大黄素治疗类风湿关节炎的作用机制：基于网络药理学方法

类风湿关节炎（RA ）是一种慢性炎症性自身免疫疾病，国内相关指南建议，RA 患者一经确诊，应首选传统合成DMARDs 治疗，如甲氨蝶呤、来氟米特等［1-2］。

近20年来，生物制剂如肿瘤坏死因子（TNF ）抑制剂、共刺
激调节剂，白细胞介素6（IL-6）抑制剂和B 细胞消耗药
物等的出现改变了原有的治疗策略，根本上改变了类风
湿关节炎的疾病进程［3］。

但上述药物因不良反应或是受患
者身体条件的限制，其临床效应甚少达到预期效果［4］。

中药药物应用限制及副作用相对较少［5］
，且一些中药提取物如雷公藤红素已被证实从多种途径对类风湿
关节炎有治疗作用［6］。

植物大黄为中医传统药物之一，有研究证实，中药大黄及大黄提取物具有抗肿瘤、抗炎
Therapeutic mechanism of emodin for treatment of rheumatoid arthritis:a network pharmacology-based analysis
CAO Chunhao,ZENG Li,RONG Xiaofeng
Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China
摘要：目的基于网络药理学方法，运用在线数据库研究大黄素治疗类风湿关节炎的作用机制，并在成纤维样滑膜细胞细胞系中
进行验证。

方法通过Targetnet 、SwissTargetPrediction 、Genecards 、DisGeNET 和OMIM 数据库，分别获得大黄素作用靶点及类风湿关节炎相关基因，并构建靶点蛋白质相互作用网络（PPI ），对交集基因进行Gene Ontology 与KEGG 通路富集分析。

运用AutoDock4.2.6软件模拟分子对接。

将大黄素与经TNF-α诱导的MH7A 细胞共同培养，培养分组情况：空白对照组、模型组（TNF-α组，10ng/mL ）、药物干预组（TNF-α10ng/mL+Emodin20、40、60、80、100μmol/L ）。

采用CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞周期实验探究大黄素对MH7A 细胞增殖的抑制作用。

通过Western blot 观察其NF-κB 通路蛋白表达情况，通过Rt-PCR 实验分析CAPS3、PTGS2（COX2）、MAPK14基因的表达。

结果获得大黄素和类风湿关节炎交集基因32个，其中心节点为CAPS3、ESR1、MAPK14等，主要涉及NF-κB 信号通路等。

分子对接提示大黄素与核心靶点能较好的结合。

实验结果显示，大黄素能明显抑制MH7A 细胞过度增殖（P <0.05）。

Western blot 结果显示，TNF-α诱导的MH7A 细胞NF-κB 蛋白表达水平升高（P <0.01），而予以大黄素80μmol/L 干预后I κB α、p-NF-κB 表达水平均有所降低（P <0.01）。

Rt-PCR 结果显示，TNF-a 组COX2、P38MAPK （MAPK14）核心基因的表达量明显上调，而大黄素（80μmol/L ）处理后各组COX2、P38MAPK14的mRNA 表达下降mRNA 的表达下降（P <0.01），凋亡相关基因CASP3上调。

结论大黄素通过调控细胞增殖凋亡，调节NF-κB 等信号通路等发挥治疗类风湿关节炎作用。

关键词：网路药理；大黄素；类风湿关节炎；NF-κB 通路
Abstract:Objective To investigate the therapeutic mechanism of emodin in the treatment of rheumatoid arthritis (RA)using a network pharmacology-based method and validate this mechanism in a fibroblast-like synovial cell line.Methods The PubChem,Targetnet,SwissTargetPrediction,Genecards,OMIM,and DisGeNET databases were searched to obtain emodin targets and RA-related genes.A protein-protein interaction (PPI)network was constructed,and GO and KEGG pathway enrichment analyses were carried out to analyze the intersection genes.AutoDock4.2.6software was used to simulate molecular docking between emodin and its candidate targets.In a cultured fibroblast-like synovial cell line (MH7A),the effects of different concentrations of emodin on proliferation of tumor necrosis factor-α(TNF-α)-induced cells were investigated using CCK-8assay,cell scratch experiment and flow cytometry;the changes in the expressions of nuclear factor-κB (NF-κB)pathway proteins were detected using Western blotting,and the mRNA expressions of the hub genes were examined with RT-qPCR.Results We identified 32intersection genes of emodin and RA,and the key targets including CAPS3,ESR1,and MAPK14involved mainly the NF-κB signaling pathway.Cell scratch experiment and flow cytometry demonstrated a strong inhibitory effect of emodin on MH7A cell proliferation.Treatment with TNF-αsignificantly increased the cellular expressions of the NF-κB pathway proteins,which were obviously lowered by treatment with 80μmol/L emodin.The results of RT-qPCR showed that TNF-αtreatment obviously up-regulated the expressions of the hub genes COX2and P38MAPK,and emodin treatment significantly down-regulated the expressions of MAPK and PTGS2and up-regulated the expression of CASP3.Conclusion The therapeutic effect of emodin on RA is mediated mainly
through regulation of cell proliferation,apoptosis,and the NF-κB pathway.
Keywords:network pharmacology;emodin;rheumatoid arthritis;nuclear factor-κB signaling pathway
收稿日期：2022-01-19
基金项目：重庆市科委基础研究与前沿探索专项（cstc2018jcyjAX0325）作者简介：曹春浩，在读硕士研究生，E-mail:******************* 通信作者：荣晓凤，主任医师，硕士生导师，E-mail:*************
J South Med Univ,2022,42(6):913-921doi 10.12122/j.issn.1673-4254.2022.06.16
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等药理作用［7,8］。

