淫羊藿和甘草配伍对淫羊藿主要化学成分的影响

淫羊藿和甘草配伍对淫羊藿主要化学成分的影响
聂静;陈素娟;高歌;杨芊芊;韩晶晶;王艳娟;李强
【摘要】目的研究淫羊藿与甘草不同比例配伍时淫羊藿主要化学成分的影响.方法将淫羊藿与甘草分别按照不同比例配伍,水煎,制备供试样品,采用HPLC法测定淫羊藿苷的含量,Kromasil C18 (250 mm×4.6mm,5μm)型色谱柱,以水为流动相A,乙腈为流动相B,在流速为1.0 mL· min-1下进行洗脱;检测波长:270 nm;柱温:25℃.结果淫羊藿与甘草配伍后,各配伍组淫羊藿中淫羊藿苷等多种成分的含量均有不同程度的增加,在淫羊藿与甘草的配伍比例为5∶1时含量增加最明显,有些成分含量则无明显改变.结论淫羊藿与甘草配伍后药材中淫羊藿苷等成分溶出量较单味淫羊藿提高,可为二药配伍应用提供参考.
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2019(034)003
【总页数】3页(P295-297)
【关键词】淫羊藿;甘草;配伍;淫羊藿苷
【作者】聂静;陈素娟;高歌;杨芊芊;韩晶晶;王艳娟;李强
【作者单位】北京中医药大学中药学院,北京 102488;北京中医药大学中药学院,北京 102488;北京中医药大学中药学院,北京 102488;北京中医药大学中药学院,北京102488;北京中医药大学中药学院,北京 102488;吉林紫鑫药业股份有限公司,吉林130022;北京中医药大学中药学院,北京 102488
【正文语种】中文
【中图分类】R284
淫羊霍为多年生草本植物淫羊霍的地上部分，作为滋补类中药始载于《神农本草经》，已有2 000多年的历史。

淫羊藿味辛、甘，性温，归肝、肾二经，为补命门、益精气、强筋骨、补肾壮阳之要药[1]。

淫羊藿的主要活性成分是以淫羊藿苷等为代表的异戊烯基取代黄酮苷类，但其水煎液提取率较低[2]。

甘草为源自豆科的补益中草药，能补脾益气、清热解毒、缓急止痛、调和诸药[3]，在药物配伍中发挥着重要作用。

甘草皂苷是甘草的主要活性成分，其具有表面活性剂的性质，能在水溶液中形成胶束，具有增溶作用[4-6]。

我国很多民间经验方如补肾安神口服液和健阳片等均含有淫羊藿和甘草，但二药配伍对淫羊藿苷等成分溶出量的影响目前研究较少。

本文探讨了淫羊藿和甘草以不同比例配伍煎煮时对淫羊藿所含淫羊藿苷等主要成分的影响[7-9]。

1 仪器与试药
1.1 仪器 Waters 2695型高效液相色谱仪，包括四元泵、DAD检测器、在线脱气机、自动进样器和柱温箱(美国Waters公司)；Kromasil C18色谱柱(250
mm×4.6 mm，5 μm)，广州艾欣科学仪器有限公司；98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)；BT25S型电子分析天平(上海荆和分析仪器有限公司)；0.45 μm 微孔滤膜(天津市津腾实验设备有限公司)。

1.2 试药淫羊藿苷对照品(中国食品药品检定研究院)；淫羊藿及甘草药材(北京同仁堂药店)，均符合《中国药典》2015年版中药用淫羊藿及甘草的规定[10]；乙腈为色谱纯(美国Fisher公司)；水为超纯水。

2 方法与结果
2.1 色谱条件应用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm) 型色谱柱；水为流动相 A，乙腈为流动相B；流动相:乙腈-水(30∶70)；在流速1.0 mL·min-1下进
行洗脱[11-14]；检测波长：270 nm；柱温：25 ℃。

2.2 对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品
3.78 mg，置于 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备分别称取淫羊藿和甘草饮片，按照1∶0，6∶1，5∶1，
4∶1，3∶1，2∶1，1∶1，0∶1，1∶2，1∶3和1∶4的比例混合，每份均含淫
羊藿10 g，置于烧瓶中，加10倍量纯水浸泡 30 min 后，回流提取3次，每次1 h，合并提取液，浓缩并用水定容至100 mL量瓶中，分别得到11个样品液。

分
别精密量取各样品液 1 mL，置于11个10 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用乙酸乙酯萃取3次，每次15 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解并
定容至5 mL，即得供试品溶液1～11[15]。

2.4 淫羊藿苷的定性分析分别取2.2项下制备的淫羊藿苷对照品溶液和2.3项下制备的供试品溶液1，注入液相色谱仪，测定并绘制其色谱图，见图1。

由图1可知，特征峰的保留时间一致(tR1=11.376 min，tR2=11.341 min)，且两峰的形态相同，说明两峰是同一物质。

图1 HPLC图
A.淫羊藿苷对照品溶液;
B.供试品溶液1；1.淫羊藿苷。

Fig.1 HPLC chromatograms
A.icariin reference substance；
B.sample solution 1；1.icariin.
2.5 方法学考察
2.5.1 标准曲线的建立精密吸取2.2项下制备的对照品溶液适量，加甲醇制成质量浓度分别为4.03，12.09，24.18，48.36，96.72和19
3.44 μg·mL-1的对照品溶液，各吸取10 μL，进样，依法测定,以峰面积值(y)对进样量(x)进行线性回归，得
回归方程为y=3 777.6x+25.991(r=0.999 9)，线性范围为0.040 3～1.934 4 μg。

