Tramiprosate_HNMR_21256_MedChemExpress
黄芩素通过调节HIF-1α
黄芩素通过调节HIF -1α/VEGF 信号通路抑制类风湿关节炎大鼠的炎症反应和病理性血管生成*杜红丽1，张晨宇1，赵清2△［1河南中医药大学第五临床医学院（郑州人民医院）风湿免疫科，河南郑州450053；2河南大学淮河医院风湿免疫科，河南开封475099］［摘要］目的：探讨黄芩素（BA ）调节缺氧诱导因子1α（HIF -1α）/血管内皮生长因子（VEGF ）信号通路对类风湿关节炎（RA ）大鼠炎症反应和病理性血管生成的影响。
方法：按照随机数字表法将SD 大鼠分为对照（control ）组、模型（model ）组、低剂量（10mg/kg ）BA （BA -L ）组、高剂量（30mg/kg ）BA （BA -H ）组、雷公藤多苷片（TWP ；6.25mg/kg ）组和BA -H+HIF -1α激动剂二甲基草酰甘氨酸（DMOG ；40mg/kg ）组，每组12只。
除control 组外，其它组大鼠均采用II 型胶原蛋白-完全弗氏佐剂法诱导RA 大鼠模型。
第2次免疫24h 后开始给药处理，每天给药一次，持续4周。
检测大鼠在给药第0、7、14和28天时的足趾肿胀度，计算关节炎指数；计算大鼠胸腺和脾脏指数；HE 染色检测大鼠踝关节滑膜组织病理损伤；ELISA 法检测大鼠踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF -α）和白细胞介素6（IL -6）水平；免疫组化检测大鼠踝关节滑膜组织中VEGF 和VEGF 受体2（又称激酶插入域受体，KDR ）表达；Western blot 检测各组大鼠踝关节滑膜组织中HIF -1α和VEGF 蛋白表达。
结果：与control 组比较，model 组大鼠踝关节滑膜组织病理损伤严重，足趾肿胀度、关节炎指数、胸腺和脾脏指数，以及滑膜组织TNF -α、IL -6、VEGF 、KDR 、HIF -1α和VEGF 水平均显著升高（P <0.05）；与model 组比较，BA -L 组、BA -H 组和TWP 组对应指标变化趋势与上述相反（P <0.05）；BA -H 组与TWP 组比较，上述指标变化差异无统计学意义（P >0.05）；DMOG 减弱了BA -H 对RA 大鼠炎症反应和病理性血管生成的抑制作用。
一甲基澳瑞他汀 e 化学结构-概述说明以及解释
一甲基澳瑞他汀e 化学结构-概述说明以及解释1. 引言1.1 概述一甲基澳瑞他汀（Simvastatin）是一种广泛应用于临床治疗高胆固醇血症和心血管疾病的药物。
它属于被称为他汀类药物的一员，是一种竞争性抑制HMG-CoA还原酶的药物，通过降低胆固醇的合成来达到降低血浆胆固醇的效果。
随着现代生活方式的改变和不良饮食习惯的普遍存在，高胆固醇血症在全球范围内变得越来越普遍。
该疾病不仅与心血管疾病的发展密切相关，还可能导致其他严重的健康问题，如动脉粥样硬化和心肌梗死等。
一甲基澳瑞他汀由黄曲霉属真菌产生，即通过天然发酵法生产得到。
然而，为了提高其药代动力学性质和治疗效果，科学家们通过改进和优化合成方法，合成了合成一甲基澳瑞他汀。
现在，一甲基澳瑞他汀已经成为一种被广泛研究和临床使用的药物。
在本篇文章中，我们将介绍一甲基澳瑞他汀的化学结构、合成方法、性质与用途等方面的内容。
通过深入了解一甲基澳瑞他汀，我们可以更好地理解它在治疗高胆固醇血症和心血管疾病方面的作用机制，并有望对该药物的未来发展提供一定的启示。
在接下来的章节中，我们将详细介绍一甲基澳瑞他汀的化学结构、合成方法以及它在临床上的广泛用途。
最后，我们将总结这篇文章的主要观点，并对一甲基澳瑞他汀的未来进行展望。
通过本文的阅读，读者将能够全面了解一甲基澳瑞他汀，为今后的相关研究和临床实践提供有益的指导与参考。
文章结构部分的内容如下：1.2 文章结构本文主要包含以下几个部分：引言、正文和结论。
引言部分通过概述一甲基澳瑞他汀的化学结构和合成方法，介绍背景知识和研究意义。
此外，本部分还会明确文章的目的，即对一甲基澳瑞他汀进行全面的分析和探讨。
正文部分将围绕一甲基澳瑞他汀展开讨论。
首先，我们将介绍一甲基澳瑞他汀的化学结构，包括其分子式、分子量等信息，并通过图表等形式直观地展示其结构。
其次，我们将详细介绍一甲基澳瑞他汀的合成方法，包括起始原料的选择、反应步骤和条件等。
氨氯吡啶酸 代谢物
氨氯吡啶酸代谢物
氨氯吡啶酸，又称阿法酸或5-氯-2-羟基尿嘧啶酸，是一种用于治疗消化性溃疡和胃食管反流病的药物。
该药物经口服后被吸收，并在肝脏中代谢成为多个代谢物。
通过代谢作用，氨氯吡啶酸可以转化为其活性代谢物，如5-羟基-氨氯吡啶酸、5-氯-2,6-二羟基尿嘧啶酸等。
这些活性代谢物可以结合到贴壁受体上，从而发挥治疗作用。
而与此同时，一些代谢物则被肝脏进一步代谢，从而被排出体外。
然而，一些代谢物的代谢速率可能受到个体差异、肝脏受损等因素的影响，可能导致药物的代谢率发生变化。
这可能会导致药物在体内的浓度过高或过低，从而影响治疗效果或引发副作用。
因此，在使用氨氯吡啶酸的过程中，应该根据患者的具体情况和症状，合理调整药物使用剂量和频次，以达到最佳的治疗效果，并避免出现不必要的药物不良反应。
同时，应该密切关注患者的药物代谢情况，特别是肝功能不全的患者，应该特别注意药物的剂量和使用方式，以保证药物的安全性和有效性。
一种国产胃泌素释放肽前体化学发光免疫试剂的性能验证
一种国产胃泌素释放肽前体化学发光 免疫试剂的性能验证
欧赛英１，徐海伟１，陈秀发１，沙利烽１，梁 辰２，冯 杰２，薛 辉２，颜光涛２
（１．苏州长光华医生物试剂有限公司，江苏 苏州 ２１５１６３； ２．中国人民解放军总医院医学检验中心，北京 １００８５３）
ＴｈｅＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａＤｏｍｅｓｔｉｃＧａｓｔｒｉｎｒｅｌｅａｓｉｎｇ ＰｅｐｔｉｄｅｆｏｒＣｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅＩｍｍｕｎｏｒｅａｇｅｎｔ
ＯＵ Ｓａｉｙｉｎｇ１，ＸＵ Ｈａｉｗｅｉ１，ＣＨＥＮ Ｘｉｕｆａ１，ＳＡ Ｌｉｆｅｎｇ１，ＬＩＡＮＧ Ｃｈｅｎ２， ＦＥＮＧ Ｊｉｅ２，ＸＵＥＨｕｉ２，ＹＡＮ Ｇｕａｎｇｔａｏ２
（１．ＳｕｚｈｏｕＣｈａｎｇｇｕａｎｇｈｕａＭｅｄｉｃａｌＲｅａｇｅｎｔＣｏ．ＬＴＤ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５１６３，Ｃｈｉｎａ； ２．ＭｅｄｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｅｎｔｅｒｏｆＰＬＡ ＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８５３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＰｒｏＧＲＰｉｓａｐｒｏｍｉｓｉｎｇｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒｉｎｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｎｇＳＣＬＣｆｒｏｍ ＮＳＣＬＣａｎｄ ｏｔｈｅｒｂｅｎｉｇｎｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅｓ．ＰｒｏＧＲＰＣｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＣＬＩＡ）ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｎｄｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｄ ｂｙＨｙｂｉｏｍｅ．Ｔｈｅｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｄｅｃｌａｒｅｄｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅａｇｅｎｔ ｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ１０％，ｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓ５ｐｇ／ｍＬ，ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓｂｅｔｗｅｅｎ ＜±１０％，ｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅｗａｓ＜６５ｐｇ／ｍＬ，ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｗａｓ１５３０００ｐｇ／ｍＬ，ｔｈｅｓｅｒｕｍ ｗａｓｗｅｌｌｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｐｌａｓｍａ，ａｎｄ ｔｈｅｓｅｒｕｍ ｓｔａｂｉｌｉｔｙｃｏｕｌｄｒｅａｃｈ９６ｈｏｕｒｓ，ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＲｏｃｈｅｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｐｒｏＧＲＰ ｒｅａｇｅｎｔｗａｓｇｏｏｄ．Ｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｒｅａｇｅｎｔｗａｓｖｅｒｉｆｉｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＣＬＳＩ ａｎｄＣＡＰ，ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｌｉｍｉｔｏｆｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ，ｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅ，ｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅ，ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌ，ｓｅｒｕｍ ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ，ｓｅｒｕｍ ｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｄｏｍｅｓｔｉｃｐｒｏＧＲＰａｓｓａｙａｎｄｉｔｓｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，ＡＥ１８０ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｗｅｒｅｖｅｒｉｆｉｅｄ．１９９ｃａｓｅｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌ，ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，ｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒａｎｄｂｅｎｉｇｎｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｐａｒａｌｌｅｌｗｉｔｈＲｏｃｈｅＥ６０１ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｏｆｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｎｅｗＰｒｏＧＲＰ
血管外膜细胞钙化及其钙化机制研究
血管外膜细胞钙化及其钙化机制研究谭小青,张旭升,樊小容,黄战军摘要 目的:研究经体外诱导钙化建立大鼠血管外膜细胞钙化模型,检测钙化过程中成骨相关指标及凋亡㊁自噬相关蛋白的表达变化,旨在为心血管疾病模型提供更精确的细胞模型,并初步探讨其钙化机制㊂方法:原代提取大鼠胸主动脉外膜纤维细胞,取3~6代细胞使用诱导培养基(高糖DMEM +10%胎牛血清+10mmol/L β-甘油磷酸+0.05mmol/L 抗坏血酸+100mmol/L 地塞米松)诱导钙化,诱导时间为3d ㊁6d ㊁9d ㊁12d ㊁15d ,筛选出诱导细胞钙化的最佳时间㊂对细胞采用茜素红S 染色㊁细胞内钙含量测定和碱性磷酸酶(ALP )活性检测,鉴定是否成功构建钙化模型㊂采用实时定量聚合酶链式反应(PT -PCR )检测成骨相关因子骨形态生成蛋白2(BMP2)和核心结合因子α1(Runx2)的mRNA 含量,蛋白免疫印迹法(Western Blot )检测凋亡蛋白Bax ㊁Bcl -2和自噬相关蛋白微血管相关蛋白(LC3)㊁Beclin -1的表达水平,找出血管外膜细胞钙化的潜在机制㊂结果:当诱导钙化时间为15d 时,血管外膜细胞中主要钙化指标胞内钙含量及ALP 活性上调(P <0.05),茜素红S 染色显示钙化组有明显钙盐沉积㊂血管外膜细胞经钙化诱导后,BMP2和Runx2的mRNA 水平上调,Bax 蛋白水平上调,Bcl -2和Beclin -1蛋白水平下调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调(P <0.05)㊂结论:钙化诱导培养基培养血管外膜细胞15d 可成功构建钙化细胞模型,血管外膜细胞钙化可能与细胞向成骨样表型转化有关,血管外膜细胞钙化过程涉及细胞自噬及凋亡调控㊂关键词 血管外膜细胞;钙化;成骨样表型转化;自噬与凋亡;实验研究d o i :10.12102/j.i s s n .1672-1349.2023.18.010 Calcification of Vascular Adventitial Cells and Its MechanismTAN Xiaoqing,ZHANG Xusheng,FAN Xiaorong,HUANG Zhanjun Longgang District People 's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518172,Guangdong,China Corresponding Author ZHANG Xusheng,E -mail:*****************Abstract Objective:To investigate the mananism of calcification of rat vascular adventitial cells,establish the calcification model of rat vascular adventitial cells,and detect the expression changes of osteogenesis -related indicators,apoptosis,and autophagy -related proteins during the calcification process.It aimed to provide more accurate cell models for cardiovascular disease and initially explore the mechanism of calcification.Methods:Rat thoracic aortic adventitial fibroblasts were extracted from the primary generation,and the 3rd to 6th generation cells were used for induction medium(high glucose DMEM +10%fetal bovine serum +10mmol/L β-glycerophosphate +0.05mmol/L ascorbic acid +100mmol/L dexamethasone)to induce calcification,the induction time was 3,6,9,12,and 15d,and the optimal time for inducing cell calcification was selected.The cells were stained with alizarin red S,detected by intracellular calcium content and alkaline phosphatase(ALP)to identify whether the calcification model was successfully constructed.Real -time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction(RT -PCR)was used to detect the mRNA levels of osteogenesis -related factors bone morphogenetic protein(BMP2)and runt -related transcription factor 2(Runx2);Western Blot was used to detect the apoptosis proteins Bax,Bcl -2,the autophagy -related proteins LC -3,and Beclin -1expression level;then the potential mechanism of vascular adventitial cell calcification would be revealed.Results:When calcification was induced for 15days,the intracellular calcium content in the adventitial cells of the main calcification indicators and ALP activity were up -regulated(P <0.05).Alizarin red S staining showed obvious calcium deposits in the calcification group.After calcification was induced in adventitial cells,the mRNA levels of BMP2and Runx2up -regulated,the protein levels of Bax up -regulated,the protein levels of Bcl -2and Beclin -1down -regulated,and the ratio of LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰdown -regulated(P <0.05).Conclusion:Adventitial cells cultured in the calcification -inducing medium for 15days could successfully construct a calcified cell model.calcification of adventitial cells might be related to the transformation of cells to an osteoblast -like phenotype.The Calcification process of adventitial cells involved autophagy and apoptosis regulation.Keywords adventitial cells;calcification;osteogenic phenotype transformation;autophagy and apoptosis;experimental study血管钙化常见于动脉粥样硬化㊁血脂异常㊁高血压㊁糖尿病㊁慢性肾病及衰老等人群[1],血管钙化引起血管硬度增加㊁顺应性降低,导致心肌缺血㊁心力衰竭㊁血栓形成等,增加脑卒中㊁心脏病㊁动脉粥样硬化斑块破裂等的风险,被认为是影响心血管疾病的重要因素之一[2-4]㊂目前关于血管内膜㊁中膜和心脏瓣膜钙化的关注和研究相对较多㊂临床工作中发现,血管外膜也可发生钙化,然而调查发现,现阶段对血管外膜钙化的作者单位 深圳市龙岗区人民医院(广东深圳518172)通讯作者 张旭升,E -mail :*****************引用信息 谭小青,张旭升,樊小容,等.血管外膜细胞钙化及其钙化机制研究[J ].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(18):3347-3350.关注较少,因此,需要更多的研究来阐明血管钙化的致病机制㊂最初血管钙化被认为是被动和退行性病变,标志着血管老化,但是越来越多研究表明血管钙化是类似于胚胎骨形成的病理生物学过程[5-6]㊂Bostr öm 等[7-8]研究发现,钙化过程中大鼠血管中膜细胞由原有收缩表型转变成为成骨样细胞表型,原有的收缩标志物如平滑肌肌动蛋白α(α-SMA )等表达减少,并表达核心结合因子α1(Runx2)㊁骨形态生成蛋白2(BMP2)等多种成骨样标志物,从而介导骨基质在血管中沉积㊂细胞凋亡与自噬为2种细胞死亡的方式,与血管钙化息息相关,研究表明,血管中膜细胞在细胞凋亡过程中释放凋亡小体,促进细胞钙化,而细胞自噬通过多种机制调控细胞钙化[9-10]㊂本研究对大鼠血管外膜细胞进行体外诱导钙化,建立大鼠血管外膜细胞钙化模型,并检测钙化过程中成骨相关指标及凋亡㊁自噬相关蛋白的表达变化,旨在为心血管疾病模型提供更精确的细胞模型,并初步探讨其钙化机制㊂1材料与方法1.1试剂胎牛血清(FBS,Gibco),青霉素,链霉素(Gibco,美国),茜素红S溶液,β-甘油磷酸,抗坏血酸,地塞米松(Sigma,美国),抗GAPDH抗体(Bioworld),抗Bcl-2, Bax,Bcelin1和微血管相关蛋白(LC3)抗体(CST),碱性磷酸酶检测试剂盒㊁钙(Ca)检测试剂盒(南京建城生物工程研究所)㊂1.2大鼠血管外膜细胞分离与培养取10只4~6周龄雄性Wistar-Kyoto大鼠(体质量120~180g)胸主动脉分离血管外膜,采用组织黏附法培养㊂使用添加10%胎牛血清的高糖DMEM培养基(Gibco dmem)在37ħ㊁5%二氧化碳条件下培养细胞㊂当细胞增殖至80%~90%融合时,用0.25%胰酶消化传代㊂使用第3代至第6代的细胞进行后续实验㊂1.3体外钙化模型的建立钙化诱导培养基为含10%胎牛血清,10mmol/L β-甘油磷酸钠,0.05mmol/L抗坏血酸和100mmol/L 地塞米松的高糖DMEM培养液㊂将第3代至第6代细胞分为对照组和钙化组,待细胞长至50%融合时,使用钙化诱导培养基培养,每3d更换1次培养基,连续培养15d㊂1.4碱性磷酸酶(ALP)酶活测定细胞钙化诱导后,弃去培养基,1ˑ磷酸缓冲盐溶液(PBS)洗细胞3次,加入裂解液500μL(1%T ritonX-100),冰上裂解40min后,离心,取上清液㊂使用上清液根据试剂盒说明书检测ALP活性及总蛋白含量㊂1.5细胞内钙含量检测细胞钙化诱导后,弃去培养基,1ˑPBS洗细胞3次,每孔加入500μL0.6mol/L的盐酸4ħ脱钙过夜,取上清,根据钙测试试剂盒说明书检测钙含量㊂将脱钙后的细胞用4ħPBS洗3次,每孔加入500μL NaOH/0.1%SDS裂解细胞,取上清,用二喹啉甲酸法(BCA)测定细胞蛋白含量㊂1.6茜素红S染色细胞钙化诱导15d,弃去培养基,1ˑPBS洗细胞3次,加入0.5mL4%多聚甲醛室温固定15min,用双蒸水洗3次,加入1mL0.1%茜素红室温孵育15min,吸去染液,双蒸水洗3次,在倒置显微镜下观察㊂1.7实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞钙化诱导后,弃去培养基,1ˑPBS洗细胞3次,使用TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit提取总RNA,使用PrimeScrip TM RT reagent Kit将所提取的RNA逆转录合成cDNA,以cDNA为模板,通过SYBR Green I嵌合荧光定量RT-PCR检测BMP-2㊁Runx2和GAPDH的表达量㊂引物序列见表1㊂表1引物序列基因方向序列Runx2正向5'-TGGCTTTGGTTTCAGGTTAGG-3'反向5'-TGGAGATGTTGCTCTGTTCG-3' BMP-2正向5'-TGAGGATTAGCAGGTCTTTGC-3'反向5'-TCTCGTTTGTGGAGTGGATG-3' GAPDH正向5'-GGCTGCCCAGAACATCAT-3'反向5'-CGGACACATTGGGGGTAG-3'1.8蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞钙化诱导15d,弃去培养基,1ˑPBS洗细胞3次,提取细胞总蛋白㊂使用12%SDS-PAGE胶电泳分离,并转移到聚偏二氟乙烯膜(PVDF)上,封闭后,加入一抗(Bax1ʒ1000,Bcl-21ʒ1000,Beclin11ʒ1000, LC31ʒ1000,GAPDH1:1000)稀释液,4ħ孵育过夜;加入二抗稀释液(1ʒ10000)室温孵育1h后,使用ECL发光试剂盒显影并计算灰度值㊂1.9统计学处理应用SPSS19.0软件进行统计处理,符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1大鼠血管外膜细胞可在体外被诱导钙化为验证高磷是否能诱导大鼠血管外膜细胞钙化,使用钙化诱导培养基培养细胞,在不同时间点检测ALP活性和胞内钙含量㊂随着培养时间延长,ALP活性逐渐上升,在培养第12天达到峰值,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);诱导第3天开始所测得的胞内钙含量与对照组比较升高(P<0.05),ALP 