牛睾丸原代细胞的培养技术与大容量批量冻存试验
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E A ,. 胰 蛋 白 酶 + 0 0 E TA 以 及 2 5 DT 5 0 . 2/ D 9 5 .
苗 的 牛睾丸 约 为 7 0万 对 , 牛 的产仔 具有 相对 严格 但 的季节 性 , 同一 个 牛 场 每 天 的睾 丸 产 量 是极 其 有 且 限的 。这 给疫 苗生产 厂家批 量 收集睾 丸 以及 调剂生 产周 期等方 面 带来 了 困难 。另 外 , 常不 断 的从 外 经
牛 睾丸 原代 细胞 是 目前 生产 细胞 型猪瘟 弱毒 疫 苗 的最 主要 细胞 源 。全 国每年用 于生 产猪 瘟弱 毒疫
1 3 1 试 验设计 选 择 3对牛 睾丸作 为试 验对 象 , .. 分别用 含有 Ha kS液 的 2 5 胰 蛋 白酶 +0 0 n . . 24 , o
培 养液 样 品 , 血球计 数板 计数 。
32
中 国兽 医杂 志 2 1 0 2年 ( 4 卷 ) 1 第 8 第 期
C iee o ra o tr ayMe in hn s un1 fVeei r dc e J n i
21 0 河 南信 阳 中小 型 猪 场 大肠 杆 菌病 0年 血 清 型调 查 报 告
猪 大肠 杆菌病 是 由致病 性大 肠杆 菌引 起 的仔猪
冰箱 。
的一组 肠道 传染性 疾 病 , 见 的有仔猪 黄痢 、 猪 白 常 仔
痢 和仔 猪水 肿 3种 。 以发 生肠 炎 、 肠毒 血症 为特 征. 主要 发生在 O 0日龄 的仔 猪 。大肠 杆 菌病属 于条 ~7 件 性 致病 菌 , 当环境 因素恶 劣 或机体抵 抗 力下 降时 , 容 易 引发该 病 的发 生 , 其 是 冬季 , 气寒 冷 , 温 尤 天 气 剧变 , 保温 不 良, 空气 流通 不 畅 , 更易 引发 此病 , 造成 新生 仔猪 大批 死亡 或 生 长发 育 不 良 , 重 影 响 养 猪 严 业 的发展 , 养猪户 造成 巨大 的 经济 损失 。2 1 给 0 0年 2月到 1 1月期 间 , 我们 对 信 阳地 区存 栏 母 猪 在 1 0 0
3 ℃水 浴锅 中消化 3 n 在 超 净工 作 台 内慢 慢 将 7 0mi , 消化 液 倒 出 , 向瓶 中加 入 DME 工 作 液 进 行 中 再 M 和 , 去培 养基 , 烈振 摇 , 消化 后 的睾 丸 细胞 充 倒 强 使 分从 组织块 上分 离 出来 , 用培 养基 冲洗 玻璃珠 , 再 洗 液 即成为 细胞 悬 液 , 入 细 胞 瓶 中 , 人 3 倒 放 7C二 氧 化碳 培养箱 培 养 。
胞袋 解冻 离 心 后 轻 轻 移 入 超 净 工 作 台 内倒 出 上 清
DME 高糖 培养基 原液 , 自北京 清大 天一 科 技有 M 购
限公 司 , 液按 使用 说 明 书 配 制 , 加 入 1 血 清 原 另 0 即成 为 DME 高 糖 工 作 液 。细 胞 冻 存 液 由 4 M 5/ 9 6
1 5 分离 培养 病料 分别 接种 普通 营养 琼脂 平板 、 . 鲜血琼 脂 平 板 、 康 凯 平 板 , 3 ℃ 培 养 2 ; 麦 置 7 4 h 涂 片 , 兰染 色镜 检 , 取 培养 基 上 的典 型 单个 菌落 , 革 挑 依次 接种 于麦康 凯琼 脂平 板 、 肉汤 , 进行 纯培养 。 1 6 生化 试验 取 纯培 养菌 落接种 生 化反应 管 , . 于
头 以下 的 中小型养 猪场 开展 了猪 大肠杆 菌病 血清 型 流 行病学 调查 工作 。
1 材 料 与 方 法
mi ; 其上 清液 , 0 / n离 心 1 n 取 其 沉 n取 80 0rmi 0mi; 淀 物配 成 菌 悬 液 , 经 1 1℃ 处 理 2h 破 坏 K 抗 再 2 , 原, 即为 O抗 原 ; ℃保 存 , 用 。按 照 大 肠 杆 菌 标 4 备
10 0mL, 3 。下 转瓶 培养 。对 照组 按 传 统方 法 0 于 7C 进 行解 冻培养 。
1 5 细胞存 活率 检 测 细胞 悬 液 和 台 盼 蓝染 液 按 . 1: ( : 的 比例 混 合 , 色 2 3mi 1 V V) 染 ~ n后在 倒 置
显微 镜下 用血球 计 数 板进 行 细 胞 计数 , 区分 出活 并
1 材 料 与 方 法
好 的去 皮睾 丸 称 重 , 后 将 睾 丸 组 织 剪 成 厚 约 0 2 然 . c 的碎 片 , 入一个 装有 玻璃 珠并 经高 温灭 菌处 理 m 转
的抽滤 瓶 中 , 继续 向抽 滤瓶 中加 入 细 胞 消化 液 直 至
浸 没全 部 玻 璃 珠 及 其 上 放 置 的 睾 丸 组 织 , 置 于 放
11 试 验 试 剂 .
