3+离子解离到溶液中，在溶液中Eu3+离子和增强液形成了高荧光强度的螯合物。
荧光强度和样品中的抗原浓度成正比。
1.2.2 实验方法严格按说明书操作，将试剂盒放置室温平衡，配备洗涤液，使用前一小时内按1：50倍稀配备銪标记物，吸取100ml样本及对照，按顺序加入微孔反应小孔中并加贴封片，放37度恒温1小时，用洗板机洗涤4次拍干，再每孔入100ml已稀释的销标记物、加封条，放37度1小时，第2次孵育结束后，洗板机洗涤6次，拍干，每孔加入增强液100ml，然后在室温下用振荡仪振荡5分钟，上分析仪检测。
2 结果乙肝五项定量参考范围，HBSAG：0-0.5hg/ml，HBsAb：0-10mIU/ml，HBeAg：0-0.5PEIU/ml，HBeAb： 0-0.2PEIU/ml ，HBCAb：0-0.9PEIU/ml。
表1 200例标本乙肝五项定量与酶联免疫测试HBV含量关系3 讨论TRF采用于双抗体夹心时间分辨荧光分析法，其灵敏度高达0.01Fg/ml，可准确定量出0-1010个拷贝的病原体，可清楚的反映出HBV的感染和复制情况，该技术在一整套时间分辨荧光免疫分析仪中进行，整个过程可在2个半小时完成，设备自动化程度高，操作简单，而且保证了检测的准确性和特异性，HBSAg的检测可协助乙肝的早期诊断，在乙肝病人中HBSAg检出率在70%以上，可协助乙肝的鉴别诊断，阳性者可能为急性、慢性患者，乙肝潜伏期或无症状携带者，有助于乙肝的预后估计，定量检测血清中HBSAg，对乙肝病人动态疗效观察，消毒药物考核很有价值。
时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ Ｏ ． ２ Ｏ １ ５ ． ０ ７ ． ０ ５ ７ 文 献标 识 码 ： Ｂ 文 章编 号 ： １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ７ — ０ ９ ９ ４ — ０ ２
析法 （ ｔ ｉ ｍｅ ｒ ｅ ｓ ｏ ｌ ｖ ｅ ｄ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｉ ｓ ｎ ｍｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ） 、 微 粒 子 酶 免 疫测定法 （ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｐ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， ＭＥ Ｉ ） 和 酶 联 免 疫吸附测 定 法 （ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍ ｅ — ｌ ｉ ｎ ｋ ｅ ｄ ｉ Ｉ ｍｕ ｎ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ）
乙型 肝 炎 病 毒 简 称 乙肝 病 毒 ， 也 称 丹 氏颗 粒 ， 属 嗜肝 ＤＮＡ 病毒科 （ ｈ ｅ ｐ ａ ｄ ｎ ａ ｖ ｉ ｖ ｉ ｄ ａ ｅ ） ， 是 引起 各 类 急 慢 性 肝 炎 的 致 病 因 素 。 据 不 完 全 资料 统 计 ， 我 国 乙 肝 病 毒 的感 染 率 超 过 ５ ｏ ， 乙 肝 病 毒携带者近 １ 亿人 ， 乙 肝 患 者也 有 近 ３ ０ ０ ０万 。如 何 选 择 一 种 操作简单 、 经济适用 、 便 于 推 广 而 敏 感 度 又 相 对 较 高 的 乙肝 病 毒检 测法 ， 对 如 此 大 的 人 群 进 行 乙 肝 病 毒 筛查 一 直 是 临 床研 究 的热 点 。 目前 常用 的 乙 肝 病 毒 检 测 法 主 要 有 时 间 分 辨 荧 光 分
酶联免疫吸附法和时间分辨荧光免疫法在检测乙型病毒性肝炎中的效果比较
酶联免疫吸附法和时间分辨荧光免疫法在检测乙型病毒性肝炎中的效果比较吴阿阳;陈忠进【摘要】目的分析比较ELISA法和TRFIA法在检测乙型肝炎患者血清学标志物的灵敏性.方法以2011年5月至2012年1月期间来我院就诊的74例乙肝患者为研究对象.分别采用两种检测方法对患者血清学标志物进行检测,并对检出结果进行统计分析.结果 TRFIA法对乙肝患者血清标志物检测的阳性率明显高于ELISA法(P ＜0.05).结论与ELISA相比,TRFIA法对乙肝血清学标志物的检测更为灵敏,临床上值得推广.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2012(006)013【总页数】2页(P34-35)【关键词】时间分辨荧光免疫法;酶联免疫吸附法;乙型肝炎;血清学标志物【作者】吴阿阳;陈忠进【作者单位】363000,福建省医科大学附属漳州市医院检验科;福建省云霄县医院【正文语种】中文乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是危害人类健康的最严重的病毒性肝炎之一。
有资料显示，我国有10%以上的人为乙肝病毒携带者［1］。
乙肝血清学标志物是检验机体是否感染过或正在感染乙肝病毒的有效证据之一，也是对乙肝患者病程的分析和判断的重要依据。
可见，乙肝血清学标志物的检测在临床诊断和治疗中起着非常重要的作用。
酶联免疫吸附法(ELISA)是临床上检验科常用的一种检测乙肝血清学标志物的方法。
近年来，随着免疫学技术的不断发展，时间分辨荧光免疫法(TRFIA)逐渐成为一种新的检测乙肝血清学标志物的方法为广大临床医师所接受。
本研究采用两种不同的方法对我院2011年5月至2012年1月期间的74例乙肝患者进行检测，旨在探讨两种检测方法的优劣性，以期为临床检测提供参考依据。
1 资料与方法1.1 一般资料以2011年5月至2012年1月期间来我院就诊的74例乙肝患者为研究对象。
年龄17～51岁，平均年龄39.4岁，其中男49例，女25例。
清晨空腹抽取患者静脉血3 ml，分离血清后分装，一部分立即检测，另一部分保存于-80℃冰箱备用。
酶联免疫法和发光免疫法测定乙肝病毒标志物比较
酶联免疫法和发光免疫法测定乙肝病毒标志物比较目的比较发光免疫、酶联免疫这两种免疫学方法检测乙肝病毒标志物的特点和各自的应用价值。
方法用这两种不同的免疫学方法分别对182例乙肝患者的血清标本进行检测,然后计算结果、分析结果。
结果两种方法对乙肝病毒标志物前四项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb)均敏感,灵敏度达到ng/mL,结果的相互符合率也达到96%以上。
而对HbcAb而言,结果的相互符合率仅为89%,因为发光免疫法检测HbcAb时未稀释标本,所以发光免疫法的灵敏度要高于酶免法。
结论两种实验方法各有特点,操作时应根据实验的实际情况来选择。
标签：酶联免疫法; 发光免疫法; 乙肝病毒标志物现在实验室免疫学分析用的最广的方法是酶联免疫法和发光免疫法。
这两种方法哪种的灵敏度高、它们又有什么样的不足之处,现就这两种方法对乙肝病毒表面标志物的检测作比较,结论如下。
1 材料与方法1.1 材料收集182例临床确诊乙肝的病人静脉血样离心,分离出的血清用未加抗凝剂的密闭试管中保存,放置于-20℃环境中备用。
酶免法表面抗原质控品由北京市临检中心提供,浓度为2ng/mL。
1.2 试剂和仪器酶联免疫法试剂采用上海科华生物工程有限公司生产的乙肝两对半诊断试剂盒(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);试剂为同批号试剂,批号:20081106,校期:20091105。
仪器有洗板机(BIORAD MODEL 1575),酶标比色仪(Rayto RT-6000)。
化学发光法采用北京源德生物医学工程公司JETLIA-962化学发光免疫测定系统及配套使用的专用试剂盒,试剂批号:200902012290318A,校期:20090917。
1.3 方法酶联免疫法的操作严格按照使用说明书进行,以表面抗原定值血清作为质控,设空白一空,阴阳对照各两孔。
主要步骤是加样,加酶,孵育,洗板,加显色剂,显色,比色。
其中核心抗体检测时用生理盐水作1∶30稀释。
