草鱼病毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用
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组别 接种方法 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射
不同剂量灭活苗的安全测定
剂量 （67 0 尾） "+$ "+! "+& "+% "+* 观察时间 （天） $% $% $% $% $% 实验尾数 存活尾数 !" !" !" !" !" !" !" !" !" !"
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灭活苗的效力检验
04淡水渔业2002年第32山东省临沂师范学院东院区生物系临沂276003临沂师范学院实习基地水产繁育养殖研究中心原临沂农校实习基地1992年建场养鱼1994始陆续有草鱼出血病的发生我们自1995年开始着手进行出血病免疫预防试验采用本场出血病鱼病料做病毒种源制做灭活苗对本场草鱼进行免疫注射有效的预防了本病的发生取得满意的效果
《淡水渔业》 !""! 年第 &! 卷第 & 期草鱼Leabharlann 毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用
刘德福 孙世友 彭福峰 王兴礼
（山东省临沂师范学院东院区生物系， 临沂 !’(""&） 临沂师范学院实习基地水产繁育养殖研究中心 （原临沂农校实习基地） $))! 年建场养鱼， $))% 年开 始陆续有草鱼出血病的发生， 我们自 $))* 年开始着 手进行出血病免疫预防试验， 采用本场出血病鱼病 料做病毒种源制做灭活苗， 对本场草鱼进行免疫注 射， 有效的预防了本病的发生， 取得满意的效果。现 将草鱼病毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用试 验报告如下。 $ 病料来源与确认 $+$ 病料毒种的来源 取新鲜出血症状表现明显 的自然死亡或濒临死亡的鱼， 要求皮下肌肉、 口腔周 围、 鳍基部、 鳃盖、 肠道、 肝脏等部位出血或全身肌肉 鲜红的病死鱼为好， 主要用其肝脏、 脾脏、 肾脏和肌 肉， 称重后放入 # %, 冰箱保存备用。 $+! 病料毒种的实验室确认 取上述病料少许立 即送化验室进行检验， 使用快速诊断方法， 确认出血 性病毒病后， 方可进行出血病灭活疫苗的制作。 $+& 种毒病料的继代生产 取 $+$ 所述野毒病料 少许， 组织捣碎机捣碎， 用 "+-*. 的生理盐水 $" 倍 稀释。选健康无病长 $" 厘米左右的幼龄草鱼进行 继代接种培养， 每尾接种 "+& / "+* 毫升， 要求水温 大部分在 $% 天内死亡， 用 !’, 左右进行培养观察， 同样方法用将接种后 $% 天内死亡的病死鱼病料进 行第二代接种， 这样连续进行五代以上。无菌取连 续五代以上， 出血症状表现明显， $% 日内死亡或濒 临死亡的病死鱼肝脏、 脾脏、 肾脏和肌肉， 称重后放 入 # %, 冰箱保存备用。 ! 出血病灭活疫苗的简易制备步骤 无 !+$ 病料的加工 取新鲜或 $+& 所述备用病料， 菌操作， 将其剪成小块， 然后放入组织捣碎机捣碎 $ 分钟。加入 $" 倍 "+-*. 的无菌生理盐水， 稀释成匀 浆。然后在 &""" 转 0 每分钟下离心沉淀 &" 分种， 取 上悬液测量后每毫升加入青霉素、 链霉素各 -"" / $""" 单位备用。
组别 攻毒方法 甲 乙 腹腔注射 腹腔注射
鱼塘号 接种方法 疫 # 苗 ’ 免 ! 疫 & 鱼 % 塘 , 对 0 照 组 ( 背鳍注射 背鳍注射 背鳍注射 腹腔注射 背鳍注射 腹腔注射 不 接 种