大黄素是一种天然蒽醌衍生物，是从大黄根茎中分离得到的活性化合物衍生物，在中医理论中具有“泻下”作用。

现代药理证实，大黄还具有抗病毒、抗癌、血管舒张、免疫抑制、抗炎和促进伤口愈合等作用［9,10］。

我们前期研究已证实，大黄素可通过抑制ERK1/2、p38MAPK 表达从而抑制滑膜成纤维细胞增殖，起到抗RA 的作用［11］。

此外，有研究从HIF-1α-iNOS-NO 信号通路论证了大黄素对RA 的治疗作用［12］。

但这些研究仅从某一通路或是某一方面探讨大黄素抗RA 的作用，缺乏对其机制的系统研究。

因此，本研究采用网络药理学方法与实验验证相结合，以系统生物学理论为基础，旨在系统分析大黄素治疗类风湿关节炎的潜在机制和治疗靶点，为进一步探究大黄素抗风湿作用提供新的思路［13］。

1材料和方法1.1数据收集1.1.1大黄素药物代谢动力学信息收集在TCMSP 网站［14］及Pubmed 中，以“Emodin ”为检索词，获取大黄素基本理化性质及药物代谢动力学数据，并从PubChem 数据库（http://pubchem.ncbi.nlm.nih ）中获得大黄素的SMILES 结构式，用于随后的靶点预测［15］。

1.1.2大黄素和类风湿关节炎相关基因分析Swiss Target Prediction 数据库是预测蛋白质小分子靶点的网络工具［16］。

将大黄素的SMILES 结构导入Swiss Target Prediction 数据库并以可能性（probability>0）为限制条件进行筛选。

利用GeneCards ［17］（https:///），DisGeNet ［18］（/）和OMIM ［19］（https:///）数据库预测人类基因功能。

以“Rheumatoid Arthritis ”为关键词，物种限定为“Homo sapiens ”在上述数据库中检索，将交集基因数目及占比在Venny2.1.1软件中展示（https://b.csic.es/tools/venny/index.html ）。

1.2蛋白质互作网络构建及中心节点筛选利用网络分析在线平台String （https:///）进行网络拓扑分析［20］。

将RA 与大黄素的相关靶点上传至String ，选用Multiple proteins 工具，限定物种为人类，置信区间为大于0.4，获得蛋白质靶点互作网络（PPI ）。

使用cytoscape3.7.0［21］的BisoGenet 插件通过”Mergre ”功能对两个PPI 网络取交集，获得交集网络。

分别使用“analyze network ”功能和CytoNCA 插件对自由度、介度中心性和接近中心性等进行分析，筛选出中心节点。

1.3Gene Ontology （GO ）和KEGG 通路富集分析利用GO 分析基因和蛋白质的功能富集。

KEGG 途径富集分析通过在数据集中识别富集的生化途径，为不同的基因和蛋白功能提供深入解释。

用R 包“clusterProfiler ”对共同靶点进行GO 、KEGG 的富集分析。

以P <0.05为条件，筛选出GO 分析中前10条的生物过程、细胞成分和分子功能，将结果用R 语言进行可视化处理。

1.4大黄素关键靶点与靶蛋白的分子对接
将1.2中获得的关键靶点与大黄素进行分子对接，分子对接能有效确定与靶受体部位空间、作用力和电性特征匹配小分子化合物，预测与靶点结合的可能性。

