贝类毒素的测定
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将混合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却至室温， 调节pH至2.0-4.0（切勿＞4.5）。将混合物移至 量筒中并稀释至200mL
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10
样品的测定
提取
将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至 上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可
必要时将混合物或上清液以3000r/min离心5min， 或用滤纸过滤
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26
提取
以少量乙醚将浓缩物移入100mL磨口烧瓶中，再次减压 浓缩去除乙醚
以1%吐温60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释 到10mL。此时1mL试液相当于20g去壳贝肉的重量，以 此悬浮液做为试验原液
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27
小白鼠试验
振荡使试液或其稀释液成为均匀的悬浮液
将每只小白鼠称重，每三只小白鼠为一组，分别将1mL 试液注射到小白鼠腹腔中
稀释提取液时，要调节pH至2.0-4.0,逐滴加入 0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液
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14
结果的计算与判断
毒力的计算
根据小鼠的死亡时间，在附录B 中查出相应的每毫升注射
液的鼠单位数M
将存活鼠的死亡时间视为大于60min即相当于＜0.875MU
若试验动物重量＜19g或＞21g。则根据附录C查出重量校 正系数k
试剂和材料
丙酮（分析纯）
乙醚（分析纯） 1%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐温-60，溶于生理盐
水（0.8%NaCl）中，并定容至100.0mL
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21
仪器和设备
旋转蒸发器 均质器 磨口烧瓶：圆底，500 mL，250 mL，100 mL 布氏漏斗：φ100mm 分液漏斗：具塞，500 mL 天平：感量0.1g 刻度试管：10mL，具塞 冰箱：0℃-5℃和-15℃- -20℃ 注射器：1mL 注射器针头：8# 小白鼠：体重为16-20g的健康ICR系雄性小白鼠
DSP是由于双壳贝类滤食含毒的涡鞭毛藻而引起
影响较严重的地区主要是日本和欧洲沿海国家， 发病率高，引起许多国家地区的关注
受DSP中毒的症状表现为消化功能紊乱（腹泻、 呕吐、腹痛），食用含毒贝类后30分钟至几小 时出现症状，中毒者一般在3-4天康复，尚无死 亡病例
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19
腹泻性贝类毒素的测定方法
保留进行小鼠注射用的足量液体（约10mL）
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11
样品的测定
小鼠试验
选择ICR系小鼠 称重：以感量为 0.1g
的天平将小鼠称重并 记录重量
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12
样品的测定
小鼠试验
每个样品注射3只小鼠，每只小鼠腹腔注射1mL 提取液。注射时若有一滴以上提取液溢出，须 将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠
记录注射完毕时间，仔细观察 并用秒表记录小鼠停止呼吸时 的死亡时间（到小鼠呼出最 后一口气止）
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13
样品的测定
小鼠试验
若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间 大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样 品的毒力
若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提 取液后，再注射另一组小鼠（3只），得到 5min-7min的死亡时间
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9
样品的测定
提取
取 100g 样 品 于 800mL 烧 杯 中 ， 加 0.1mol/L HCl溶液100mL充分搅拌， 检 查 pH （ pH 应 为 2.0-4.0 ） 。 需 要 时，可逐滴加入5mol/L HCl溶液或 0.1mol/L NaOH溶液调整pH，加碱 时速度要慢，同时需不断搅拌，防 止局部碱化破坏毒素
数便可得到校正的死亡时间 体重＞23g、或已用过的小白鼠则不能
使用
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7
样品的测定
检样的制备
贝类
洗净外壳，切断闭壳
肌，开壳，用清水淋
洗内部去除泥沙及其
他外来杂质，仔细取
贝 肉 ， 收 集 沥 水 5min
（避免贝肉堆积），
捡出碎壳等杂物，将 注意：取肉时切勿
贝肉均质
割破肉体，开壳前
样品中PSP的含量按公式（1）计算。 ……………（1）
式中：
X—样品中PSP含量，每百克样品中鼠单位（MU / 100g）
Ki—每只小鼠的重量校正系数
Mi—每只小鼠的鼠单位数，鼠单位（MU）
D—样品提取液的稀释倍数
200—样品量，克（g） 精选版课件ppt
15
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16
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贝类毒素的测定 生物法
