RASAL1基因在不同类型胃息肉及胃癌中的表达变化

RASAL1基因在不同类型胃息肉及胃癌中的表达变化
发表时间：2013-07-26T10:29:24.433Z 来源：《医药前沿》2013年第18期供稿作者：夏挺松1 钱建忠2 徐洪明2 刘鹏飞1 项斌1 [导读] 胃息肉是指胃黏膜局限性上皮隆起性的病变，通常被认为是胃癌的癌前病变。

夏挺松1(通讯作者) 钱建忠2 徐洪明2 刘鹏飞1 项斌1 刘兵团1 （东南大学医学院附属江阴医院 214400）
【摘要】目的探讨不同病理类型胃息肉和胃癌中RASAL1基因的表达变化及临床意义。

方法对正常胃黏膜组40例、增生性胃息肉组35例、腺瘤性息肉组30例及胃癌组40例采用免疫组化SP染色法检测RASAL1蛋白的表达情况。

结果胃癌组RASAL1蛋白的阳性率为17.50%，明显低于正常胃黏膜组（95.00%）、增生性胃息肉组（85.71%）及腺瘤性息肉组（53.33％），差异均有统计学意义（P<0.05）；增生性息肉组中RASAL1蛋白阳性率与性别、年龄、生长部位及息肉大小均无相关性（P<0.05）；腺瘤性息肉组中RASAL1蛋白阳性率与性别、年龄、生长部位均无相关性（P<0.05），而与息肉大小有相关性(P<0.05)。

结论检测胃息肉和胃癌中RASAL1基因的表达有助于推测胃息肉的生物学行为发展趋势，从而早期诊断胃癌并判断其预后。

【关键词】 RASAL1 胃息肉胃癌
【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）18-0007-02 胃息肉是指胃黏膜局限性上皮隆起性的病变，通常被认为是胃癌的癌前病变。

目前依据组织病理学特征将其分成非肿瘤性息肉（包括增生性息肉、错构瘤性息肉、炎性息肉、异位性息肉等）和肿瘤性息肉（包括管状腺瘤和绒毛状腺瘤）两大类，前者的恶变机率不高，而后者有很高的恶变倾向。

Ras蛋白激活物类似物-1基因(Ras protein activator like-1，RASAL1) 是新近发现的钙离子依赖性Ras活性调节基因，可在多种肿瘤细胞株和肿瘤组织中表达下调[1]。

本文旨在探讨RASAL1基因在不同病理类型胃息肉和胃癌中的表达改变及其临床意义。

1 材料和方法
1.1 材料
收集东南大学附属江阴医院2011-2012年手术切除的胃癌标本40例，术前均未进行放化疗；正常胃黏膜组织40例，标本取自距胃癌组织边缘5cm以上；增生性胃息肉标本35例、腺瘤性息肉30例，标本均取自胃镜下电切术；所有标本经病理科确诊，且无使用非甾体类抗炎药及糖皮质激素史。

各标本经常规甲醛固定,石蜡包埋切片。

免疫组织化学主要试剂包括：（1）即用型SABC免疫组化染色试剂盒(购自武汉博士得生物工程有限公司)；（2）一抗RASAL1羊抗人多克隆抗体（购自英国Abcam公司）；（3）粘片剂Poly-L-Lysine多聚赖氨酸、柠檬酸盐抗原修复缓冲液、DAB显色试剂盒（均购自福州迈新生物技术开发公司提供）。

1.2 方法
RASAL1基因的检测及阳性结果的判定:免疫组织化学方法检测RASAL1的表达，实验按照试剂盒说明书进行,已知阳性组织作为阳性对照，以正常山羊血清代替一抗作阴性对照，以PBS液代替一抗作空白对照。

由两名高级职称病理医师无序两次重复阅片，结果不一致时则采取协商统一的原则。

RASAL1阳性染色者在细胞胞浆或（和）细胞膜有棕黄色颗粒沉着。

每一切片观察5个不相连的视野，每个视野计数100个细胞，计算每张切片染色细胞百分率。

根据染色细胞所占比例，将RASAL1基因的阳性率分成4个等级：染色细胞比例>90%为强阳性(+++)、50%-90%为阳性(++)、10%-49%为弱阳性(+)、<10%为阴性(-)。

1.3 统计学处理
数据的统计处理采用SPSS13.0软件处理,以χ2检验进行统计分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 RASAL1基因在不同病理类型的胃息肉与胃癌中的表达(表1) RASAL1基因在正常胃黏膜组、增生性胃息肉组、腺瘤性息肉组、胃癌组中阳性表达率分别为95.00%、85.71%、5
3.33%、17.50%。