首先
将潜在关键治疗靶点输入蛋白质结构数据库（PDB ）［22］
，下载靶点蛋白的3D 结构，运用AutoDock 软件，选择默认设置，设置Grid Box 为整个蛋白分子，运行Autodock
vina 进行分子对接，以验证靶点与化合物的结合活性，
得到结合能。

1.5主要试剂DMEM 高糖培养基、胎牛血清（FBS ）（Gibco ）；二甲亚砜（DMSO ）、流式周期相关试剂盒（赛维尔生物）；大黄素（纯度大于98%）（西安昊轩生物科技有限公司）。

CCK8试剂盒（上海七海复泰生物科技有限公司）；Western blot 相关BCA 试剂盒及硝酸纤维膜（PVDF 膜）
（碧云天）。

β-actin 蛋白抗体、p-I κB α抗体、I κB α抗体、NF-κB 抗体、P-NF-κB 抗体、Histone H3抗体、Anti-rabbit IgG （HRP-linked ）（CST ）；PCR 相关试剂及引物（Takara ）。

1.6细胞培养及分组处理本研究选用人类风湿关节炎成纤维样滑膜MH7A
细胞株［23］
（Biovector NTCC ）即类风湿样成纤维滑膜细
胞（RA-FLS ）经SV40T 基因转染后转化而成的永生细胞株。

将细胞置于含20%胎牛血清的DMEM 高糖培养基中，并在含5%CO 2及37℃的环境下孵育。

培养分组情况：空白对照组、模型组（TNF-α,10ng/mL ）、药物干预组（TNF-α10ng/mL+Emodin 20、40、60、80、100μmol/L ）。

1.7CCK-8法检测人成纤维样滑膜细胞增殖抑制率将MH7A 细胞常规消化后，取4500细胞加入96孔板，培养24h 后，加入终浓度分别0、20、40、60、80、
100μmol/L 大黄素10μL ，因大黄素需用DMSO 助溶，故对照组加入终体积分数为0.1%的DMSO 。

各组培养6、12、24h 后加入CCK-8溶液10μL/孔，37℃孵育3h ，酶标仪测定吸光度A 450nm ，重复3次/孔。

根据公式计算：抑制率=1-加药组A 450nm /对照组A 450nm 。

1.8蛋白免疫印迹检测取经分组培养后的空白对照组、模型组及80μmol/L 大黄素药物干预组的MH7A 细胞，吸弃细胞培养基，用预冷的PBS 清洗2次，向细胞中加入蛋白质裂解液，收集裂解后的细胞，按12000r/min 、4℃离心10min ，
收集上清于EP 管内。

用BCA 试剂盒测定样品蛋白含
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量，计算出各样品的上样量，加入上样缓冲液混匀后100℃变性5min。

常规行SDS-PAGE电泳后，转至PVDF膜上，用现配的5%的脱脂奶粉TBS-T溶液封闭并常温孵育45min。

后将膜置于加入了于TBS溶液稀释的一抗（p-IκBα抗体、IκBα抗体、NF-κB、P-NF-κB，均按1∶1000稀释）中4℃过夜。

次日用TBS-T洗涤10min×3次，加入二抗（1∶5000）孵育1h（室温避光）。

加入ECL 发光剂后用凝胶成像系统拍照成像。

用图像分析系统（重庆，道益）进行图像扫描及灰度分析图像采集。

1.9细胞划痕实验检测各组细胞增殖能力
按1.6中实验分组，在六孔板背后每隔0.5~1cm横穿过孔划5条平行线。

传代细胞以1×105/mL的密度均匀接种于六孔板中，2mL/孔。

采用200μL枪头垂直于孔板背后的横线划痕。

后用PBS缓冲液进行3次冲洗。

在培养0、24h后进行划痕实验观察并拍照。

1.10流式细胞周期检测
取对数生长期的MH7A细胞，按细胞密度1×108/L 种植于六孔板，3mL/孔。

分组情况：对照组加入终体积分数为0.1%的DMSO；干预组为加入终浓度为80μmol/L 的大黄素及10ng/mL的TNF-α；模型组加入TNF-α（10ng/mL）。