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1
一、麻痹性贝类毒素（PSP）
Para1ytical shellfish poisoning
PSP中毒是最常见的食用贝类中毒 PSP由一组石房蛤毒及其衍生物组成，PSP与涡
鞭毛藻的水华有关（＞106个细胞／升） PSP在世界范围内分布 PSP中毒引起神经系统紊乱，呼吸困难，感觉
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25
提取
将抽提液移入500mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发 器，56℃）去除丙酮，直至在液体表面分离出油状物
将浓缩液移入分液漏斗内，以100mL－200mL乙醚和少量的 水洗下粘壁部分，轻轻振荡(不能生成乳浊液)，静置分层 后，去除水层(下层)
用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移入 250mL的磨口烧瓶中，减压浓缩(旋转蒸发器，35℃)去除 乙醚
冷冻贝类
在室温下，使冷冻的样品（带壳或去壳的）呈半冷冻 状态，按上述方法清洗、开壳、淋洗、取肉
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23
检样的制备
取样
可以切取中肠腺的贝类（扇贝、贻贝、牡蛎等），称取 200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细 切混合做为检样，注意不要使中肠内容物污染案板
对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小 型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，做为检样
生物法(即小白鼠法)，系采用ICR系列的小白鼠作为检验 动物，进行贝类毒素分析
生物法(即小白鼠法)优势：当使用生物法检测法时，一旦 发现超标样品，则本批样品不得食用，这说明所检测贝类
中相关的毒素含量已经影响到人们的食用安全，不适合食
用。
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3
麻痹性贝类毒素的测定 生物法
(SC/T 3023-2003)
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22
检样的制备
生鲜带壳的贝类
用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水淋洗内部去 除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，切勿割破肉 体
收集贝肉，沥水5min，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻， 贮藏备用
注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又 称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。开壳前不能 加热或用麻醉剂
4
试剂
盐酸溶液：0.1 mol/L 盐酸溶液：5 mol/L 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L
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5
仪器和设备
均质器 天平（感量0.1g） 离心机 pH计 秒表 玻璃皿；烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等 注射器：1mL 注射器针头：8#
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6
小白鼠：
体重为19-21g的健康ICR系雄性小白鼠 若体重＜19g或＞21g，查表中的校正系
不能加热或用麻醉
剂 精选版课件ppt
8
样品的测定
检样的制备
贝类罐头
1.将罐内所有内容物（包括贝肉组织及汁液）， 于均质器中均质
2.大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别 称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质
冷冻贝类
在室温下，使冷冻的样品（带壳或脱壳的）呈 半冷冻状态，按上述规定的方法清洗、开壳、 淋洗、取肉、均质
为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等 用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，以使 毒素分解；废弃的提取液等也应用5%的次氯酸钠溶液处 理
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24
提取
取处理好的中肠腺，或200g贝肉置于均质杯内， 均质2min
加3倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布 氏漏斗抽滤并收集提取液。对残渣以检样两倍 量丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液
样品中DSP毒力的计算，按表1选择24h内 死亡二只及二只以上白鼠的最小注射量 及最大稀释倍数进行计算
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29
注射量与毒力的关系
试验液
注射量mL
检样量1）g
原液
1.0
20
原液
0.5
10
2倍稀释液
1.0
10
2倍稀释液
0.5
5
4倍稀释液
1.0
5
4倍稀释液
0.5
2.5
8倍稀释液
1.0
2.5
窒息，心肺衰竭而在2—24小时内死亡 一般PSP中毒在0.5-2h的时间内，症状逐渐发
展，能承受12h以上的中毒者一般能康复
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2