活性和钙含量升高具有时间依赖性㊂详见图1㊁图2㊂诱导15d所测得钙含量最高,因此,后续实验选择的诱导时间为15d㊂对钙化诱导15d的细胞进行茜素红S染色,结果显示,对照组细胞呈长梭形,而钙化组细胞变成菱形㊂茜素红S染色后,钙化组可观察到大量的橘红色钙结节(见图3),而对照组完全没有㊂这也证明大鼠血管外膜细胞可在体外被钙化培养基诱导钙化㊂图1钙化诱导培养基诱导外膜细胞后ALP含量(与0d时比较,*P<0.05)图2钙化诱导培养基诱导外膜细胞后胞内钙含量(与0d时比较,*P<0.05)图3培养15d时细胞经茜素S红染色切片图(ˑ100)2.2血管外膜细胞钙化与细胞向成骨样表型转化有关血管钙化的增加与成骨细胞特异性标志物如BMP2㊁和Runx2的增加有关[11]㊂RT-PCR结果显示,与对照组比较,钙化组的成骨细胞特异性标志物BMP2和Runx2mRNA表达量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图4㊂图4外膜细胞钙化过程中BMP2和Runx2mRNA表达量(与对照组比较,*P<0.05)2.3血管外膜细胞钙化过程涉及细胞自噬及凋亡调控通过Western Blot检测凋亡和自噬相关蛋白的表达量变化㊂与对照组比较,钙化组促凋亡蛋白Bax表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.05)㊂详见图5㊂钙化组自噬相关蛋白Beclin1表达上调,LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比例上调(P<0.05),说明钙化诱导培养后细胞内凋亡水平上调㊁自噬水平升高㊂详见图6㊂图5诱导钙化后促凋亡蛋白及抑凋亡蛋白表达变化图6诱导钙化后凋亡及自噬蛋白Beclin1等表达变化3讨论血管钙化作为心血管疾病病人的并发症之一,其发病率与严重程度逐年增高及加重,是导致心血管疾病病人高死亡率的重要因素㊂血管钙化缺乏有效的治疗药物㊂因此,探究血管钙化发病机制,在分子水平寻找有效的诊断和防治靶点是急需开展的基础研究工作㊂本研究证明,使用10mmol/Lβ-甘油磷酸+0.05 mmol/L抗坏血酸+100mmol/L地塞米松培养外膜细胞即可诱导大鼠血管外膜细胞在体外发生钙化,这是通过茜素红S染色㊁ALP活性检测及胞内钙含量检测结果得以确定的㊂血管钙化过程中,血管中膜细胞向成骨样细胞表型转变并表达相关成骨标志物,从而引起骨基质的沉积,是血管钙化的重要特点及机制[5]㊂本实验所用的血管外膜细胞钙化条件与血管中膜细胞钙化条件一致,说明血管外膜细胞钙化的机制可能与中膜细胞钙化的机制部分一致㊂血管中膜细胞钙化过程中,细胞表达成骨相关的转录因子如Runx2等,进而促进下游表达骨相关蛋白如骨形态发生蛋白BMP2等的表达,从而促使细胞向成骨样细胞主动分化[12-13],本研究也观察到类似的机制㊂通过PT-PCR检测,发现钙化培养基培养大鼠血管外膜细胞15d后,BMP2和Runx2的mRNA表达水平升高㊂本研究通过对钙盐沉积与成骨样细胞表型转变2个维度的探讨,证明血管外膜细胞可在体外被诱导钙化,丰富了血管钙化的分型㊂血管钙化的发生机制复杂,涉及多种信号通路,如细胞自噬和凋亡㊁Wnt/β-catenin信号通路激活㊁内质网应激等均参与调控血管钙化的过程㊂自噬作为一种细胞应激的适应性反应,在维持血管结构与功能中十分关键㊂研究表明,血管钙化过程中自噬水平增高[14-15]㊂在体外实验中,高磷可提高大鼠血管中膜细胞的自噬水平,增加细胞内自噬体数量,从而抑制凋亡与钙化[16]㊂还有研究表明,自噬可通过抑制大鼠血管中膜细胞氧化应激,抑制血管内皮细胞的炎症反应,对三酰甘油等脂代谢进行调控,从而减轻血管钙化[17-18]㊂LC3和Beclin1是2种典型的自噬标志物,Western Blot实验结果表明,用钙化培养基诱导大鼠血管外膜细胞15d,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率升高,Beclin1蛋白水平表达升高,说明细胞内自噬水平升高㊂多项研究表明,细胞凋亡参与促进血管钙化的发生,抑制细胞凋亡和抑制钙化[16-17]㊂在对大鼠的体内研究发现,成纤维细胞生长因子21通过内质网应激调控Caspase-12信号通路来减少血管内中膜细胞凋亡,从而抑制血管钙化[18]㊂另外,提高培养基中的Pi 或Ca2+浓度,可诱导细胞质膜形成并释放基质囊泡(如凋亡小体),从而导致细胞外基质钙化,这种基质钙化可能成为血管钙化的成核位点[19]㊂Bax和Bcl-2是2种典型的凋亡和抑制凋亡蛋白,本实验结果证明,利用钙化培养基对血管外膜细胞诱导钙化过程中,细胞内凋亡水平升高㊂同时细胞内自噬水平也升高,这可能是细胞自我调控以对抗钙化的结果㊂本研究证实血管外膜细胞可在体外被诱导钙化,且外膜钙化过程与骨组织钙化过程类似,为主动可调控的过程㊂血管钙化是一个复杂的过程,涉及细胞凋亡和自噬等调控通路,仍需进一步研究㊂参考文献:[1]梁英权,段亚君,韩际宏.血管钙化分子机制研究进展[J].中国动脉硬化杂志,2020,28(11):921-929.[2]NICOLL R,HENEIN M Y.The predictive value of arterial andvalvular calcification for mortality and cardiovascular events[J].Int J Cardiol Heart Vessel,2014,3:1-5.[3]JOHNSON R C,LEOPOLD J A,LOSCALZO J.Vascularcalcification:pathobiological mechanisms and clinical implications[J].Circulation Research,2006,99(10):1044-1059.[4]YAMADA S,GIACHELLI C M.Vascular calcification in CKD-MBD:roles for phosphate,FGF23,and Klotho[J].Bone,2017,100:87-93.[5]LIN M E,CHEN T M,WALLINGFORD M C,et al.Runx2deletion insmooth muscle cells inhibits vascular osteochondrogenesis andcalcification but not atherosclerotic lesion formation[J].Cardiovascular Research,2016,112(2):606-616.[6]DURHAM A L,SPEER M Y,SCATENA M,et al.Role of smoothmuscle cells in vascular calcification:implications in atherosclerosis andarterial stiffness[J].Cardiovascular Research,2018,114(4):590-600.[7]BOSTRÖM K I,RAJAMANNAN N M,TOWLER D A.The regulationof valvular and vascular sclerosis by osteogenic morphogens[J].Circulation Research,2011,109(5):564-577.[8]SPEER M Y,YANG H Y,BRABB T,et al.Smooth muscle cells giverise to osteochondrogenic precursors and chondrocytes incalcifying arteries[J].Circulation Research,2009,104(6):733-741.[9]PROUDFOOT D,SKEPPER J N,HEGYI L,et al.Apoptosisregulates human vascular calcification in vitro:evidence forinitiation of vascular calcification by apoptotic bodies[J].Circulation Research,2000,87(11):1055-1062.[10]AN S J,BOYD R,ZHU M,et al.NADPH oxidase mediatesangiotensin 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益生菌对阿尔茨海默病作用的研究进展
