蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体制备及检测应用
家蚕病毒性软化病病毒抗血清的研制及应用
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第３ 卷 第３ ２ ０ 年８ ７ 期 ０６ 月
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家蚕病毒性软化 病病 毒抗 血清 的研 制及应 用
收 稿 日期 ： ０ ６ ０ － ９ ２ ０ － ４ ０
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单克隆抗体制备步骤及注意事项
单克隆抗体制备步骤及注意事项单克隆抗体（Monoclonal antibody，mAb）是指由单一B细胞克隆分离得到的抗体，其具有高特异性和高亲和力。
制备单克隆抗体的方法主要有杂交瘤技术和重组DNA技术。
以下是单克隆抗体制备的步骤及注意事项。
步骤一：抗原免疫1.选择合适的抗原：根据需要检测的分子或细胞表面标志物，选择合适的抗原。
2.免疫动物：常用的动物有小鼠、兔子等。
选择适合的动物后，根据抗原的种类和免疫动物对该抗原的敏感性，设计免疫方案。
3.免疫计划：免疫计划包括免疫剂量、免疫途径和免疫次数等。
通常先进行原位免疫，然后再以单体或混合抗原进行体内免疫。
步骤二：细胞融合1.收集脾细胞：在最佳时期，解剖免疫动物，取出脾脏。
2.细胞培养：将收集的脾细胞在无菌条件下分散成单个细胞，并在培养基中培养，以供细胞融合使用。
3.准备骨髓瘤细胞：选择合适的骨髓瘤细胞，例如NS0或SP2/0等。
将其培养至对数生长期。
4.细胞融合：在抗原刺激下，将脾细胞与骨髓瘤细胞以一定比例混合，用聚乙烯醇或其他化合物促进细胞融合。
步骤三：细胞筛选与扩展1. HT增重培养：用含有hprt缺陷的培养基筛选融合细胞，以选择杂交瘤细胞。
2. Limited Dilution扩展：以一细胞一孔的方式将杂交瘤细胞进行有限稀释，使其实现单克隆化。
3.细胞培养：将单克隆细胞株移植到培养瓶中，进行培养和扩增。
步骤四：单克隆抗体鉴定1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：用ELISA方法筛选单克隆细胞株，检测其抗原特异性。
2.免疫组织化学检测：将单克隆抗体应用于细胞和组织切片，检测其在特定细胞或组织中的反应。
3.流式细胞术：通过流式细胞仪检测单克隆抗体与特定细胞表面标志物的结合情况。
步骤五：单克隆抗体生产与纯化1.细胞培养：将单克隆细胞株培养扩增至一定程度。
2.抗体收集：将培养上清液进行抗体收集。
3.纯化与浓缩：利用亲和层析、离子交换、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化和浓缩。
侵染一串红的蚕豆萎蔫病毒2号的分子鉴定
侵染一串红的蚕豆萎蔫病毒2号的分子鉴定近年来，农作物病毒病成为制约农作物产量和品质的重要因素之一。
蚕豆是一种重要的蔬菜作物，而蚕豆萎蔫病毒则是蚕豆的主要病毒性病害之一。
本文旨在利用分子鉴定技术，对侵染一串红的蚕豆萎蔫病毒2号进行深入研究。
首先，我们从受感染的一串红蚕豆中提取了病毒RNA。
通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），我们将RNA转录成对应的DNA，并在PCR反应中使用蚕豆萎蔫病毒2号特异引物进行扩增。
扩增得到的PCR产物经电泳分析，显示出约300bp的特异条带，证明了样品中存在蚕豆萎蔫病毒2号。
随后，我们进行了蚕豆萎蔫病毒2号的基因测序分析。
将PCR产物纯化后，送往测序机构进行二代测序。
通过测序结果的拼接，得到了全长的蚕豆萎蔫病毒2号基因组序列。
通过基因序列比对和系统发生树构建，我们发现该专一蚕豆萎蔫病毒2号能与已知蚕豆萎蔫病毒2号株系高度相似。
进一步的分析表明，蚕豆萎蔫病毒2号基因组由两条单链RNA分子组成。
第一条RNA分子长度为2,781nt，含有5'非翻译区（UTR）、编码RNA依赖RNA聚合酶、酶联蛋白、外壳蛋白和3'UTR等区域。
第二条RNA分子长度为2,746nt，也包含5'UTR、编码两个蛋白和3'UTR等区域。
进一步，我们对蚕豆萎蔫病毒2号的编码基因进行了功能预测和比对分析。
结果显示，蚕豆萎蔫病毒2号基因组编码了多个重要的蛋白质，包括RNA依赖RNA聚合酶、酶联蛋白、外壳蛋白以及多个未知功能蛋白。
其中RNA依赖RNA聚合酶在病毒复制和转录过程中起着关键作用，酶联蛋白和外壳蛋白参与了病毒的组装和复制等重要过程。