麻痹性贝类毒素的测定方法
国际上麻痹性贝类毒素的检测方法较多，主要有小白鼠法、 高效液相色谱法、酶联免疫法、放射性免疫法等。
生物法(即小白鼠法)是国际惯用的麻痹性贝类毒素的测定 方法，已被美国公职分析化学家协会《公定分析方法》 （AOAO）收入，而成为最普遍应用的检验方法。
原理
根据小鼠注射贝类提取液后的死亡时间，查出 鼠单位，计算确定每100g贝肉中PSP的含量
特点：测定结果代表存在于贝肉内各种化学结 构的麻痹性贝类毒素的总量
鼠单位 mouse unit，MU：对体重为20g的小白 鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在 15min时死亡所需的最低毒素量
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8倍稀释液
0.5
1.25
16倍稀释液
1.0
1.25
16倍稀释液
0.5
0.625
1）以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳贝肉量。
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毒力MU/g 0.05 0.1 0.1 0.2 0.2 0.4 0.4 0.8 0.8 1.6
30
谢谢 ！
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31
同时，另取三只小白鼠作为对照组，注射1mL 1%吐温60生理盐水于腹腔中
观察自注射开始到24h后的小白鼠ຫໍສະໝຸດ 存活情况，求出一组三只中死亡两
只及两只以上的最小注射量
小白鼠注射腹泻性贝毒后的症状
为运动不活泼，大多呼吸异常，
致死时间长
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28
结果计算和表述
毒力的计算
使体重16-20g的小白鼠在24h死亡的毒力 为1个小白鼠单位（MU）
在国际上对腹泻性贝类毒素的检测方法较 多，主要有生物法、高效液相色谱法、酶 联免疫法、放射性免疫法等
生物法（小白鼠法，Mouse bioassay）是 最常用的一种方法
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20
腹泻性贝类毒素的测定 生物法
(SC/T 3024-2004)
原理
用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓 缩蒸干后，再以1%吐温－60生理盐水溶解残留物，注 射小白鼠观察存活情况，计算其毒力
17
结果的计算与判断
毒力单位转换
样品中的毒力单位的按公式（4）计算。 F·80µg /100g＝400MU/100g ………（3） F=5
式中： F—毒素转换系数；
80µg /100g—样品中PSP限量，µg /100g 400MU/100g—样品中PSP限量，MU/100g
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二、腹泻性贝类毒素（DSP） Diarrhetic shellfish poisoning
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样品的测定
提取
将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至 上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可
必要时将混合物或上清液以3000r/min离心5min， 或用滤纸过滤
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提取
以少量乙醚将浓缩物移入100mL磨口烧瓶中，再次减压 浓缩去除乙醚
以1%吐温60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释 到10mL。此时1mL试液相当于20g去壳贝肉的重量，以 此悬浮液做为试验原液
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小白鼠试验
振荡使试液或其稀释液成为均匀的悬浮液
将每只小白鼠称重，每三只小白鼠为一组，分别将1mL 试液注射到小白鼠腹腔中
稀释提取液时，要调节pH至2.0-4.0,逐滴加入 0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液
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结果的计算与判断
毒力的计算
根据小鼠的死亡时间，在附录B 中查出相应的每毫升注射
液的鼠单位数M
将存活鼠的死亡时间视为大于60min即相当于＜0.875MU
若试验动物重量＜19g或＞21g。则根据附录C查出重量校 正系数k
试剂和材料
丙酮（分析纯）
乙醚（分析纯） 1%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐温-60，溶于生理盐
水（0.8%NaCl）中，并定容至100.0mL
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仪器和设备
旋转蒸发器 均质器 磨口烧瓶：圆底，500 mL，250 mL，100 mL 布氏漏斗：φ100mm 分液漏斗：具塞，500 mL 天平：感量0.1g 刻度试管：10mL，具塞 冰箱：0℃-5℃和-15℃- -20℃ 注射器：1mL 注射器针头：8# 小白鼠：体重为16-20g的健康ICR系雄性小白鼠
DSP是由于双壳贝类滤食含毒的涡鞭毛藻而引起
影响较严重的地区主要是日本和欧洲沿海国家， 发病率高，引起许多国家地区的关注
受DSP中毒的症状表现为消化功能紊乱（腹泻、 呕吐、腹痛），食用含毒贝类后30分钟至几小 时出现症状，中毒者一般在3-4天康复，尚无死 亡病例
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腹泻性贝类毒素的测定方法
保留进行小鼠注射用的足量液体（约10mL）
