层析系统纯化人用狂犬病疫苗PPT教案
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功能： 系统控制 （全自动 Run Method,手动 Manual 或自动加手动） 在线同步监测（ Run Data, Curves, Flow Scheme, Logbook） 系统设定 （系统参数默认值等设定） 校正 （流速、压力、电导、pH 等）
Evaluation 结果处理
主要功能： 文件编辑 File/ Edit (Copy, Delete, Rename, Chromatogram Layout) 积分 Integrate (Peak Integrate, Baseline, Peak Table) 曲线操作 Operations (Add, Subtract, divide, Multiply, Shift, Smooth, Normalize, Differentiate, Cut Curve, Create Curve…… )
2 使0.01M pH7.8 PBS经层析柱正冲，通过紫 外流通池进入空瓶，当一瓶0.01M pH7.8 PBS 洗完后，调低流速，最后点击Pause，换一瓶 0.01M pH7.8 PBS，平衡至电导率和紫外吸收 稳定时为止。
上样
待系统曲线稳定以后，先进行紫外校零， 在系统控制模块窗口中设定流速并点击插 入，选择上样管道点击插入，点击Execute 执行，开始上样。
Method Editor 方法编辑
功能： 编辑方法 (Method Wizard, Run Setup, Text Instruction) 编辑层析柱列表 (Column List) 编辑缓冲液配方 (BufferPrep Receipt) ……
System Control 系统控制
系统运行前准备
系统泵的清洗
1、选择所要使用的管道放入蒸馏水中，在系 统控制模块(System Control)窗口中选择 Manual 再点击Pump，选择Pump Wash explorer，选择所要清洗的管道，点击 Execute执行。
2、水洗完成后将管道放入所要使用的缓冲液 中重复上述步骤。
3 、层析柱用两个柱体积的0.05M NaOH溶液清洗， 至平衡并保存在20℅的酒精中（长期不用应拆除单 独保存）。
4 、将进口管没入20℅的酒精中，启动系统自动循环， 循环液根据使用频率定期更换。
注意事项
1 首先必须设定报警压力，取较小的一个最 大耐受压力。
2 所有的缓冲液必须过滤，以保护层析系统 和层析柱。
……
系统操作
开机
系统运行前准备 运行
运行结束
手动运行 自动运行
开机
1、开机接通电源，依次打开仪器各部件电源开关 （AKTA explorer100主机、 纯化系统工作站和 打印机），约3分钟后，AKTA explorer100主机 自检完毕进入待机状态，此时仪器各部件显示当 前参数。
2、在计算机上双击打开UNICORN 5.0图标，输入 用户名和密码（系统默认的用户名和密码是 Default），进入纯化工作站的操作页面。
洗脱
待样品全部进入系统后，在系统控制模块 窗口中设定流速点击插入，选择接通PBS缓 冲液的管道点击插入，点击Execute执行， 开始洗脱过程。
收集
注意紫外吸收曲线的变化，待第一个峰形 起峰时，接通接样瓶，当样品洗脱峰出完 后，接通废液瓶，这时便停止接样。
根据所收集的纯化液的体积，加入人血白 蛋白，使之终浓度为1%。加入人白前后都 要取样做无菌，并取样测抗原和蛋白。
手动运行
管路清洗
管路、层析柱消毒 柱平衡
纯化
上样
洗脱
手动运行
1 高压器材：无菌衣、10L瓶、10L 瓶塞、反口塞、10ml吸管、盐水瓶
2 溶液准备：0.01M pH7.8 PBS（含 2%蔗糖）、0.5M NaOH、人血白 蛋白
管路清洗
将所需清洗管道放入0.01M pH7.8 PBS缓 冲液中，在系统控制模块(System Control)窗口中设定流速并点击插入，设 置报警压力点击插入，选择所清洗的管道 点击插入，柱位选择旁路点击插入，点击 Execute执行。
