醋酸丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其对TRF1表达的影响

醋酸丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其对
TRF1表达的影响
李红梅; 张三元; 赵文英; 范静静
【期刊名称】《《临床医药实践》》
【年(卷),期】2017(026)005
【总页数】3页(P361-363)
【关键词】子宫内膜癌; 丙氨瑞林; 裸鼠移植瘤; 端粒重复因子1 (TRF1)
【作者】李红梅; 张三元; 赵文英; 范静静
【作者单位】山西省妇幼保健院山西太原030012; 山西医科大学第一医院山西太原030001; 山西省人民医院山西太原030012
【正文语种】中文
【中图分类】R737.3
子宫内膜癌(EC)是女性生殖道三大恶性肿瘤之一，多数为腺癌，发病率呈逐年上升趋势，但其发病机制仍不明确，趋于年轻化。

复发、晚期以及有严重合并症的患者，常常需要辅助以药物治疗(化学药物、激素)和放疗[1]。

其中，激素治疗因其安全性高的特点受到研究者的青睐，其中促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)的应用备
受关注。

GnRHa在一些激素依赖性的肿瘤中已进入到临床应用阶段，如乳腺癌、卵巢癌及前列腺癌[2]。

本实验通过建立动物模型，观察不同剂量的丙氨瑞林对肿
瘤生长及对TRF1表达的影响，推断促性腺激素释放激素(GnRH)可能的抑癌机制，为GnRHa在临床应用提供理论及实验依据。

〔1〕本课题为山西省科技厅自然科学基金项目(项目编号：2013011045)
1.1 实验材料
雌性裸鼠34 只，4～6 周龄，购自中国药品检验所实验中心，无菌条件下饲养；
子宫内膜癌HEB-1B细胞株(细胞株表面含有ER、PR、GnRH-R)；丙氨瑞林购自
马鞍山丰源制药有限公司。

1.2 实验方法
1.2.1 HEC-1-B细胞培养
将对数期的HEC-1-B细胞株置于高糖培养基，待细胞融合时胰蛋白酶传代，制备成浓度为5.0×107/mL的悬浊液。

1.2.2 移植瘤动物模型
HEC-1-B子宫内膜癌细胞株悬浊液0.2 mL(约含8×106个细胞)注射于裸鼠的左前肢。

建模成功的标志为接种处出现粟粒结节。

1.2.3 实验分组
34 只裸鼠，去除移植瘤结节最大及最小的2 只，并将剩余的32 只随机分四组：
对照组、低剂量醋酸丙氨瑞林组(20 μg/kg)、中剂量醋酸丙氨瑞林组(40 μg/kg)、高剂量醋酸丙氨瑞林组(80 μg/kg)。

按剂量分组饲养，每日给予肌肉注射0.2 mL
注射液1 次，观察28 d后处死裸鼠，取出位于左前肢的皮下移植瘤结节。

测量瘤体的长、宽、高，计算瘤体的体积(V)。

计算抑瘤率(IR)=[(V对照组)-(V实验组)/V 对照组]×100%。

抑瘤率大于10%为药敏阳性。

1.2.4 TRF1蛋白表达检测
移植瘤细胞中TRF1蛋白主要在胞核内表达。

病理图像分析软件分析各组阳性灰度值，取平均数后进行统计学分析。

1.2.5 统计学方法
所得数据应用SPSS19.0软件处理，计量资料以±s表示，均数间采用方差分析，
组间比较为LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 不同剂量丙氨瑞林干预后瘤体的变化
按照试验步骤，给予不同剂量的丙氨瑞林干预后，随着丙氨瑞林剂量的增加，肿瘤体积逐渐减小。

计算各组的抑瘤率均>10%，将各剂量组与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表明丙氨瑞林可以抑制移植瘤的生长。

2.2 瘤体的细胞学改变
对照组移植瘤组核异型性明显，染色较深；各丙氨瑞林组细胞核大小不一，形态不规则，瘤细胞变小、破碎、坏死，细胞间排列较前明显稀疏，局部区域可见片状无结构的坏死区。

2.3 丙氨瑞林与TRF1表达的关系
免疫组织化学法处理后，TRF1蛋白阳性染色呈棕黄色颗粒，主要位于胞核中。

通过病理图像分析进行半定量分析，以图片中目标的灰度值反应其表达情况。

随着丙氨瑞林剂量增大，TRF1灰度值增高。

对照组平均灰度值为103.00±6.87，低剂量醋酸丙氨瑞林组灰度值为132.19±7.53，中剂量醋酸丙氨瑞林组灰度值为
154.28±6.93，高剂量醋酸丙氨瑞林组灰度值为171.52±10.91。

