牛传染性鼻气管炎病毒检测方法研究进展

中国动物保健
2020.03
疾病防治
牛传染性鼻气管炎病毒检测方法研究进展
刘清荣
（山东省诸城市畜牧业发展中心山东潍坊262200）
牛传染性鼻气管炎病毒属于疱疹病毒I 型，病牛和带毒牛是主要传染源，牛传染性鼻气管炎病毒可以发生呼吸道和生殖道传播，病毒通过胎盘可以发生垂直传播。

此外，病毒
可
传染性鼻气管炎病毒是牛易感的病毒性传染病，以呼吸道症状为主，是一种急性、热性、接触性传染病。

近年来，牛传染性鼻气管炎病毒的发病呈上升趋势，对养牛产业危害较大，加强牛传染性鼻气管炎病毒的实验室检测对预防和控制本病起到关键作用，本文主要综述牛传染性鼻气管炎病毒的检测方法研究进展，为相关疾病的诊断及防控提供参考。

传染性鼻气管炎病毒；检测方法；研究
进展
以在体内潜伏在腰、脊神经节或三叉神经节内，带毒牛呈潜伏感染状态，可以长期带毒。

不同年龄和性别的牛都可以感染病毒，病牛主要临床表现为鼻气管炎、脑膜脑炎，孕牛流产，产死胎，子宫内膜炎和乳房炎，肠炎等，牛传染性鼻气管炎病毒危害巨大，只有加强牛传染性鼻气管炎病毒的实验室检测才能有助于疾病的早期诊断和防治，牛传染性鼻气管炎病毒的实验室检测方法主要有下面几种。

1PCR 检测方法
PCR 方法是最常用的分子生物学技术，通过设计特异性检测引物实现核酸片段的体外扩增，是动物疾病检测特异、敏感、准确的检测方法。

徐娜等[1]建立了牛传染性鼻气管炎病毒双重PCR 检测方法，该方法根据GenBank 中公布的牛传染性鼻气管炎病毒gE 和gB 基因序列设计2对特异性检测引物，预期扩增片段大小分别为112和78bp ，该检测方法特异性强，对牛支原体、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒、巴氏杆菌、牛和羊布鲁菌检测结果均为阴性，gB 引物最低检测浓度为2.3×103拷贝/μL ，gE 引物最低检测浓度为2.4×103拷贝/μL ，该检测方法重复性好，可以用于牛传染性鼻气管炎病毒野毒株感染和gE 基因缺失疫苗株的鉴别诊断。

2荧光定量PCR 检测方法
荧光定量PCR 是更加敏感特异的PCR 检测方法，张颖慧等[2]
建立了牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR 检测方法，该检测方法特异性好，对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛腺病毒3型、牛冠状病毒、牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌的检测为阴性，敏感性高，检测下限为2.4拷贝/μL 质粒标准品，检测过程时间短，利用病毒基因组试剂盒仅需1h 就能出结果，通过对9个省29份商品化冻精检测，牛传染性鼻气管炎病毒阳性率为24%，说明商品化冻精中牛传染性鼻气管炎病毒感染率较高，应该引起广泛关注，该检测方法可以用于牛传染性鼻气管炎病毒的快速检测。

3LAMP 检测方法
LAMP 检测方法是一种可视化、快速、特异的检测方法，特别
适合于基层和现场临床样品的快速检测。

董世娟等[3]建立了牛传染性鼻气管炎可视化LAMP 检测方法，该方法根据牛传染性鼻气管炎病毒的保守序列gB 基因设计3对LAMP 检测引物，通过对反应体系的优化和特异性试验及敏感性试验建立了牛传染性鼻气管炎可视化LAMP 检测方法，最适反应条件为65℃、50min 条件下扩增反应，根据颜色变化判定结果。

该方法的检测下限为10拷贝/μL 的质粒DNA ，敏感性比普通PCR 方法高很多，对牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病毒、水泡口炎病毒等没有交叉反应，应用该方法检测393份临床样本，301份鼻腔拭子阳性率为87.6%，92份血清样本阳性率为58.8%，表明鼻腔拭子的检出率更高，更适合临床采样，该检测方法可以用于牛传染性鼻气管炎病毒的基层和现场临床样品的快速检测。

4胶体金检测方法
胶体金检测方法具有简便、快速、灵敏、稳定、特异、结果易判等诸多优点。

梅力等[4]制备了牛传染性鼻气管炎病毒抗体胶体金检测试纸条，该试纸条采用杆状病毒表达系统表达牛传染性鼻气管炎病毒gD 蛋白抗原，将gD 蛋白纯化后用胶体金标记作为示踪抗原，未标记的gD 蛋白抗原作为捕获抗原，羊抗牛IgG 抗体作为质控抗体，制备了牛传染性鼻气管炎病毒双抗原夹心法胶体金检测试纸条，该试纸条特异性好，灵敏度高，与牛口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒等阳性血清无交叉反应，与IDEXX 牛传染性鼻气管炎病毒抗体ELISA 检测试剂盒的阳性符合率为93.5%，可以用于牛传染性鼻气管炎病毒抗体的临床诊断和检测。

5结语
牛传染性鼻气管炎病毒是一种以呼吸道症状为主的病毒性传染病，传播迅速，对养牛业危害巨大，该病目前没有特效治疗药物，只有加强疫苗免疫和疾病的快速诊断和隔离淘汰才是控制本病流行的最好方法，因此，建立快速的疾病诊断方法对防控本病至关重要，实际应用中可以根据需要综合运用各种实验室检测方法，更好的控制牛传染性鼻气管炎病毒的传播和流行。