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样品的测定
小鼠试验
选择ICR系小鼠 称重：以感量为 0.1g
的天平将小鼠称重并 记录重量
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样品的测定
小鼠试验
每个样品注射3只小鼠，每只小鼠腹腔注射1mL 提取液。注射时若有一滴以上提取液溢出，须 将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠
记录注射完毕时间，仔细观察 并用秒表记录小鼠停止呼吸时 的死亡时间（到小鼠呼出最 后一口气止）
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13
样品的测定
小鼠试验
若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间 大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样 品的毒力
若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提 取液后，再注射另一组小鼠（3只），得到 5min-7min的死亡时间
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样品的测定
提取
取 100g 样 品 于 800mL 烧 杯 中 ， 加 0.1mol/L HCl溶液100mL充分搅拌， 检 查 pH （ pH 应 为 2.0-4.0 ） 。 需 要 时，可逐滴加入5mol/L HCl溶液或 0.1mol/L NaOH溶液调整pH，加碱 时速度要慢，同时需不断搅拌，防 止局部碱化破坏毒素
数便可得到校正的死亡时间 体重＞23g、或已用过的小白鼠则不能
使用
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样品的测定
检样的制备
贝类
洗净外壳，切断闭壳
肌，开壳，用清水淋
洗内部去除泥沙及其
他外来杂质，仔细取
贝 肉 ， 收 集 沥 水 5min
（避免贝肉堆积），
捡出碎壳等杂物，将 注意：取肉时切勿
贝肉均质
割破肉体，开壳前
样品中PSP的含量按公式（1）计算。 ……………（1）
式中：
X—样品中PSP含量，每百克样品中鼠单位（MU / 100g）
Ki—每只小鼠的重量校正系数
Mi—每只小鼠的鼠单位数，鼠单位（MU）
D—样品提取液的稀释倍数
200—样品量，克（g） 精选版课件ppt
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贝类毒素的测定 生物法
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1
一、麻痹性贝类毒素（PSP）
Para1ytical shellfish poisoning
PSP中毒是最常见的食用贝类中毒 PSP由一组石房蛤毒及其衍生物组成，PSP与涡
鞭毛藻的水华有关（＞106个细胞／升） PSP在世界范围内分布 PSP中毒引起神经系统紊乱，呼吸困难，感觉
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提取
将抽提液移入500mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发 器，56℃）去除丙酮，直至在液体表面分离出油状物
将浓缩液移入分液漏斗内，以100mL－200mL乙醚和少量的 水洗下粘壁部分，轻轻振荡(不能生成乳浊液)，静置分层 后，去除水层(下层)
用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移入 250mL的磨口烧瓶中，减压浓缩(旋转蒸发器，35℃)去除 乙醚
冷冻贝类
在室温下，使冷冻的样品（带壳或去壳的）呈半冷冻 状态，按上述方法清洗、开壳、淋洗、取肉
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检样的制备
取样
可以切取中肠腺的贝类（扇贝、贻贝、牡蛎等），称取 200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细 切混合做为检样，注意不要使中肠内容物污染案板
对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小 型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，做为检样
生物法(即小白鼠法)，系采用ICR系列的小白鼠作为检验 动物，进行贝类毒素分析
生物法(即小白鼠法)优势：当使用生物法检测法时，一旦 发现超标样品，则本批样品不得食用，这说明所检测贝类
中相关的毒素含量已经影响到人们的食用安全，不适合食
用。
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麻痹性贝类毒素的测定 生物法
(SC/T 3023-2003)
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检样的制备
生鲜带壳的贝类
用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水淋洗内部去 除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，切勿割破肉 体
收集贝肉，沥水5min，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻， 贮藏备用
注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又 称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。开壳前不能 加热或用麻醉剂
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试剂
盐酸溶液：0.1 mol/L 盐酸溶液：5 mol/L 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L