检测hbsag的常用方法是
检测hbsag的常用方法是检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的常用方法包括免疫荧光法、酶免疫法、免疫层析法和聚合酶链反应法。
免疫荧光法是一种常用、成熟的HBsAg检测方法。
其原理是，在荧光显微镜下观察标本中HBsAg与特异性抗原结合形成荧光复合物。
这种方法具有高灵敏度和高特异性，能迅速准确地检测HBsAg的存在，并可实现对阳性样本的图像记录。
酶免疫法（ELISA）是一种常用的定性和定量检测HBsAg的方法。
它利用特异性抗原与酶标记的抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
酶作为信号放大因子，可通过底物的酶促反应，产生可见的色素变化。
通过测定底物的酶促反应产物的光密度或荧光值，可以判断样本中HBsAg的浓度。
酶免疫法具有敏感度高、准确性高、简单易行、操作快捷等优点，广泛应用于临床乙肝病毒感染的筛查和诊断。
免疫层析法是一种快速检测HBsAg的方法。
该方法通过溶液或尿液样本在试纸或膜片上向上渗透，与标记在试纸上的抗HBsAg抗体结合形成复合物。
复合物会在试纸上显示出一条颜色变化的线条。
这种方法操作简单，无需仪器，快速方便，适用于乙肝病毒感染的后勤补给和现场筛查。
聚合酶链反应法（PCR）是一种利用酶的芯片技术快速、高效地检测HBsAg的方法。
PCR技术通过特异性引物选择性地扩增HBV核酸，再利用荧光染料或融合探针进行定性或定量分析。
PCR方法具有极高的灵敏度和特异性，能够在病毒感染初期或重度感染时快速准确地检测出HBsAg，对于乙肝感染的早期诊断和监测具有重要意义。
综上所述，免疫荧光法、酶免疫法、免疫层析法和聚合酶链反应法是常用的HBsAg检测方法。
不同的方法有各自的优缺点，临床医生可根据具体情况选择合适的检测方法，以确保乙肝病毒感染的早期发现和准确诊断。
化学发光免疫测定、酶联免疫、时间分辨免疫荧光三种方法检测乙肝
时间分辨免疫荧光与化学发光法、酶联免疫法测定乙肝标志物的比较摘要目的: 比较化学发光免疫测定（CL）、酶联免疫（EIA）与时间分辨免疫荧光（TRFIA）三种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。
方法: 用上述三种方法的检测试剂及仪器对189例临床血清标本分别进行检测，然后进行结果分析。
结果: 三者对乙肝表面抗原的检测灵敏度均达到了0.1ng/ml。
对HBcAb的测定，以CL的灵敏度最高，ELISA最低。
对表面抗体、E抗原及E抗体的检测，相互符合率均在95%以上，但对核心抗体的检测符合率，TRFIA与CL为83.23%，TRFIA与EIA为85.19%。
结论: 三种方法的检测性能相差不大，但操作性各有特点，应按各实验室具体情况加以选择。
关键词：化学发光法，酶联免疫试验，时间分辨荧光免疫测定本文作者:肖征周薇薇白立彦赵莉萍parison of chemiluminescence, ELISA and time-resolved fluoroimmunoassay in detecting Hepatitis B markers肖征，副主任医师，副教授周薇薇，主管技师白立彦，主管技师赵莉萍，主管技师解放军总医院微生物科，100853Zheng Xiao, Weiwei Zhou, Liyan Bai, Liping ZhaoGeneral Hospital of PLA, Beijing, 100853 PRCAbstractSubject:To pare three deferent assays to see their abilities in detecting hepatitis B markers.Methods：By using Chemiluminescence (CL), ELISA and Time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA), 189 serum samples were tested for hepatitis B markers, then the results were analyzed.Results:The three assays all can detect as low as 0.1ng/ml of HBsAg. But in HBcAb, The CL showed the highest sensitivity, ELISA showed the lowest sensitivity. The coincidences of the three methods in detecting HBsAb, HBeAg, and HBeAb are normally above 95%, but for HBcAb, the coincidence was 83.23% between TRIF and CL, and 85.19% between TRIFA and EIA.Conclusion:There were not much difference among these three methods regarding their abilities in detecting hepatitis B markers, but the maneuver flexibilities of each method differed a lot. One should consider his own lab's situation before making choice.Key words:chemiluminescence, ELISA, time-resolved fluoroimmunoassay自二十世纪七十年代以来，许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测。
时间分辨荧光免疫分析法测定HBsAg
世界最新医学信息文摘 ２ ０ １ ４ 年第 １ ４ 卷第 ２ ４ 期
・
医学检验 ・
时 间分 辨 荧光 免 疫 分 析 法 测 定 ＨＢ ｓ Ａ ｇ
（ 黑龙江省江滨农场 医院 ，黑龙 江 鹤岗 １ ５ ４ ２ ４ ３ ）
徐 秋 萍
摘要 ：目的 探 讨时 间分辨荧光免 疫分析 法检测 乙型肝 炎表 面抗原 ｒ ＨＢ ｓ Ａｇ ） 的方法。方法 总结采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法测 定病人 血清标本的 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ的方法和结果。结论 采 用 Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ 法定量检测 ＨＢ ｓ Ａｇ灵敏度更 高 ， 线性范围更宽 ， 在低浓度标本检 测 中更具优 势 ， 更具有 临床意 义。
４０ ａｉ ｒ ｎ。
２ 标本 采集
２ ． １ 样 品采集
采 集新鲜 无抗 凝静 脉血 ２— ３ ｍｌ ，采用 离心法 分离 出血 清 。血 清样 本 ２～ ８ ｑ Ｃ 可保 存 ６ ｄ ，一 ２ ０ ｑ Ｃ 可长 期保 存 。避 免 反 复冻融 。
２ ． ２ 注意事项
由于 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ、柠檬 酸盐会 与铕 发生螯 合 反应 ，因此 ，不 能 使 用含 有 这些 物质 抗凝 的血 浆 ，但 可 以使用 肝 素 抗凝 血
６ ． ８ 第 二 次孵 育结 束 后 ，小 心将 微孔 反 应条 上 的封 片 揭 下并 弃 掉 ，将 微孔 反 应 条放 人 洗板 机 吸 于各 孔 并每 孔 注 入洗涤液 ４ ０ ０ ｌ ，在 吸干 各 孔 ，重 复 以上 洗 涤 ６次 ，最 后 次将 微孔 反应 条拍干 。
一
６ ． ９ 每孔 中加 入增 强液 １ ０ ０ ｌ （ 加 样 过程 中避免 碰 到小 孔边 缘或其 中的试剂 ，尽量避 免污染 ） ，并加 贴封 片。 ６ ． １ ０ 微 孔 反 应 条 在 室 温 下 ，用 振 荡 仪 轻 摇 ５ ａｉ ｒ ｎ （ 在 ３ ０ ｍｉ ｎ内完成测 定 １ 。