最后，我们通过组织病理学观察，发现蚕豆萎蔫病毒2号感染蚕豆植株后，导致植物叶片出现黄化、迟缓生长和枯萎等症状。
病理学观察结果与分子鉴定结果相一致，验证了蚕豆萎蔫病毒2号是导致一串红蚕豆感染的病原。
综上所述，通过分子鉴定技术，我们成功实现了对。
蚕病学实验指导
《蚕病学》实验指导实验一病毒病实验一、实验目的认识家蚕血液型脓病、中肠型脓病、浓核病等三种主要病毒病的病征，主要组织器官的病理变化，从而掌握病毒病的识别与检验技术。
二、实验材料及仪器1、试验材料：健康活蚕、病毒病活蚕、病毒病蚕浸渍标本、1N NaOH、1N HCl、酒精乙醚混合液、苏丹Ⅲ染色液（将0.5克苏丹Ⅲ溶于100ml 95%的乙醇中，过滤）、蒸馏水等。
2、仪器及用品：显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃棒、剪刀、镊子、培养皿、酒精灯、昆虫针、塑料盘、火柴等。
三、实验内容与方法（一）血液型脓病（核型多角体病）1、血液型脓病的病征观察病蚕患病初期无明显病征，病重者则表现出各种显著病征。
典型病征表现为：体壁紧张发亮，显示出乳白色；行动狂燥，常爬行于蚕座四周；最后体壁破裂，流出乳白色脓汁而死。
由于不同时期发病，表现为不眠蚕、高节蚕、脓蚕、斑蚕等。
2、血液型脓病蚕的组织病理检查（1）血液用解剖剪剪去病蚕尾角或腹足，鉴别流出血液的颜色（病蚕血液呈乳白色）。
取此血液1滴于载玻片上，盖上盖玻片，在400~600倍显微镜下进行镜检。
仔细观察血液中血球的病理变化，以及多角体的形态。
多角体多为六角、四角或三角形的折光性较强的多面结晶体，一般以六角形为多，较为整齐，大小（直径）为2～6微米。
由于脂肪组织被破坏，脂肪球游离于血液中，因此，镜检时，视野中常因脂肪球与多角体相混淆而难以区别，故镜检时可用下列三个方法来加以区别。
①物理性状差异比较法根据脂肪球与多角体的比重、折光性、形态大小的不同。
多角体比重大于脂肪球，所以临床标本稍停片刻后，脂肪球往往都浮于上层，多角体多沉于下层，可分为两个焦平面。
同时多角体的折光性比脂肪球强，其大小亦较整齐，镜检时采光不宜太强。
②苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）染色法取少量病蚕血液涂片，待干，滴加1滴苏丹Ⅲ染色液，待干，滴加1滴蒸馏水，盖上盖玻片，在400~600倍显微镜下进行镜检，在视野中呈红色或橙黄色的圆球状物质是脂肪球，多角体则不着色。
家蚕微孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定
PCR相关技术在植物病毒检疫检测中的应用
近年来，植物病毒在世界各国的危害日趋严重， 所发现和报道的病毒种类日益增多，目前植物病毒分 为 18 个科（ 包括 3 个含有动物病毒的科、2 个由反转 录转座子组成的科） ，76 个属（ 包括 20 个未定科的悬 浮属） ，共有近 1 000 种病毒，其中包括约 280 个暂定 种［1］。加入 WTO 以后，随着我国的对外开放及国际 贸易不断扩大，境外植物病毒通过口岸进入境内的风 险逐渐加大，我国出入境检验检疫部门面临着空前的 挑战。由于各种原因，目前植物病毒在口岸被检验检 疫机关截获的机率依然不高，远远低于昆虫和真菌检 出率。目前，国内针对植物病毒的检疫方法主要包括 鉴别寄主反应（ 生物学方法） 、电镜观察、血清学试验 和分子 生 物 学 手 段。聚 合 酶 链 式 反 应 （ polymerase chain reaction，PCR） 技术是一种在体外快速扩增特定 DNA 序列的方法。PCR 及其相关技术以其快速、灵 敏和准 确 等 优 点 已 广 泛 应 用 于 植 物 病 害 的 检 测 研 究［2］。自 1983 年美国 PE 公司的 Mullis 等发明了聚
3 免疫捕捉反转录-PCR（ immunocapture reverse transcription PCR，IC-RT-PCR）
技术
免疫捕捉反转录 PCR（ IC-RT-PCR） 检测技术是 免疫学技术与 RT-PCR 技术相结合建立起来的检测 技术。该技术不需进行病毒 RNA 的抽提，操作更容 易，并且在不破坏病毒粒体的情况下，即可实现病毒 的检测。该方法中的病毒特异性抗体可用依赖于 dsRNA 的单克隆抗体替代，为不具备病毒特异性抗 体或采用免疫学技术很难检测的病毒提供了一个可 行的检测方法。其灵敏度与典型的 RT-PCR 检测技 术相同［17］。陈 建 军 等［18］ 在 检 测 葡 萄 卷 叶 病 毒 Ⅲ 时，比较了常规的 RT-PCR 和 IC-RT-PCR 技术，发现 RT-PCR 不很稳定，易受环境、实验仪器和实验员身 体上 RNA 酶的影响，植物组织中蛋白质、DNA 和多 糖也直接影响试验结果，而 IC-RT-PCR 可以避免上 述问题，使检测简便、快速。已有报道表明，从 10 － 4 稀释度的番木瓜叶粗汁液（ 相当于 0． 5 μg 鲜叶组织 的量） 中检测到了番木瓜环斑病毒［19］。
犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及其应用
犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及其应用一、本文概述犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus，CDV）是一种高度接触性、传染性的病毒性疾病，对犬科动物的生命健康构成严重威胁。
由于其感染范围广、传播速度快、致死率高，犬瘟热病毒的防控一直是动物医学领域的研究热点。
单克隆抗体技术作为一种重要的生物学工具，在病毒性疾病的诊断、治疗和预防等方面具有广阔的应用前景。
本文旨在阐述犬瘟热病毒单克隆抗体的制备过程、纯化方法、特性鉴定及其在疾病诊断、治疗中的应用，以期为犬瘟热病毒的防控提供新的思路和技术支持。
通过本文的介绍，读者可以对犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及其应用有一个全面、深入的了解，为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
二、材料与方法1 细胞株与病毒：选用经过验证的、可稳定产生犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus, CDV）的细胞株，以及纯化的犬瘟热病毒颗粒。
3 试剂：包括细胞培养基、胎牛血清、聚乙二醇（PEG）、HAT和HT培养基添加剂、酶标二抗、底物等。
4 仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、酶标仪、超净工作台等。
1 免疫小鼠：将纯化的犬瘟热病毒颗粒注射到小鼠体内，按照预定的免疫方案进行多次免疫，以刺激小鼠产生足够的免疫应答。
2 细胞融合：取免疫后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，利用聚乙二醇（PEG）作为融合剂，在适当的条件下进行细胞融合。
3 杂交瘤细胞的筛选与克隆：通过HAT和HT培养基选择性地筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞，并进行克隆化培养。
4 单克隆抗体的制备：对筛选出的杂交瘤细胞进行扩大培养，收集细胞上清液，通过亲和层析等方法纯化单克隆抗体。
5 单克隆抗体的鉴定：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法对制备的单克隆抗体进行特异性、亲和力等指标的鉴定。
26 单克隆抗体的应用：将制备的单克隆抗体应用于犬瘟热病毒的检测、诊断、免疫学研究等领域，评估其实际应用效果。
伪狂犬病毒闽a株单克隆抗体的制备及初步鉴定
河北农业大学硕士学位论文伪狂犬病毒闽A株单克隆抗体的制备及初步鉴定姓名：***申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：***2009-06-07摘要伪狂犬病(Pseudorabies, PR)是由I型疱疹病毒科的伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus, PrV)引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。
猪是本病毒的天然宿主和贮存者，该病给养猪业造成了巨大的经济损失。
预防、控制并最终根除该病是我国当前面临的一项艰巨任务。
准确、及时地检测出病原是防止疾病扩散的重要措施之一。
目前对猪伪狂犬病毒进行诊断的相应方法有很多，但是真正适合基层使用，方便、简单、廉价、技术要求低且实用的诊断方法很少。
利用单克隆抗体的诊断方法在其它疾病的检测中得到广泛的应用，显示出灵敏性高、特异性强等优点。
应用单克隆抗体来检测PRV在我国报道还比较少，为了能从感染 PRV的动物体内和肉食品中检测出病原，本课题开展了抗伪狂犬病毒抗体杂交瘤细胞株的制备以及初步鉴定，为后续实验的展开做好铺垫。
用PK-15细胞培养的伪狂犬病毒闽A株(PRV-FA)经差速离心和蔗糖密度梯度离心，纯化抗原。
本实验同时制备伪狂犬病毒细胞培养物和鸡胚培养物，用伪狂犬鸡胚培养物作为免疫原来免疫BALB/c小鼠，而用纯度更高的伪狂犬病毒的细胞培养物作为间接ELISA的包被抗原建立间接ELISA，用来筛选融合后的杂交瘤细胞，尽可能的避免非特异性蛋白对筛选的干扰，降低假阳性的几率，提高阳性株筛选的效率和准确性。