运行结束
运行结束时需进行清洗
1、将所需清洗管道放入缓冲液中，在系统控制模块 (System Control)窗口中设定流速并点击插入，设置 报警压力点击插入，选择所清洗的管道点击插入， 柱位点击插入，点击Execute执行。
2 、参照开机清洗的内容先把缓冲液管放入缓冲液中 清洗，然后再把样品的进口放入20℅的酒精中清洗。
管路、层析柱消毒
1 管路清洗结束后，将所需消毒管道放入 0.5M NaOH溶液中，在系统控制模块窗口 中设定流速并点击插入，选择所消毒的管 道、柱位点击插入，点击Execute执行。层 析柱消毒两个柱体积，上样管道消毒两小 时。
2 关闭所有阀门，封存层析柱，原位消毒12 小时以上。
柱平衡
1 将原来浸泡在0.5M NaOH溶液中的进液管 道插入0.01M pH7.8 PBS缓冲液中，在系统控 制模块窗口中设定流速、报警压力、选择柱 位并点击Execute执行。
收集的纯化液留样。纯化液及样品标明名 称、批号、数量，置4℃保存。
手动运行
继续洗脱，待杂蛋白峰出完，电导峰 和紫外峰走平后，可继续上第二次样 品，方法同前。
运行完毕后，点击End，结束运行。
自动运行
在系统控制模块(System Control)窗口中， 点击RUN，在对话框中选择所需运行的程 序，执行即可。
层析柱的连接
1、在系统控制模块(System Control)窗口中选择 Manual，再点击Pump，选择Pump Flow, 输入流速 后点击Insert插入。 2 、在Select中选择报警压力，输入保护压力，在 Flow Path中选择柱位，点击插入，点击Execute执 行。 3、 将连接管接入所选择的柱位，待出口有溶液 滴出再接上层析柱，全部拧紧之前打开出口，拧 入出口阀相应的柱位，拧紧所有接头。
层析系统纯化人用狂犬病疫苗
会计学
1
AKTA exlorer 系统硬件
AKTA Explorer 100: Flowrate: 0.01-100 ml/min Pressure: 0-10 MPa
AKTA exlorer 系统硬件
储物盒和缓冲液托盘 pH电导检测器 紫外检测器
系统泵
主机
AKTA exlorer 系统硬件
系统维护
1、缓冲液及样品 所有缓冲液须经过滤，以保护系统和层析柱。 所有样品须经过滤，以保护层析柱。 2、泵和系统清洗 使用前：依次用水，缓冲液； 使用后：依次用水，20%乙醇。系统管路全部保 存在20%乙醇溶液中。
系统维护
3、pH 电极 每天使用完后必须保存在电极保护液中。保护液配方如：
pH4.0 缓冲液与 1M KNO3 溶液的 1:1 混合液
系统运行前准备
样品泵的清洗
1、先将样品入口放入缓冲液中，在系统控制 模块(System Control)窗口中选择Manual选 择Flow命令，再点击samplePump，输入流 速，点击Execute执行，开始清洗样品环。
2、洗完毕后将流速设为0 ml/min，结束清洗 过程。
系统运行前准备
3 使用完毕，必须及时用保存液清洗保存， 一般使用20%乙醇溶液。
系统维护
对操作环境的要求： 室内温度：4－40度 相对湿度：10－90％ 输入电压：100－240VAC 功率：400AV－900AV
系统维护
层析柱： 1、报警压力
所有程序运行和手动运行中，必须首先设定报警 压力（使用预装柱，编程时由软件自动设定）。 压力值参阅层析柱及填料说明书，取较小的一个 最大耐受压力。 2、保存 使用完毕，必须及时用保存液冲洗保存。除非说 明书另外注明，一般使用20%乙醇溶液。
层析柱
上样阀 样品选择阀
出口收集阀
层析柱位阀
pH计流动池
AKTA exlorer 系统硬件
组分收集器
Unicorn 软件——四个操作窗口
Method Editor 方法编辑
Main Manu 主菜单
System Control 系统控制
Evaluation 结果处理
Main Manu 主菜单
功能： 文件管理 (File: Copy, Rename, Move, etc.) 用户设置 (User Setup: Edit, New, Access Group) 系统设置 (System Setup) 方法组 (Method Queue) ……