化学发光、时间分辨和酶免三种方法学测定HBsAg
化学发光、时间分辨和酶免三种方法学测定HBsAg摘要】目的酶联免疫化学发光法、时间分辨荧光免疫法和酶联免疫吸附试验法，探讨这三种方法用于检测乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义。
方法采用酶联免疫化学发光法（CLIA）、时间分辨荧光免疫法(TRFIA) 和酶联免疫吸附试验( ELISA) 同时对 655例患者 HBV 血清标本进行 HBsAg检测。
结果 CLIA法检测患者标本乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg阳性率分别为16.64%，TRFIA阳性率分别为16.48%。
结论化学发光法测定乙肝病毒血清标志物的相对灵敏度高、特异性好，且为定量检测，可为临床用药疗效观察及乙肝病毒感染的转归提供科学依据。
【关键词】HBV 化学发光法时间分辨荧光免疫法酶联免疫吸附试验1 资料与方法HBV感染呈世界性流行，但不同地区HBV感染的流行强度差异很大。
据报道，全球约3.5亿人为慢性HBV感染者，每年约有100万人死于HBV感染所导致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)。
检测乙肝感染和机体免疫状态的常见指标为乙肝表面抗原（HBsAg）、表面抗体（抗-HBs）、e抗原（HBeAg）、e抗体（抗-HBe）和核心抗体（抗-HBc），即通常所说的“两对半”。
表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒的膜蛋白，是乙肝病毒感染最直接、最重要的标志物，随着研究的深入和新的抗病毒药物的问世，灵敏度高且又可以进行定量检测的化学发光定量检测试剂盒，满足了检测要求。
1.1 一般资料选取我院 2011年10～12月门诊患者共 655 例。
乙型肝炎诊断参照 2000年中华医学会传染病与寄生虫学会，肝病学分会联全修订的《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型肝炎诊断标准[1]。
分别取其静脉血5ml并分离血清后，于-20℃保存待测。
1.2 仪器与试剂 CLIA法使用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的，LUMO化学发光检测仪及配套试剂检测HBV-M定量； TRFIA 法使用上海新波生产的Anytest2000 型时间分辨荧光免疫检测仪及配套试剂；ELISA法使用上海科华生物药业技术有限公司提供的试剂，应用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的PHOMO酶标仪检测 HBV-M定性。
时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较
相较于酶联免疫吸 附法， 时 间分 辨 荧光 免 疫 法 用 于 乙型肝 炎 患 者 可 显 著
提 高病 毒 血 清 标 志 物 阳性 检 出率 ， 具 有 临床 应 用价 值 。
【 关键词 】 荧光免疫测定； 酶联免疫吸 附测定 ； 乙型肝炎病毒血清标志物； 肝 炎， 乙型， 慢性
乙 型肝 炎 病毒 血 清标 志物 是 目前 公 认 的 乙型病 毒 性 肝炎 诊 断 “ 金标准” ， 也 是 乙型肝 炎 病毒感 染 重要 病原
血清 分离 后 １ ｈ进 行 检测 。 （ １ ） 时 间分 辨荧 光免 疫 法 ： 时 间分辨 荧光 免疫 法属 于 定量检 测方 法 。 以超 过正 常参 考
现 代 医 药卫 生 ２ ０ １ ５ 年６月３ ０日 第３ １ 卷 第ｌ ２ 期 Ｊ Ｍｏ ｄ Ｍｅ ｄ Ｈｅ ａ ｌ ｔ ｈ， Ｊ ｕ ｎ ｅ ３ ０， ２ ０ １ ５， Ｖｏ １ ． ３ １ ， Ｎ ｏ ． １ ２
时 间分 辨荧 光免疫 法与酶联 免疫 吸 附法检 测 乙型 肝炎病 毒 血 清 标 志物 的 比较
法进行检 测 ， 比较 ２种 方 法对 乙型 肝 炎病 毒 表 面 抗 原 （ ＨＢ ｓ Ａ ｇ ） 、 乙型 肝 炎 病毒 ｅ 抗 体（ Ｈ Ｂ ｅ Ａ ｂ ） 、 乙型 肝 炎病 毒 核 心 抗 体
（ Ｈ Ｂ ｃ Ａ ｂ ） 、 乙型肝 炎病 毒 表 面抗 体 （ ＨＢ ｓ Ａ ｂ ） ７ Ｌ乙型 肝 炎 病 毒 ｅ抗 原 （ Ｈ Ｂ ｅ Ａ ｇ ） 等 乙型肝 炎 病 毒 血 清 标 志 物 阳性 检 出 率 。 结
正 常参 考范 围值 上 限判定 为 阳性 ， 其 中 ＨＢ ｓ Ａ ｇ 、 Ｈ Ｂ ｅ Ａ ｂ 、
Ｈ Ｂ ｃ Ａ ｂ 、 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ及 ＨＢ ｅ Ａ ｇ正 常参 考 范 围分别 为 ０ ． ０ ０ ． ５
分享几种HBsAg检测方法
分享几种 HBsAg检测方法由于HBV主要的传播途径是血液传播，因此无论是献血还是献血浆，都需要进行HBV的筛查，其中主要筛查指标为HBsAg，同时在使用前还需要进行HBV-DNA的检测。
随着医疗技术的发展，HBsAg的检测方法不断进步，目前根据献血浆初筛的要求与目的不同，各单采血浆站均采了多种检测方法，以保障血浆的质量安全。
现对HBsAg检测的几种主要方法进行分析探讨。
1.关于HBsAgHBsAg作为一种乙型肝炎病毒S基因的表达，其属于病毒包膜蛋白质的范畴，虽然其本身不具有传染性，但是在后期的疾病干预中，其属于最先出现的血清病毒抗原，基本结构和HBV模板息息相关，其与cccDNA水平存在较大的相关性，所以对关于HBsAg研究的价值进行分析。
有关专家指出，HBsAg和血清之间的转换，能够更加有效的实现乙肝疾病治愈的目标，这主要是因为在疾病干预中，HBsAg阴转或血清转换是开展免疫控制的重要标志。
其不仅代表患者的HBV复制可以进行持续控制，也可以代表患者的肝组织炎症获得明显减轻，从而起到延缓疾病进展的目的，将癌细胞的发生率降到最低。
在有关肝脏研究讨论中指出，慢性乙型肝炎的临床治疗，要想得到理想的效果，就要加强先进方法的利用，不管是HBeAg（+）或者是HBeAg（-）属性的慢性乙型肝炎，只有经过科学的抗病毒干预后，才会出现明显的HBsAg血清学转换。
而就代偿性肝病而言，不管是使用何种药物，只要达到这种终点，才能实现停止治疗。
所以在实际的HBsAg的检测中，对于HBV感染的诊断，还是应该利用有效的方法，这对于病毒的防治具有十分重要的意义。
需要特别关注的是，为了使HBsAg的定量检测效果得到提升，就要积极的对HBsAg下降速度进行观察。
1.HBsAg检测方法通常情况下，经常使用的三种HBsAg检测方法为酶联免疫吸附试验(EIA)、胶体金层析法(GIA)和免疫电子发光试验(MEIA)。
在针对HBsAg三种检测方法分析的时候,不同方法的原理、成本和总符合率等方面具有较大的差异性，所以对于这些方法进行经济学分析是十分必要的。
应用时间分辨技术进行乙肝病毒标志物的测定
应用时间分辨技术进行乙肝病毒标志物的测定摘要目的、方法：应用时间分辨技术(TRFIA)对19例仅表面抗原(HBsAg)和核心抗体(抗-HBc)为阳性的患者进行分析。
结果：19例患者中HBsAg、HBeAg、抗-HBc均为阳性者7例，HBsAg、HBeAb、抗-HBc均为阳性者8例，而HBsAg、抗-HBc為阳性者只有4例。
5项乙肝病毒标志物的阳性检出数前者均高于后者。
结论：应用时间分辨技术检测乙肝病毒血清标志物灵敏度高、特异性强，可代替酶联免疫吸附实验进行乙肝病毒血清标志物的定量检测。
关键词乙肝病毒标志物时间分辨技术酶联免疫吸附实验资料与方法标本来源及收集方法：医院住院患者、门诊病人90例，健康体检人员70例，其中男89例，女71例，年龄6～78岁；门诊患者采用ELISA法HBsAg和抗-HBc阳性者19例，其中男11例，女8例，年龄在13～72岁。
血清分离后置-30℃保存。
仪器及试剂：时间分辨荧光分析仪，广州丰华泰莱-I型；试剂由广州丰华公司提供。