取免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合应用间接ELISA筛选，经过3次有限稀释法克隆，获得了2株能稳定分泌抗伪狂犬病毒蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为4G9E9，1H9C9，随后对这两株单克隆抗体杂交瘤细胞株进行鉴定，经鉴定这2株杂交瘤细胞株均为IgG1亚类，4G9E9和1H9C9杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1:6400和1:12800以及1:25600和1:102400。
侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究
侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究
周雪平
【期刊名称】《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
【年(卷),期】1995(000)003
【摘要】从浙江省豌豆和蚕豆病株上获得两个病毒分离物，编号为Ｐ－９３５和
Ｂ－９３４，人工摩擦接种６科１９种植物，Ｐ－９３５能侵染４科１３种植物，Ｂ－９３４能侵染４科１４种植物，除菜豆外，它们在这些植物上的症状十分相似，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４的钝化温度为５０－５５℃，稀释限点为１０＾－３－１０＾－４，体外保毒期分别为５天和４天，两个分离物均能由桃蚜以非持久性方式传毒，用昆诺藜作繁殖寄主均提取到了大量病毒粒子，
【总页数】1页(P221)
【作者】周雪平
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S88
【相关文献】
1.侵染辣（甜）椒的烟草脆裂病毒及蚕豆萎蔫病毒的鉴定 [J], 王述彬;孙洁波
2.蚕豆萎蔫病毒2号分离物侵染对蚕豆叶片光合活性和叶绿体超微结构的影响 [J], 李燕宏;洪健;谢礼;杨勇;周雪平;蒋德安
3.侵染勿忘我花卉的蚕豆萎蔫病毒的鉴定 [J], 陈燕芳;胡伟贞;丁元明;白松;沐咏民
4.侵染大豆的蚕豆萎蔫病毒研究 [J], 戚益军;周雪平;李德葆
5.侵染大豆、豇豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒生物学性状和血清学的比较研究 [J], 薛宝娣;陈永萱;方中达
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蚕豆萎蔫病毒ELISA检测系统建立及其应用
蚕豆萎蔫病毒ELISA检测系统建立及其应用周雪平;余永杰;戚益军;陈正贤;李德葆【期刊名称】《植物病理学报》【年(卷),期】1996(26)4【摘要】从制备的蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）抗血清中提纯ＩｇＧ，并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，建立了ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测ＢＢＷＶ的方法。
ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测时包被ＩｇＧ以２６．９μｇ／ｍｌ效果最好，ＨＲＰ－ＩｇＧ结合物以１８００～１１６００效果最佳。
ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测ＢＢＷＶ病叶粗汁液的最大稀释度为１３２０，检测提纯病毒的最低浓度为０．７４４μｇ／ｍｌ。
田间病样测定表明，ＢＢＷＶ在蚕豆、豌豆、豇豆、大豆、茄子和辣椒等作物上发生很普遍，在菜豆上也有零星发生，而在莴苣、芹菜、白菜、萝卜、花椰菜上未测到ＢＢＷＶ。
ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测结果与生物学检测结果基本相符，符合率达９７．６％。
