电镜检查在肾脏疾病病理诊断中的作用及其新进展
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27
Fabry氏病
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
31
伴特殊有形结构的肾脏病
•
• 1995.1~2006.12 北京大学肾脏疾病研究所的 肾活检病例共12,332 例
Golgi氏器、溶酶体、微体等 • 细胞骨架：微丝、微管、中间丝 • 胞质内包涵体：病毒、糖原、脂滴、结
晶、分泌颗粒等
6
细胞外基质的超微结构
• 基底膜：中等密度均质状结构 Ⅳ型胶原、Laminin、蛋白聚糖
• 间质成分： Ⅲ型胶原：带横纹的粗纤维结构 弹力纤维（Elastic fibers） 蛋白聚糖(proteoglycan particles)
几种纤维物质沉积病的鉴别诊断
鉴别要点 AL FG/ITG FN 胶原III GP
纤维直径(nm) 10-12 20-50 10-14
60-100
沉积物成份 轻链/AA IgG,C3 fibronectin 胶原III
刚果红染色 +
-
-
-
40
电子致密物沉积病 (DDD)
轻链沉积病(LCDD)
nodular glomerulosclerosis
1
2
3
4
5
amyloidosis,
6
59%
7
8
9
肾组织有特殊有形结构的疾病类型的构成比
34
纤维样肾小球病(fibrillary glomerulopathy)
触须样肾小球病(immunotactoid glomerulopathy)
胶原Ⅲ肾小球病(collagen type Ⅲ glomerulopathy)
11
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
14
EM在病理诊断中作用的评估
EM在肾活检标本病理诊断中的作用
决定性 辅助性 验证
Hass 50% 北大医院 19%
21% 14%
16
Ⅰ:临床表现为NS的肾脏疾病
临床表现: NS
LM: GBM空泡 变性
(-)
微小病变 早期AL?
免疫荧光
IgG(+), C3(+) 早期MN 早期DN
17
minimal change disease
早期MN合并早期DN
22
Ⅱ:系膜轻度增生性肾小球病变
• 轻度系膜增生性GN Ms区低至中等电子密度D沉积
47
电镜技术的改进及其新技术
• 常规电镜技术的改进 • 电镜细胞化学－免疫电镜技术 • 电镜相关的新技术开发：
形态定量研究（体视学）
4
透射电镜的性能特点
• 观察细胞的亚显微结构，包括细胞膜、细胞核及胞质内各种细胞 器、细胞骨架及包涵体的形态。
• 观察组织结构的细微形态改变及细胞外基质的变化。 • 异常物质的沉积：免疫复合物
特殊有形结构 • 缺点：视野较小，观察局限、片面
5
细胞的超微结构基础
• 细胞核：核膜、常/异染色质、核仁 • 细胞膜：质膜、细胞连接、微绒毛等 • 细胞器：线粒体、内质网及核糖体
Linear light chain along TBM
冷球蛋白血症肾损害
脂蛋白肾病
HIV相关性肾小球病
膜型乙肝病毒相关性肾炎
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
2
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
3பைடு நூலகம்
透射电镜的基本知识
照射源 成像装置
放大倍数 分辨率
透射电镜
电子束 电磁透镜 (磁场\电场) 1,000×~60万 0.2nm
光镜
可见光 光学透镜 玻璃 40×~2,000 200nm
29% 67%
EM在轻微病理改变的肾脏病诊断中作用 LM轻微病理改变的病例占30% 决定性作用:55% 辅助诊断：45%
Hass M .J Am Soc Nephrol 1997;8:69-70
王素霞等.中华医学杂志 1998；78：782
15
LM•病原理发改性肾变小轻球微疾的病肾脏疾病
