某Bt菌株的最适分离条件探究

某Bt菌株最适分离条件的探究
一、实验目的及意义：
苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）为革兰氏阳性土壤杆菌，属于芽孢杆菌属，其菌体为短杆状，生鞭毛，单生或形成短链。

它在芽孢形成过程中产生称为δ-内毒素的杀虫伴胞晶体蛋白(控制合成这种蛋白质的基因在质粒上），这些蛋白具有很高的杀虫活性。

在过去的几十年里，Bt的杀虫晶体蛋白已被广泛的应用于农业生产领域，如制备农药、生产转基因作物等。

作为转基因作物外源抗虫基因的供体，必须不停地寻找新的抗病基因，以应对由于害虫抗性产生而导致的抗性退化。

寻找新的抗病基因的其中一种途径，就是寻找新的菌株，并从中发掘新的基因。

二、地点年限：
地点：
年限：2011年3月—2011年9月
三、处理方案：
苏云金芽孢杆菌的分离主要受温度、pH值、抗生素浓度这三种因素的影响。

苏云金芽孢杆菌的芽孢形成过程中，会产生大量DPA-Ca鳌合物，使得芽孢中的生物大分子形成耐热凝胶，在80℃下热处理20 min，苏云金芽孢杆菌芽孢也不会死亡。

而且休眠的芽孢在75℃的亚致死温度下处理15 min，活化效果最好，不但可促其快速萌发，还可提高芽孢的成活率。

因此，培养温度可设计三个水平：70℃、75℃、80℃。

苏云金芽孢杆菌芽孢的萌发，直接受pH值影响：当pH值为7.0时，芽孢萌发率在85％以上；当pH值低于6.5或高于8.5时，芽孢萌发率极低。

于是，pH值的设定可以为6.5、7.0、7.5三个水平。

在分离苏云金芽孢杆菌的过程中所需要的抗生素主要有氨苄青霉素及硫酸庆大霉素，但二者的浓度相同，故可以统称为抗生素，水平设置为0.1mg/ml、
0.2mg/ml、0.4mg/ml。

四、实验设计：
本实验有三个因素，三个水平，不考察因素间的交互作用，故采用L9（34）设计实验。

L9（33）正交表设计：
处理组合号
列号指标
1 2 3 重复重复重复平均值
1 1 1 1
2 1 2 2
3 1 3 3
4 2 1 2
5 2 2 3
6 2 3 1
7 3 1 3
8 3 2 1
9 3 2 1
五、分析测定项目：
对于不同的培养条件，该实验的测定值会有所不同。

1.液体培养：对于液体培养的菌株，可利用血细胞计数板，或者透射光的比色分析，或者比旋光度分析，来测定其浓度，比较各因素水平对菌株生长的影响作用。

2.固体培养：苏云金芽孢杆菌常用固体培养基来培养，可将经过各因素、各水平处理过的菌株接种在培养皿中，一周左右后观察其菌落的数目及大小形态，以比较各因素水平对菌株生长的影响作用。

六、项目负责人执行人：
项目负责人：
执行人：。