益生菌对阿尔茨海默病作用的研究进展发布时间：2021-12-14T06:08:15.523Z 来源：《中国结合医学杂志》2021年12期作者：宋鑫萍1,2，李盛钰2，金清1[导读] 阿尔茨海默病已成为威胁全球老年人生命健康的主要疾病之一，患者数量逐年攀升，其护理的经济成本高，给全球经济造成重大挑战。
近年来研究显示，益生菌在适量使用时作为有益于宿主健康的微生物，在防治阿尔茨海默病方面具有积极影响，其作用机制可能通过调节肠道菌群，影响神经免疫系统，调控神经活性物质以及代谢产物，通过肠-脑轴影响该病发生和发展。
宋鑫萍1,2，李盛钰2，金清11.延边大学农学院，吉林延吉 1330022.吉林省农业科学院农产品加工研究所，吉林长春 130033摘要：阿尔茨海默病已成为威胁全球老年人生命健康的主要疾病之一，患者数量逐年攀升，其护理的经济成本高，给全球经济造成重大挑战。
近年来研究显示，益生菌在适量使用时作为有益于宿主健康的微生物，在防治阿尔茨海默病方面具有积极影响，其作用机制可能通过调节肠道菌群，影响神经免疫系统，调控神经活性物质以及代谢产物，通过肠-脑轴影响该病发生和发展。
本文综述了近几年来国内外益生菌对阿尔茨海默病的作用进展，以及其预防和治疗阿尔茨海默病的潜在作用机制。
关键词：益生菌；阿尔茨海默病；肠道菌群；机制Recent Progress in Research on Probiotics Effect on Alzheimer’s DiseaseSONG Xinping1,2，LI Shengyu2，JI Qing1*(1.College of Agricultural, Yanbian University, Yanji 133002，China)(2.Institute of Agro-food Technology, Jilin Academy of Agricultural Sciences, Chanchun 130033, China)Abstract：Alzheimer’s disease has become one of the major diseases threatening the life and health of the global elderly. The number of patients is increasing year by year, and the economic cost of nursing is high, which poses a major challenge to the global economy. In recent years, studies have shown that probiotics, as microorganisms beneficial to the health of the host, have a positive impact on the prevention and treatment of Alzheimer’s disease. Its mechanism may be through regulating intestinal flora, affecting the nervous immune system, regulating the neuroactive substances and metabolites, and affecting the occurrence and development of the disease through thegut- brain axis. This paper reviews the progress of probiotics on Alzheimer’s disease at home and abroad in recent years, as well as its potential mechanism of prevention and treatment.Key words：probiotics; Alzheimer’s disease; gut microbiota; mechanism阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD），系中枢神经系统退行性疾病，属于老年期痴呆常见类型，临床特征主要包括：记忆力减退、认知功能障碍、行为改变、焦虑和抑郁等。
瑞波替尼结构式-概述说明以及解释
瑞波替尼结构式-概述说明以及解释1.引言1.1 概述瑞波替尼是一种靶向治疗药物，用于治疗多种癌症，包括非小细胞肺癌和胃癌。
它是一种酪氨酸激酶抑制剂，能够抑制癌细胞的生长和增殖。
瑞波替尼的结构式具有特定的化学结构，使其能够精准地靶向癌细胞，减少对正常细胞的损害。
本文将详细介绍瑞波替尼的化学结构、药理作用以及在临床应用中的意义，展望其未来的发展前景。
内容文章结构部分的内容包括了整篇文章的框架和组织方式。
通过对文章结构的规划，读者可以清晰地了解文章的逻辑顺序和内容安排。
在本篇文章中，我们按照以下结构进行组织:1. 引言1.1 概述1.2 文章结构1.3 目的2. 正文2.1 瑞波替尼的化学结构2.2 瑞波替尼的药理作用2.3 瑞波替尼在临床应用中的意义3. 结论3.1 总结瑞波替尼的重要性3.2 展望瑞波替尼的未来发展3.3 结论通过以上结构，我们将系统性地介绍瑞波替尼的化学结构、药理作用以及在临床应用中的意义。
同时，我们将总结瑞波替尼的重要性，并展望其未来发展。
最终，我们将得出结论，对瑞波替尼的潜在价值进行总结和展望。
1.3 目的本文的目的是对瑞波替尼这一药物进行全面的介绍和分析。
首先，我们将介绍瑞波替尼的化学结构，重点探讨其分子组成和结构特点。
接着，我们将深入探讨瑞波替尼的药理作用，包括其在机体内的作用机制和生物活性。
最后，我们将探讨瑞波替尼在临床应用中的意义，包括其在治疗特定疾病中的效果和应用前景。
通过对瑞波替尼的全面介绍和分析，旨在增进对该药物的理解，促进其在临床上的应用和发展。
2.正文2.1 瑞波替尼的化学结构瑞波替尼（Ripotinib）是一种新型的靶向治疗药物，具有独特的化学结构。
其化学名称为N-(1-(3-Fluoro-4-((3-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)propyl)amino)phe nyl)-1H-pyrazol-3-yl)-2-hydroxybenzamide。
Expression, Purification and Crystallization of
