细胞铺板的3种手法，这样铺更均匀！

细胞铺板的3种⼿法，这样铺更均匀！
细胞铺板是细胞实验中最常见⼜必须掌握的⼀门技术，看似简单，然⽽却经常遇到如细胞居中或者中间稀疏等不均匀分布的现象，结果就是只能整板扔掉，重新铺板，既耽搁时间⼜浪费了细胞及培养板等资源。

历经多次失败后，你才会发现，原来细胞铺板是有规律可循的，今天我们就聊⼀聊：细胞铺板的3种⼿法。

⾸先，我们来看看细胞铺板不均匀的3种最常见情况：
1，中间多，周围少
细胞铺板不均匀-1
2，中间少，四周多
细胞铺板不均匀-2
3，呈现⼀坨⼀坨的状态
细胞铺板不均匀-3
这么多种不均匀的情况，到底该怎么拯救呢？⼀起来看看细胞铺板的三种⼿法：⼿法⼀：均匀单层
要铺成那种很均匀的单层细胞，⼿法如下：
1，细胞板⼦先加⼊⼀定量(⼀般是总量培养基的1/5)的培养基，放⼊孵箱中放置10-20min。

2，在滴⼊细胞时，细胞板⼦与通风橱有⼀定的⾓度，沿着板壁的孔边缘滴⼊。

均匀单层
3，滴⼊后，呈“8”字⽅法摇晃5-8次。

4，置于⽔平台上，放置10-20分钟
5，放⼊孵箱。

在细胞铺板时，每⼀种板⼦的孔⾯积有多⼤，培养的液体量以及加⼊细胞量如下：
⽤量对照图
⼿法⼆：中间少，周围多其实细胞铺板不⼀定都需要单个单个的那么均匀，⽐如，做免疫荧光时，学霸姐姐喜欢铺中间少，周围稍多的板⼦，
因为这个样⼦可以同时检测到单个细胞的形态，另外⼜可以照⼀点低倍的⽤作于统计，所有的细胞都在⼀个环境中。

特别说明⼀下：这⾥的多也只是相对于多，细胞也是单层的。

中间
周围
要铺这样的细胞样⼦，那铺细胞时要注意⼿法了：1，细胞板⼦不需要提前⽤培养基润洗，直接从边上滴⼊混有细胞的培养基。

2，放置30s-1min后，前后摇晃5-8次。

3，放在⽔平台上静置2-5min。

4，放⼊孵箱。

⼿法三：中间多，周围少
学⼀般在提取蛋⽩或者提取RNA的时候，可以这样铺板，因为有些细胞刮⼑不好⽤，没有办法刮到周围的。

想要铺中间多，周围少的板⼦，⼿法如下：
1，细胞板⼦不需要提前润洗，从中间滴⼊进去后。

2，把板⼦朝⼀个⽅向顺时针或者逆时针旋转3-5圈。

3，⽔平台上静置2-5min。

4，放⼊孵箱。

中间多周围少
总结⼀下：想要细胞铺板铺得好，背景知识很重要其实在铺细胞的时候，你要准确的知道你所养的细胞的特性，⽐如：
1，细胞的名称，来源。

2，细胞的属性。

3，细胞分裂时间。

还有，最主要的是要搞清楚你的细胞的⽣长曲线，还要知道铺板后多久可以到达什么细胞密度。

如果你准确的掌握了你的细胞特性，那铺板是分分钟搞定的事情。

细胞铺板后，细胞状态不好怎么办？
如果出现这种情况，学霸姐姐建议你从以下⼏个⽅⾯考虑⼀下原因：
1，⽤来铺板的细胞状态本⾝就不好。

2，⽤来铺板的细胞传代次数太多，有些⽼化。

3，胰酶消化时间过长。

4，中和的⾎清量及时间不够。

5，⽀原体污染。

细胞铺板是⼀个经验积累的过程，你的⼿法也需要积极的改进，不要⽣搬硬套，也不要⼀味追求绝对的铺均匀，在实验过程中多思考细胞本⾝的特征和属性，出现问题积极解决即可。