切记不可保存在水中。 4、在线过滤器 如果在没接层析柱时，系统仍有一定压力，若限压器（Flow
Restrictor FR-902，FR-904）没有接在流路中，（可能影响 低压柱的报警设置），应检查在线过滤器中的滤膜是否堵塞。 检查方法：拧松过滤器进口接头，若压力恢复正常，则可确认 滤膜堵塞。 更换：拧开在线过滤器，取出滤膜。滤膜可以清洗后再用，若 效果仍不理想，则需更换。配件箱中均有相应的备件。 5、紫外流动池 紫外检测流动池可定期清洗，清洗液可选择1M NaOH或去污剂。
系统维护
每天工作结束后 如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液，
则可用10％的使用流速，用缓冲液冲洗泵 如果将在第二天更换缓冲液，则需用水用
PumpWash功能将泵冲洗干净 几天停用仪器
先用水PumpWash冲洗之后，再用20%的乙 醇将系统冲洗干净，包括所有的进口管路 和出口管路都用20％的乙醇保存好
每天工作结束后每天工作结束后如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液则可用则可用1010的使用流速用缓冲液冲洗泵的使用流速用缓冲液冲洗泵如果将在第二天更换缓冲液则需用水用如果将在第二天更换缓冲液则需用水用pumpwashpumpwash功能将泵冲洗干净功能将泵冲洗干净几天停用仪器几天停用仪器先用水先用水pumpwashpumpwash冲洗之后再用冲洗之后再用2020的乙醇将系统冲洗干净包括所有的进口管路醇将系统冲洗干净包括所有的进口管路和出口管路都用和出口管路都用2020的乙醇保存好的乙醇保存好aktaexloreraktaexloreraktaexplorer100
系统维护
系统： 检查系统是否渗漏.手拧头拧紧。 如果数天不使用仪器，须用水将系统冲洗干净，并将层 析柱和pH计拆下，之后用20%乙醇清洗系统，并用20％的 乙醇保存所有的流路。 系统泵
检查系统泵是否渗漏，如果发现泵头发生渗漏，或是流量 不准确，则需更换泵头密封圈。更换缓冲液时，需排尽泵 头里的残存气泡，否则会影响流速的准确性。
Evaluation 结果处理
主要功能： 文件编辑 File/ Edit (Copy, Delete, Rename, Chromatogram Layout) 积分 Integrate (Peak Integrate, Baseline, Peak Table) 曲线操作 Operations (Add, Subtract, divide, Multiply, Shift, Smooth, Normalize, Differentiate, Cut Curve, Create Curve…… )
2 使0.01M pH7.8 PBS经层析柱正冲，通过紫 外流通池进入空瓶，当一瓶0.01M pH7.8 PBS 洗完后，调低流速，最后点击Pause，换一瓶 0.01M pH7.8 PBS，平衡至电导率和紫外吸收 稳定时为止。
上样
待系统曲线稳定以后，先进行紫外校零， 在系统控制模块窗口中设定流速并点击插 入，选择上样管道点击插入，点击Execute 执行，开始上样。
Method Editor 方法编辑
功能： 编辑方法 (Method Wizard, Run Setup, Text Instruction) 编辑层析柱列表 (Column List) 编辑缓冲液配方 (BufferPrep Receipt) ……
System Control 系统控制
系统运行前准备
系统泵的清洗
1、选择所要使用的管道放入蒸馏水中，在系 统控制模块(System Control)窗口中选择 Manual 再点击Pump，选择Pump Wash explorer，选择所要清洗的管道，点击 Execute执行。
2、水洗完成后将管道放入所要使用的缓冲液 中重复上述步骤。
3 、层析柱用两个柱体积的0.05M NaOH溶液清洗， 至平衡并保存在20℅的酒精中（长期不用应拆除单 独保存）。