!"!"’ 场内大面积成鱼的免疫效力检验 场内共 有草鱼塘 ( 个，随机分为两组，甲组鱼塘 , 个，为 试验组；乙组鱼塘 ’ 个，为对照组。待冬片鱼种转 成鱼塘时，对甲组草鱼进行免疫接种，每尾背鳍注 射 $"! - $"%./，乙组不进行接种，但发病时允许进 行常规的处理措施，到起水时计算比较。结果甲组 最低保护率 (#"’+ 、最高保护率 *&"’+ 、平均保 护率 (0"(+ ；乙 组 两 鱼 塘 成 活 率 分 别 为 &!+ 和 !,+ ，死亡率 %0+ 和 %&+ 。见表 ! 所示。 & 疫苗的分装、使用、保存及有效期 &"# 灭活疫苗分装 疫苗检验合格后，在无菌条 件下分装，分装时要求不断搅拌使其充分混合。分 装后的疫苗要封口、贴签，注明疫苗名称、用法、 用量、保存方 法、批 号、制 造 日 期、以 及 制 造 单 位。 %
万方数据
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!"!"# 幼龄鱼的免疫效力检验（室内） 选择健 康无病无外伤的长 #$ 厘米左右的幼龄草鱼 #$$ 尾， 随机分为甲、乙两组，每组各 %$ 尾，甲组为试验 组，乙组为对照组。甲组每尾腹腔注射出血病灭活 苗 $"! 毫升，观察 #& 天。结果甲乙两组均无发病 和死亡现象，全部健活。然后进行攻毒试验，取种 毒病料悬液， #$ 倍稀释，甲、乙两组每尾各腹腔 接种 $"’ 毫升，分别时行正常饲养，水温控制 在 ’() 左右，观察 #& 天。结果，甲组死亡 # 尾，存 活 &* 尾，死亡率 ’+ ，保护率 *(+ ；乙组全部死 亡，死亡率 #$$+ ，见表 ’ 所示
表’ 幼龄鱼接种灭活苗 #& 天后攻毒试验
攻毒剂量 观察 （毫升） 天数 $"’ $"’ #& #& 实验 尾数 %$ %$ 死亡 尾数 # %$ 存活 成活率 尾数 （ + ） &* $ *( $
&"’ 注射剂量 根据试验，幼龄草鱼使用出血病灭 活疫 苗 每 尾 接 种 $"# - $"!./；成 鱼 可 使 用 $"! $"%./ 即可起到较好的免疫效果。 &"! 注射部位 幼龄鱼最好使用腹腔注射，成鱼 使用背鳍注射或腹腔注射。 &"& 疫苗保存 要求将疫苗保存在 1 &) 的冰箱中 备用。如短时间使用可将灭活苗保存避光阴暗处， 或放在深水井内。 &"% 疫苗的有效期 通过疫苗效力持续期的测定， 在 1 &) 的温度下保存有效期为 #’ - #, 个月；如在 阴暗、避光的常温下保存，有效期为 ! - , 个月。
收稿日期： !""! # "$ # "% 1 2 3 4 5
!+! 出血病疫苗的灭活 取 !+$ 所述悬液按剂量 加入 "+-. 的福尔马林溶液， 充分摇匀， 放入 &’, 恒 温箱中灭活 ’! 小时， 灭活期间， 每 ! / % 小时振荡一 次， 每次 $" / $* 分钟。灭活后再加入 $". 的甘油进 行保护， 即成为出血病灭活疫苗， 并放入 # %, 冰箱 中保存备用。 & 灭活疫苗的检验 将制备好的 &+$ 无菌检验 按成品检验有关规定， 灭活苗随机抽取数瓶， 混合后， 用接种环蘸取混合液 分别接种于不同的培养基上， 在有氧、 微氧、 无氧的 不同条件下， &’, 恒温箱培养 %- / ’! 小时分别进行 观察， 无细菌生长。 &+! 安全检验 选 &+!+$ 毒性检验 用 %+$ 无菌检验后的混合液， 健康无病、 无外伤， 根 * / $" 厘米的幼龄草鱼 &" 尾， 据大 小 每 尾 腹 腔 注 射 "+& 毫 升， 注 射 后 "+*、 $+"、 结果 &" 尾 !+"、 %+"、 (+"、 $!、 !% 和 %- 小时进行观察， 均无中毒发病和死亡现象， 全部健活。 &+!+! 不同剂量的安全性观察 选健康无病长约 随机分为 * 组 （分 $" 厘米左右的幼龄草鱼苗 $"" 尾， 别为 1、 ， 每组 !" 尾。用出血病灭活苗 2、 3、 4、 5 组） 进行腹腔注射， 每组注射剂量依次为 "+$67、 "+!67、 水温控 "+&67、 "+%67、 "+*67。注射后进行室内饲养， 制在 !’, 左右， 观察 $% 天。结果五组均无发病和死 亡现象， 全部健活。见表 $。
致富“财神” ！