恒温CO2培养箱培育24h后，收集各组细胞，用预冷0.01mol/L PBS（pH7.2）漂洗2次，75%冷乙醇4℃固定过夜。

检测前去除固定液，加入300μL细胞周期染色液处理30min，涡旋分散（2s/次，共10次）后避光冰浴2h，每组样本取3×104细胞上流式细胞仪检测。

采用FLOW JO软件分析得出细胞周期各时相比例和细胞早期凋亡率。

实验重复3次。

1.11Rt-PCR检测关联核心基因相对表达
取步骤1.6中空白对照组、模型组、Emodin60μmol/L 组悬浮细胞连同培养液1mL一起离心后按RNA柱式提取试剂盒说明书裂解，提取RNA，NanoDrop（赛默飞世尔）测定RNA浓度后，保存在-80℃冰箱，期间全程冰上操作。

随后采用逆转录试剂盒按20μL500ng/μL RNA 浓度配置反应液，将RNA逆转录为cDNA。

在200μL 的八联管中配置反应体系（Takara），每个样本3个复孔。

上荧光定量PCR仪检测（Bio-rad）。

2-ΔΔCT法计算表达差异。

引物序列（5'-3'）如下：CASP35'-AGCGAA TCAA TGGACTC-3'，5'-TTCCTGACTTCA T A TTTCAA-3'；COX25'-TCCTTGCTGTTCCCACCCA TG-3'，5'-CATC ATCAGACCAGGCACCAG-3'；p38MAPK5'-GGGG TTACGTGTGGCAGTGAAGA-3'，5'-CGGAGAATTT GGTAGATAAGGAACT-3'；内参β-actin5'-ACCCCC ACTGAAAAAGATGA-3'，5'-CGGAGAATTTGGTAG ATAAGGAACT-3'。

1.12统计学分析
实验数据采用SPSS19.0进行统计分析，定量资料
以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果
2.1大黄素及RA靶点获取及分析
从数据库中共获得856个类风湿关节炎相关基因。

从TCMSP数据库中获得162个大黄素作用靶点。

通过Uniprot数据库标准化后共获得32个两者共同靶点（图1）。

在String数据库中对32个靶蛋白进行互作分析，网络中有32个节点和148条边，中心节点是CASP3、PTGS2、MAPK14等（图2）。

2.2GO生物学过程与KEGG通路富集分析
共32个靶点进行GO功能注释后，以-logP值排序，前十名的生物过程包括淋巴细胞增殖、单核细胞增殖、调节淋巴细胞增殖、白细胞增殖、B细胞增殖调控-淋巴细胞活化调节及对细菌分子的反应；细胞组分集中在膜筏、膜微区、膜区等；分子功能则显示大黄素在血红素结合蛋白酶结合、转录辅助因子结合、核受体活性等方面调控RA（图3）。

对共同靶点进行KEGG富集分析，结果显示，大黄素对RA的调节作用与NF-κB信号通路等密切相关（图4）。

2.3分子对接预测
大黄素与中心节点ESR1、PTGS2、PTPRC、RELA、CASP3进行分子对接，结果显示，分子亲和力均小于-0 kcal/mol（表1，图5）。

2.4大黄素对MH7A细胞增殖的抑制作用
不同大黄素浓度组处理细胞后采用CCK-8法检测6、12、24h细胞增殖情况，结果显示，各浓度组大黄素的抑制率明显高于空白组，差异具有统计学意义（P< 0.05），且随着大黄素浓度增加，大黄素抑制作用越强（图6）。

图1大黄素与RA基因交集韦恩图
Fig.1Venn diagram of the intersection genes of emodin and
RA.
130
(13.2%)
32
(3.2%)
824
(83.6%)
Emodin RA
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2.5不同浓度大黄素对经TNF-α诱导的MH7A 细胞的增殖的影响
与对照组相比，经不同浓度（40、80μmol/L ）大黄素处理的MH7A 细胞增殖均受到抑制（图7）。

为进一步证实大黄素对MH7A 细胞的影响，进行流式细胞周期检测，结果显示，80μmol/L 的大黄素+TNF-α组与TNF-α组相比，G0/G1期细胞增多，差异具有统计学意义（P <0.05，图8）。

2.6大黄素对TNF-α诱导的成纤维样滑膜细胞NF-κB
表达水平的影响
与空白组比较，TNF-α诱导的MH7A 细胞NF-kB 蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（P <0.05）；而予以大黄素80μmol/L 干预后I κB α、p-NF-κB 表达水平均有所降低，差异具有统计学意义（P <0.05，图9，表2）。