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参考文献：
[1]徐娜,杨帆,雷宇,等.牛传染性鼻气管炎病毒双重方法的建（下转第23页
）
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2020.03.015
淋巴结出现肿大和出血的病变，尤其是在肠系膜淋巴结和腹股沟淋巴结表现尤其明显。

5诊断方法
本病根据流行规律、临床症状以及病理剖检变化等可以做出初步的诊断，对疾病进行确诊还需要通过实验室技术。

在实验室诊断本病，通常可以用到的方法有血清学方法和病原学方法。

血清学方法有免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、间接免疫荧光试验（I-FA）、血清中和试验（SN）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）[3]。

这些免疫学方法通常在应用中具有一定的局限性和主观性，通常结果不够准确可靠。

但血清中和试验和酶联免疫吸附试验具有较高的敏感性和特异性，可以用于本病的确诊。

病原学诊断用的方法有病毒的分离鉴定和分子生物学方法。

病原学方法相对具有较高的特异性，能够准确对疾病做出诊断。

还可以对病毒进行深入的研究，如对病毒的类型以及病毒基因序列都可以研究。

病毒分离鉴定是应用原代肺泡巨噬细胞以传代细胞对病毒进行培养，对培养出来的病毒可以应用荧光技术来鉴定，还可以应用酶抗体法鉴定。

分子生物学方法是目前可以应用的最为准确和广泛的一种技术，常用的是RT-PCR技术和核酸探针原位杂交技术。

这两种技术均有非常高的灵敏度，可以检测到病料组织中的微量病原，能够为本病做出准确的诊断。

6防治措施
6.1预防
针对本病要加强预防为主，通过加强饲养管理来进行预防工作。

猪场要保证饲养环境的卫生和营养物质的需求量。

猪舍内要保持有合理的饲养密度，确保猪群不过于拥挤。

还要具有良好的通风条件，以便能够及时将舍内的有害气体排出，吸入新鲜空气。

猪舍要有保温的作用，能够在高温季节内起到防暑降温的效果，在寒冷季节起到防寒保暖的作用。

猪群的饲料要求营养全面，搭配合理，这样可以提升猪自身的免疫力，降低感染发病的风险。

饲料还要求新鲜和具有良好的品质，尤其是在潮湿的季节要防止饲料发生霉变，一旦猪群采食霉变饲料就会出现霉菌毒素中毒的情况，从而导致体质下降，甚至引起发病。

猪舍需要定期进行打扫和消毒，及时将猪舍中的粪便和各种污染物清除出去，而后对舍内进行全面的消毒，消毒要求全面和彻底，不能够留有死角，对于进入养殖区的车辆和人员也要进行消毒，防止将病原体带入到养殖场。

此外还需要对养殖场内的老鼠和各种寄生虫予以杀灭，防止老鼠和寄生虫携带病毒，造成病毒的扩散和感染。

本病可以通过疫苗接种的方式进行预防，通常猪场可以选择1种活疫苗进行接种，不能使用多种疫苗。

常用的疫苗有猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（R98株），具有良好的抗原性和保护力，而且免疫后产生抗体的时间短，副作用小。

猪场还应当建立自繁自养的养殖模式，尽量避免从场外进行引种，如果确实需要引种，可以选择从非疫区引种，而且在引种时需要对引进的猪进行检疫，确保阴性，在引进入猪场后，要隔离饲养30d 以后确定没有出现临床症状时才可以混群饲养。

引种要防止从不同的猪场引进。

猪场内不同年龄和类型的猪要避免混合饲养，应当采用全进全出的养殖制度。

在本病的高发季节，可以在猪群的饲料中添加一些提升免疫力的药物，如黄芪多糖、鱼腥草以及多种维生素和微量元素等。

6.2治疗
猪场一旦发病，要及时对发病猪进行隔离处理，对猪场进行封锁，防止造成疫情的扩散。

对病猪的分泌物和排泄物要进行无害化处理。

隔离的病猪进行对症治疗。

应用止咳、止泻的药物对症治疗，同时对体温不断升高的病猪不间断进行物理降温，适当配合和使用抗菌药物，防止出现继发感染。

也可以应用中草药进行治疗，常用的中草药有板蓝根、麻黄、连翘、杏仁、大青叶和炙甘草等，煎水后给病猪灌服。

能起到一定的疗效。

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参考文献：
[1]王蕾,陈振勇.猪繁殖与呼吸综合症的综合防治[J].畜牧兽医科技信息, 2014(08):92.
[2]赵飞,冯卫.猪繁殖与呼吸综合症的诊断及综合防治措施[J].农技服务, 2013,30(12):1338-1339.
[3]李晓辉.猪繁殖与呼吸综合症的诊断方法及防治措施[J].现代畜牧科技, 2017(05):8-9.
（上接第18页）立[J].动物医学进展,2017,38(12):5-8.
[2]张颖慧,岳华,汤承,等.牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立[J].中国预防兽医学报,2019,41(6):601-604+640.
[3]董世娟,冯蒙,于瑞嵩,等.牛传染性鼻气管炎可视化LAMP检测方法的建立和应用[J].生物工程学报,2018,34(10):1587-1595.[4]梅力,李永清,宋彦军,等.牛传染性鼻气管炎病毒抗体胶体金检测试纸条的制备[J].中国兽医杂志,2019,55(1):39-43+5.。