Ha k S液 : 标 准 配 方 自配 。 n 按
1 4 冻存 与解 冻操作 当睾 丸细胞 分离 后 , 照 每 . 按 3 5g睾 丸组织 加 入 2 0mL冻存 液 的标 准制 成 细 . 0
胞悬 液 , 装入 冻存袋 中 , 分 每袋 2 0mL, 0 将其 分别 放 入一 适 当大小 的泡 沫 箱 内和 铁盒 内 , 放 入 ~8 ℃ 并 O 的冰 箱 中让其 自然 冻结 。另取 少量 细胞 悬液放 人 若 干个 冻存 管 , 照 常规冻 存方法 作检 测备 用样 品 。 按 分别 在细 胞冻 存 后 的 第 3 、 2 、 6 O 1 O 3 0天 取 部 分 细胞 进行 解冻 。将 泡沫 箱 内的细胞 袋 和铁盒 中的细
20 。 2 份
准 抗 O血 清 凝 集 试 验 使 用说 明 书操 作 。鉴 定 发 病
场 猪大 肠杆 菌致病 菌株 血清 型 。
1 8 致 病性 试验 将 鉴 定 的大 肠 埃 希 氏 菌分 别 接 . 种 于 营养 肉 汤 培 养 基 ,7C振 荡 培 养 , 0 / n 3。 40 0r mi 离 心 2 n 用等 量灭 菌 生理 盐 水 配制 悬 浮 液作 攻 Omi , 毒 用 。将 2 7只 小 鼠 , 为 9组 , 组 3只 。8个 组 分 每 为试验 组 , 个 组作 为对 照 , 验 组 腹腔 注 射悬 浮 液 1 试
收 稿 日期 :0 01—2 2 1 ~22 基 金 项 目: 汉 市 财 政 局 创 新 岗位 项 目( c2 0 0 0 3 武 yx 0 9 1 1 ) 作 者 简介 : 向敏 (9 1) 女 , 医 师 , 士 , 18~, 兽 硕 主要 从 事 细 胞 培 养 和 病 毒检 测研 究 , — i ml 6 9 1 6 cr E mal :x 1 0 @ 2 .o n
3 ℃培养 , 7 按说 明 书进行 生化 反应试 验 。
1 7 血 清型 鉴定 将经 生 理 生 化 试 验鉴 定 为 大 肠 . 杆 菌的纯 培养 菌 株 于普 通 琼 脂 培 养 , 2mL . 用 05
石 碳酸 生理 盐 水 洗 下 以后 , 2 0 0 r mi 以 0 / n离 心 5
11 病 料 采 自 2 1 . 0 0年 以来 河南 省信 阳地 区平 桥 区 、 河 区 、 山县 、 山 县 、 狮 ’ 罗 光 固始 县 、 川 县 、 县 潢 新
1 6 发 生猪 大肠杆 菌病 的 中小 型 养 猪场 ; 中 , 5个 其 肛 门拭子 1 0份 , 猪空 肠和小 肠 内容物 l O份 , 计 2 病 O 共
液, D 用 ME 工 作 液 重 悬 细 胞 , 样 计 数 , 重 悬 M 取 将
细胞 液 导 入 1 0 0 0 0 mL 的 转 瓶 中 , 加 培 养 基 至 补
手手 指 尖离切 口约 lm 处 结 扎 , c 用浸 满 碘 酊 的棉 花 条沿 切 口向后 将整 个 阴囊包 裹 , 入采 样袋 中 , 人 装 放 装有 冰 袋 的泡 沫箱 内存 放备 用 。 1 3 原 代细 胞 制作 .
