QIAGEN微量DNA提取

QIAamp DNA Micro Handbook
Zhang wei
Carrier RNA的作用：它可以提高DNA和柱子的结合能力，尤其是对于低目标分子的样本来说。

如果加入了Carrier RNA，那么最后洗脱下来的产物中会有目的DNA和Carrier RNA。

而且Carrier RNA的量远远大于DNA的量。

因此，通过计算初始加入多少CarrierRNA 的量来确定后续实验中所需要使用的洗脱产物的量。

加入310uLBuffer AE到310ug的Carrier RNA干粉末中，充分溶解，存于-20℃保存，不要反复冻融在3次以上。

轻轻的将Buffer AL和溶解的Carrier RNA混匀，不要产生泡沫。

含有Carrier RNA的Buffer AL可以在常温下（15-25℃）放置48h。

事先溶液准备
Buffer ATL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。

Buffer AL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。

Buffer AW1加入25mL无水乙醇。

Buffer AW2加入30mL无水乙醇。

加入Carrier RNA：小量血液提取DNA过程中，每100uLBuffer AL加入1uL溶解的Carrier RNA。

在微量组织中提取DNA中，200uLBuffer AL中加入1uL Carrier RNA。

微量血液中提取DNA（可以从1-100u
1-100uL L 血液中提取基因组DNA）
（微量细胞的基因组DNA提取可以使用该步骤）
1)吸取100uL血液加入1.5mL离心管中
2)加入Buffer ATL至最终体积为100uL
3)加入10uL蛋白酶K
4)加入100uLBuffer AL，关上盖子，涡旋15s
5)56℃孵育10min（孵育时反复震荡几次可以增加
DNA产出量）
6)简单离心，甩下瓶盖上的液滴
1)加入50uL无水乙醇，关上盖子，涡旋15s，室温
孵育3min（如果室温超过25℃，无水乙醇可以事先冰浴）
7)简单离心，甩下盖子上的液滴
8)将上步的液体转移至吸附柱里，6000×g（8000
rpm）离心1min，弃滤液（个人建议可以将滤液再次吸回吸附柱内在洗脱一次）
9)在吸附柱里加入500uL Buffer AW1，6000×g（8000
rpm）离心1min，弃滤液
10)在吸附柱里加入500uL Buffer AW2，6000×g（8000
rpm）离心1min，弃滤液
11)空转20000×g（14000rpm）离心3min
12)将吸附柱转移至干净的1.5mL离心管，在膜上小
心加入20-100uL BufferAE或者双蒸水来溶解，室温放置1min，20,000×g(14,000rpm)离心1min。

从小量组织中提取基因组DNA
1、将少于10mg的样品组织放入1.5mL离心管
立刻加入180uL Buffer ATL，
2、加入20uL蛋白酶K，涡旋15s
3、56℃孵育过夜，直到样品完全溶解。

对于小量的组织，孵育4-6h至组织溶解即可。

4、加入200uL Buffer AL，关上盖子，涡旋15s
5、加入200uL无水乙醇，关上盖子，涡旋15s，在室温下放置5min（如果室温超过25℃，无水乙醇可以事先冰浴）
6、简单离心，甩下瓶盖上的液滴
7、将液体转移至吸附柱，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液（个人建议可以将滤液再次吸回吸附柱内在洗脱一次）
8、加入500uL Buffer AW1，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液
9、加入500uL Buffer AW2，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液
10、空转20,000×g（14,000rpm）离心3min
将吸附柱转移至1.5mL新的离心管中，加入
20-100uL BufferAE或者双蒸水到膜上，室温下静置1min，20,000×g（14000rpm）离心1min。