经两两比较，胃癌组中RASAL1基因的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组、增生性胃息肉组及腺瘤性息肉组，差异均有统计学意义(P<0.05)；腺瘤性息肉组中RASAL1基因的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组、增生性胃息肉组，差异均有统计学意义(P<0.05)；增生性胃息肉组中RASAL1基因的阳性表达率低于正常胃黏膜组，差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 RASAL1基因在不同病理类型的胃息肉与胃癌中的表达
a P＜0.05 vs 胃癌组；c P＜0.05 vs 腺瘤性胃息肉组；e P> 0.05 vs 增生性胃息肉组
2.2 胃息肉中RASAL1基因的表达与临床病理资料的关系（表2）在增生性胃息肉组及腺瘤性胃息肉组中，男性病例的RASAL1蛋白阳性表达率均高于女性病例，但差异均无统计学意义（P＞0.05）；二组中年龄≤40岁的病例其RASAL1蛋白阳性表达率均低于年龄＞40岁的病例，但差异均无统计学意义（P＞0.05）；二组中来源于胃体部的标本其RASAL1蛋白阳性表达率高于来源于胃底及胃窦部的标本，但差异均无统计学意义（P＞0.05）；在增生性胃息肉组中，息肉直径＜1cm的标本其RASAL1蛋白的阳性表达率高于息肉直径≥1cm的标本，差异无统计学意义(P>0.05)；在腺瘤性胃息肉组中，息肉直径＜1cm的标本其RASAL1蛋白的阳性表达率明显高于息肉直径≥1cm的标本，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 胃息肉中RASAL1基因的表达与临床病理资料的关系
3 讨论
胃癌的发生同其他肿瘤一样有癌基因的过度表达和/或抑癌基因的失活[2]。

而抑制基因在肿瘤发生过程中持续丧失功能被认为是细胞恶变的重要分子事件之一。

RASAL1作为Ras GTP酶激活蛋白（Ras GTPase-activating proteins, Ras GAPs）具有GTP酶活性，可使Ras蛋白失活，进而抑制肿瘤的发生发展，起到抑癌基因的作用[3]。

Seto等人[4] 通过免疫印迹法发现10个胃癌细胞系中有6个细胞系的RASAL1表达降低；通过基因转染使胃癌细胞RASAL1表达上调后，胃癌细胞的增殖减慢，提示RASAL1的低表达对于胃癌的发生中起着重要作用。

本研究中正常胃黏膜组、增生性胃息肉组中RASAL1基因的阳性表达率分别为95.00%、85.71%，两者差异无统计学意义(P>0.05)，而与腺瘤性息肉组（53.33%）、胃癌组（17.50%）比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；胃癌组中RASAL1基因的阳性表达率显著低于腺瘤性息肉组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

以上结果表明，RASAL1基因在非肿瘤性息肉、肿瘤性息肉、胃癌三个阶段其阳性表达率呈递减趋势，提示RASAL1的低表达与胃癌的发生发展关系密切，其机制可能与其水解GTP成GDP而使Ras p21蛋白失活，从而参与细胞的增殖、分化、凋亡有关[5-6]。

另外，在增生性息肉组中，RASAL1基因的表达与性别、年龄、标本部位及息肉大小无相关性(P>0.05)；而在腺瘤性息肉组中，RASAL1基因的表达与性别、年龄、标本部位无相关性(P>0.05)，但与息肉大小有相关性(P<0.05)。

目前认为腺瘤性息肉是癌前期病变，结合我们既往的研究[7]，推测直径较大的腺瘤性息肉可能存在较高的上皮内瘤变率，因而更加容易癌变。

因此对于常规染色不能明确性质的息肉，尤其是直径较大的息肉，结合RASAL1基因免疫组化检查就可以判定该息肉是否有癌变的可能，从而提高胃癌早期诊断的阳性率与准确率。

参考文献
[1] Jin H, Wang X, Ying J, et al. Epigenetic silencing of a Ca(2+)-regulated Ras GTPase- activating protein RASAL defines a new mechanism of Ras activation in human cancers[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2007,104(30):12353-12358.
[2] 房静远. 胃癌发生中后生修饰的异常[J]. 世界华人消化杂志，2002 ;10(7):749-752.
[3] Bernards A, Settleman J. Loss of the Ras regulator RASAL1: another route to Ras activation in colorectal cancer. Gastroenterology .2009 Jan; 136(1):46-8.
[4] Seto M, Ohta M, Ikenoue T, Sugimoto T, Asaoka Y, Tada M, Mohri D, Kudo Y, Ijichi H, Tateishi K, Otsuka M, Hirata Y, Maeda S, Koike K, Omata M. Reduced expression of RAS protein activator like-1 in gastric cancer. Int J Cancer. 2011 Mar 15;128(6):1293-302.
[5] Ohta M, Seto M, Ijichi H,et a1. Decreased expression of the RAS GTPase activating protein RASALI is associated with colorectal tumor progression[J].Gastroenterology，2009, 136(1): 206-216.
[61 Kolfehoten IG，Van Leeuwen B，Betas l('et a1.A genetic screen identifies PITXl as suppressor of RAS activity and tumorigenicity[J].Cell,2005,121(6):849-858.
[7] 夏挺松,陈洪,钱建忠等. RASAL1基因在胃癌组织的表达及临床意义[J].世界华人消化杂志,2011,19（13）：1403-1407.。