皮, 继续 用 含 双 抗 的 Ha k S液 洗 涤 1 2次 , 洗 n ~ 将
于生 产猪瘟 疫 苗 的牛睾 丸细胞 最好 是经 检测 无污 染 并能 产 出高效 价 病 毒 的合 格 细 胞 。但 是 , 睾 丸 细 牛 胞传 代次 数是 有 限 的 。统 计 数据 表5代 次_ 。很 明 显 , ] ] 以现 有 的冻 存 管冻存 技 术 冻存 牛 睾 丸 细胞 等 待 检 测 结果 , 再将 其解 冻用 于 大容 量 转 瓶 培 养 是不 可 能 的 , 只有 采 取大 容量批 量 冻存技 术建 立可 靠 的健 康 牛睾 丸原 代 细胞贮 备库 才 可 以做 到这 一点 , 目前 , 内外 尚无 国 类 似 的成熟技 术 。本试 验 从 传 统 制作 方法 的改 进 , 胰 酶 的消化 以及 大容量 批量 冻存 等方 面改 进牛 睾丸 细 胞 的原代 培养 技术 , 研 究猪 瘟 细 胞 型 弱毒 疫 苗 为 的规 范化生 产 , 提供技 术参 考 。
界送 入生鲜 睾 丸组 织 , 加 了药 品生 产 质 量 管 理 规 增 范( GMP 车间 的污染 频率 , ) 因此 , 入 GMP车 间用 进
胰蛋 白酶 三种不 同消 化方 法分 离牛 睾丸 细胞 。 1 3 2 操 作方 法 从样 品袋 中取 出阴囊 , .. 在超 净工 作 台 内无 菌操 作 , 眼科 镊 子 夹住 露 于 阴囊 切 口外 用 的附睾或 睾 丸 系 膜 组 织 , 睾 丸 放 入 盛 有 Ha k S 将 n 液 的平皿 中 , 含有 双 抗 的 Ha k S 反复 洗涤 , 用 n 液 再 将 睾丸放 入另 一 干燥 平 皿 内, 眼科 剪 剪 去 睾 丸 表 用
DME 原液 、 5 新 生 牛 血 清 、 O D M 4 1 MS 混合 均 O 匀制 得 。分 别 装 入 2 0 mL血 清 袋 中 , K 0 8 GY 剂 量
下辐 照 5h 一2 ℃冻存 备用 。 , O 1 2 牛 睾丸 的采集 刚 出生 的奶 公牛 , . 运入 洁净 手 术室 , 照常规 操作 快速 将 阴囊皮 肤环切 , 按 同时切 断 皮下 筋膜 、 睾 、 管 等 组 织 , 一 根细 绳 在 术 者 两 附 血 用
刘 涛 ,王 瑞 , 曲哲 会 ,连 慧 香 ,魏 爱枝
( 阳 农 业 高 等 专 科 学 校 , 南 信 阳 4 40 ) 信 河 6 0 0
中图 分 类 号 :8 2 6 。 ¥ 5 . 1。 2
文 献 标 识 码 : B
文 章 编 号 :5 96 0 ( 02 0 —0 20 0 2 —0 5 2 1 ) 10 3 —2
细胞 和死 细胞 以计算 细胞 活力 。 1 6 细胞 贴壁 率检 测 及 细 胞形 态学 观 察 转 瓶培 . 养 8h后 , 在转 瓶 显 微 镜 下 观察 细 胞 形 态 并 取 少 量
通讯作者 : 高其 双,E malgo i un 5 8 iac m — i:aqs a g 1 @s .o h n
3 0
中 国兽 医杂 志 2 1 0 2年 ( 4 第 8卷 ) 1 第 期
牛 睾 丸原 代 细胞 的培 养 技 术 与大 容 量 批量 冻 存 试 验
向 敏 ,陈 志 华 ,高其 双 ,黄 海 军 ,陶 弼 菲 ,占才耀 ,王连 芳 ,李 杰
( 北 省 武 汉 市 畜牧 兽 医科 学 研 究 所 , 北 武 汉 4 0 6 ) 湖 湖 30 5 中图 分 类 号 : 9 Q2 1 文 献标 识 码 : B 文 章编 号 :5 960 (0 2 o一0 00 0 2—0 5 2 1 ) i0 3—2
苗 的 牛睾丸 约 为 7 0万 对 , 牛 的产仔 具有 相对 严格 但 的季节 性 , 同一 个 牛 场 每 天 的睾 丸 产 量 是极 其 有 且 限的 。这 给疫 苗生产 厂家批 量 收集睾 丸 以及 调剂生 产周 期等方 面 带来 了 困难 。另 外 , 常不 断 的从 外 经
牛 睾丸 原代 细胞 是 目前 生产 细胞 型猪瘟 弱毒 疫 苗 的最 主要 细胞 源 。全 国每年用 于生 产猪 瘟弱 毒疫