4 、将进口管没入20℅的酒精中，启动系统自动循环， 循环液根据使用频率定期更换。
注意事项
1 首先必须设定报警压力，取较小的一个最 大耐受压力。
2 所有的缓冲液必须过滤，以保护层析系统 和层析柱。
……
系统操作
开机
系统运行前准备 运行
运行结束
手动运行 自动运行
开机
1、开机接通电源，依次打开仪器各部件电源开关 （AKTA explorer100主机、 纯化系统工作站和 打印机），约3分钟后，AKTA explorer100主机 自检完毕进入待机状态，此时仪器各部件显示当 前参数。
2、在计算机上双击打开UNICORN 5.0图标，输入 用户名和密码（系统默认的用户名和密码是 Default），进入纯化工作站的操作页面。
洗脱
待样品全部进入系统后，在系统控制模块 窗口中设定流速点击插入，选择接通PBS缓 冲液的管道点击插入，点击Execute执行， 开始洗脱过程。
收集
注意紫外吸收曲线的变化，待第一个峰形 起峰时，接通接样瓶，当样品洗脱峰出完 后，接通废液瓶，这时便停止接样。
根据所收集的纯化液的体积，加入人血白 蛋白，使之终浓度为1%。加入人白前后都 要取样做无菌，并取样测抗原和蛋白。
手动运行
管路清洗
管路、层析柱消毒 柱平衡
纯化
上样
洗脱
手动运行
1 高压器材：无菌衣、10L瓶、10L 瓶塞、反口塞、10ml吸管、盐水瓶
2 溶液准备：0.01M pH7.8 PBS（含 2%蔗糖）、0.5M NaOH、人血白 蛋白
管路清洗
将所需清洗管道放入0.01M pH7.8 PBS缓 冲液中，在系统控制模块(System Control)窗口中设定流速并点击插入，设 置报警压力点击插入，选择所清洗的管道 点击插入，柱位选择旁路点击插入，点击 Execute执行。
运行结束
运行结束时需进行清洗
1、将所需清洗管道放入缓冲液中，在系统控制模块 (System Control)窗口中设定流速并点击插入，设置 报警压力点击插入，选择所清洗的管道点击插入， 柱位点击插入，点击Execute执行。
2 、参照开机清洗的内容先把缓冲液管放入缓冲液中 清洗，然后再把样品的进口放入20℅的酒精中清洗。
管路、层析柱消毒
1 管路清洗结束后，将所需消毒管道放入 0.5M NaOH溶液中，在系统控制模块窗口 中设定流速并点击插入，选择所消毒的管 道、柱位点击插入，点击Execute执行。层 析柱消毒两个柱体积，上样管道消毒两小 时。
2 关闭所有阀门，封存层析柱，原位消毒12 小时以上。
柱平衡
1 将原来浸泡在0.5M NaOH溶液中的进液管 道插入0.01M pH7.8 PBS缓冲液中，在系统控 制模块窗口中设定流速、报警压力、选择柱 位并点击Execute执行。
收集的纯化液留样。纯化液及样品标明名 称、批号、数量，置4℃保存。
手动运行
继续洗脱，待杂蛋白峰出完，电导峰 和紫外峰走平后，可继续上第二次样 品，方法同前。
运行完毕后，点击End，结束运行。
自动运行
在系统控制模块(System Control)窗口中， 点击RUN，在对话框中选择所需运行的程 序，执行即可。
层析柱的连接
1、在系统控制模块(System Control)窗口中选择 Manual，再点击Pump，选择Pump Flow, 输入流速 后点击Insert插入。 2 、在Select中选择报警压力，输入保护压力，在 Flow Path中选择柱位，点击插入，点击Execute执 行。 3、 将连接管接入所选择的柱位，待出口有溶液 滴出再接上层析柱，全部拧紧之前打开出口，拧 入出口阀相应的柱位，拧紧所有接头。
层析系统纯化人用狂犬病疫苗
会计学
1
AKTA exlorer 系统硬件
AKTA Explorer 100: Flowrate: 0.01-100 ml/min Pressure: 0-10 MPa
AKTA exlorer 系统硬件
储物盒和缓冲液托盘 pH电导检测器 紫外检测器
系统泵
主机
AKTA exlorer 系统硬件
系统维护