! 名优牧草良种 规模较大的国营牧草基地。每亩含邮资种价：菊苣 #$$3、鲁梅 3 斯 #$$3、松香草 #$$3、白三叶 !$$3、 苜蓿 #$$$3、多年生黑麦草 #$$$3 各 &$ 元；苦荬菜 %$$3,$ 元；杂交狼尾草 %$$3、冬牧 0$3、黑麦 &$$$3、墨西哥玉米 %$$3 各 ($ 元；莪菜种根 %$$$3#&$ 元；皇竹草 *$$ 节 &%$ 元。赠资料。购 !$$ 元以上赠 #$ 种牧草 456 一盘。若别处价更低，可比该 处再低 %+ 供种（注明信息来源） 。 !经济作物良种 速生葛根 #$$ 元 7 %$ 株；日本抗癌黑红薯 #$$ 元 7 ’"%83；超甜玉米 ,$ 元 7 %$$3；红心红薯、彩色红薯、水果红 薯各 ,$ 元 7 !83。 !秸秆生化蛋白饲料（专利技术） 以秸秆为原料，用生物工程技术，生产适用于禽畜鱼的优质饲料、技术函授 !($ 元（含技术资料与光盘） ，设备有粉碎机、铡草机、颗粒机、大型鲜草烘干设备。 《农业实用技术全书》上、下册 &$$ 万字，&*( 元。 !致富教材 中国失效专利光盘 #*( 元；农业种养科教 456&$$ 种； 单位：河南省新乡市专利技术应用中心（国营） 邮编：&%!$$$ 联系人：黄光明 地址：人民路西段 0, 号步步高大楼
小结 通过试验可以看出，采用本场鱼出血病料做毒
种种源，生产的鱼出血病灭活苗再用于本场鱼的免 疫，其保护率较高，极大的提高了鱼的成活率，学 院实习基地自 #**% 年实验生产出血病灭活苗以来， 自产自用，并取得了很好的预防效果，也大大提高 了鱼场的经济效益。采用本方法制做出鱼出血病灭 活疫苗，方法简便，无毒性，安全性好，特别本场 使用免疫效果好，有一定规模的养鱼场不妨一试。
表! 大面积使用灭活苗的效力检验
接种剂量 （毫升） $"% $"% $"% $"% $"% $"% $ $ 接种 尾数 ’&, !0% #!0 !’, ’$( &$# !#0 ’0( 起水 尾数 ’#! !’0 #!# ’*! #*, !’, #%& (! 死亡 成活率 尾数 （ + ） !! &( , !! #’ 0% #,! #*% (, 2 , (0 2 ’ *% 2 , (* 2 * *& 2 ’ (# 2 ’ &("0 ’*"(
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万方数据
电话：$!0! 1 ’,’*’’$（兼传真）
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组别 接种方法 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射
不同剂量灭活苗的安全测定
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灭活苗的效力检验
04淡水渔业2002年第32山东省临沂师范学院东院区生物系临沂276003临沂师范学院实习基地水产繁育养殖研究中心原临沂农校实习基地1992年建场养鱼1994始陆续有草鱼出血病的发生我们自1995年开始着手进行出血病免疫预防试验采用本场出血病鱼病料做病毒种源制做灭活苗对本场草鱼进行免疫注射有效的预防了本病的发生取得满意的效果
《淡水渔业》 !""! 年第 &! 卷第 & 期草鱼Leabharlann 毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用
刘德福 孙世友 彭福峰 王兴礼
（山东省临沂师范学院东院区生物系， 临沂 !’(""&） 临沂师范学院实习基地水产繁育养殖研究中心 （原临沂农校实习基地） $))! 年建场养鱼， $))% 年开 始陆续有草鱼出血病的发生， 我们自 $))* 年开始着 手进行出血病免疫预防试验， 采用本场出血病鱼病 料做病毒种源制做灭活苗， 对本场草鱼进行免疫注 射， 有效的预防了本病的发生， 取得满意的效果。现 将草鱼病毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用试 验报告如下。 $ 病料来源与确认 $+$ 病料毒种的来源 取新鲜出血症状表现明显 的自然死亡或濒临死亡的鱼， 要求皮下肌肉、 口腔周 围、 鳍基部、 鳃盖、 肠道、 肝脏等部位出血或全身肌肉 鲜红的病死鱼为好， 主要用其肝脏、 脾脏、 肾脏和肌 肉， 称重后放入 # %, 冰箱保存备用。 $+! 病料毒种的实验室确认 取上述病料少许立 即送化验室进行检验， 使用快速诊断方法， 确认出血 性病毒病后， 方可进行出血病灭活疫苗的制作。 $+& 种毒病料的继代生产 取 $+$ 所述野毒病料 少许， 组织捣碎机捣碎， 用 "+-*. 的生理盐水 $" 倍 稀释。选健康无病长 $" 厘米左右的幼龄草鱼进行 继代接种培养， 每尾接种 "+& / "+* 毫升， 要求水温 大部分在 $% 天内死亡， 用 !’, 左右进行培养观察， 同样方法用将接种后 $% 天内死亡的病死鱼病料进 行第二代接种， 这样连续进行五代以上。无菌取连 续五代以上， 出血症状表现明显， $% 日内死亡或濒 临死亡的病死鱼肝脏、 脾脏、 肾脏和肌肉， 称重后放 入 # %, 冰箱保存备用。 ! 出血病灭活疫苗的简易制备步骤 无 !+$ 病料的加工 取新鲜或 $+& 所述备用病料， 菌操作， 将其剪成小块， 然后放入组织捣碎机捣碎 $ 分钟。加入 $" 倍 "+-*. 的无菌生理盐水， 稀释成匀 浆。然后在 &""" 转 0 每分钟下离心沉淀 &" 分种， 取 上悬液测量后每毫升加入青霉素、 链霉素各 -"" / $""" 单位备用。
组别 攻毒方法 甲 乙 腹腔注射 腹腔注射
鱼塘号 接种方法 疫 # 苗 ’ 免 ! 疫 & 鱼 % 塘 , 对 0 照 组 ( 背鳍注射 背鳍注射 背鳍注射 腹腔注射 背鳍注射 腹腔注射 不 接 种
!"!"’ 场内大面积成鱼的免疫效力检验 场内共 有草鱼塘 ( 个，随机分为两组，甲组鱼塘 , 个，为 试验组；乙组鱼塘 ’ 个，为对照组。待冬片鱼种转 成鱼塘时，对甲组草鱼进行免疫接种，每尾背鳍注 射 $"! - $"%./，乙组不进行接种，但发病时允许进 行常规的处理措施，到起水时计算比较。结果甲组 最低保护率 (#"’+ 、最高保护率 *&"’+ 、平均保 护率 (0"(+ ；乙 组 两 鱼 塘 成 活 率 分 别 为 &!+ 和 !,+ ，死亡率 %0+ 和 %&+ 。见表 ! 所示。 & 疫苗的分装、使用、保存及有效期 &"# 灭活疫苗分装 疫苗检验合格后，在无菌条 件下分装，分装时要求不断搅拌使其充分混合。分 装后的疫苗要封口、贴签，注明疫苗名称、用法、 用量、保存方 法、批 号、制 造 日 期、以 及 制 造 单 位。 %
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表’ 幼龄鱼接种灭活苗 #& 天后攻毒试验
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! 名优牧草良种 规模较大的国营牧草基地。每亩含邮资种价：菊苣 #$$3、鲁梅 3 斯 #$$3、松香草 #$$3、白三叶 !$$3、 苜蓿 #$$$3、多年生黑麦草 #$$$3 各 &$ 元；苦荬菜 %$$3,$ 元；杂交狼尾草 %$$3、冬牧 0$3、黑麦 &$$$3、墨西哥玉米 %$$3 各 ($ 元；莪菜种根 %$$$3#&$ 元；皇竹草 *$$ 节 &%$ 元。赠资料。购 !$$ 元以上赠 #$ 种牧草 456 一盘。若别处价更低，可比该 处再低 %+ 供种（注明信息来源） 。 !经济作物良种 速生葛根 #$$ 元 7 %$ 株；日本抗癌黑红薯 #$$ 元 7 ’"%83；超甜玉米 ,$ 元 7 %$$3；红心红薯、彩色红薯、水果红 薯各 ,$ 元 7 !83。 !秸秆生化蛋白饲料（专利技术） 以秸秆为原料，用生物工程技术，生产适用于禽畜鱼的优质饲料、技术函授 !($ 元（含技术资料与光盘） ，设备有粉碎机、铡草机、颗粒机、大型鲜草烘干设备。 《农业实用技术全书》上、下册 &$$ 万字，&*( 元。 !致富教材 中国失效专利光盘 #*( 元；农业种养科教 456&$$ 种； 单位：河南省新乡市专利技术应用中心（国营） 邮编：&%!$$$ 联系人：黄光明 地址：人民路西段 0, 号步步高大楼
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