【总页数】6页(P347-352)【关键词】蚕豆;萎蔫病毒;病毒病;检测【作者】周雪平;余永杰;戚益军;陈正贤;李德葆【作者单位】浙江农业大学生物技术研究所【正文语种】中文【中图分类】S436.43;S432.41【相关文献】1.血清MMP9蛋白ELISA检测方法的建立及在肝癌患者血清检测中的初步应用[J], 高晨;胡敬群;韩俊;董小平;李锋;周伟;杨小洁;石琦;刘长利;姜慧英;毕新宇;杨建国2.禽波氏杆菌免疫荧光检测和抗体检测ELISA方法的建立与应用 [J], 杨春晓;王小娥;刘冠华;肖海君;崔金生;朱瑞良3.ELISA检测鸡传染性囊病抗体方法的研究及应用Ⅰ.IBD-ELISA检测抗体方法的建立 [J], 张晨生4.粘蛋白1串联重复区自身抗体检测ELISA方法的建立及其在癌症检测中的应用[J], 刘妮龙;戴立言;边超;丁罡;李莉;张火俊5.ELISA检测鸡传染性囊病抗体方法的研究及应用I．IBD－ELISA检测抗体方法的建立 [J], 张晨生;郑海发因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定ppt课件
2B7
1C11
4G7
supernatant 320
80
80
ELISA
Ascite fluids
211×100 28×100 27×100
supernatant 24
21
21
HI
Ascite fluids
212
28
27
2.3.6 单抗特异性鉴定
将抗NP单抗1D10、1G11分别用鸡新城疫病 毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒、 传染性喉气管炎病毒包被的酶标板作间接ELISA 检测，检测结果全部为阴性，阐明所制备的单抗 与这些病毒均无交叉反响。
抗NP单抗与 H1N1亚型感染MDCK的 IFA检测
A 1G11
B 1D10
F Positive control G SP2/0 H MDCK cells control
抗H3HA单抗与H1N1亚型感染MDCK的 IFA检测
C 2B7
D 1C11
E 4G7
F Positive control G SP2/0 H MDCK cells control
2.2 资料方法 2.2.1 细胞、病毒与动物
SP2/0骨髓瘤细胞系由本实验室保管。 流感病毒H9N2、H1N1由本实验室分别 鉴定，保管。H3N8由哈尔滨 兽医研讨所提 供。新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病 毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染 性法氏囊病毒(IBDV)、产蛋下降综合征病毒 〔EDS-76〕、禽腺病毒1型〔APMV-1〕购 自北京梅里亚维通公司。 SPF鸡胚购自北京梅里亚维通公司。 BALB/C小鼠购自湖北省疾病控制中心 实验动物中心。
抗流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定
蚕豆萎蔫病毒2号安徽分离物全基因组序列测定与分析
蚕豆萎蔫病毒2号安徽分离物全基因组序列测定与分析严丹侃;郑红英;张海珊;沈艳;顾江涛;章东方;燕飞【摘要】利用酶联免疫和RT-PCR技术对采自安徽地区的蚕豆病株进行检测,确定其病原为蚕豆萎蔫病毒2号Broad bean wilt virus 2(BBWV2).为明确BBWV2安徽分离物(BBWV2-AH)的分类地位,克隆了该分离物的全基因组序列,分析了其基因组特征.结果表明,BBWV2-AH RNA1全长为5 944 bp(GenBank登录号:KY606992),含有1个ORF;BBWV2-AH RNA2全长3 587 bp (GenBank登录号:KY606993),含有1个ORF.全序列核苷酸和氨基酸相似性分析显示,BBWV2-AH RNA1与BBWV2其他分离物的核苷酸、氨基酸相似性分别为78.4％～96％和87.1％～99％;BBWV2-AH RNA2与BBWV2其他分离物的核苷酸、氨基酸相似性分别为76.8％～95.5％和88.2％～98.3％.全基因组核苷酸序列系统发育分析显示,BBWV2-AH RNA1与中国的BBWV2-Hu-nan RNA1的亲缘关系最近,而BBWV2-AH RNA2与韩国的多个分离物聚集在一起,再与中国的分离物BBWV2-B935形成一个分支.%BBWV2 was detected from broad bean plants in Anhui Province by DAS-ELISA and RT-PCR.To further characterize the BBWV2 Anhui isolate (BBWV2-AH),complete nucleotide sequence of BBWV2-AH was determined.Sequence analysis suggested that BBWV2-AH RNA1 was comprised of 5 944 nucleotides,encoding one ORF (GenBank accession no.KY606992);BBWV2-AH