肾小球微小病变 早期膜性肾病 轻度系膜增生性GN • 继发性肾小球疾病 轻度系膜增生性IgAN/HSPN Ⅱ型狼疮肾炎 早期糖尿病肾病 早期肾淀粉样变性病 • 先天遗传性肾脏病 薄基底膜肾病 早期Alport综合征 Fabry氏病
• 轻度系膜增生性IgAN/HSPN Ms、副Ms区高电子密度D沉积
• 轻度系膜增生性LN Ms区中等或高电子密度D沉积 伴上皮下、内皮下D沉积
23
Ⅲ：先天遗传性肾脏疾病
• 薄基底膜肾病 LM：轻微病变，缺血性肾损伤
• Alport综合征 LM：轻度系膜增生性G病，FSGS 肾小管间质损伤
• Fabry氏病 LM：轻微病变，微小病变 (尤其是家族史不明确者)
• 病理检查：光镜、免疫荧光及电镜检查 伴特殊有形结构的病例共203例, 占肾活检病例的1.65%
• 分析其超微结构特征及其诊断作用
32
伴特殊有形结构的肾脏疾病及其比例
肾淀粉样变 冷球蛋白血症 纤维样和免疫触须样GP 电子致密物沉积病(DDD) 轻链沉积病(LCDD) 脂蛋白肾小球病 Fabry氏病 胶原Ⅲ肾小球病 纤连蛋白肾小球病
57.6%(117例) 18.2%(37例) 8.9%(18例) 3.4%(7例) 3.4%(7例) 3.4%(7例) 3.0%(6例) 1.0%(2例) 1.0%(2例)
33
lipoprotein 3%
GP,
3% 1%1%
LCDD, 3%
DDD, 3%
FGP/IT, 9%
cryoglobulinemi a, 18%
电镜检查在肾脏疾病病理诊断中 的作用及其新进展
1
肾活检标本病理诊断的方法
• 光镜(LM)：HE，PAS，Masson，PASM • 免疫荧光(IF)：IgG,IgA,IgM,C3,C1q,FRA
• 透射电镜(EM)：细胞和细胞外基质的超 微结构变化
LM、IF、EM三者相辅相成，缺一不可. 构成肾活检标本病理诊断的统一整体
Fabry氏病
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
31
伴特殊有形结构的肾脏病
•
• 1995.1~2006.12 北京大学肾脏疾病研究所的 肾活检病例共12,332 例
Golgi氏器、溶酶体、微体等 • 细胞骨架：微丝、微管、中间丝 • 胞质内包涵体：病毒、糖原、脂滴、结
晶、分泌颗粒等
6
细胞外基质的超微结构
• 基底膜：中等密度均质状结构 Ⅳ型胶原、Laminin、蛋白聚糖
• 间质成分： Ⅲ型胶原：带横纹的粗纤维结构 弹力纤维（Elastic fibers） 蛋白聚糖(proteoglycan particles)
几种纤维物质沉积病的鉴别诊断
鉴别要点 AL FG/ITG FN 胶原III GP
纤维直径(nm) 10-12 20-50 10-14
60-100
沉积物成份 轻链/AA IgG,C3 fibronectin 胶原III
刚果红染色 +
-
-
-
40
电子致密物沉积病 (DDD)
轻链沉积病(LCDD)
nodular glomerulosclerosis
1
2
3
4
5
amyloidosis,
6
59%
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8
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肾组织有特殊有形结构的疾病类型的构成比
34
纤维样肾小球病(fibrillary glomerulopathy)
触须样肾小球病(immunotactoid glomerulopathy)
胶原Ⅲ肾小球病(collagen type Ⅲ glomerulopathy)
11
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
14
EM在病理诊断中作用的评估
EM在肾活检标本病理诊断中的作用
决定性 辅助性 验证
Hass 50% 北大医院 19%
21% 14%
16
Ⅰ:临床表现为NS的肾脏疾病
临床表现: NS
LM: GBM空泡 变性
(-)
微小病变 早期AL?