1 3 1 试 验设计 选 择 3对牛 睾丸作 为试 验对 象 , .. 分别用 含有 Ha kS液 的 2 5 胰 蛋 白酶 +0 0 n . . 24 , o
培 养液 样 品 , 血球计 数板 计数 。
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中 国兽 医杂 志 2 1 0 2年 ( 4 卷 ) 1 第 8 第 期
C iee o ra o tr ayMe in hn s un1 fVeei r dc e J n i
21 0 河 南信 阳 中小 型 猪 场 大肠 杆 菌病 0年 血 清 型调 查 报 告
猪 大肠 杆菌病 是 由致病 性大 肠杆 菌引 起 的仔猪
冰箱 。
的一组 肠道 传染性 疾 病 , 见 的有仔猪 黄痢 、 猪 白 常 仔
痢 和仔 猪水 肿 3种 。 以发 生肠 炎 、 肠毒 血症 为特 征. 主要 发生在 O 0日龄 的仔 猪 。大肠 杆 菌病属 于条 ~7 件 性 致病 菌 , 当环境 因素恶 劣 或机体抵 抗 力下 降时 , 容 易 引发该 病 的发 生 , 其 是 冬季 , 气寒 冷 , 温 尤 天 气 剧变 , 保温 不 良, 空气 流通 不 畅 , 更易 引发 此病 , 造成 新生 仔猪 大批 死亡 或 生 长发 育 不 良 , 重 影 响 养 猪 严 业 的发展 , 养猪户 造成 巨大 的 经济 损失 。2 1 给 0 0年 2月到 1 1月期 间 , 我们 对 信 阳地 区存 栏 母 猪 在 1 0 0
3 ℃水 浴锅 中消化 3 n 在 超 净工 作 台 内慢 慢 将 7 0mi , 消化 液 倒 出 , 向瓶 中加 入 DME 工 作 液 进 行 中 再 M 和 , 去培 养基 , 烈振 摇 , 消化 后 的睾 丸 细胞 充 倒 强 使 分从 组织块 上分 离 出来 , 用培 养基 冲洗 玻璃珠 , 再 洗 液 即成为 细胞 悬 液 , 入 细 胞 瓶 中 , 人 3 倒 放 7C二 氧 化碳 培养箱 培 养 。
胞袋 解冻 离 心 后 轻 轻 移 入 超 净 工 作 台 内倒 出 上 清
DME 高糖 培养基 原液 , 自北京 清大 天一 科 技有 M 购
限公 司 , 液按 使用 说 明 书 配 制 , 加 入 1 血 清 原 另 0 即成 为 DME 高 糖 工 作 液 。细 胞 冻 存 液 由 4 M 5/ 9 6
1 5 分离 培养 病料 分别 接种 普通 营养 琼脂 平板 、 . 鲜血琼 脂 平 板 、 康 凯 平 板 , 3 ℃ 培 养 2 ; 麦 置 7 4 h 涂 片 , 兰染 色镜 检 , 取 培养 基 上 的典 型 单个 菌落 , 革 挑 依次 接种 于麦康 凯琼 脂平 板 、 肉汤 , 进行 纯培养 。 1 6 生化 试验 取 纯培 养菌 落接种 生 化反应 管 , . 于
头 以下 的 中小型养 猪场 开展 了猪 大肠杆 菌病 血清 型 流 行病学 调查 工作 。
1 材 料 与 方 法
mi ; 其上 清液 , 0 / n离 心 1 n 取 其 沉 n取 80 0rmi 0mi; 淀 物配 成 菌 悬 液 , 经 1 1℃ 处 理 2h 破 坏 K 抗 再 2 , 原, 即为 O抗 原 ; ℃保 存 , 用 。按 照 大 肠 杆 菌 标 4 备
10 0mL, 3 。下 转瓶 培养 。对 照组 按 传 统方 法 0 于 7C 进 行解 冻培养 。
1 5 细胞存 活率 检 测 细胞 悬 液 和 台 盼 蓝染 液 按 . 1: ( : 的 比例 混 合 , 色 2 3mi 1 V V) 染 ~ n后在 倒 置
显微 镜下 用血球 计 数 板进 行 细 胞 计数 , 区分 出活 并
1 材 料 与 方 法
好 的去 皮睾 丸 称 重 , 后 将 睾 丸 组 织 剪 成 厚 约 0 2 然 . c 的碎 片 , 入一个 装有 玻璃 珠并 经高 温灭 菌处 理 m 转
的抽滤 瓶 中 , 继续 向抽 滤瓶 中加 入 细 胞 消化 液 直 至
浸 没全 部 玻 璃 珠 及 其 上 放 置 的 睾 丸 组 织 , 置 于 放
11 试 验 试 剂 .
