实验7-2丙二醛含量测定

实验7-2丙⼆醛含量测定
实验7-2 丙⼆醛（MDA）含量测定
【实验⽬的】
1、掌握植物组织中丙⼆醛含量测定的原理和⽅法。

2、了解丙⼆醛含量测定的意义。

【实验原理】
植物器官在衰⽼或逆境胁迫时，会发⽣脂质过氧化作⽤，丙⼆醛（MDA）是其终产物之⼀，其含量可以反映脂类过氧化程度和植物遭受逆境伤害的程度。

在⾼温和酸性条件下，丙⼆醛与硫代巴⽐妥酸（TBA）反应，⽣成红棕⾊的3，5，5-三甲基恶唑-2，4-⼆酮（三甲川），在532nm处有最⼤吸收波长。

植物在胁迫条件下可溶性糖增加，⽽糖与硫代巴⽐妥酸的反应产物在532nm也有吸收（最⼤吸收波长为450nm），因此测定植物组织中丙⼆醛含量时需排除可溶性糖的⼲扰。

采⽤双组分分光光度法可分别求出丙⼆醛和可溶性糖的含量。

蔗糖与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为85.40和7.40；丙⼆醛与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为0和155000，根据Lambert-Beer定律，列出⼆元⼀次⽅程：
A450=C1×85.4
A532- A600=C1×7.4+ C2×155000
解此⽅程得：
C1（mmol/L）=11.71 A450
C2（µmol/L）=6.45（A532- A600）-0.56 A450 （1）其中：C1——可溶性糖的浓度
C2——丙⼆醛的浓度
A450、 A532、A600分别表⽰450、532和600nm波长下的吸光值。

【实验器材与试剂】
1、实验材料受逆境胁迫的植物叶⽚或衰⽼的植物器官、正常植物叶⽚或器官
2、实验试剂 10%的三氯⼄酸（TCA）（称取10克TCA蒸馏⽔稀释定容⾄100mL）、⽯英砂、0.6%的硫代巴⽐妥酸（称取0.6克硫代巴⽐妥酸先⽤少量1mol/L氢氧化钠溶解，再⽤10%三氯⼄酸定容⾄100mL）
3、实验仪器分光光度计、离⼼机、研钵、电炉、试管、量筒、天
平、移液管等
【实验步骤】
1、MDA的提取
称取材料1g，剪碎，先加⼊2mL10%的三氯⼄酸和少量⽯英砂研磨，再加⼊8mL10%的三氯⼄酸充分研磨后，4000r/min离⼼10min，上清液即为样品提取液。

2、显⾊反应及测定
吸取2mL提取液，加⼊2mL0.6%的硫代巴⽐妥酸，混匀，于沸⽔浴中反应15min，迅速冷却后离⼼。

以2mL蒸馏⽔代替提取液作为对照。

3、测定
取上清液测定532nm 、450nm和600nm处的OD值。

4、计算
先按公式（1）计算样品提取液中丙⼆醛的含量，再根据植物组织的鲜重计算丙⼆醛的含量（µmol/gFW）。

【注意事项】
1、MDA-TBA显⾊反应的时间最好控制在10-15min之间。

时间太短或
太长均会引起532nm
下的光吸收值下降。

2、⼀定要充分研磨样品以保证MDA提取完全。

【实验作业】
1、正常植物组织与胁迫条件下植物组织的丙⼆醛含量相⽐有什么变化，分析其原因。

2、为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？
3、有哪些因素会影响植物组织中丙⼆醛含量的测定？
【参考⽂献】
1.张志良等主编.植物⽣理学实验指导.⾼等教育出版社,北京,2009.
2.郝再彬等主编. 植物⽣理学实验.哈尔滨⼯业⼤学出版社,哈尔滨,2004.
3.李合⽣主编. 植物⽣理⽣化实验原理和技术. ⾼等教育出版社,北京,2000.。