实验二毛细血管采血微量吸管牛鲍计数板的使用及显微镜法红细胞计数

7、实验评价
微量吸管使用是手工法血细胞分析的第一 步，有很多因素影响检验结果的准确性和 精确度，如一次性吸管的质量、操作者的 技术熟练程度和责任心等。
三、改良牛鲍计数板的使用
（一）目的：掌握改良牛鲍计数板结构及使 用方法。
（二）原理：一定倍数稀释的血液或体液混 匀后滴入具有固定体积和精密划分刻度的 改良牛鲍计数板中，在显微镜下对所选择 的区域中的细胞进行计数，在乘以稀释倍 数，即可换算成单位体积内的细胞数。
3、冲池 用完了吸管吸取制备好的再次混匀的红细 胞悬液，沿盖玻片与计数板之间的缝隙冲入计数 池。充液量以恰好充满一侧计数池为宜，不可过 多、过少或有气泡，否则需重新操作。
附：牛鲍计数板基本结构
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽 构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分 隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网 共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数 区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格 （大方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格； 另一种是一个计数区分成25个中方格（中方格之间用双线 分开），而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数 区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由 400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积 为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后， 计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为 0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
急时用。
【操作方法】
l、取红细胞稀释液1.99ml 毫升，放入一小试 管内。
2、用微量吸管吸血至l0ul 处。 3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛
有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗 吸管2-3次，立即摇匀。
4、用微量吸管或玻棒取混悬液少量，充入计 数池内。
5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计 数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察， 如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
红细胞计数的区域:
中心大方格中的5个中方格(正中一 个和四角各一个)。
四、显微镜法红细胞计数
原理
用等渗稀释液将血液稀释一定的 倍数后，滴入计数板，在显微镜下计 数一定范围内红细胞数，经换算可求 得每升血液中的红细胞数。
红细胞稀释液
? Hayem液（赫姆氏红细胞稀释液 ） ? 枸橼酸钠稀释液 ? 普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水
①Hayem液
主要成分及作用： ?NaCl 调节渗透压； ?Na2SO4 调节渗透压，提高比重防止细胞
（三）、实验用品
1、器材 改良牛鲍计数板、专用盖玻片、光 学显微镜、绸布、微量吸管、带孔乳胶吸 头、刻度吸管、试管。
2、试剂 红细胞稀释液
（四）标本：抗凝血
（五）操作
1、稀释血液 取试管1支，加红细胞稀释液 2ml,加抗 凝血10微升，立即混匀，制成红细胞悬液。
2、准备计数板 用绸布拭净改良牛鲍计数板和专业 盖玻片，采用推式法从计数板下缘向前平推盖玻 片，将其盖在计数池上。
注意事项
所选择的采血部位，不能有冻疮、紫绀、水肿、炎 症等；皮肤消毒后，一定要乙醇挥发干燥后采血，否则流 出的血会四处扩散而不成滴；为避免交叉感染，采血针在 使用前应进行高压灭菌，并严格实行一人一针制；如穿刺 后血液不易流出，可于伤口远端稍加压力，或重新穿刺。 切忌用力挤压，以免混入大量组织液，使血液稀释影响检 验结果，且血液更易凝固；进行多项检查时，采取标本的 顺序为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞 计数等；出血时间测定需另外刺一部位，凝血时间另行测 定。
实验二
毛细血管采血、微量吸管及改良牛 鲍计数板使用及显微镜法红细胞计 数
医学检验技术教研室 13级检验用
一、毛细血管采血法
目的：掌握毛细血管采血方法。 实验器材：专用“采血针”、微量定量吸管、
标本容器等。 标本：末梢血。
操作方法
首先用手指按摩采血部位，使中指或无名指指尖 自然充血，再用 75%酒精棉球消毒皮肤，待酒精 挥发干燥后，用左手拇指和食指固定采血部位， 右手持消毒刺针，自指尖腹侧迅速刺入 2 mm～3 mm，让血液自然流出，用消毒棉球擦去第一滴 血后，按需要依次采血，采血完毕，用消毒干棉 球压住伤口片刻即可。
二、微量吸管使用
1、目的：掌握微量吸管的实验方法。 2、原理：挤压乳胶头使微量吸管产生负压而
吸取液体。 3、实验用品： 一次性微量吸管、带孔乳胶吸头、试管、2ml
吸管、NS等。 4、标本：新鲜抗凝血
5、操作方法
（1）准备吸管 将带孔的乳胶吸头套在微量吸管上， 连接处应严密不漏气。
（2）加稀释液 取试管1支，加生理盐水 2ml. （3）持管吸血 右手拇指和中指夹住吸管及吸头交
接处，示指盖住吸头小孔，三个指头轻微用力， 排出适量的气体使管内形成较小的负压，将管尖 插入抗凝血（或末梢血），三个指头慢慢松劲， 吸取抗凝血到所需刻度后，抬起示指，注意管尖 始终不要离开液面，以免吸入气泡，也不要过度 用力将血液吸入乳胶吸头。
（ 4）拭净余血 用干棉球顺微量吸管口拭净 余血。
（5）稀释血液 将微量吸管插入含生理盐水 （或稀释液）的试管底部，慢慢排出吸管 内的血液，再用上清液冲洗管内余血2-3次。
粘连； ?HgCl2 防腐； 缺点：遇高球蛋白血症患者，由于蛋白质沉
淀而使红细胞易凝集。
②枸橼酸钠稀释液
主要成分及作用：
?NaCl
调节渗透压；
?枸橼酸钠 调节渗透压，抗凝；
Hale Waihona Puke ?甲醛防腐；优点：配制简单，可使红细胞在稀释后较长 时间保持正常形态并且不凝集，故应用较 广。
③普通生理盐水或加1%甲醛的 生理盐水
（6）洗涤吸管 依次用蒸馏水洗净，95%乙 醇脱水。乙醚干燥。如为一次性微量吸管， 可省略该步骤。
6、注意事项
（1）操作步骤3需反复练习才能准确吸取血 液到所需量。
（2）一次吸取血液到所需的量，吸管内不能 有空节也不能吸取血液过多，最好不要超 过所需刻度的±2mm.
（3）稀释血液前一定要拭净管外余血，释放 血液时的动作不能太剧烈，避免破坏血液 成分或不能利用上清液将管内血液洗净。