Expression, Purification and Crystallization of the Mycobacterium Tuberculosis HSP16.3 Molecular Chaperone Background of Mycobacterium Tuberculosis HSP16.3HSP16.3, a 16.3 kDa protein from Mycobacterium Tuberculosis, was originally identified as a prominent antigen (Kingston et al., 1987). During the stationary phase, HSP16.3 is maximally expressed and becomes a main protein of the latent phase (Yuan et al., 1996). Previous studies showed that HSP16.3 can make the cell structure stable and prevent stationary Mycobacterium Tuberculosis from autolysing (Cunningham et al., 1998). In previous studies, HSP16.3 was found as one of theα-crystallin-related small heat shock proteins (sHSP) with molecular chaperone activity. Experiments in vitro revealed that HSP16.3 can suppress the thermal aggregation of citrate synthase at 39.5˚C, without consumption of A TP (Chang et al., 1996).Now the Mycobacterium Tuberculosis HSP16.3 gene was cloned to the plasmid pSTE-HSP16.3, and transformed to E.Coli. BL21(DE3) strain.Material and MethodExpressionThings to have ready before Starting.-Plate or glycerol culture-Sterile LB 25ml in a 50mL shaker flasker, 250ml in a 500mL shaker flasker, all together autoclaved, antibiotic added afterword.- antibiotic and sterile water- TipsPrepare the LB and autoclave:Fomula of the LB medium for 1 Liter:Bacto Tryptone (BT) 10 gBacto Y east Extract (BYE) 10 gNaCl 10gThe LB medium, dd H2O and the tips all together autoclaved at 121 ˚C for 20 minutes.Method:1 Innoculate 25 ml LB Medium ( containing 100 ug) and grow culture overnight(37˚C, 200rpm).2 Next morning inoculate 250 ml prewarmed LB Medium ( containing 100 ug) with the 25 ml overnight culture and grow at 37 ˚C, 200rpm, HSP16.3 was overexpressed in soluble form intracellularly without IPTG induction.3 Incubate the Culture for 10 hours before havesting the cell at 4000 g for 20 minutes.4 Resuspend the cell pellet in 30 ml Butter A and freeze the Sample in -80˚C refigerator.PurificationDE52 Ion-Exchange columnThings to have ready before Starting.-Butter A: 50 mM Imidazole pH 6.5 (1 liter)-Butter B: 50 mM Imidazole pH 6.5 , 300mM NaClall together Fitrate with 0.2 um membrane.- DE52 medium , column ,Gradient maker, UV-monitor and Fractioner- TipsMethod:1 Thaw the cell pellet and vortex .2 Add 0.4ml 100 mM PMSF and sonicate (400kw, 4s-6s 50 cycle* 5 )3 Centrifuge 15000 rpm, 30 minutes to pellet debris4 Transfer supernatant to a 50 ml conicale tube and discard the pellet.5 The supernatant dilute to 50 ml with Buffer A and then load to DE52 ion-exchange columns (20ml), which was pre-equibrated with 100ml Buffer A. And then wash the unbound proteins with 100 ml Buffer A.6 Elute the protein with a linear gradient : 200ml buffer A plus 200ml buffer B, 2ml/min, 6ml each fraction.7 Run 15% SDS-PAGE to determine the HSP16.3 peak.Desalting by dialysis1 Preparation of the dialysis tubeCut the tube in a suitable length (20-30 cm)Boil the tube in solution containing 10 mM NaHCO3 for a few minutes.Boil the tube in solution containing 10 mM EDTA for a few minutes.Rasin the tube with de-ion water2 Pool the HSP16.3 peak and dialysis the Sample against 1000ml Buffer A for more than 6hours.Q-Separose (HP) Ion-Exchange Column1 load the sample to Q-Separose (HP) Ion-Exchange column (20ml), which was pre-equibrated with 100ml Buffer A. And then wash the unbound proteins with 100 ml Buffer A.2 Elute the protein with a linear gradient : 200ml buffer A plus 200ml buffer B, 2ml/min, 6ml each fraction.3 Run 15% SDS-PAGE to determine the purity of the HSP16.3 peak.Gel filtration ColumnThe HSP peak was a final volumn 0.3ml and then run though a Superdex75 (HR, 10/30mm) gel filtration column in 150mM NaCl and 5mM Imdazole, pH6.5. Crystallization1 The purified HSP16.3 was solvent-exchanged to water and concentrated to 20mg/ml before crystallization trails (Bradford). All the crystallization trials were carried out using the hanging-drop vapor-diffusion method at 291K: drops consisted of2 microlitres of HSP16.3 protein solution plus 2 microlitres of the precipitant. The drops were equilibrated against 0.2 ml precipitant at room temperature. The crystallization conditions were investigated with a PEG4000 Kit.Result and discussionThe purity of the final HSP16.3 was over 95% by SDS-PAGE. The crystallization trials of HSP16.3 yielded Cubic crystals with a size of 0.8*0.8*0.6mm in a few days.20040060080010001200mAUBuffer Tris-HCL pH 8.5 Precipitant PEG 4000 MethodV apor Diffusion Temperature 293 K Size0.8*0.8*0.6mmReferencesChang Z., Primm, T.P., Jakana J., Lee H. I., Serysheva I., Chiu W., Gilber H. F., Quiocho F. A., (1996) J Biol Chem 271:7218-7223Cunningham A. F., Spreadbury C. L., (1998) J. Bacteriol. 