Ha k S液 : 标 准 配 方 自配 。 n 按
1 4 冻存 与解 冻操作 当睾 丸细胞 分离 后 , 照 每 . 按 3 5g睾 丸组织 加 入 2 0mL冻存 液 的标 准制 成 细 . 0
胞悬 液 , 装入 冻存袋 中 , 分 每袋 2 0mL, 0 将其 分别 放 入一 适 当大小 的泡 沫 箱 内和 铁盒 内 , 放 入 ~8 ℃ 并 O 的冰 箱 中让其 自然 冻结 。另取 少量 细胞 悬液放 人 若 干个 冻存 管 , 照 常规冻 存方法 作检 测备 用样 品 。 按 分别 在细 胞冻 存 后 的 第 3 、 2 、 6 O 1 O 3 0天 取 部 分 细胞 进行 解冻 。将 泡沫 箱 内的细胞 袋 和铁盒 中的细
20 。 2 份
准 抗 O血 清 凝 集 试 验 使 用说 明 书操 作 。鉴 定 发 病
场 猪大 肠杆 菌致病 菌株 血清 型 。
1 8 致 病性 试验 将 鉴 定 的大 肠 埃 希 氏 菌分 别 接 . 种 于 营养 肉 汤 培 养 基 ,7C振 荡 培 养 , 0 / n 3。 40 0r mi 离 心 2 n 用等 量灭 菌 生理 盐 水 配制 悬 浮 液作 攻 Omi , 毒 用 。将 2 7只 小 鼠 , 为 9组 , 组 3只 。8个 组 分 每 为试验 组 , 个 组作 为对 照 , 验 组 腹腔 注 射悬 浮 液 1 试
收 稿 日期 :0 01—2 2 1 ~22 基 金 项 目: 汉 市 财 政 局 创 新 岗位 项 目( c2 0 0 0 3 武 yx 0 9 1 1 ) 作 者 简介 : 向敏 (9 1) 女 , 医 师 , 士 , 18~, 兽 硕 主要 从 事 细 胞 培 养 和 病 毒检 测研 究 , — i ml 6 9 1 6 cr E mal :x 1 0 @ 2 .o n
3 ℃培养 , 7 按说 明 书进行 生化 反应试 验 。
1 7 血 清型 鉴定 将经 生 理 生 化 试 验鉴 定 为 大 肠 . 杆 菌的纯 培养 菌 株 于普 通 琼 脂 培 养 , 2mL . 用 05
石 碳酸 生理 盐 水 洗 下 以后 , 2 0 0 r mi 以 0 / n离 心 5
11 病 料 采 自 2 1 . 0 0年 以来 河南 省信 阳地 区平 桥 区 、 河 区 、 山县 、 山 县 、 狮 ’ 罗 光 固始 县 、 川 县 、 县 潢 新
1 6 发 生猪 大肠杆 菌病 的 中小 型 养 猪场 ; 中 , 5个 其 肛 门拭子 1 0份 , 猪空 肠和小 肠 内容物 l O份 , 计 2 病 O 共
液, D 用 ME 工 作 液 重 悬 细 胞 , 样 计 数 , 重 悬 M 取 将
细胞 液 导 入 1 0 0 0 0 mL 的 转 瓶 中 , 加 培 养 基 至 补
手手 指 尖离切 口约 lm 处 结 扎 , c 用浸 满 碘 酊 的棉 花 条沿 切 口向后 将整 个 阴囊包 裹 , 入采 样袋 中 , 人 装 放 装有 冰 袋 的泡 沫箱 内存 放备 用 。 1 3 原 代细 胞 制作 .
