苏州蓝晓生物科技有限公司 Ni Seplife HP（IDA）说明书

Ni Seplife HP（IDA）说明书
1.产品介绍
Ni Seplife HP（IDA）层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型亲和层析介质，具有良好
的化学稳定性和生物相容性，是将亚氨基二乙酸基键合在高流速高分辨率琼脂糖凝胶过滤层析
介质上，再螯合金属离子Ni2+形成的一种亲和层析介质。

Ni Seplife HP（IDA）利用样品组分中
的组氨酸与金属离子的亲和吸附进行分离纯化，可用于分离纯化能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His标签的重组蛋白。

2.性能介绍
产品牌号Ni Seplife HP（IDA）
外观球状凝胶，无臭无味
基质Seplife6FF
形状球形
最高流速（cm/h）150
耐压（MPa）0.3
粒径（μm）25～45
离子结合量（Ni2+umol/ml）：~30
pH稳定性3~13（长期）；2~14（短期，在位清洗[CIP]）
化学稳定性在常用水相溶液中稳定：0.1M氢氧化钠；0.1M盐酸；8M尿素应用适用His标签的重组蛋白纯化
3.使用方法
3.1装柱
装柱按照标准操作规程操作。

必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

3.2平衡
用2~5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡，直至电导率、pH值等参数不变。

3.3上样
（1）样品一般溶解于pH6～8的初始缓冲液中，提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。

（2）缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐，同时最好避免巯基乙醇、DTT等还原剂。

（3）常用缓冲液有10～100mmol/L磷酸钠缓冲液、20～200mmol/LTris-HCl缓冲液等。

（4）缓冲液中一般要加入0.15～0.5mol/L的NaCl以消除离子交换作用。

（5）初次使用镍螯合琼脂糖凝胶时，推荐使用50mmol/L PBS（50mmol/L NaH2PO4，0.5 mol/L NaCl，pH7.4）作为初始缓冲液。

3.4洗脱
洗脱一般分为以下几种方法：
（1）降低pH洗脱：大多数蛋白在pH6～4会被洗脱下来（也可以在pH3～4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。

（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度（如0～0.5mol/L咪唑、0～50mmol/L组氨酸、0～2mol/L NH4Cl）。

（3）螯合剂洗脱：EDTA、EGTA等螯合剂可同金属离子产生作用力会使蛋白被洗脱下来。

但是此法不能分离不同的蛋白，会影响蛋白的吸附，导致融合蛋白无法挂柱。

备注：（1）初次使用时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑，浓度从低到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。

（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。

（3）降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使金属离子脱落，下次使用前需重新螯和金属离子。

（4）有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。

上述洗脱方法，均须在缓冲液中加入150～500mmol/L的NaCl以消除离子交换作用。

3.5再生
（1）多次使用后或需要更换螯合的金属离子时，必须将凝胶脱镍再生。

脱镍方法：首先用5～10个柱床体积的蒸馏水淋洗柱子，然后用5～10个柱床体积的100mmol/L EDTA淋洗柱子，最后用2～3个柱床体积的0.5mol/L NaCl洗掉残留的EDTA。

（2）多次使用的柱子脱镍后一般需要清洗。

清洗方法：用0.1～1.0mol/L NaOH反向清洗柱子，50cm/h保持1～2h，不仅可以去除结合强的杂质，也可以去除热源。

（3）清洗后需要重新螯合金属离子。

螯合方法：首先用2～5个柱床体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子，然后用0.1～0.3mol/L金属盐溶液过柱5～10个柱床体积以螯合金属离子，最后用5～10个柱床体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。

3.6在位清洗
（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：用2mol/L NaCl溶液反向清洗2～3个柱床体积。

（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。

（3）除去沉淀蛋白、疏水性蛋白：参照凝胶再生步骤。

3.7存储
密封保存在4~30℃（保存溶液为20%乙醇）干燥、通风、清洁处，不可冷冻；用过的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8运输
运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

4.注意事项
（1）样品与Ni Seplife HP （IDA ）必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。

（2）所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。

（3）使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

（4）洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

（5）加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。

5.订货信息产品名称货号
包装规格Ni Seplife HP （IDA ）A4025202
25ml A4025203
100ml A4025204
500ml A4025205
1L A4025206
5L A402520710L 生产日期：见标签
使用期限：在适当的贮藏条件下可贮藏5年
注册人名称/生产企业：西安蓝晓科技新材料股份有限公司
注册人住址/生产地址：西安市高新开发区锦业路135号蓝晓科技园
售后服务单位：西安蓝晓科技新材料股份有限公司
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