2.7大黄素对TNF-α诱导的成纤维样滑膜细胞CASP3、COX2、P38MAKP14表达水平的影响
A
B
图2靶基因PPI 网络图
Fig.2Diagram of the protein-protein interaction (PPI)network of the target
genes.
图3大黄素治疗RA 的GO 分析
Fig.3GO signal pathway analysis of Emodin in the treatment of RA.
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与空白对照组比较，TNF-α组COX2、P38MAPK 核心基因的表达量明显上调，而大黄素（80mmol/L ）处理后各组COX2、P38MAPK 的表达量下调（P <0.01），凋亡相关基因上调（图10）。

3讨论
大黄素可以通过调节细胞因子的分泌和抑制中性粒细胞的迁移来有效缓解RA 小鼠模型的症状［25-26］，但越来越多的人认识到药物通过靶向多种蛋白质而不是单一靶点发挥作用［27］。

本研究通过网络药理学方法系统预测大黄素与类风湿关节炎之间的相互作用，共获得32个大黄素治疗类风湿关节炎的作用靶点，其中最为关键靶点是CASP3、PTGS2、MAPK14、RELA 等。

其中，Caspase3参与细胞凋亡进程［28］；PTGS2与炎症反应相关［29］；MAPK14在由细胞外刺激引起的细胞反应级联中起重要作用［30］。

RELA 则是NF-κB 通路一员。

对于中心节点我们进行了PCR 实验，结果表明大黄素可降低炎症相关PTGS2及p38MAPK 表达，而上调凋亡相关CASP3的表达。

除上述靶点之外，TLR9、NOS3、NR3C1也起到了一定的作用，
这在之前的研究中并没
图4大黄素治疗RA 的KEGG 分析
Fig.4KEGG signal pathway analysis of emodin in the treatment of RA.
表1大黄素与中心节点分子对接亲和力
图5分子对接结果
Fig.5Molecular docking model.A :CASP3;B :PTGS2;C :RELA;
D :ESR1.
E S R 1R E L A P T G S 2C A S P S 3
A
B
C
D
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有被提及。

有研究证实，抑制RA 模型鼠TLR9的表达能明显缓解RA 的严重程度，这可能与TLR9可激活NF-κB 通路，从而引起细胞因子分泌和炎症反应相关［31,32］。

NOS3参与了内皮功能，炎症和骨骼重塑过程的调节，与风湿性疾病相关的血管生成-炎症途径有关［33］。

NR3C1基因编码糖皮质激素受体，内源性糖皮质激素受体多态性在炎症机制中发挥着关键作用，可能改变机体对糖皮质激素的反应，对自身免疫性疾病有重
要意义［34］。

但上述结论需要进一步的证据支持。

为进一步明确大黄素对RA 的治疗作用的信号通路及机制，本研究进行GO 和KEGG 分析。

GO 富集分析提示，大黄素治疗RA 的主要生物进程和分子功能均
Control
E20E40E60E80E100
1.21.00.80.60.40.20
I n h i b i t i o n r a t e 6h 12h 48h
***
***
**
*
*
*
*
*
*
*图6CCK-8法检测大黄素对MH7A 细胞增殖的抑制作用
Fig.6CCK-8method for assessing inhibitory effect of emodin on proliferation of MH7A cells.*P <0.05vs Control.E80:80μmol/L EMO;E60:60μmol/L EMO;E40:40μmol/L EMO;E20:20μmol/L
EMO.
0h
24h
Control TNF-αE80E40
图7Emodin 对成纤维样滑膜细胞增殖影响
Fig.7Effect of emodin on proliferation of TNF-α-treated fibroblast-like synovial cells.
图8Emodin 对成纤维滑膜细胞的细胞周期影响
Fig.8Effect of emodin on cell cycle of TNF-α-treated fibroblast synovial cells.
50100150200FL2-A PE-A Control
N u m b e r
120
100806040200
N u m b e r
6005004003002001000
N u m b e r 150010005000
50100150200FL2-A PE-A TNF-α
50100150200FL2-A PE-A 80
μmol/L EMO
120100806040200
G 0/G 1S G 2/M
Conrtol
TNF-α
TNF-α+EMO
A
B
C e l l c y c l e d i s t r i b u t i o n (%)
与类风湿关节炎炎症相关因子的分泌密切相关。

大黄素治疗RA 的KEGG 通路主要富集在NF-κB 信号通路、TNF 信号通路、糖尿病并发症AGE-RAGE 信号通路、C
型凝集素受体信号通路、癌症中PD-L1表达和PD-1途
径等。

其中，TNF 信号通路在类风湿关节炎发病中至关重要，巨噬细胞-TNF-FLS 轴是引起RA 慢性持续性特
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征的关键因素，与RA 病理标志的血管翳相关［35,36］。