皮, 继续 用 含 双 抗 的 Ha k S液 洗 涤 1 2次 , 洗 n ~ 将
于生 产猪瘟 疫 苗 的牛睾 丸细胞 最好 是经 检测 无污 染 并能 产 出高效 价 病 毒 的合 格 细 胞 。但 是 , 睾 丸 细 牛 胞传 代次 数是 有 限 的 。统 计 数据 表5代 次_ 。很 明 显 , ] ] 以现 有 的冻 存 管冻存 技 术 冻存 牛 睾 丸 细胞 等 待 检 测 结果 , 再将 其解 冻用 于 大容 量 转 瓶 培 养 是不 可 能 的 , 只有 采 取大 容量批 量 冻存技 术建 立可 靠 的健 康 牛睾 丸原 代 细胞贮 备库 才 可 以做 到这 一点 , 目前 , 内外 尚无 国 类 似 的成熟技 术 。本试 验 从 传 统 制作 方法 的改 进 , 胰 酶 的消化 以及 大容量 批量 冻存 等方 面改 进牛 睾丸 细 胞 的原代 培养 技术 , 研 究猪 瘟 细 胞 型 弱毒 疫 苗 为 的规 范化生 产 , 提供技 术参 考 。
界送 入生鲜 睾 丸组 织 , 加 了药 品生 产 质 量 管 理 规 增 范( GMP 车间 的污染 频率 , ) 因此 , 入 GMP车 间用 进
胰蛋 白酶 三种不 同消 化方 法分 离牛 睾丸 细胞 。 1 3 2 操 作方 法 从样 品袋 中取 出阴囊 , .. 在超 净工 作 台 内无 菌操 作 , 眼科 镊 子 夹住 露 于 阴囊 切 口外 用 的附睾或 睾 丸 系 膜 组 织 , 睾 丸 放 入 盛 有 Ha k S 将 n 液 的平皿 中 , 含有 双 抗 的 Ha k S 反复 洗涤 , 用 n 液 再 将 睾丸放 入另 一 干燥 平 皿 内, 眼科 剪 剪 去 睾 丸 表 用
DME 原液 、 5 新 生 牛 血 清 、 O D M 4 1 MS 混合 均 O 匀制 得 。分 别 装 入 2 0 mL血 清 袋 中 , K 0 8 GY 剂 量
下辐 照 5h 一2 ℃冻存 备用 。 , O 1 2 牛 睾丸 的采集 刚 出生 的奶 公牛 , . 运入 洁净 手 术室 , 照常规 操作 快速 将 阴囊皮 肤环切 , 按 同时切 断 皮下 筋膜 、 睾 、 管 等 组 织 , 一 根细 绳 在 术 者 两 附 血 用
刘 涛 ,王 瑞 , 曲哲 会 ,连 慧 香 ,魏 爱枝
( 阳 农 业 高 等 专 科 学 校 , 南 信 阳 4 40 ) 信 河 6 0 0
中图 分 类 号 :8 2 6 。 ¥ 5 . 1。 2
文 献 标 识 码 : B
文 章 编 号 :5 96 0 ( 02 0 —0 20 0 2 —0 5 2 1 ) 10 3 —2
细胞 和死 细胞 以计算 细胞 活力 。 1 6 细胞 贴壁 率检 测 及 细 胞形 态学 观 察 转 瓶培 . 养 8h后 , 在转 瓶 显 微 镜 下 观察 细 胞 形 态 并 取 少 量
通讯作者 : 高其 双,E malgo i un 5 8 iac m — i:aqs a g 1 @s .o h n
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中 国兽 医杂 志 2 1 0 2年 ( 4 第 8卷 ) 1 第 期
牛 睾 丸原 代 细胞 的培 养 技 术 与大 容 量 批量 冻 存 试 验
向 敏 ,陈 志 华 ,高其 双 ,黄 海 军 ,陶 弼 菲 ,占才耀 ,王连 芳 ,李 杰
( 北 省 武 汉 市 畜牧 兽 医科 学 研 究 所 , 北 武 汉 4 0 6 ) 湖 湖 30 5 中图 分 类 号 : 9 Q2 1 文 献标 识 码 : B 文 章编 号 :5 960 (0 2 o一0 00 0 2—0 5 2 1 ) i0 3—2