各剂量组与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

各剂量组免疫组化结果见图1～图4。

促性腺激素释放激素类似物(GnRH-α)是一种模拟天然GnRH效应的九肽类似物，其活性是天然GnRH的十倍甚至百倍，丙氨瑞林为其中一类。

对GnRH的依赖性肿瘤细胞具有阻碍增殖的作用，主要是依靠阻碍性腺轴和垂体的功能来发挥的作用，少数情况下是依靠肿瘤细胞局部的自分泌以及旁分泌的调整来完成，即间接抑制下丘脑-垂体-性腺轴或直接与肿瘤细胞表面的GnRH受体结合。

位于哺乳动物染色
体末端的端粒是由重复的DNA序列TTAGGG和蛋白组成，其中的部分蛋白按照
一定的顺序结合形成端粒保卫蛋白复合体(Shelterin)。

Shelterin属于端粒蛋白的
一种，有6 种蛋白组成，分别为Rap1、TIN2、POT1、TRF1、TPP1及TRF2。

在端粒中，这6 种独立的蛋白组装起来与重复的碱基序列一道，形成复杂的双链
结构。

这样复杂的DNA-蛋白结构可以使得染色体末端得到保护，并可以确保基因的稳定性，避免了DNA损伤性的应答[3-4]。

然而，这些组成成分中的任一部分
发
生结构或功能的异常就有可能引起不良的DNA损伤应答，甚至细胞衰老或凋亡。

TRF1于1995年被chong等首次发现[5]。

TRF1的表达主要位于胞核中，由三个重要的结构域，分别为：TRF特异性结构域、羧基末端的myb样DNA结合结构域、氨基末端的酸性结构域。

在端粒的长度调控方面，TRF1发挥负性作用。

TRF1以二聚体的形式通过其C端的myb结构域与端粒DNA结合，促进端粒末端的三级环状结构T-Loop的形成，与TRF2一起参与维持基因组的稳定性。

当TRF1启动ATM磷酸化，可参与DNA的损伤响应系统，增加细胞的癌症易感性。

陈炜等[6]研究表明，在前列腺癌中TRF1蛋白的表达水平位于胞核，且明显高于前列腺
增生组织。

但Aragona等[7]对颅内肿瘤的研究中发现TRF1在胞浆明显表达，在正常组织、良性肿瘤中表达高于恶性肿瘤组。

本实验在建立裸鼠皮下移植瘤模型后，移植瘤在不同剂量的丙氨瑞林组中有变化。

随着丙氨瑞林剂量增加，裸鼠移植瘤的体积降低，与本课题结果一致，且丙氨瑞林剂量的增加，TRF1表达的下降，可以推测丙氨瑞林对子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用，可能是通过下调TRF1来实现的。

但是丙氨瑞林抗肿瘤的机制尚未被完全揭示，有可能是多种机制共同作用的结果，希望随着GnRH抑制肿瘤作用机制的研究深入，可以被更好地应用于临床。

【相关文献】
[1]谢幸，苟文丽，林仲秋，等.妇产科学[M].8版.北京：人民卫生出版社，2013：313-314.
[2]ROSE P G.Medical progress，endometrial carcinoma[J].N Engl J Med，1996，335 (9)：
640-648.
[3]HOU L，JOYCE B T.Blood telomere length attrition and cancer development in the norm-ative aging study cohort[J].EBio Medicine 2015，2(6)：591-596.
[4]MEENA J，RUDOLPH K L，GUNES C.Telomere dysfunction instability and
cancer[J].Recent Results Cancer，2015，200：61-79.
[5]CHONG L.A human telomeric protein[J]，Science，1995，70(5 242)：1 663-1 667.
[6]陈炜，何丽娜，王勇.端粒重复序列结合蛋白TRF1及TRF2在前列腺癌中的表达及临床意义[J].临床泌尿外科杂志，2016，31(9)：841-845.
[7]ARAGONA M，DEDIVITIIS O，LATORRE D，et al.Immunohistochemical TRF1 expressionin human primaryintracranialtumors[J].Anticancer Res，2001，21(3C)：2 135-2 139.。