酶标仪，美国Σ-960，酶联免疫试剂由上海科华公司提供。
检测方法：分别采用酶联免疫法和时间分辨免疫荧光法测试乙肝病毒标志物。
严格按照试剂说明书进行操作。
结果判断：时间分辨免疫荧光法(TRFIA)HBsAg≥0.5ng/ml，抗-HBs≥30IU/ml，HBeAg≥0.03NCU/ml，抗-HBe≥2.0NCU/ml，抗-HBc≥0.2NCU/ml为阳性；ELISA 法HBsAg以S/N≥2.1，抗-HBs以S/N≥2.1，HBeAg以S/N≥2.1，抗-HBe以S/C.O≤1.0，抗-HBe以S/C.O≤1.0 为阳性。
结果经酶联免疫吸附法检测19例仅表面抗原(HBsAg)和核心抗体(抗-HBc)为阳性的患者，采用TRFIA进行分析，结果见表1。
对于收集的160份患者和健康人血清标本，分别采用时间分辨免疫荧光技术(TRFI)和酶联免疫吸附法(ELISA)同时检测乙肝病毒5项标志物。
时间分辨荧光免疫分析法和酶联免疫吸附实验法测定乙型肝炎病毒大蛋白的方法学比较
喙部刃面%更容易观察有关&有研究显示%当工作端尺寸减少-)U%工作端的强度将显著降低(/)&报废的原因可能是此时刮治器的喙部宽度变薄%强度减弱%工作时有折断风险%也影响工作效果&本研究选取的-*7个工作端报废时宽度略偏低%有&.个折断&本文选取的刮治器分别来自'男'女工作年限'r-/年的(名医生%总体上年资高比年资低磨锐保形效果好%其余未发现明显规律&总之%本研究中反复多次磨锐后的L S4;Q Y刮治器锋利程度下降%大部分产生变形%可能影响器械贴合进而影响刮治效果%或容易损伤牙龈引起疼痛出血%提示临床工作时需要认真学习打磨技术和更仔细地打磨&参考文献&$J4S;Q?Q R P%l4R R Q T4A3!g%`Q S?4TQ1%Q C46:L6<T46TAS WQ?<\<2 S46;<?W5C5<?R5?&..)0-)&)!4R Y R C Q34C5;4?46Y R5R(g):g,Q?C V Q R% -)&'".-#!/.-0/.*:-$利春风%万晓曼%杨小英:大学新生口腔健康状况调查分析(g):中国临床新医学%-)&7%*"7#!'-/0'-*:'$L S4=54?5M%l4S4ZQ C R4,%+6<?R<`%Q C46:!<?R AS@5;464?W R AS@5;46C S Q4C3Q?C<\ZQ S5<W<?C5C5R!><[34?Y<ZC5<?R\<S<?Q W5R Q4R Q(g):]Q S52<W<?C<6-)))%-)&*%*/"&#!&/-0&%%:7$李少兰%周$军:口腔专科诊疗器械的保养0牙周锐器的磨利(+):全国口腔护理新进展研讨会论文汇编%-)&-!'7'0'7/:/$g566R:!5Q6W2L Q>S5@:M A?W43Q?C46R<\ZQ S5<W<?C465?R C S A3Q?C4C5<?4?W 4W_4?;Q W S<<C5?R C S A3Q?C4C5<?(J):(C>Q W5C5<?:P<6C Q S R l6A[Q S!7&'0 7'':收稿日期$-)&*0).0-- 本文编辑$杨光和$$ 摘要 $目的$对时间分辨荧光免疫分析"C53Q2S Q R<6_Q W\6A<S<533A?<4R R4Y%K V M"+#和酶联免疫吸附实验"Q?=Y3Q265?^Q W533A?<R<S TQ?C4R R4Y%1H"G+#检测乙型肝炎患者血清中病毒大蛋白">Q Z4C5C5R`_5S AR64S@Q R AS2 \4;Q ZS<C Q5?%F`a2H]#进行方法学比较&方法$收集')例正常体检血清标本作为阴性对照和&/)例慢性乙型肝炎患者血清标本%利用1H"G+法检测F`a2H]%将其中*)例阳性标本作为阳性样本%*)例阴性标本作为阴性样本%再分别采用K V M"+法检测F`a2H]%对二者的灵敏度'特异度'一致性'检测线性范围'精密度'相关性及两种试剂盒的稳定性进行比较&其中K V M"+与1H"G+结果不一致的&-例标本采用]E V法进行验证&结果$K V M"+检测F`a2H]的最小测定值为)I&?@N36%1H"G+检测F`a2H]的最小测定值为-I/?@N36%二者的特异度均为&))U&K V M"+和1H"G+检测F`a2H]的l4ZZ4值为)I%'&&-例1H"G+和K V M"+检测不一致的标本%经]E V验证后有&)例F`a,!+t&)'拷贝数&K V M"+试剂检测的线性范围在)I(-/r&)-/-?@N36之间%1H"G+试剂盒检测的线性范围在/r&-%&I(?@N36&K V M"+法检测高'中'低'个浓度水平的批内E a平均为(I&)U%1H"G+法的批内E a平均为%I.%U&K V M"+批间E a平均为(I.&U%1H"G+的批间E a平均为&)I7/U&K V M"+试剂盒的结合下降率为(I(&U%1H"G+试剂盒的结合下降率为-'I/.U&结论$K V M"+与1H"G+具有高度的一致性%但是两者相比%前者有更高的灵敏度和精密度%且K V M"+试剂盒的稳定性更好& $$ 关键词 $乙型肝炎病毒$$时间分辨荧光免疫分析$$大蛋白$$ 中图分类号 $V77(I($ 文献标识码 $+$ 文章编号 $&(*70'%)( -)&% )-0)&&%0)7$$W<5 &):'.(.N X:5R R?:&(*70'%)(:-)&%:)-:)7=(%,'/'2'4#+*2+'G5*&#)'"'-/(%(+%#"4L M N6O P31%#G(6&()'2$(/-2.'&'#G G."'*))*1*"/("Q1G(62#"H(/#G6 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W533A?<R<S TQ?C4R2 R4Y%1H"G+#法('%7)%随着荧光免疫自动化分析技术发展的日新月异%以抗原抗体反应与荧光物质发光和时间分辨技术相结合的时间分辨荧光免疫分析"C53Q2S Q R<6_Q W\6A<S<533A?<4R R4Y%K V M"+#已被逐渐应用于临床&笔者对K V M"+与1H"G+两种方法的检出阳性率'检测线性范围'精密度'相关性及两种试剂盒的稳定性进行比较%评价K V M"+用于F`a2 H]检测的价值&B:材料与方法BC B:试剂与材料:F`a2H]的K V M"+试剂盒"苏州新波公司产品#$F`a2H]1H"G+试剂盒"北京热景生物技术有限公司产品#$F`a,!+聚合酶链反应试剂盒"上海复星长征医学科学有限公司产品#&BC D:标本来源:&/)例慢性乙型肝炎患者血清标本来自无锡市人民医院住院及门诊患者血清%所有乙肝患者均符合-)&)年-中国慢性乙型肝炎防治指南诊断标准.%乙型肝炎病毒表面抗原均为阳性%无甲'丙'丁'戊肝的合并感染%以及人类免疫缺陷病毒感染'自身免疫性疾病'原发性胆汁淤积性肝硬化'重度酗酒者等疾病&')份正常体检者血清标本"F`a 血清标志物均阴性#&BC E:K V M"+检测F`a2H]$采用双抗夹心法%在+A2 C<,1H M"+2&-'/仪上检测荧光信号%从标准曲线计算样品中的F`a2H]的含量"软件程序机器自带#& BC I:1H"G+检测F`a2H]$采用双抗夹心法%利用+H"G1"u D+H"K mGm GK1J全自动酶免分析仪检测& BC J:]E V检测F`a,!+$采用商品化的聚合酶链式反应试剂盒进行检测%验证K V M"+与1H"G+不一致的标本&BC R:统计学方法:应用G]GG&*I)统计软件进行数据分析%对K V M"+和1H"G+两种方法进行一致性检验%计算l4ZZ4值&D:结果DC B:K V M"+和1H"G+的灵敏度比较$利用K V M"+法测定-)孔零点标准品的荧光强度%零标准点荧光强度均值加-倍标准差";#后的荧光强度在标准曲线上得到的相应值为其最小测定值%为)I&?@N36&利用1H"G+法测定-)孔零点标准品的吸光度%零标准点吸光度均值加-倍标准差";#后的吸光度在标准曲线上得到的相应值为其最小测定值%为-I/?