2.5.2 精密度实验取2.3项下制备的供试品溶液1，按照2.1项下色谱条件，连续
进样6次，每次5 μL，计算淫羊藿苷峰面积的RSD值为0.72%，结果表明，该仪器精密度良好。

2.5.3 稳定性实验取2.3项下制备的供试品溶液1，分别于制备后0，1，2，4，8，12和24 h进样分析，测定淫羊藿苷峰面积RSD值为1.27%，表明淫羊藿苷在
24 h内稳定。

2.5.4 加样回收率实验精密称取已知含量的淫羊藿0.1 g，6份，加入2.2项下制
备的淫羊藿苷对照品溶液，按照2.3项下供试品溶液制备方法进行制备，按照2.1项下色谱条件进样测定，结果淫羊藿苷的平均回收率为98.04%，RSD值为
2.49%。

见表1。

表1 淫羊藿苷的加样回收率测定结果
Tab.1 Results of icariin recovery test (n=6)
取样量/g原有量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率
/%RSD/%0.103 00.618 00.154 50.770 698.7798.042.490.120 60.723 60.180 90.898 696.740.106 70.640 20.320 10.956 898.910.102 10.612 60.306
30.921 7100.910.110 30.661 80.496 41.139 496.210.104 90.629 40.472
11.091 597.82
2.6 淫羊藿及其配伍甘草后淫羊藿苷的含量变化分别精密吸取2.3项下制备的供试品溶液(1～11) 5 μL，注入高效液相色谱仪，按照2.1项下色谱条件进样分析，所得图谱共有10个共有峰，通过保留时间定性可知，7～10号峰组分来自淫羊藿(10号峰为淫羊藿苷)，3～6号峰组分来自甘草，1～2 号峰为淫羊藿与甘草的共有峰，色谱图见图2。

图2 淫羊藿与甘草不同比例配伍的HPLC图
1～10.特征峰；10.淫羊藿苷。

Fig.2 HPLC chromatogram of Epimedium brevicornu Maxim and Glycyrrhiza of different proportion compatibility
1-10.characteristic peaks;10.icariin.
由图2可知，淫羊藿与甘草的配伍水煎液中各峰分离度较高、峰形较好、保留时间相对稳定，没有新峰产生。

其中相对峰面积为各水煎液中成分的峰面积除以淫羊藿单煎液中相对应成分的峰面积。

淫羊藿苷等成分相对峰面积与不同配伍比例间的关系见表2。

由表2可知，与甘草配伍后，淫羊藿中8和10号峰组分含量总体增加较为明显，7和9号峰组分含量变化较小。

结果表明，淫羊藿与甘草配伍比例为5∶1时，淫羊藿中淫羊藿苷等成分含量增加最明显，且此时淫羊藿苷的含量达到最大值，为6.701 mg·g-1。

表2 淫羊藿苷等成分相对峰面积与不同配伍比例间的关系
Tab.2 The relationship between the relative peak area of icariin and other components and different proportions
峰号成分tR/min不同配伍比例(淫羊藿∶甘草)中淫羊藿苷的相对峰面积
1∶06∶15∶14∶13∶12∶11∶11∶21∶31∶47未知
4.51.0001.0131.0201.0151.1171.0121.0091.0111.0071.0058未知
8.41.0001.1061.1401.0961.0871.0721.0231.0331.0291.0189未知
9.31.0001.0321.0261.0201.0161.0121.0100.9941.0071.00310淫羊藿苷
11.31.0001.0941.1051.0971.0381.0241.0120.9981.0020.999
3 讨论
本实验研究淫羊藿与甘草不同比例配伍对淫羊藿中主要化学成分含量变化的影响，实验采用HPLC法进行测定，研究表明，淫羊藿与甘草配伍后并无新的化学物质生成，仅化学成分的含量发生改变。

实验对比研究了乙腈-1 mL·L-1磷酸、乙腈-
水溶液、乙腈-2 mL·L-1冰醋酸，流速0.8和1.0 mL·min-1，柱温20，25，30
和35 ℃ 条件下的分离结果。

结果显示，乙腈-水溶液(70∶30)，流速为1.0 mL·min- 1，柱温为25 ℃条件下分离效果最好。

本次实验对方法的精密度、重复性、稳定性以及线性范围和回收率均作了考察，结果符合方法学要求。

现代药理学研究表明，淫羊藿苷具有促进神经突触生长、抵抗神经元损伤、改善骨代谢、抗炎、抗氧化应激、抗抑郁和抗肿瘤等作用[16-17]。

通过对比淫羊藿与甘草不同比例配伍前后的水煎液，结果表明，淫羊藿与甘草配伍后淫羊藿中所含淫羊藿苷等4种成分含量总体比单味淫羊藿中4种成分含量高，推断可能是二药配伍
后甘草皂苷的增溶作用[18-19]增加了水煎液中淫羊藿苷等成分的溶解度。

当淫羊藿与甘草配伍比例为5∶1时更有利于淫羊藿苷成分的溶出，这一比例是淫羊藿和甘草药材饮片的最佳配伍比例，对提高其生物利用度和疗效等方面有重要作用。

由于中药配伍的复杂性,为了全面研究二药的配伍关系,需深入考察。

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