184:801-808Kingston A. E., Salgame P. R., Mitchison N.A., Colston M. J. (1987) Infect. Immun 55,3149-3154Yuan Y., Crane D. D., Barry C. E. III (1996) J Bacteriol178: 4484-4492。
Keap1
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)发病率占据肺癌的75%~80%。
肿瘤细胞进展快且易扩散转移，临床常采用手术、放化疗等进行治疗，但5年生存率低于60%[1-2]。
氧化应激是由活性氧(ROS)生成量增加所致，ROS积累可诱导肺癌细胞凋亡，清除ROS 可阻止癌细胞凋亡，即肺癌细胞存活依赖于癌细胞自身抗氧化能力[3]。
Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (kelch-like epichlorohydrin-associated protein-1，Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor E2related factor 2，Nrf2)信号通路在癌症中发挥重要调控作用，氧化应激可激活Keap1，促使Keap1-Nrf2复合物裂解，Nrf2转移至细胞核内，可激活下游靶基因表达，参与肺癌发生发展过程[4]。
Nrf2可维持氧化还原稳态，ROS侵袭细胞时，Nrf2可进入细胞核，结合抗氧化反应元件(ARE)转录编码各种抗氧化蛋白、代谢酶基因，抑制氧化应激反应[5-6]。
目前氧化应激、Keap1/Nrf2信号通路在NSCLC发生过程中的机制尚未明确。
基于此，本研究尝试分析Keap1/Nrf2信号通路与临床病理参数、氧化应激指标的相关性，探讨其在NSCLC氧化应激机制中的作用，为临床研制新药提供参考依据。
1资料与方法1.1一般资料选取2017年4月至2020年4月郑州市第三人民医院收治的100例NSCLC患者为研究对象。
纳入标准：符合NSCLC诊断标准[7]；术前未接受放化疗、免疫治疗者；预计生存期≥6个月；符合手术适应证、禁忌证；Karnofsky功能状态评分≥70分；签署知情同意书。
排除标准：合并凝血功能障碍、肝肾功能障碍、其他恶性肿瘤者；伴有急/慢性感染者；伴有精神疾病者；既往腹部相关外科手术史者。
所有患者均行肺癌根治性切除术，术中收集癌组织、癌旁组织(距离癌组织5cm范围内正常组织)，其中男性63例，女性37例；年龄46~67岁，平均(56.32±3.16)岁；体质量指数(BMI)17~30kg/m2，平均(23.16±2.03)kg/m2；病理类型：鳞癌58例、腺癌42例；病理分级[8]：Ⅰ~Ⅱ级51例、Ⅲ级49例；T分期[9]：T1~T253例、T3~T447例；N分期：N055例、N1~N245例。
biomaker
生物标记物基本简介生物标记物(biomarker)[1]是近年来随着免疫学和分子生物学技术的发展而提出的一类与细胞生长增殖有关的标志物。
生物标记物不仅可从分子水平探讨发病机制，而且在准确、敏感地评价早期、低水平的损害方面有着独特的优势，可提供早期预警，很大程度上为临床医生提供了辅助诊断的依据。
代谢标记物骨代谢标记物通过测定尿中吡啶诺林(pyridinoline，PYD)及I型胶原N尾端交联肽(NTX-I)和C 尾端交联肽(CTX-I)水平可反映骨I型胶原的代谢。
研究发现OA患者中PYD水平明显升高，进展期OA患者尿中CTX-I水平明显高于对照组。
血清降钙素作为一种反映骨合成的标记物在OA患者的研究中表现出不一致的结果。
利用现有的骨代谢标记物反映OA病情欠满意。
更多学者致力于挖掘更具特异性、敏感性的反映软骨和滑膜代谢的标记物。
软骨代谢标记物可通过数种标记物的检测反映软骨Ⅱ型胶原的合成代谢，其中，Ⅱ型胶原羧基木端肽(CTX-Ⅱ)最为重要。
多项研究已证实0A和RA患者中尿CTX-Ⅱ水平明显升高。
通过测定血清PIICP(procollagen type ⅡC-terminalpropeptide，Ⅱ型前胶原羧基端前肽)发现Ⅱ型胶原合成在OA早期阶段即有增加。
Rousseau［2］利用ELISA法测定PIIANP，发现其水平在OA患者中降低。
Deberg［3］发现了软骨II型胶原2种降解产物肽：Coll2-1及Coll 2-1 NO2水平在OA患者中升高。
Charni［4］发现膝OA患者中尿HELIX-Ⅱ水平较健康对照组显著升高。
表1 骨，软骨，滑膜代谢标记物的BIPED分类组织分子合成标记物降解标记物BIPED 分类方法骨Ⅰ型胶原[编辑本段]临床应用诊断性标记物尽管目前研究的大部分标记物水平(CTX-Ⅱ，COMP，PYD等)在大部OA个体中明显升高，但在一定比率患者中却表现出正常水平。
这提示这些标记物单独作为OA 诊断工具仍不具备足够敏感性。
糖尿病预防试验
糖尿病预防试验.txt——某天你一定会感谢那个遗弃你的人，感谢那个你曾深爱着却置之你不顾的人。
做一个没心没肺的人,比什么都强。
________舍不得又怎样到最后还不是说散就散。
糖尿病预防试验糖尿病预防试验－1型糖尿病Diabetes Prevention Trial - Type 1 Diabetes (DPT-1)* 目的为明确利用以抗原为基础的治疗于1型糖尿病患者的非糖尿病亲属，进行早期干预，能否延缓1型糖尿病的发生* 1型糖尿病患者的一级亲属发生糖尿病的危险较一般人群高10倍以上* 通过测定针对胰岛β细胞自身抗原的自身抗体可检出将要发生糖尿病者* 第一步筛查为检出胰岛细胞自身抗体 (ICA) 阳性者* 然后再根据其他指标确定发生1型糖尿病的危险度，并进行干预性治疗评估发生糖尿病的危险度分级胰岛细胞 1VGTT 胰岛素 5年内发危险性自身抗体第1相自身抗体生糖尿病ICA In分泌 IAA 可能性高度 (+) 消失 (+, -) > 50 %中度 (+) 正常 ( + ) 20~25 %低度 (+) 正常 ( - )DPT-1干预试验10个临床中心，包括200多个附属单位参加* 实验性治疗组: 年度i.v.