@N36& DC D:K V M"+和1H"G+的特异度比较$利用K V M"+和1H"G+两种方法分别检测')例正常体检者血清"F`a 血清标志物均阴性#的F`a2H]的含量%结果均为阴性%二者F`a2H]检测的特异度均为&))U"')N')#&DC E:K V M "+和1H "G+测定F `a 2H ]的一致性$对1H "G+阴性组和阳性组的标本进行K V M "+方法的检测%结果见表&%l 4ZZ4j )I %'&在1H "G+阳性组有&例K V M "+阴性%在1H "G+阴性组有&&例K V M "+阳性%利用]E V 进行验证得出%在1H "G+阴性组有&)例F `a,!+t &)'拷贝数%其他阴性&表&$K V M "+和1H "G+测定F `a 2H ]的一致性1H "G+K V M "+O 0总计O (.&*)0&&/.*)总计%)()&7)$注!l 4ZZ4j )I %'DC I:K V M "+和1H "G+检测F `a 2H ]的线性范围$在.)例乙型肝炎患者血清中选择F `a 2H ]浓度"&)-/-?@N 36#较高的&例乙型肝炎患者血清标本倍比稀释至)I (-/?@N 36%用K V M "+试剂与1H "G+试剂盒同时进行F `a 2H ]的检测%结果见图&&K V M "+试剂检测F `a 2H ]的线性范围在)I (-/r &)-/-?@N 36之间%1H "G+试剂检测的线性范围在/r &-%&I (?@N 36%K V M "+在高值和低值分别比1H "G+高出%倍的检测范围&图&$KV M "+和1H "G+检测F `a 2H ]的线性范围DC J:K V M "+和1H "G+批内和批间精密度比较$K V M "+检测F `a 2H ]高'中'低'个不同浓度水平的批内E a "'j -)#分别为7I ')U '(I 7&U '*I /%U " @j (I &)U #%1H "G+检测的批内E a "'j-)#分别为%I -.U '%I /%U '&)I )(U " @j %I .%U #%见表-&K V M "+检测F `a 2H ]高'中'低'个浓度的批间E a "'j %#分别为/I )(U '*I &/U '%I /'U "@j (I .&U #%1H "G+检测的批间E a "'j %#分别为.I '%U '&)I )7U '&&I .'U"@j &)I 7/U #&见表'&表-$KV M "+和1H "G+批内精密度比较 'j -) 组$别K V M "+1H "G+浓度"?@N 36#G,E a"U #浓度"?@N 36#G,E a"U #高浓度组'('I '&/I ('7I ')'/%I &-.I (%%I -.中浓度组//I *'I /*(I 7&/7I -7I (/%I /%低浓度组&(I /&I -/*I /%&(I *&I (%&)I )(表'$KV M "+和1H "G+批间精密度比较 'j % 组$别K V M "+1H "G+浓度"?@N 36#G,E a"U #浓度"?@N 36#G,E a"U #高浓度组'('I .&%I 7&/I )('()I -''I *%.I '%中浓度组//I &'I .7*I &//7I ./I /&&)I )7低浓度组&(I '&I '.%I /'&(I &&I .-&&I .'DC R :K V M "+和1H "G+的相关性$以K V M "+和1H "G+两种方法分别检测.)例乙型肝炎患者血清中F`a 2H ]浓度%以1H "G+法测得浓度为B 轴%以K V M "+法测得浓度为Y 轴进行比较%相关系数8j )I .&(%回归方程为<j &I (*7-@0&/I '.7&见图-&图-$KV M "+和1H "G+的相关性DC S:K V M "+和1H "G+试剂盒的稳定性比较$取'组K V M "+试剂盒置7c 保存*W 后%测得平均荧光强度为'()(%.计数N R %'*c 水浴*W 后%测得平均荧光强度为''/..(计数N R %'*c 与7c 相比%抗原抗体结合的平均下降率为(I (&U $取'组1H "G+试剂盒置7c 保存*W 后%测得平均的吸光度值为-I *)%'*c 水浴*W 后%测得平均吸光度值为-I )(%'*c 与7c 相比%抗原抗体结合的平均下降率为-'I /.U &见表7&表7$K V M"+和1H"G+试剂盒的稳定性比较组$别K V M"+1H"G+7c保存*W"荧光强度#'*c水浴*W"荧光强度#抗原抗体结合的下降率"U#7c保存*W"吸光度#'*c水浴*W"吸光度#抗原抗体结合的下降率"U#&组-(/7-'-/&'-7/I'&-I/%&I%7-%I(% -组'(/&-''7&/-&(I7(-I(*-I&--)I() '组7/&/-&7&/&7-%I)(-I%7-I-'-&I7%平均值'()(%.''/..((I(&-I*)-I)(-'I/.E:讨论EC B:F`a2H]由]S Q G&']S Q G-和G结构域组成的双重跨膜拓扑结构%是F`a2H]发挥多种生物学功能作用的依赖性结构(/)&F`a2H]在肝细胞内作为受体蛋白对F`a复制过程具有反式激活的作用%由肝细胞内释放参与构成病毒外膜%与血清F`a,!+拷贝数具有良好的相关性%能反映患者机体内乙肝病毒复制情况('%/)&本研究用K V M"+分别检测1H"G+阴性组和1H"G+阳性组标本中的F`a2H]的浓度%并进行比较分析&二者具有高度的相关性"8j)I.&(#% l4ZZ4值为)I%'%表明两种方法具有高度的一致性&对不一致的&-例标本利用]E V方法进行验证%其中1H"G+阳性组%K V M"+阴性的&例标本进行]E V 检测%结果F`a,!+i&)'拷贝数$在1H"G+阴性组%&&例K V M"+阳性标本进行]E V检测F`a,!+%有&)例t&)'拷贝数%说明]E V结果与K V M"+的结果更接近%从而证明K V M"+的结果更可靠%具有更高的特异度和灵敏度&EC D:从K V M"+和1H"G+的检测线性范围可以看出% /?@N36和&-%&I(?@N36两个浓度值分别是1H"G+最低和最高的检测限&而K V M"+有更宽的检测范围%其最低和最高的检测限为)I(-/?@N36和&)-/-?@N36%分别比1H"G+高出%倍的检测浓度%累计高达&(倍%也说明了K V M"+比1H"G+有更高的灵敏度&利用K V M"+检测F`a2H]可以提高阳性率%降低假阴性率&对于一些极低浓度的F`a2H]%1H"G+无法检测%而低浓度的F`a2H]也是反映乙肝病毒复制的指标(()&利用K V M"+即可检测到F`a2H]%从而为临床医生判断病情及指导用药提供依据&EC E:此外%K V M"+的精密度更高于1H"G+%这与巢浩界等(*)利用K V M"+和1H"G+对乙肝病毒标志物的研究是一致的&对二者的试剂盒稳定性比较中%K V M"+试剂盒'*c与7c相比%抗原抗体结合的平均下降率为(I(&U%而1H"G+试剂盒*c与7c相比%抗原抗体结合的平均下降率为-'I/.U%可见K V M"+试剂盒的稳定性更好%说明K V M"+凭借其更高的精密度和更好的稳定性测定的结果准确度更高%更可靠& EC I:F`a2H]检测反映病毒复制情况%对于临床判断慢性乙肝患者的感染'病毒复制和预后有重要意义%对于低浓度的F`a2H]%一般1H"G+检测为阴性%而高灵敏度的K V M"+则能精确定量F`a2H]的浓度%为临床及时有效的诊断治疗疾病提供了可靠的依据&此外%K V M"+自动化程度较1H"G+更高%减少了工作中存在的系统误差和随机误差%提高了结果的准确度&因此%K V M"+定量检测F`a2H]正逐步成为现代检测乙型肝炎免疫学指标新的发展方向&参考文献&$王$贺%邢智远%孙风波%等:替诺福韦与恩替卡韦对高病毒载量F`Q+@阳性慢性乙型肝炎患者的疗效比较(g):中国临床新医学%-)&(%."&)#!%%-0%%7:-$谢服役%孙$琦%陈$巍:乙肝病毒大蛋白在乙肝患者诊疗中的临床意义(g):中华实验和临床病毒学杂志%-)&'%-*"7#!-%)0 -%-:'$贺超奇%覃江凤%梁友芳%等:血清乙型肝炎病毒包膜大蛋白检测与病毒复制的相关性研究(g):中华实验和临床病毒学杂志% -)&/%-."&#!-'0-/:7$樊$燕%王永忠%郑国军%等:乙型肝炎病毒1抗原'大蛋白与乙肝病毒,!+的关系(g):山东医药%-)&/%//"&#!7&07-:/$陈翔宇:乙肝血清学检测研究进展(g):医学理论与实践%-)&/% -%!-7/)0-7/-:($`S AR R a:F Q Z4C5C5R`_5S AR3<S Z><@Q?Q R5R(g):P<S6W g L4R C S<Q?2C Q S<6%-))*%&'"&#!(/0*':*$巢浩界%张$铭:时间分辨荧光免疫分析技术检测乙肝病毒标志物优越性的探讨(g):实用检验医师杂志%-)&(%%"7#!-).0 -&&:收稿日期$-)&*0&)0&& 本文编辑$吕文娟。
酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法测定HBsAg对比分析
酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法测定HBsAg对比分析黄晓群【期刊名称】《中国保健营养：临床医学学刊》【年(卷),期】2009(018)005【摘要】目的探讨酶联免疫法、金标法、时间分辨免疫荧光分析法三种方法测定HBsAg的可靠性及优缺点。
方法通过对1500名体检及临床标本用三种方法检测HBsAg，对其检测结果的准确度、灵敏度、特异性进行对比。
结果三种方法在准确度、灵敏度、特异性方面酶联免疫法最低，金标法其次，时间分辨免疫荧光分析法最高。
结论酶联免疫法检测HBsAg操作简便，可用于自动化分析，适用于大量标本的定性检测，如大量人群的乙肝筛查；金标法检测HBsAg操作简便快速，无需特殊仪器设备。
适用于单份标本的定性测定，适用于急诊、社区诊所及家庭化验；时间分辨免疫荧光分析法检测HBsAg动态检测范围广、试剂稳定、自动化程度高，最有发展前途，但对实验室条件和操作人员条件要求高，适用于HBsAg定量检测。
【总页数】3页(P7-9)【作者】黄晓群【作者单位】四川仁寿县人民医院检验科,620500【正文语种】中文【中图分类】R512.6【相关文献】1.酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg [J], 陈桂花;谭玉华;罗颖照2.比较分析金标法与酶联免疫法测定抗-HIV的效果 [J], 陈晓波3.金标法与酶联免疫法测定抗-HIV的效果分析 [J], 张加亮;周盛4.电化学发光法、酶联免疫法和金标快速检测板检测HbsAg、HBsAb结果对比[J], 刘勇;刘敏;肖玲5.酶联免疫法和胶体金法测定HBsAg的比较 [J], 王克成;周国芳;常秋月因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酶联免疫吸附试验和时间分辨荧光免疫技术在乙型肝炎病毒血清标志物检测中的临床价值
酶联免疫吸附试验和时间分辨荧光免疫技术在乙型肝炎病毒血清标志物检测中的临床价值王娜【摘要】目的:对酶联免疫吸附试验和时间分辨荧光免疫技术在乙型肝炎病毒血清标志物检测中的临床价值进行分析和比较.方法:选取本院2014年3月-2015年3月收治的40例乙型肝炎患者,分别使用酶联免疫吸附试验和时间分辨荧光免疫技术对患者的血清标本进行检测,对比两种检测方法结果的有效性.结果:时间分辨荧光免疫技术HBcAb、HBeAb的阳性检出率均显著高于对酶联免疫吸附试验,差异均有统计学意义(P＜0.05),两种方法HBsAb、HBeAg、HBsAg检出阳性率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:两种检测方法有较高的阳性符合率,均适用于乙型肝炎病毒的临床检测;时间分辨荧光免疫技术拥有更高的阳性检出率、敏感性及特异性,临床检测效果更加稳定和显著,值得推广使用.【期刊名称】《中外医学研究》【年(卷),期】2016(014)015【总页数】2页(P62-63)【关键词】酶联免疫吸附试验;时间分辨荧光免疫技术;乙型肝炎病毒;血清标志物检测【作者】王娜【作者单位】东海县人民医院江苏东海222300【正文语种】中文【中图分类】R512.6①东海县人民医院江苏东海 222300乙型肝炎病毒在我国有较高的感染率，是居于癌症死亡率第4位的肝细胞癌的主要病因，严重危害着我国人民的健康和生命安全［1］。
现阶段，对于乙型病毒性肝炎诊断的“金标准”公认的是乙型肝炎病毒血清学标志物，包括HBcAb、HBeAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg等［2］。
对于乙型肝炎病毒血清学标志物的检测临床多采用酶联免疫吸附试验的方法，该方法具有检测费用低、成批检测速度快、设备仪器要求低等优点，不足在于无法定量检测，且检测准确性不高。
随着医学技术和医学器械的不断发展，出现了时间分辨荧光免疫技术，该方法弥补了酶联免疫吸附试验无法定量检测的缺点，且检测特异性、灵敏度更加优越，有着较高的检测准确性，不足在于检测费用较高昂，检测时间较长。
酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg
酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg陈桂花1a，谭玉华2，罗颖照1b（1.广州经济技术开发区红十字会医院，a检验科,b体检中心，广东广州 510530 ；2.广州市丰华生物工程有限公司，广东广州 510730）摘要：目的比较2种方法4种试剂乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的检测性能，并探讨HBsAg阳性HBV血清标志物（HBV M）模式组间及其与HBsAg阴性模式组间的HBsAg 浓度差异。
方法酶联免疫法（ELISA）对1205例标本HBV M进行定性检测。
其中定性检测的153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法（TrFIA）定量测试试剂进行HBsAg比对检测，其余经定性检测的1052例标本均再用TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测，对HBsAg结果进行统计分析。
结果 2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95。
TrFIA法能对0.2ng/ml—1.0ng/ml的低浓度HBsAg标本进行有效检测。
研究发现TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间。
“HBsAg、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）”阳性模式组HBsAg浓度与“HBsAg、抗-HBc”阳性、“HBsAg、e抗体（抗-HBe）、抗-HBc”阳性、“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组和“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组间HBsAg浓度差异无统计学意义(P>0.05)，“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组、“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组HBsAg 浓度与“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg”单阳性模式组和“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg阳性模式”组HBsAg浓度与“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05）。
酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg
HbsAg DETECTION WITH ELISA AND RESOLVINGFIA作者： 陈桂花[1] 谭玉华[2] 罗颖照[1]作者机构： [1]广州经济技术开发区红十字会医院,广东广州510530 [2]广州市丰华生物工程有限公司,广东广州510630出版物刊名： 现代医院页码： 16-18页主题词： 酶联免疫法 时间分辨荧光免疫法 乙型肝炎病毒 表面抗原摘要：目的比较两种方法4种试剂对乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的检测性能，并探讨HBsAg阳性模式组间及其与HBsAg阴性模式组间的HBsAg浓度差异。
方法酶联免疫法（ELISA）定性检测1205例标本。
其中153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法（TrFIA）定量测试试剂进行HBsAg比对检测，其余的1052例标本均再用TrFIA法进行HBs鲰定量检测，再对1205例标本HBsAg定量结果按抗原抗体模式分组统计分析。
结果两种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率均无统计学差异（p〉0．05），3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r〉0．95。
TrFIA法能对0．2～1．0ng／ml的低浓度HB．sAg标本进行有效检测。
研究发现TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0．2～650．0ng／ml间。
研究中HBsAg阳性模式中除“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组与“HBsAg、e抗体（抗-HBe）、抗-HBc”阳性模式的HBsAg浓度差异无统计学意义（P〉0．05）外，其它HBsAg阳性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（P〈0．05），HBsAg阳性模式与HBsAg阴性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（p〈0．05）。
结论HBeAg或抗-HBe的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系，HBsAg浓度与病毒的复制存在一定的关系。
ELISA法HBVM定性检测结合TrFIA法HBsAg定量检测对HBV感染诊断和防治具有重要意义。
酶联免疫吸附法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果的比较
酶联免疫吸附法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果的比较刘丽娜;高阳【期刊名称】《实用医药杂志》【年(卷),期】2018(035)012【摘要】乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染率较高,感染后该病毒持续复制导致疾病迁徙、容易反复且难以治愈,最终发展成为肝硬化、肝衰竭,HBV已经严重危害人类健康[1]。
合理的使用抗病毒药物是治疗HBV感染的主要手段[2]。
目前检测肝组织内cccDNA是判断抗HBV疗效及患者预后的金标准,但该检测属于有创检测,对患者的损伤较大,在临床上普及较困难[3]。
有研究表明,血清HBsAg作为肝内cccDNA血清学的替代指标,血清HBsAg水平的变化贯穿在整个病程中,准确地检测血清HBsAg水平的变化可以预测疾病进展、观察治疗效果[4]。
酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光免疫法(CLIA)是常用的血清HBsAg水平检测方法,在临床上均被广泛应用,为了解两种检测方法的优缺点,现将两种检测方法的准确性、精密度和灵敏度进行比较,报告如下。
【总页数】2页(P1105-1106)【作者】刘丽娜;高阳【作者单位】451100 河南新郑,新郑市人民医院检验科;451100 河南新郑,新郑市人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R392.1【相关文献】1.ELISA法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析 [J], 马红霞;周运恒;杨蔺;吕红根;范列英2.酶联免疫吸附试验和电化学发光免疫法检测孕妇乙型肝炎表面抗原结果的比较[J], 黄光豪3.酶联免疫吸附试验和电化学发光免疫法检测孕妇乙型肝炎表面抗原结果的比较[J], 黄光豪4.酶联免疫吸附试验和电化学发光免疫法检测孕妇乙型肝炎表面抗原结果的比较[J], 费静5.酶联免疫吸附试验和电化学发光免疫法检测孕妇乙型肝炎表面抗原结果的比较[J], 费静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg陈桂花1a，谭玉华2，罗颖照1b（1.广州经济技术开发区红十字会医院，a检验科,b体检中心，广东广州 510530 ；2.广州市丰华生物工程有限公司，广东广州 510730）摘要：目的比较2种方法4种试剂乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的检测性能，并探讨HBsAg阳性HBV血清标志物（HBV M）模式组间及其与HBsAg阴性模式组间的HBsAg 浓度差异。
方法酶联免疫法（ELISA）对1205例标本HBV M进行定性检测。
其中定性检测的153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法（TrFIA）定量测试试剂进行HBsAg比对检测，其余经定性检测的1052例标本均再用TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测，对HBsAg结果进行统计分析。
结果 2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95。
TrFIA法能对0.2ng/ml—1.0ng/ml的低浓度HBsAg标本进行有效检测。
研究发现TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间。
“HBsAg、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）”阳性模式组HBsAg浓度与“HBsAg、抗-HBc”阳性、“HBsAg、e抗体（抗-HBe）、抗-HBc”阳性、“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组和“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组间HBsAg浓度差异无统计学意义(P>0.05)，“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组、“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组HBsAg 浓度与“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg”单阳性模式组和“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg阳性模式”组HBsAg浓度与“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05）。
结论 HBsAg 出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关。
HBeAg或抗-HBe 的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系，HBsAg浓度与病毒的复制存在一定的关系。
ELISA法HBV M定性检测结合TrFIA法HBsAg定量检测对HBV感染诊断和防治具有重要意义。
关键词：酶联免疫法；时间分辨荧光免疫法；乙型肝炎病毒，表面抗原HBsAg是HBV感染后血清中首先出现的标志物HBV M，可作为乙肝的早期诊断和普查项目。