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仪器和设备
均质器 天平（感量0.1g） 离心机 pH计 秒表 玻璃皿；烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等 注射器：1mL 注射器针头：8#
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小白鼠：
体重为19-21g的健康ICR系雄性小白鼠 若体重＜19g或＞21g，查表中的校正系
不能加热或用麻醉
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样品的测定
检样的制备
贝类罐头
1.将罐内所有内容物（包括贝肉组织及汁液）， 于均质器中均质
2.大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别 称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质
冷冻贝类
在室温下，使冷冻的样品（带壳或脱壳的）呈 半冷冻状态，按上述规定的方法清洗、开壳、 淋洗、取肉、均质
为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等 用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，以使 毒素分解；废弃的提取液等也应用5%的次氯酸钠溶液处 理
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提取
取处理好的中肠腺，或200g贝肉置于均质杯内， 均质2min
加3倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布 氏漏斗抽滤并收集提取液。对残渣以检样两倍 量丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液
样品中DSP毒力的计算，按表1选择24h内 死亡二只及二只以上白鼠的最小注射量 及最大稀释倍数进行计算
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注射量与毒力的关系
试验液
注射量mL
检样量1）g
原液
1.0
20
原液
0.5
10
2倍稀释液
1.0
10
2倍稀释液
0.5
5
4倍稀释液
1.0
5
4倍稀释液
0.5
2.5
8倍稀释液
1.0
2.5
窒息，心肺衰竭而在2—24小时内死亡 一般PSP中毒在0.5-2h的时间内，症状逐渐发
展，能承受12h以上的中毒者一般能康复
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2
麻痹性贝类毒素的测定方法
国际上麻痹性贝类毒素的检测方法较多，主要有小白鼠法、 高效液相色谱法、酶联免疫法、放射性免疫法等。
生物法(即小白鼠法)是国际惯用的麻痹性贝类毒素的测定 方法，已被美国公职分析化学家协会《公定分析方法》 （AOAO）收入，而成为最普遍应用的检验方法。
原理
根据小鼠注射贝类提取液后的死亡时间，查出 鼠单位，计算确定每100g贝肉中PSP的含量
特点：测定结果代表存在于贝肉内各种化学结 构的麻痹性贝类毒素的总量
鼠单位 mouse unit，MU：对体重为20g的小白 鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在 15min时死亡所需的最低毒素量
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8倍稀释液
0.5
1.25
16倍稀释液
1.0
1.25
16倍稀释液
0.5
0.625
1）以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳贝肉量。
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毒力MU/g 0.05 0.1 0.1 0.2 0.2 0.4 0.4 0.8 0.8 1.6
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谢谢 ！
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同时，另取三只小白鼠作为对照组，注射1mL 1%吐温60生理盐水于腹腔中
观察自注射开始到24h后的小白鼠ຫໍສະໝຸດ 存活情况，求出一组三只中死亡两
只及两只以上的最小注射量
小白鼠注射腹泻性贝毒后的症状
为运动不活泼，大多呼吸异常，
致死时间长
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结果计算和表述
毒力的计算
使体重16-20g的小白鼠在24h死亡的毒力 为1个小白鼠单位（MU）
在国际上对腹泻性贝类毒素的检测方法较 多，主要有生物法、高效液相色谱法、酶 联免疫法、放射性免疫法等
生物法（小白鼠法，Mouse bioassay）是 最常用的一种方法
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腹泻性贝类毒素的测定 生物法
(SC/T 3024-2004)
原理
用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓 缩蒸干后，再以1%吐温－60生理盐水溶解残留物，注 射小白鼠观察存活情况，计算其毒力
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结果的计算与判断
毒力单位转换
样品中的毒力单位的按公式（4）计算。 F·80µg /100g＝400MU/100g ………（3） F=5
式中： F—毒素转换系数；
80µg /100g—样品中PSP限量，µg /100g 400MU/100g—样品中PSP限量，MU/100g
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二、腹泻性贝类毒素（DSP） Diarrhetic shellfish poisoning