滴注胰岛素疗程辅以长期s/c注射胰岛素* 密切观察组 (对照)* 实验性治疗组: 口服胰岛素* 安慰剂对照组DPT-1实施情况> 筛查89220名1型糖尿病一级亲属> 查出3152例 ICA (+) 者> 从中选出354例进入研究> 169例随机分至用胰岛素处理组 (注射或口服)170 例随机分至对照观察组* 结果: 阴性，干预处理未能取得明显效果* 按语: ICA 作用不够，GAD 可能更重要一些口服胰岛素稍优于皮下注射胰岛素美国2型糖尿病预防计划 DPP-2* 多中心，24个中心* 大样本，4000例IGT，无明显心、肾、肝病* 随机分组①强化生活方式改变②二甲双胍，每天1700 mg (850 mg Bid)③曲格列酮，每天400 mg④安慰剂②、③、④组亦遵循标准的 (非强化) 饮食及运动计划* 1996年7月1日开始入选对象强化生活方式改变组方案* 饮食管理> 总热量摄入 1200－1800 卡> 脂肪占总热量的 20 %* 每周中度运动，至少 150 分钟* 健康教育 16 次* 长期随访，在指导下进行* 营养师、糖尿病教员、心理咨询、运动教育* 重点自我监测，解决出现的问题* 每 2 月随访* 定期上课，集体活动DPP-2 结果I* 93 % 完成计划* 平均干预处理 2.8 年* 74 % 达到每周运动 150 分钟* 体重下降 7 公斤* IGT → T2DM年转变率> 强化生活方式改良组 4.8 %> 二甲双胍 7.4 %> 安慰剂 11.0 %DPP-2 结果II芬兰糖尿病预防研究 DPS* 多中心，大样本，IGT干预试验* 522 例中年人> 男 172、女 350> 平均年龄 55 岁> 平均体重指数 31* 随机分为强化生活方式改良组及对照组* 平均随访 3.2 年DPS强化干预方案* 健康教育、饮食指导、运动指导* 第 1 年 7 次，第 2 年起每 3 个月 1 次* 减体重目标: 5 % 或更多* 总脂肪摄入占总热量 30 %以下饱和脂肪占总热量10 % 以下* 增加纤维摄入量，每1000 kcal至少 15 克* 每天中等运动量至少 30 分钟DPS结果* 体重下降第1 年底第2年底干预组平均 4.2 kg 净下降均值 3.5 kg 对照组平均 0.8 kg 净下降均值 0.8 kg * 4 年DM 积累发生率> 干预组11 %> 对照组23 %* 发生糖尿病危险度降低 58 % ( p < 0.001)* 结论：通过生活方式改良，可预防糖尿病STOP-NIDDM IGT干预试验* 多国家、多中心、大样本试验* 1368 例随机分至阿卡波糖组及安慰剂组* 阿卡波糖 100 mg，日服 3 次* 平均随访 3.4 年* IGT 转为 T2DM 累计率试验中止时停药3个月后阿卡波糖组 32.8 % 39.7 %安慰剂组 41.8 % 44.9 %DCCT / EDIC (NIH)DCCT 1993 糖尿病控制与并发症试验强化血糖控制对比一般血糖控制，平均 6.5 年* HbA1c 7 % 比 9.1 %* 视网膜、神经、肾脏病变减少 50 % ～ 70 %* 大血管病变 (心血管原因死亡、心肌梗死、重要周围血管病变分别统计皆无统计学差异) 合并统计，减少41 %，p = 0.06* 可能与病人年龄较小有关，试验开始时平均27岁EDICDCCT 结束时，决定对病人进行随访不再分强化治疗及常规治疗皆鼓励作强化治疗目的为了解大血管病变及肾脏病变发展规律由1994～2006年，此研究称为《糖尿病干预治疗及并发症的流行病学》(EDIC)EDIC 1994～2000> DCCT 6 年以后原 2 组患者HbA1c相同，8.1 % 比 8.2 %> 颈动脉壁厚度超声检查以颈动脉壁厚度增加的程度反映动脉粥样硬化的发展> 原常规治疗组增加 10 %，强化组增加 7.6 %原强化组减少 24 %，在年龄较大者差别更明显* 结论：> 在一定关键时期内强化血糖控制对心血管病变起长远的有益影响> 反之，血糖控制不佳有利于并发症的发生，亦难以控制其发展RENAAL试验Reduction of Endpoints in NIDDM with theAII Antagonist Losartan血管紧张素II拮抗剂氯沙坦(科索亚)在2型糖尿病中减少临床终点的试验* 一项由研究者发起的、多中心、三盲、随机化、安慰剂对照的研究，评价氯沙坦对2型糖尿病肾病患者的肾脏保护作用* 1513例病人，29个国家的250个中心RENAAL -- 入选/排除标准入选标准* 2型糖尿病* 年龄 31-71 岁* 蛋白尿(尿白蛋白/肌酐 > 300mg/g, > 25 mg/mmol)* 血肌酐(1.3-3.0 mg/dl,115-265 μmol/L)*RENAAL -- 研究设计* CT = 常规治疗: 钙拮抗剂、利尿剂、β-受体阻滞剂或α-受体阻滞剂RENAAL -- 入选者基线特征 (I)氯沙坦(+ CT) 安慰剂 (+CT)(n=751)(n=762)年龄 (岁) 60 60男, % 62 65女, % 38 35种族, %亚裔 16 18黑人 17 14白人 48 50西班牙裔 19 18其他 2 1收缩压 (mmHg) 152 153舒张压 (mmHg) 82 82体重指数BMI (kg/m2) % 30 29RENAAL -- 入选者基线特征 (II)氯沙坦 (+ CT) 安慰剂(+CT)(n=751)(n=762)病史% %高血压治疗92 95心绞痛9 10心梗10 12冠状动脉血管成型术 0.1 0.1中风0 0.1血脂异常31 36贫血21 22截肢9 9神经病变50 50眼底病变66 62激光治疗/光致凝固术 6 7吸烟(目前) 20 17RENAAL -- 入选者基线特征 (III)氯沙坦 (+ CT) 安慰剂 (+CT)实验室检查(n=751) (n=762)尿白蛋白: 肌酐 (中位数) (mg/g) 1237 1261尿白蛋白: 肌酐 (平均数) (mg/g) 1875 1743血肌酐(mg/dl) 1.9 1.9血胆固醇 (mg/dl)总胆固醇227 229LDL-C 142 142HDL-C 45 45血甘油三酯(mg/dl) 212 225血钾(mEq/L) 4.6 4.6血尿酸(mg/dl) 6.7 6.7血红蛋白(g/dl) 12.5 12.5糖化血红蛋白(%) 8.5 8.4RENAAL -- 首要综合终点及组成氯沙坦 + 安慰剂 +综合终点及 (常规治疗) (常规治疗)组成(n=751) (n=762) 危险性n (%) n (%) P-Value下降 % 95 % Cl血清肌酐加倍，终末期肾病及死亡 327 (43.5) 359(47.1) 0.024 16(2.28)血清肌酐加倍 162(21.6) 198 (26.0) 0.006 25(8.39)终末期肾病 147 (19.6) 194 (25.5) 0.002 28(11.42)死亡 158 (21.0) 155(20.3) 0.882-2 (-27.19)终末期肾病及死亡 255 (34.0) 300 (39.4) 0.010 20(5.32)RENAAL 次要综合终点及组成氯沙坦 + 安慰剂 +综合终点及 (常规治疗) (常规治疗)组成(n=751) (n=762) 危险性n (%) n (%) P-Value下降 % 95 % Cl心血管患病率/死亡率247 (32.9) 268 (35.2) 0.255 10(-8.24)CV死亡 90 (12.0) 79 (10.4) 0.455 -12(-52.17)心衰 89 (11.9) 127 (16.7) 0.005 32(11.48)心梗50(6.7) 68 (8.9) 0.07928 (-4.50)不稳定心绞痛 42 (5.6) 41 (5.4) 0.881 -3(-59.33)中风 47 (6.3) 50 (6.6) 0.7875 (-41.36)血管重建术 69 (9.2) 60 (7.9) 0.332 -19(-68.16)诺和龙新进展于肾功能正常或受损的2型糖尿病患者诺和龙的安全性及有效性* 多国家参与的临床试验* 2型糖尿病281例，按肌酐清除率(CLcr)作肾功能分类> 正常 (>80ml/min) 151例> 轻度受损(60-80ml/min) 64例> 中度受损(40-60ml/min) 44例> 重度受损(30-40ml/min) 12例> 极重受损(20-30ml/min) 10例* 纳入期：6周，患者继续用原治糖尿病药* 改用诺和龙，1-4周调节剂量期，3个月维持剂量期* 84%患者完成了试验诺和龙于不同肾功者的有效性* 不同肾功能组HbA1c、空腹血糖、总胆固醇、HDL-C、甘油三酯皆无显著差别* 诺和龙对糖代谢疗效与以往治疗相比至少相等， HbA1c于肾功能正常及轻、中度受损者不变；重度受损者增加0.3%；极度受损者降低0.6%* 最终诺和龙用量，肾功能重度和极度受损者较其余组为小(P=0.032)诺和龙于不同肾功者的安全性* 不论肾功能状况如何，诺和龙皆较为安全* 不良反应的类型及严重程度在纳入期及用诺和龙期相仿* 发生不良反应例数与肾功能状况无明显相关* 在纳入期，低血糖的发生率与肾功能受损程度明显相关(P=0.007)；此种情况不见于用诺和龙治疗时(P=0.074)于肾功能正常或受损的2型糖尿病患者诺和龙的安全性及有效性总结诺和龙对2型糖尿病中餐后代谢控制的优越性：血浆游离脂酸（FFA）变化更符合生理性* 目的：研究诺和龙对比磺脲类对餐后代谢控制是否有优越性* 对象：12例2型糖尿病患者随机分为2组> SU组继续服格列奇特> RE组改服诺和龙* 治疗4周后进行试验> 混合餐前15分钟分别服降糖药> 试验餐含热量550Kcal，碳水化合物67%，脂肪19%，蛋白质14%及2g标记的葡萄糖诺和龙与餐后血FFA结果* 两组葡萄糖吸收速率相同* RE组血浆胰岛素(mu/L)上升速率较快，20分钟时，RE组为27.1± 4.7，SU组为19.4± 3.3；但两者峰值相仿。