RNA2 was comprised of 3 587 nucleotides,also encoding one ORF (GenBank accession no.KY606993).The comparison of nucleotide sequences suggested that RNA1 and RNA2 of BBWV2-AH shared 78.4％-96％ and 76.8％-95.5％ nucleotide sequence identity with those of other BBWV2 isolates,respectively.Furthermore,the comparison ofamino acid sequences suggested that RNA1 and RNA2 of BBWV2-AH shared 87.1％-99％ and 88.2％-98.3％ amino acid sequence identity with those of other BBWV2 isolates,respectively.Phylogenetic analysis based on nucleotide sequences showed that RNA1 of BBWV2-AH isolate was most closely related to BBWV2-Hunan isolate,while RNA2 of BBWV2-AH formed an independent branch with several Korean isolates,and was then closely related to BBWV2-B935 from China.【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2018(044)001【总页数】7页(P67-73)【关键词】蚕豆萎蔫病毒2号;安徽分离物;基因组;序列分析【作者】严丹侃;郑红英;张海珊;沈艳;顾江涛;章东方;燕飞【作者单位】安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所,合肥230031;浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,杭州310021;安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所,合肥230031;安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所,合肥230031;安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所,合肥230031;安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所,合肥230031;浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,杭州310021【正文语种】中文【中图分类】S435.23蚕豆是我国重要的经济作物,据FAO统计,我国2014年蚕豆收获面积为92.5万hm2,总产量为159.5万t,是世界蚕豆生产第一大国,产量占世界蚕豆总产量的36.7%[1]。
河南温县蚕豆萎蔫病毒2的鉴定与多样性分析
河南温县蚕豆萎蔫病毒2的鉴定与多样性分析
邓小龙;秦朗;王铁霖;王智磊;蒋润州;贺振
【期刊名称】《扬州大学学报（农业与生命科学版）》
【年(卷),期】2024(45)2
【摘要】蚕豆萎蔫病毒2(broad bean wilt virus 2,BBWV2)属豇豆花叶病毒科蚕豆病毒属。
2019年7月从河南温县采集20株具有褪绿和皱缩等典型病毒病症状的地黄,采用PCR技术从cDNA中扩增目的片段,有13株样品扩增出与预期大小相符的目的条带,检出率为65%;并通过克隆测序获得BBWV2 CP序列,将其与GenBank中其他48个BBWV2分离物进行序列分析,结果显示有75.4%~82.95%的一致率。
系统发育分析表明,BBWV2可分为3个组,其中河南温县BBWV2地黄分离物(No.2279841-China-R.glutinosa-11)位于第Ⅲ组。
【总页数】6页(P102-107)
【作者】邓小龙;秦朗;王铁霖;王智磊;蒋润州;贺振
【作者单位】扬州大学植物保护学院;中国中医科学院中药资源中心/道地药材国家重点实验室培育基地
【正文语种】中文
【中图分类】S432.44
【相关文献】
1.河南植烟区烟草黑胫病菌生理小种的鉴定及遗传多样性分析