1、缓冲液及样品 所有缓冲液须经过滤，以保护系统和层析柱。 所有样品须经过滤，以保护层析柱。 2、泵和系统清洗 使用前：依次用水，缓冲液； 使用后：依次用水，20%乙醇。系统管路全部保 存在20%乙醇溶液中。
系统维护
3、pH 电极 每天使用完后必须保存在电极保护液中。保护液配方如：
pH4.0 缓冲液与 1M KNO3 溶液的 1:1 混合液
系统运行前准备
样品泵的清洗
1、先将样品入口放入缓冲液中，在系统控制 模块(System Control)窗口中选择Manual选 择Flow命令，再点击samplePump，输入流 速，点击Execute执行，开始清洗样品环。
2、洗完毕后将流速设为0 ml/min，结束清洗 过程。
系统运行前准备
3 使用完毕，必须及时用保存液清洗保存， 一般使用20%乙醇溶液。
系统维护
对操作环境的要求： 室内温度：4－40度 相对湿度：10－90％ 输入电压：100－240VAC 功率：400AV－900AV
系统维护
层析柱： 1、报警压力
所有程序运行和手动运行中，必须首先设定报警 压力（使用预装柱，编程时由软件自动设定）。 压力值参阅层析柱及填料说明书，取较小的一个 最大耐受压力。 2、保存 使用完毕，必须及时用保存液冲洗保存。除非说 明书另外注明，一般使用20%乙醇溶液。
层析柱
上样阀 样品选择阀
出口收集阀
层析柱位阀
pH计流动池
AKTA exlorer 系统硬件
组分收集器
Unicorn 软件——四个操作窗口
Method Editor 方法编辑
Main Manu 主菜单
System Control 系统控制
Evaluation 结果处理
Main Manu 主菜单
功能： 文件管理 (File: Copy, Rename, Move, etc.) 用户设置 (User Setup: Edit, New, Access Group) 系统设置 (System Setup) 方法组 (Method Queue) ……
切记不可保存在水中。 4、在线过滤器 如果在没接层析柱时，系统仍有一定压力，若限压器（Flow
Restrictor FR-902，FR-904）没有接在流路中，（可能影响 低压柱的报警设置），应检查在线过滤器中的滤膜是否堵塞。 检查方法：拧松过滤器进口接头，若压力恢复正常，则可确认 滤膜堵塞。 更换：拧开在线过滤器，取出滤膜。滤膜可以清洗后再用，若 效果仍不理想，则需更换。配件箱中均有相应的备件。 5、紫外流动池 紫外检测流动池可定期清洗，清洗液可选择1M NaOH或去污剂。
系统维护
每天工作结束后 如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液，
则可用10％的使用流速，用缓冲液冲洗泵 如果将在第二天更换缓冲液，则需用水用
PumpWash功能将泵冲洗干净 几天停用仪器
先用水PumpWash冲洗之后，再用20%的乙 醇将系统冲洗干净，包括所有的进口管路 和出口管路都用20％的乙醇保存好
每天工作结束后每天工作结束后如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液则可用则可用1010的使用流速用缓冲液冲洗泵的使用流速用缓冲液冲洗泵如果将在第二天更换缓冲液则需用水用如果将在第二天更换缓冲液则需用水用pumpwashpumpwash功能将泵冲洗干净功能将泵冲洗干净几天停用仪器几天停用仪器先用水先用水pumpwashpumpwash冲洗之后再用冲洗之后再用2020的乙醇将系统冲洗干净包括所有的进口管路醇将系统冲洗干净包括所有的进口管路和出口管路都用和出口管路都用2020的乙醇保存好的乙醇保存好aktaexloreraktaexloreraktaexplorer100
系统维护
系统： 检查系统是否渗漏.手拧头拧紧。 如果数天不使用仪器，须用水将系统冲洗干净，并将层 析柱和pH计拆下，之后用20%乙醇清洗系统，并用20％的 乙醇保存所有的流路。 系统泵
检查系统泵是否渗漏，如果发现泵头发生渗漏，或是流量 不准确，则需更换泵头密封圈。更换缓冲液时，需排尽泵 头里的残存气泡，否则会影响流速的准确性。