HBsAg的检测受到许多研究者的关注[1-6]，随着标记免疫方法学的飞跃发展，HBsAg检测的灵敏度有了进一步提高，并且定量结果取代了定性报告，为临床诊断提供了更多的信息。
作者采用了1个厂家的ELISA法定性诊断试剂与3个厂家的TrFIA定量测试试剂对HBsAg 进行了比对检测，结果与分析如下。
一材料与方法1. 标本标本采自广州市经济技术开发区红十字会医院门诊病人、住院病人和体检人员标本1205例，及时分离血清，-20℃保存备用。
2. 仪器与试剂 ST-360 型酶标仪（上海科华公司），酶联免疫法乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（国药准字S1*******，上海荣盛公司）；Victor2-D1420时间分辨荧光免疫仪（美国PE公司）；时间分辨荧光免疫法乙型肝炎病毒表面抗原定量测试试剂盒[国药准字S2*******，广州丰华公司；国药准字S2*******，苏州新波公司；国食药监械（准）字2007第3401095号，中山大学达安公司]；DEM-Ⅲ型自动酶标洗板机和FWZ-Ⅱ型恒温微量振荡仪（广州丰华公司）。
3. 方法 ELISA法与TrFIA法均严格按试剂盒和仪器说明书操作。
ELISA法对以上1205例标本进行定性检测，按说明书结果判断方法判读阴阳性，对弱阳性的HBV M、“HBsAg、抗-HBs”或“e抗原、e抗体”双阳模式的HBVM均须2孔复查，仍为阳性者判为阳性。
其中定性检测作者简介：陈桂花，女，1974年9月生，本科，检验技师，主要从事免疫学检验工作。
的153例标本再用以上3个厂家的TrFIA定量测试试剂进行HBsAg比对检测。
其余经定性检测的1052例标本均再用广州丰华公司TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测。
TrFIA法如HBsAg检测结果≥0.5ng/ml时判为阳性，<0.2 ng/ml时判为阴性；如0.2 ng/ml≤HBsAg<0.5ng/ml时均须以上3厂家TrFIA定量测试试剂盒各3孔复检，如有2孔仍为HBsAg ≥0.2 ng/ml时判为该试剂盒检测HBsAg阳性，如有2家TrFIA定量测试试剂盒检测HBsAg ≥0.2 ng/ml时判为该标本HBsAg阳性。
用TrFIA法HBsAg结果结合ELISA法相应标本其它HBVM结果，重新确定HBVM抗原抗体模式。
4. 统计与分析抗原抗体排列顺序：(1) HBsAg；(2)抗-HBs；(3) HBeAg；(4)抗-HBe；(5)抗-HBc。
以阳性项目的序号代表该阳性项，同一患者血清HBVM组合称抗原抗体模式（如“1+3+5”代表“HBsAg，HBeAg，抗-HBc”同时阳性；“1+4+5”代表“HBsAg，抗-HBe，抗-HBc”同时阳性）。
对以上4个厂家试剂检测的153例标本HBsAg结果进行比较分析，计算各试剂间检测HBsAg的粗一致性、约登指数、真阳性符合率、真阴性符合率，并采用配对资料Χ2检验，再对 3个厂家的TrFIA法HBsAg定量检测结果进行回归分析。
对广州丰华公司TrFIA定量试剂检测的1205例标本HBsAg结果，按“1+3+5”、“1+4+5”、“1+5”、“1”等抗原抗体模式和“HBsAg阴性”模式进行统计，计算平均值（X）和标准偏差（SD），对组间HBsAg 浓度差异采用秩和检验。
二结果1. 2种方法4种试剂比对试验 153例标本HBsAg检测结果，3个厂家的TrFIA法试剂与ELISA法试剂HBsAg检测结果比较，3个厂家的TrFIA法试剂间HBsAg检测结果相互比较，2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学意义(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95，结果详见表1。
表1 2种方法4种试剂检测153例标本HBsAg结果比较试剂配对粗一致性（%）约登指数真阳性率（%）真阴性率（%）χ2检验 (P) 回归方程α=0.05, χ2（0.05)(1)=3.48丰华TrFIA与荣盛ELISA 97.38 0.9478 98.67 96.15 0.25 (＞0.05)新波TrFIA与荣盛ELISA 96.73 0.9354 98.67 94.87 0.80 (＞0.05)达安TrFIA与荣盛ELISA 95.42 0.9113 98.67 92.31 2.28 (＞0.05)新波TrFIA与丰华ELISA 99.35 0.9872 100.0 98.68 0 (＞0.05) Y=0.9665X+4.7739，r=0.9569 达安TrFIA与丰华ELISA 95.42 0.9101 97.40 93.42 0.57 (＞0.05) Y=1.1095X+4.5493，r=0.9686 达安TrFIA与新波ELISA 96.09 0.9226 97.44 94.67 0.17 (＞0.05) Y=1.0850X+5.5247，r=0.9566 2. 抗原抗体模式与HBsAg检测结果 TrFIA法HBsAg检测结果结合ELISA法相应标本其它HBVM结果，从1205例标本中共检测出10种抗原抗体模式，HBsAg阳性的模式共4种，TrFIA 法检测HBsAg阳性480例，其中ELISA法HBsAg弱阳性36例（0.5ng/ml—5.0ng/ml）和阴性20例（0.2ng/ml—1.0ng/ml,分布在“3+5”模式1例，“4+5”18例，“5”模式1例），TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间，结果详见表2。
表2 TrFIA法结合ELISA法检测HBV M的抗原抗体模式与模式组的HBsAg浓度HBV M抗原抗体模式组例数（%） HBsAg浓度（ng/ml,X±SD）1+3+5a 157（13.0） 330.2±143.81+5b 12（0.996） 118.1±146.71+4+5c 306（25.4） 129.3±124.81d 5（0.415） 1.5±0.4HBsAg阴性模式e 725（60.2） 0.01±0.05注：组间HBsAg浓度差异采用秩和检验，a与b间差异有统计学意义（N=169，u c=4.89,P<0.05）；a与c间差异有统计学意义（N=463，u c=12.35,P<0.05）；a与d间差异有统计学意义（N=162，u c=3.71,P<0.05）；a 与e间差异有统计学意义（N=882，u c=18.41,P<0.05）；b与c间差异无统计学意义（N=318，u c=0.79,P>0.05）；b与d间差异有统计学意义（n2=5, n1-n2=7,T=27,P<0.05）；b与e间差异有统计学意义（N=737，u c=5.93,P<0.05）；c与d间差异有统计学意义（N=311，u c=3.22,P<0.05）；c与e间差异有统计学意义（N=1031，u c=9.81,P<0.05）；d与e间差异有统计学意义（N=730，u c=3.82,P<0.05）。
三讨论研究中2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95，但试剂间仍存在一定的“灰区”检测范围，仍存在HBsAg阳性检测不一致现象，提高试剂盒质量进而提高各试剂间的可比性是厂家亟需解决的问题。
HBsAg是HBV的外壳，它出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关[7]。
HBeAg或抗-HBe的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系[8]。
研究中HBsAg 阳性模式中除“1+5”模式与“1+4+5”模式的HBsAg 浓度差异无统计学意义（P>0.05）外，其它HBsAg 阳性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（P<0.05），HBsAg 阳性模式与HBsAg 阴性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（P<0.05）。