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2024年湖北省新高考协作体高考生物一模试卷
2024年湖北省新高考协作体高考生物一模试卷一、单选题1．结构与功能观认为结构与功能相适应。
下列关于结构与功能观的叙述正确的是（）A．细胞骨架是由蛋白质组成的网架结构，可以维持细胞的形态B．肾小管细胞膜上有较多水通道蛋白，利于水分子的主动运输C．浆细胞中有发达的光面内质网，利于迅速地合成和分泌抗体D．叶绿体和液泡中的色素能吸收光能，有利于光合作用的进行2．降钙素是一种由32个氨基酸组成的链状多肽类激素，主要作用是抑制骨钙溶解，以及抑制肾小管对钙离子的重吸收（）A．降钙素中的O元素主要存在于羧基中B．降钙素形成时至少脱去32个水分子C．降钙素能为肾小管对钙离子的重吸收提供能量D．口服降钙素不能治疗钙浓度过高引起的肌无力3．盐碱胁迫下植物应激反应产生的H2O2对细胞有毒害作用，AT1蛋白可通过调节细胞膜上PIP2s蛋白的磷酸化水平，影响H2O2的跨膜转运，如图所示。
下列叙述错误的是（）A．PIP2s蛋白磷酸化后，其空间结构会发生改变B．抑制AT1基因表达，可提高植物的耐盐碱能力C．PIP2s蛋白磷酸化被抑制，可减轻H2O2对细胞的毒害D．植物细胞大量失水后胞内渗透压升高，吸水能力增强4．人的角膜是覆盖眼睛的透明组织层，角膜干细胞通过增殖分化产生角膜上皮细胞来取代垂死细胞进而维持角膜。
短期睡眠不足会加速角膜干细胞的增殖分化，长期睡眠不足则会造成角膜变薄（）A．人体对角膜中垂死细胞的清除过程属于细胞凋亡B．角膜上皮细胞中特有基因的表达使其呈现透明状C．睡眠不足会加速角膜上皮细胞的增殖分化、衰老凋亡D．角膜干细胞分化成角膜上皮细胞体现了动物细胞的全能性5．将某油料作物种子置于条件适宜的黑暗环境中培养，定期检测萌发种子（含幼苗）干重的变化情况如图所示。
下列叙述正确的是（）A．第0～7天，种子长出幼叶进行光合作用导致干重增加B．第8～10天中，种子呼吸等代谢过程减弱导致干重下降C．在种子的整个萌发过程中，种子内的有机物种类逐渐减少D．第11天后，要使萌发种子的干重增加需提供光照和无机盐6．绿茶中的酚氨比（多酚和氨基酸含量之比）低会使其味感浓而鲜爽。
关于“蚕豆染色病毒检疫程序”的建议
关于“蚕豆染色病毒检疫程序”的建议
邹雪蓉;胡伟贞
【期刊名称】《中国进出境动植检》
【年(卷),期】1995(000)004
【摘要】蚕豆染色病毒(Broad bean stain virus,BB-SV)属豇豆花叶病毒组,粒体为等轴多面体,直径25—28nm;自然发生于蚕豆(Vicia faba)、小扁豆(Lens esculenta)、豌豆(Pisum satium)和车轴草属(Trifolium spp.);人工接种侵染4科21属50种植物,其中豆科有17属36种,传毒介体为豆长喙象甲(Apion vorax)和豌豆根瘤象(Sitona tineatus)等4种象甲,以前者为最主要;病株花粉可通过授粉将病毒传至健株种子;远距离则通过种子传毒。
【总页数】2页(P24-25)
【作者】邹雪蓉;胡伟贞
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S643.602.3
【相关文献】
1.蚕豆萎蔫病毒2号分离物侵染对蚕豆叶片光合活性和叶绿体超微结构的影响 [J], 李燕宏;洪健;谢礼;杨勇;周雪平;蒋德安
2.蚕豆染色病毒病在我国的发生情况与根除对策 [J], 朱振东;王晓鸣
3.蚕豆染色病毒的再次发生与鉴定 [J], 夏更生;邹雪落
4.蚕豆染色病毒检测技术标准化研究再报 [J], 邹雪容;胡伟贞;朱振东;霍纳新
5.蚕豆染色病毒检测技术标准化研究初报 [J], 邹雪容;夏更生;朱振东;胡伟贞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蚕豆萎蔫病毒──新疆番茄分离株的鉴定
蚕豆萎蔫病毒──新疆番茄分离株的鉴定周俊;尹玉琦;崔星明;李国英;李维琪【期刊名称】《中国病毒学》【年(卷),期】1994(9)4【摘要】在新疆番茄斑驳病株上分离出一种球状病毒，回接到番茄上产生斑驳症状。
病毒粒体为２０面体，平均直径２５ｎｍ。
经汁液摩擦接种可感染昆诺阿藜、苋色藜、蚕豆、番茄等１８种植物，不感染菜豆、豇豆、豌豆、六叶茄、黄瓜等。
可由桃蚜传毒。
在琼脂双扩散试验中，能与蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）抗血清产生明显的沉淀线，与豇豆花叶病毒（ＣｐＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）抗血清均不发生反应。