活化的巨噬细胞和许多相继响应的激活细胞分泌TNF 导致过多的滑膜侵犯相邻的骨和软骨，最终形成血管翳［37］。

有研究表明PD-1/PD-L1在活跃的RA 患者滑膜中上调，可能与PD-1/PD-L1相互作用参与了炎症部位T 细胞效应功能的调节相关［38］。

此次大黄素在治疗RA 的KEGG 分析中，富集最为显著的通路是NF-κB 信号通路。

经典的NF-κB 通路调节炎症细胞因子的表达，被认为是RA 的治疗靶点。

有研究证实，可以通过阻断
NF-κB 通路预防滑膜炎症［39,40］。

在RA 患者的滑膜组织
中及RA 动物模型的关节中均可观察到经典的NF-κB
通路的激活［41］。

有研究表明，抑制NF-κB 通路可诱导细
胞凋亡，抑制RA-HFLS 的增殖和血管生成［42］
，可作为治疗RA 的新靶点。

同时，NF-kB 信号通路与本研究筛选并验证的中心节点（ESR1、PTGS2、PTPRC 、RELA 、CASP3）密切相关。

NF-κB 转录因子家族由在哺乳动物中普遍表达的5种蛋白质组成：RelA 、c-Rel 、RelB 、NF-κB1（p105/p50）和
NF-κB2（p100/p52）［43］。

NF-κB 激活后可从细胞质转移到细胞核，而后与几个基因的启动子区域结合，参与IL-1β介导的滑膜成纤维细胞中PTGS2的表达［44］。

MAPK 信号的激活会刺激NF-κB ，从而诱导转录调节。

其作用机制可能与细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）相关［45,46］。

雌激素受体可以通过多种机制介导NF-κB 活性的抑制，例如置换共激活因子cAMP 反应元件结合蛋白结合蛋白、募集辅阻遏物糖皮质激素受体相互作用蛋白1，
提高I κB α水平并抑制NF-κB 核转位［47］。

这些丰富的途径展示了与大黄素相关的特征调节网络，及该网络对RA 存在复杂的、综合的作用。

本研究进行了流式细胞周期方法，证明大黄素可能通过将细胞阻滞在G0/G1期而减少其增殖，且用rt-PCR 证实了中心节点在大黄素组、TNF-α组及对照组中的差异表达。

而后，进一步采用Western blot 法证明大黄素下调NF-κB
通路中相关蛋白表达水平。

C o
n r t o l
T N
F -α
T N F -α+E
M O
P-I κB αI κB αβ-actin
400003900042000
C o
n r
t o l
T N F -αT
N F -α
+E M O P-NF-κB Histone H3
NF-κB β-actin
65000
150006500042000
A
B
图9NF-kB 通路Western blot 结果
Fig.9Western blotting for detecting expressions of NF-kB pathway proteins.A :Western blot bands of p-I κB α,I κB α,and β-actin in each group;B :Western blots of p-NF-κB,Histone H3and NF-B.
M r
M
r 表2各组p-I κB α/I κB α及p-NF-κB/NF-κB 条带灰度比值差异
Tab.2The differences in the gray scale ratios of p-I κB α/I κB αand p-NF-κB/NF-κB bands in each group **P <0.01vs Control Group,***P <0.001vs Control Group;#P <0.05vs TNF-αGroup,###P <0.001vs TNF-αGroup.
图10大黄素对于MH7A 细胞中CASP3、COX2及P38MAPK 的mRNA 含量影响
Fig.10Effect of emodin on mRNA expressions of CASP3,COX2and P38MAPK in MH7A cells.*P <0.05,**P <0.01,***P <0.001vs Control Group;#P <0.05,###P <0.001vs TNF-αGroup.
P38MAPK
COX2
CASP3
E x p r e s s i o n l e v e l s 4.03.53.02.52.01.51.00.50
Control TNF-α
Emodin+TNF-α***
###
***
###
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综上所述，本研究通过网络药理学预测大黄素可能通过抗增殖、抗炎等途径实现治疗类风湿关节炎，并在此基础上进行了细胞实验，进一步验证大黄素通过抑制滑膜成纤维细胞NF-κB 表达从而减轻炎症因子的释放。

在未来的研究中，可继续探索使用宏基因组学平台来评估大黄素与RA 相关的调控过程。

参考文献：
［1］Sparks JA.Rheumatoid arthritis ［J ］.Ann Intern Med,2019,170(1):
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（编辑：林萍）
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