植物组织培养实习报告

植物组织培养实习报告
篇一：植物组织培养实验报告
一、实验目的
1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；
2．通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3．通过
诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；
4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的
过程,加深对植物细胞的全能性的理解。

二、实验原理（一）植物组织培养
植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使
其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。

植
物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，
形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。

这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统
以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。

（二）植物细胞
的全能性
植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全
套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。

（三）组织的分化与器官建成
外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。

有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。

（四）培养基的组成
培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。

营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。

三、实验器材
高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。

四、实验材料
豌豆种子
五、实验药品
药品、70%酒精、0.1%升汞、MS培养基、蒸馏水、NaOH、84消毒液、蔗糖、琼脂等。

六、实验步骤
（一）培养基母液的配制
表1.MS培养基个成分的含量（单位：mg/L）
表2.MS培养基所需母液以及扩大倍数
名称大量元素微量元素Ca盐Mg盐Fe盐有机肌醇激素
扩大倍数5050505050100100100
定容体积(ml)
50050050050050020020050
吸取毫升数/L
202020202010105
（注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积）
表3.配制母液所需的药品及称取量
（注：根据表1与表2计算各物质的称取量）
药品名称NH4NO3KNO3KH2PO4
称取量（mg）
41250475004250
药品名称KI
Na2MnO4?2H2OCuSO4?5H2O
称取量（mg）
20.756.250.625
CaCl2?2H2O11000CoCl2?6H2O0.625MgSO4?7H2O9250肌醇
2000FeSO4?4H2O695甘氨酸40Na-EDTA932.5盐酸硫胺素
8MnSO4?7H2O557.5盐酸吡哆醇10ZnSO4?7H2O215烟酸10H3BO3155（1）MS大量元素母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。

名称
重量（mg）
名称
重量(mg)
NH4NO3KNO3
4125047500
KH2PO4CaCl2・2H2O
425011000
（2）MS微量元素母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。

名称KIH3BO3MnSO4・7H2OZnSO4・7H2O
重量(mg)20.75155557.5215
名称Na2MoO4・2H2OCuSO4・5H2OCoCl2・6H2O
重量(mg)6.250.6250.625
（3）MS有机母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定
容至200ML存放于冰箱中备用。

名称肌醇烟酸盐酸吡哆醇
重量(mg)
名称盐酸硫胺素甘氨酸
重量(mg)
20001010
840
（4）MS铁盐母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ML存放于冰箱中备用。

名称EDTA二钠
重量(mg)
932.5
名称FeSO4・4H2O
重量(mg)
695
（5）MS钙盐母液的配制
参考表3称取11000mg的CaCl2?2H2O用蒸馏水溶解定容至500ML，
保存于冰箱备用。

（6）MS镁盐母液的配制参考表3称取9250mg的MgSO4?7H2O用蒸馏
水溶解定容至500ML，保存于冰箱备用。

（7）MS肌醇母液的配制参考表3称取2000mg的肌醇用蒸馏水溶解
定容至200ML，保存于冰箱备用。

（8）MS激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能
混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。

一般取100mg配成100ml母液。

（二）培养基的配制
以配制1L的MS培养基为例进行如下操作：
（1）取1L的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾；
（2）分别取（一）中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，边
加边搅拌；
（3）称取30g蔗糖加入，边加边搅拌；
（4）称取8g琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解；（5）定容
至1L，加入激素母液，用NaOH调PH6.0左右；
（6）将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮纸用
绳子扎紧；
（7）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右；
（8）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。

（三）高压蒸汽灭菌锅的使用方法
具体操作步骤：
（1）高压锅放水至平把架；
（2）把包扎好的培养基装入高压锅；
（3）盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀；（4）然后接通电源；
（5）压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)；
（6）排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟；
（7）灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待
篇二：植物组织培养教学实习项目
作物生产技术101班姓名：马一良
一：目的意义
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。

植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。

狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

运用植物组织培养技术的意义：1、快速繁殖优良种苗。

2、无病毒苗的培养。

3、在育种上的应用
4、工厂化育苗。

5：保存种质资源。

6：基因工程的运用二：工作内容
1：学习组培相关知识
2：了解相关的实验室及其设备
3：试管苗快速繁衍技术
4：植物脱毒技术
5：植物组织培养技术的一般培养方法
6：种质立体培养
7：MS培养基的制备
8：灭菌技术
9：无菌操作技术
10：试管苗的炼苗与移栽培养步骤
第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。

把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。

置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。

易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。

流水冲洗在污染严重时特别有用。

洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。

洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。

当然，最理想的清洗物质是表面活性物质―吐温。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。

要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。

用70%酒精浸10～30秒。

由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。

有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。

处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。

第三步是用灭菌剂处理。

表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取
1―2种使用见表。

第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采
用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。

无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤
植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所
以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。

②老熟材料，特别是种子等可
以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。

③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。

④漂白粉容易导致植
物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。

⑤在消毒液中加入浓度为
0.08―0.12%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面张力，达到更好的消毒效
配制培养基。