免疫荧光
IgG(+), C3(+) 早期MN 早期DN
17
minimal change disease
早期MN合并早期DN
22
Ⅱ:系膜轻度增生性肾小球病变
• 轻度系膜增生性GN Ms区低至中等电子密度D沉积
47
电镜技术的改进及其新技术
• 常规电镜技术的改进 • 电镜细胞化学－免疫电镜技术 • 电镜相关的新技术开发：
形态定量研究（体视学）
4
透射电镜的性能特点
• 观察细胞的亚显微结构，包括细胞膜、细胞核及胞质内各种细胞 器、细胞骨架及包涵体的形态。
• 观察组织结构的细微形态改变及细胞外基质的变化。 • 异常物质的沉积：免疫复合物
特殊有形结构 • 缺点：视野较小，观察局限、片面
5
细胞的超微结构基础
• 细胞核：核膜、常/异染色质、核仁 • 细胞膜：质膜、细胞连接、微绒毛等 • 细胞器：线粒体、内质网及核糖体
Linear light chain along TBM
冷球蛋白血症肾损害
脂蛋白肾病
HIV相关性肾小球病
膜型乙肝病毒相关性肾炎
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
2
主要内容
一.透射电镜及超微病理的基础知识 二.LM轻微病理改变的肾脏病的EM观察 三.伴特殊有形结构形成的肾脏病的EM观察 四.电镜新技术在病理诊断和研究中的应用
3பைடு நூலகம்
透射电镜的基本知识
照射源 成像装置
放大倍数 分辨率
透射电镜
电子束 电磁透镜 (磁场\电场) 1,000×~60万 0.2nm
光镜
可见光 光学透镜 玻璃 40×~2,000 200nm
29% 67%
EM在轻微病理改变的肾脏病诊断中作用 LM轻微病理改变的病例占30% 决定性作用:55% 辅助诊断：45%
Hass M .J Am Soc Nephrol 1997;8:69-70
王素霞等.中华医学杂志 1998；78：782
15
LM•病原理发改性肾变小轻球微疾的病肾脏疾病
肾小球微小病变 早期膜性肾病 轻度系膜增生性GN • 继发性肾小球疾病 轻度系膜增生性IgAN/HSPN Ⅱ型狼疮肾炎 早期糖尿病肾病 早期肾淀粉样变性病 • 先天遗传性肾脏病 薄基底膜肾病 早期Alport综合征 Fabry氏病
• 轻度系膜增生性IgAN/HSPN Ms、副Ms区高电子密度D沉积
• 轻度系膜增生性LN Ms区中等或高电子密度D沉积 伴上皮下、内皮下D沉积
23
Ⅲ：先天遗传性肾脏疾病
• 薄基底膜肾病 LM：轻微病变，缺血性肾损伤
• Alport综合征 LM：轻度系膜增生性G病，FSGS 肾小管间质损伤
• Fabry氏病 LM：轻微病变，微小病变 (尤其是家族史不明确者)
• 病理检查：光镜、免疫荧光及电镜检查 伴特殊有形结构的病例共203例, 占肾活检病例的1.65%
• 分析其超微结构特征及其诊断作用
32
伴特殊有形结构的肾脏疾病及其比例
肾淀粉样变 冷球蛋白血症 纤维样和免疫触须样GP 电子致密物沉积病(DDD) 轻链沉积病(LCDD) 脂蛋白肾小球病 Fabry氏病 胶原Ⅲ肾小球病 纤连蛋白肾小球病
57.6%(117例) 18.2%(37例) 8.9%(18例) 3.4%(7例) 3.4%(7例) 3.4%(7例) 3.0%(6例) 1.0%(2例) 1.0%(2例)
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lipoprotein 3%
GP,
3% 1%1%
LCDD, 3%
DDD, 3%
FGP/IT, 9%
cryoglobulinemi a, 18%
电镜检查在肾脏疾病病理诊断中 的作用及其新进展
1
肾活检标本病理诊断的方法
• 光镜(LM)：HE，PAS，Masson，PASM • 免疫荧光(IF)：IgG,IgA,IgM,C3,C1q,FRA
• 透射电镜(EM)：细胞和细胞外基质的超 微结构变化
LM、IF、EM三者相辅相成，缺一不可. 构成肾活检标本病理诊断的统一整体