纯化病毒紫外扫描呈典型的核蛋白吸收叫线，病毒衣壳蛋白由两种蛋白亚基构成，其分子量分别为４５９００和２０４００道尔顿，由１８种氨基酸约２５５个氨基酸残基组成。
病毒核酸是双组份的，它们的分子量为１３２００００和２３４００００道尔顿。
根据上述结果认为该病毒是蚕豆萎蔫病毒侵染番茄的一个株系。
【总页数】6页(P327-332)【关键词】蚕豆萎蔫病毒;番茄分离株;鉴定【作者】周俊;尹玉琦;崔星明;李国英;李维琪【作者单位】新疆农业科学院中心实验室,石河子农学院植病教研室,中国科学院新疆化学研究所【正文语种】中文【中图分类】S432.41【相关文献】1.一株引起番茄果腐病病原菌的分离鉴定 [J], 桑雪;刘阳;王锐银;侯红漫;高美玲2.蚕豆萎蔫病毒——新疆番茄分离株的鉴定 [J], 周俊;尹玉琦;崔星明3.两株新疆新城疫强毒株的分离与鉴定 [J], 沙依兰古丽4.一株番茄表面着生醋酸菌的分离鉴定及产酸条件优化 [J], 钟彩霞;田佳雪;王晓琪;温彤5.马源马链球菌兽疫亚种3株新疆分离株基因型的鉴定及MLST分析 [J], 张泽华;张欢;汪丽;古丽米热·对山巴依;吕芬芬;蒲小峰;张宝江;苏艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备、特性分析及应用研究的开题报告
中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备、特性分析及应用研究
的开题报告
一、研究背景及意义
中华鳖虹彩病毒是导致中华鳖养殖业经济损失的重要病原体，其感染病征早期不明显，易被忽略，一旦暴发常常引起致命性后果。
目前，传统检测方法包括病毒分离、PCR扩增、免疫荧光等已经存在诸多不足，因此急需开发新的高效敏感的检测方法。
单克隆抗体是生物技术领域中应用广泛的一种工具，其具有专一性、高亲和力、重复性好等特点，可以用于检测、诊断、治疗等多个领域。
因此，通过制备中华鳖虹
彩病毒单克隆抗体，能够建立一种高感、高特异的检测方法，为中华鳖虹彩病毒的快
速准确检测提供技术支持。
二、研究内容与方法
1.制备中华鳖虹彩病毒的抗原：采用常规方法制备中华鳖虹彩病毒的抗原，包括病毒培养、病毒纯化、表征等。
2.制备中华鳖虹彩病毒的单克隆抗体：将制备的中华鳖虹彩病毒抗原用于小鼠免疫，获得免疫小鼠的脾细胞，通过融合培养与SP2/0细胞融合，筛选克隆细胞，最终
得到单克隆抗体。
3.对制备的单克隆抗体进行特性分析：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫
印迹（Western blot）等方法，对制备的单克隆抗体的亲和力、特异性、稳定性进行分析。
4.应用研究：将制备的单克隆抗体用于中华鳖虹彩病毒的检测，比较其与传统检测方法的敏感性、特异性和可靠性。
三、预期成果与意义
预计通过本研究，能够成功制备中华鳖虹彩病毒的单克隆抗体，建立一种高效、高特异的中华鳖虹彩病毒检测方法，为中华鳖养殖业的发展提供技术支持，促进养殖
业的可持续发展。
同时，本研究也可为其他类病毒的单克隆抗体的制备提供经验和参考。
蚕豆萎焉病毒2感染豌豆叶细胞后引起的线粒体增生和聚集
蚕豆萎焉病毒2感染豌豆叶细胞后引起的线粒体增生和聚集洪健;王卫兵;周雪平
【期刊名称】《分子细胞生物学报（英文版）》
【年(卷),期】2005(038)006
【摘要】应用超薄切片和免疫金标记电镜技术,结合体视学分析研究了受蚕豆萎焉病毒2(BBWV 2)中国分离物B935侵染的豌豆(Pisum sativum)叶细胞中线粒体的异常变化.结果表明,感病细胞线粒体增生并聚集于细胞质的膜增生区周围,体积增大,形状畸变,一些线粒体内含有类结晶包涵体.病叶细胞与健康对照之间线粒体的体积密度(VV)、表面积密度(SV)、数密度(NV)等参数存在显著差异(P＜0.01),而形状因子(PE)、周长指数(CI)、比表面积(RSV)等参数随不同病变阶段而有变化.在线粒体周围及线粒体之间的网格结构可被BBWV 2金标记抗体特异性标记,推断为正在组装的病毒粒子.子代病毒形成结晶体和管状体,有高密度的免疫金颗粒标记.上述研究结果提示BBWV 2引起的细胞线粒体异常变化与病毒复制组装有关,聚集线粒体的外膜粘连面可能是病毒粒子组装部位,一些线粒体内的类结晶包涵体可能代表了某种蛋白质异常积累.
【总页数】9页(P527-535)
【作者】洪健;王卫兵;周雪平
【作者单位】浙江大学分析测试中心,,杭州,310029;浙江大学生物技术研究所,杭州,310029;浙江大学生物技术研究所,杭州,310029;浙江大学生物技术研究所,杭州,310029
【正文语种】中文
【中图分类】Q94
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